Medios de Cultivo y Toma de Muestra

Prof: Katia Fernández M.

Cultivo
• Proceso de laboratorio donde se induce el crecimiento in vitro de los microorganismos. • Para conseguir la multiplicación de agentes patógenos en sistemas artificiales es necesario aportar los elementos nutritivos mínimos suficientes, así como las condiciones fisicoquímicas óptimas para su desarrollo. • Para ello se utilizan los medios de cultivo.

Requerimientos
Absolutos
- Fuente de Energía - Fuente de Carbono - Fuente de Nitrógeno - Sales - Agua

Adicionales
- Vitaminas - Factores de crecimiento - Aá esenciales

Ambientales
- Temperatura - Atmósfera - Humedad - Salinidad - pH

Compuestos y reactivos químico usados en medios de cultivo
• Hidrolizados de proteínas: peptonas, infusión de carne, triptonas y caseína. • La proteínas son divididas en aá y péptidos utilizados como fuente de C y N. • Carbohidratos: una variedad de disacáridos (lactosa, sacarosa,y maltosa), hexosas (dextrosa) y pentosas (xilosa) son incluidas. • Proporcionar una fuente de C para energía y servir como sustrato para reacciones bioquímicas para la identificación de MO desconocidos.

• Tampones: Se utilizan fosfatos de Na o K. • Proporcionan un pH estable para el óptimo crecimiento de MO y un pH de referencia estándar para aquellos medios en los que las reacciones ácidas o alcalinas son usadas para identificar MO. • Enriquecedores: sangre, suero, suplementos vitamínicos y extracto de levadura. • Los suplementos son agregados al medio para recuperar MO fastidiosos.

Metales pesados (bismuto). selenito. eosina). Agentes antimicrobianos (neomicina. Compuestos químicos (azida. – – – – Colorantes de anilina (verde brillante. cloranfenicol). ampicilina. colistín. fenil-etil-alcohol). vancomicina.• Inhibidores: diferentes compuestos se pueden usar para inhibir el desarrollo de MO no deseados (medio secletivo). .

azul de metileno. rojo neutro. • Indicadores misceláneos: pueden incluirse otros indicadores para detectar productos específicos (iones férricos y ferrosos para la detección de sulfuro de hidrógeno) .• Indicadores de pH: Los más usados fucsina. rojo fenol y púrpura de bromocresol. Para medir cambios de pH en el medio resultante del metabolismo bacteriano de los sustratos dados.

Indicadores de pH .

• Compuestos químicos misceláneos: El agar. . un extracto gelatinoso de las algas rojas es adicionado al medio en concentraciones variables como un agente gelificante.

rojo neutro proposito Selecciona entrobacteria y otros bacilos Gram -. E: enriquecido .D Inhibidor o indicador Sales biliares. Diferencian los bacilos Gram – fermentadores de los no fermentadores. S: selectivo. D: diferencial. Inhiben la mayoría de los Gram +. D Glóbulos rojos de cordero Permite el desarrollo de una amplia gama de bacterias y evidenciar el tipo de hemólisis que estas producen. cristal violeta. Enriquecimiento para Salmonella spp Caldo selenito F E Sales de selenio Agar sangre E. lactosa.Ejemplos medio Agar MacConkey tipo S.

Medios de cultivo • Uso • Clasificación .

Uso • Objetivo es aislar y cultivar los microorganismos (MO) (bacterias) causantes de una infección. para llegar a un diagnóstico certero y un tratamiento adecuado .

Clasificación • Físico • Componentes • Función .

0 % agar 0.5 % agar sin agar .5 – 2.Físico • Sólidos • Semi sólidos • Líquidos 1.

Medios sólidos Medios líquidos .

suero) sales • Sintéticos .Componentes • Naturales compuestos de origen natural (proteínas.

Clasificación .Función • Medios nutritivos • Medios enriquecidos • Medios selectivos • Medios diferenciales .

• Ej: Agar corazón. nutritivo. agar cerebro .Medios nutritivos • Contienen nutrientes que permiten que la mayoría de los MO no fastidiosos crezcan en la misma proporción en que se encuentran en la muestra. sin permitir que otro MO crezca de forma exagerada.

