Enraizamiento y aclimatacin de plantas obtenidas in vitro

Carlos Lpez Encina

Las caractersticas anatmicas y fisiolgicas de las plantas micropropagadas hacen necesaria para su supervivencia en condiciones ex vitro, una gradual adaptacin o aclimatacin a las condiciones medioambientales del invernadero o del campo. La ltima fase del proceso de micropropagacin, llamada Fase 3, incluye los procesos de enraizamiento de la microestaquillas obtenidas en la Fase 2 de multiplicacin y su aclimatacin a las condiciones ex vitro. Es una prctica corriente realizar in vitro el enraizamiento de la microestaquillas, pero esto produce problemas en muchas ocasiones. As, Grout y Aston [Hort. Res., 17, 1 (1977)] observaron como tras el enraizamiento in vitro de sus plantas la zona de transicin entre la raz y el tallo era anormal, con unas conexiones vasculares dbiles y malformadas, lo que produca problemas en la absorcin y circulacin de agua desde las races al tallo. Esta disfuncin se corrige, al menos parcialmente, tras una adecuada aclimatacin. En otras ocasiones el problema estriba en que las races que crecen en agar son defectuosas, carecen de pelos radicales y suelen necrosarse al transplantar las plntulas, lo que provoca una parada en el crecimiento de la planta [(Deberg y Maene, Scientia Hort., 14, 335 (1981)]. Tambien se ha observado como las races formadas in vitro eran gruesas y con pelos radicales engrosados y anormales, siendo sus sistemas vasculares anmalos, en comparacin con races formadas en un sustrato arenoso. En las races que no mueren durante el proceso de transplante se producen nuevas races laterales y adventicias normales durante el proceso de aclimatacin y estas ya crecen activamente. Por ello la razn raz : tallo siempre es ms alta en plantas enraizadas ex vitro que in vitro. Todos estos factores hacen que muchos de los laboratorios que trabajan produciendo plantas in vitro, no realicen el enraizamiento de la microestaquillas in vitro, al resultar problemtico, difcil y caro, ya que el proceso de enraizamiento in vitro se estima que implica un costo de entre el 3575% del coste total de la micropropagacin. Por supuesto, no es posible generalizar, ya que la eleccin del mtodo de enraizamiento va a depender totalmente de la especie y de sus caractersticas: porcentajes de enraizamiento y supervivencia final, que varan enormemente de unas especies a otras. As,

cuando el enraizamiento y aclimatacin se pueden realizar simultaneamente, sin que haya demasiada prdida de plantas, tanto los costes como la eficiencia de la produccin se ven muy favorecidos. Entre los factores a considerar en el enraizamiento de microestaquillas tanto in vitro como ex vitro estn el tamao de la microestaquilla, su cobertura foliar, los reguladores de crecimiento utilizados en la induccin, y las condiciones medioambientales de temperatura, luz y humedad. Algunos autores [(Welander, Physiol. Plant. 58:231, (1983); Zimmerman y Fordham, J. Amer. Soc. Hort. Sci. 110: 34 (1985)] han propuesto una tcnica hbrida, que combina las ventajas del enraizamiento in vitro y ex vitro. Para ello las microestaquillas son incubadas inicialmente en un medio estril que incluye hormonas para la induccin de races y azcares, durante un periodo de 3 a 7 das, para la induccin-inicio de las races. Esto se puede hacer en un medio slido o lquido normalmente en oscuridad. Luego el material es repicado en un medio no estril, o incluso transplantado a tierra, para la fase de elongacin y desarrollo de las races, mejorndose de esta forma en muchos casos el resultado final de aclimatacin y supervivencia. Otros autores [(Driver y Shutle, Eds., Cell and Tissue Culture in Forestry Vol. II (1987)] proponen realizar el enraizamiento y la aclimatacin simultneamente, transplantando las microestaquillas directamente en el campo, despues de una etapa previa de endurecimiento in vitro: tras la induccin del enraizamiento, las plantas an en condiciones in vitro eran sometidas a una elevada intensidad luminosa, un fotoperiodo ms corto y una temperatura inferior a la normal, durante un par de semanas. Esto favoreca la lignificacin y el desarrollo cuticular y estomtico del material y permita su transplante directo al campo en condiciones controladas de humedad, luz y nutrientes (Minitnel). En la fase de aclimatacin se pretende que las plantas que han crecido in vitro y por lo tanto slo han estado expuestas a un microambiente escogido por ofrecer unas condiciones mnimas de estrs y cuasi ptimas condiciones para la multiplicacin de las plantas, se adapten a condiciones ex vitro donde las condiciones no son aspticas, ni la luz, temperatura y humedad estn controladas, y donde el crecimiento ha ser autotrfico y no heterotrfico como in vitro. Es pues necesario reconstruir y desarrollar los sistemas que por adaptacin a la condiciones in vitro, es el caso de la lignificacin , cubiertas cuticulares, estomas y estructuras fotosintticas. Todas estas deficiencias o disfunciones provocadas por o durante la incubacin in vitro es necesario corregirlas de forma gradual, e incluso como ya

hemos citados comenzar la adaptacin en condiciones in vitro, incluso induciendo fotoautotrofa in vitro mediante incrementos de la tasa de CO2 y de irradiancia en los contenedores de cultivo, al objeto de mejorar la calidad de la planta, los niveles de produccin y los costes del proceso de micropropagacin. Carlos Lpez Encina es Colaborador Cientfico en la E.E. La Mayora (CSIC).