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COLUNAS PARA HPLC – Fase Reversa e Fase Normal Instruções de uso e cuidados

1. ATIVAÇÃO DE COLUNAS NOVAS OU ARMAZENADAS POR LONGOS PERÍODOS: - Fase Reversa (RP) apresentando grupos funcionais C18, C8, CN-RP, NH2 RP, Fenil C6H5, C4, C2 : Solvente de estocagem recomendado: 90% ACN : 10% H2O . (ACN = Acetronitrila) Ativação: 100% de ACN ou MeOH . (MeOH = Metanol) Colunas de 100,125 e 150x4/4,6mm = 30 minutos, vazão de 1ml/min. Colunas de 250, 300x4/4,6mm = 60 minutos, vazão de 1ml/min. - Fase Normal (NP) apresentando grupos funcionais SiOH, OH, NH2, NO2, OH e N(CH3)2: Solvente de estocagem recomendado: 100% n-Heptano. Ativação: 100% de n-Heptano. Colunas de 100,125 e 150x4/4,6mm = 30 minutos, vazão de 1ml/min. Colunas de 250, 300x4/4,6mm = 60 minutos, vazão de 1ml/min. OBS.: Antes de introduzir a fase móvel de trabalho, verifique a miscibilidade com o solvente de ativação. - Colunas RP: Passe água antes de entrar com eluentes altamente concenrtados em tampão. - Colunas NP: Passese etanol ou n-Propanol antes de entrar com solventes aquosos. 2. PROCEDIMENTO DE LIMPEZA APÓS UMA LONGA SEQUÊNCIA DE ANÁLISE: - Colunas RP: Fase móvel -> *H2O -> ACN:H2O (10:90) -> ACN:H2O (90:10) * somente se a fase móvel for um tamponado concentrado. - Colunas NP: Fase móvel -> n-Propanol -> n-Heptano Colunas de 100,125 e 150x4/4,6mm = 30 minutos para cada estágio, vazão de 1ml/min. Colunas de 250, 300x4/4,6mm = 60 minutos para cada estágio, vazão de 1ml/min. 3. PROCEDIMENTO DE REGENERAÇÃO QUÍMICA: Colunas RP: Água -> Metanol -> Clorofôrmio -> Metanol -> Água ou 0,05M H2SO4 Colunas NP: Heptano -> Clorofôrmio -> Acetato de Etila -> Acetona -> Etanol -> Água Colunas de 100,125 e 150x4/4,6mm = 30 minutos para cada estágio, vazão de 1ml/min. Colunas de 250, 300x4/4,6mm = 60 minutos para cada estágio, vazão de 1ml/min. OBS.: Caso a pressão de trabalho esteja elevada, pode-se inverter o sentido da coluna durante todo o processo de regeneração. Dependendo da gravidade do problema, este recurso de regeneração poderá não recuperar a capacidade de separação da coluna.
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mudança c/ gradiente linear (10min.)

.Evite utilizar eluentes de trabalho puramente aquosos (>95% de água) em colunas RP base sílica convencional. pomadas. alimentos. meio ambiente. d) Coluna pronta EC com instalação da pré-coluna via suporte externo e conector capilar.45µm sob vácuo e daegaseique por 15 minutos no banho ultra-som. 721359. formiato) e aminas (trietilamina.Utilize somente solventes graus HPLC e químicos de alta pureza. pH 1. Nucleodur®Gravity.4. ESQUEMA DE MONTAGEM PARA COLUNAS EM CARTUCHO (CHROMCART®) E PRONTAS (EC): a) Coluna em cartucho ChromCART® sem a instalação da pré-coluna.Filtre todas as amostras em filtros CHROMAFIL® de ≤0. Na necessidade da utilização de eluentes de trabalho puramente aquosos em RP. . . .com.Evite mudanças drásticas de fluxo e composição da fase móvel.globallab. . Nucleosil®. . fluídos biológicos. Chromafil®. Chromabond® e ChromCART® são marcas registradas da empresa Macherey-Nagel (MN). pirolidina). 721695 b) Coluna em cartucho ChromCART® com a instalação da pré-coluna.Utilize cartuchos de extração em fase sólida CHROMABOND® para limpeza das amostras em matrizes complexas tais como: cremes.5 para colunas de sílica convencional tipo Nucleosil®. Nucleodur®.Nunca armazene ou estoque a coluna em soluções tamponadas. utilize somente as colunas especiais tipo Nucleosil® Nautilus C18 ou Nucleodur® Pyramid C18. . .45µm antes da injeção. Nucleodur®Pyramid. deve-se utilizar o extensor art.Mantenha a concentração do tampão dentro dos valores mínimos necessários (ex.br . .: Para utilizar o acoplador MN nas colunas LiChroCART.Não exceder a faixa de pH de 2 a 7.: 10mM ao invés de 100mM) .5 a 9 para fases tipo Nucleodur® e pH 1 a 11 para fases tipo Nucleodur® Gravity.Utilize pré-colunas na entrada da coluna. 4.Exemplos de Tampões mais agressivos: Fosfato e Borato. c) Coluna pronta EC com instalação da pré-coluna via adaptador direto EC art. etc). Nucleosil®Nautilus.Filtre a fase móvel em membranas de ≤0. .Exemplos de Tampões menos agressivos: amonia (acetato. DCtech Instrumentação Ltda Globallab group 2/2 www. Obs.Não submeta a coluna a pH’s extremos se não for estritamente necessário. . CUIDADOS BÁSICOS: .