Agar nutritivo: sembrado con E. coli .

caldo selenito . Agregando sustancias altamente nutritivas (sangre.Medios enriquecidos • Favorecen el sobrecrecimiento de un determinado MO a partir de una muestra que lo tiene en escasa cantidad. con predominio de la flora habitual. suero etc) • Ej: agar sangre.

Agar sangre (5% de GR sangre de cordero) .

agar Skirrow. . • Ej: agar Mac Conkey. agar nutritivo con ampicilina.Medios selectivos • Contienen uno o mas agentes inhibitorios (antibióticos. colorantes) que inhiben los MO excepto al que se desea recuperar.

Medio Kanamicina Esculina Azida aislamiento de Enterococcus Medio Hektoen aislamiento de Salmonella enteritidis .

agar sangre. agar urea .Medios diferenciales • Emplean metabolitos que permiten que los MO expresen características metabólicas que hacen posible distinguirlos de otros con características diferentes. • Ej: agar Mc Conkey.

la característica bioquímica que se quiere determinar (lactosa. para determinar su fermentación) mas indicadores de pH. lo cuales al haber metabolismo de la bacteria estudio hay modificación del pH del medio de cultivo evidenciándose por el cambio de color. .• Estos medios contienen nutrientes básicos.

Agar XLD Agar Mc Conkey Agar TSI Agar LIA .

2 .03 0.001 13.0 1.5 7.5 5.0 0.1 ± 0.0 10.0 3.Agar MacConkey • Es un medio selectivo y diferencial • Fórmula (g/L): – – – – – – – – – Peptona Proteasa peptona Lactosa Sales biliares Cloruro de sodio Rojo neutro Cristal violeta Agar pH 17.

Agar MacConkey • Selectivo: inhiben Dº de Gram + y Selectivo permite la selección y recuperación de las enterobacterias. al haber fermentación de la lactosa por parte de la bacteria el medio de cultivo vira de color a fucsia. . • Diferencial: rojo fenol como indicador de pH.

L (-) L (+) Agar MacConkey .

Escherichia coli C: Salmonella sp. B.Agar SS A. Klebsiella pneumoniae. D: Proteus mirabilis E: Pseudomona aeruginosa . .

• Contiene en su composición metabolitos e indicadores que permiten el crecimiento y clasificación simultanea o diagnóstico de un MO en particular. .Agares cromogénicos • Son medios de cultivo selectivos y diferenciales.

. coli se presenta de color azul-violeta por los componentes del medio de cultivo.Cromocoli • Agar selectivo y diferencial para la detección simultánea de Escherichia coli y recuento total de coliformes mesófilos en agua y alimentos. • Las cepas Gram + y algunas Gram – se inhiben por la presencia de tergitol 7. • La E.

E. coli de color azul-violeta .

. • Los colores son producidos específicamente por reacciones enzimáticas del St.Cromoaureus • Es un medio de cultivo selectivo y diagnóstico para el cultivo. aislamiento . diferenciación y diagnóstico de Staphylococcus aureus. aureus que combinadas con las substancias cromógenas contenidas en el medio producen el viraje de las colonias al color malva-violeta.

.Agar CromoAureus mostrando desarrollo mixto y colonias de Staphylococcus aureus.

Cromocandida • Es un medio selectivo para levaduras y hongos. . • Para la diferenciación de estas especies en base a los diferentes colores de sus colonias producidos por reacciones enzimáticas de especie específicas con un sustrato cromógeno contenido en el medio.

MEDIO CROMOCANDIDA mostrando desarrollo de: Candida tropicalis colonias azules violáceas Candida albicans colonias verdes Candida glabrata colonias rosa-rojizas Candida krusei colonias rosa pálido .

. • Consiste en una tórula estéril y un tubo con el medio de transporte correspondiente en el cual se introduce la tórula con la muestra.Medios de transporte • Son un sistema de obtención y transporte de muestras microbiológicas para su cultivo y posterior identificación. lo que permite que los MO permanezcan viables hasta el momento del cultivo.

Medio de transporte (tórula estéril y medio) .

• Los microorganismos permanecen viables de 6 días a 8 semanas. gonnorrhoeae. y otros microorganismos lábiles. Se recomienda para la toma de muestras en sitios estériles. . heridas y abscesos. pyogenes .Medio Stuart • Medio de transporte eficaz para la recuperación y viabilidad de microorganismos como Streptococcus pneumoniae. Str. Haemophilus sp. óticas. • Se utiliza también para el transporte de muestras de secreciones oculares. N.

se reemplazó el glicerofosfato por un buffer inorgánico superior. como faringe.Medio Amies /c carbón • Es una modificación del medio Stuart. lo que permite el desarrollo de patógenos aún en presencia de antibacterianos. . • Se recomienda para la toma de muestras en sitios no estériles . • Se le omitió el Azul de Metileno lo que permite el crecimiento de patógenos entéricos además de la flora de fastidiosos que se desarrollan en el Stuart. Este medio permitió una recuperación mayor de patógenos que en el Medio Stuart. la adición de carbón permite la absorción de toxinas y de bactericidas del medio. vagina y uretra.

. ya que permite el desarrollo de Salmonellas y Shigellas aún después de 49 días a 28ºC. • Se recomienda este medio.Medio Cary Blair • Se utiliza para el transporte de muestras fecales o raspados rectales para Coprocultivo. Vibriones y Campylobacter permanecen viables hasta por 22 días a 28ºC.

• Si la tórula se mantiene a 37ºC después de obtenida la muestra. lo hace el medio de preferencia para la observación directa de secreciones. • La concentración apropiada de sales . el pH óptimo del medio . .Medio gel fisiológico • Se utiliza para el examen directo de secreciones vaginales y uretrales en las cuales se debe investigar la presencia de Trichomonas vaginalis. la inclusión de agarosa en éste. las Trichomonas vaginalis pueden permanecer vivos hasta por 6 horas.

.Recolección y transporte de muestras • En la recuperación del o los MO causantes de una infección lo mas importante es la correcta recolección de una muestra.

– Enviar la muestra en forma rápida y expedita al laboratorio. – Usar la técnica más apropiada – Poner la muestra recolectada en un envase que favorezca la viabilidad de los MO en forma segura. .• La recolección comprende 4 pasos: – Selección del sitio anatómico mas adecuado.

Recolección • Preparación del sitio: muestra obtenida con aguja o aspiración. seguido por yodóforo. Se encuentran estandarizadas la toma de muestra para hemocultivo. LCR para cultivo de hongos y orina para cultivo. consultar en el laboratorio. . En áreas muy contaminadas repetir procedimiento. • Volumen: esto depende de el tipo de muestra. se debe desinfectar la piel. Alcohol 70%. durante 1 min.

Una vez tomada la muestra se introduce en un frasco estéril o medio de transporte. coprocultivo. baciloscopías.• Envase y aparato recolector: La tórula debe ser de un material que no inhiba el crecimiento bacteriano. . y cultivo de Koch se encuentran normadas. En el resto tomar mas de una muestra en innecesario y caro. • Número de muestras: Solo las muestras de hemocultivo. Muestras líquidas envases estériles con tapa rosca.

• Técnicas de recolección: Para la obtención de una correcta toma de muestra. En general las muestras menos satisfactorias son las obtenidas con tórula. las óptimas con jeringa. se debe seguir un manual de toma de muestra. . • Medio de transporte: No deben usarse tórulas sin medio de transporte (excepto para técnicas específicas) porque esto lleva a la desecación de la muestra.

Como no tienen nutrientes ayudan a preservar los MO de la muestra evitando el sobrecrecimiento. • Para coprocultivos se utiliza el medio Cary Blair. deben colocarse en frascos o recipientes con medio de transporte y atmósfera sin O2 (medio de transporte anaerobio).• En el caso de secreciones se recomienda medio tipo tampón como Stuart o Amies. • Muestras de aspirado o líquidos que se solicite cultivo anaerobio. que permite una mejor recuperación de enteropatógenos. Sobreviven app 24 horas a RT. .

• Algunas muestras se pueden refrigerar hasta 12 horas (expectoración y orina).• Transporte de muestras: Aun usando medio de transporte. . antes de las dos horas. las muestras deben llevarse lo más rápido posible. • Las muestras de Neisseria o anaerobios deben mantenerse a RT.