Analisando o gro de plen

Por: Mauro Ramalho

Os gros de plen so microscpicos (da ordem de 0,01 a 0,2mm) e tm formas variveis e tpicas para cada espcie vegetal. Por isso, o trabalho de identificao do plen no mel se baseia na sua morfologia: freqentemente, a imagem vista ao microscpio ptico (m.o.) ou, mais raramente, ao microscpio de transmisso (que gera imagens tridimendisionais de altssima resoluo). Mas, no basta ver a forma dos gros de plen, preciso ainda interpret-la, pois o plano de foco ao m.o. estreito e h um achatamento da imagem: a figura tridimensional, que o plen, aparece como se fosse praticamente bidimensional com estruturas sobrepostas. Uma viso panormica do gro de plen ao microscpio revela a sua forma num plano do espao e, neste caso, a posio da imagem frente do olho do observador sempre importante. Considere uma moeda e um cigarro; dependendo da posio desses objetos em relao ao observador, a imagem visvel modifica-se Por exemplo, olhando para a cara ou a coroa de uma moeda, vemos uma imagem circular; colocando-a em p e de perfil vemos um retngulo muito alongado; a partir dessa posio, se a inclinarmos ligeiramente, veremos uma elipse. Sob a lente do microscpio, os gros de plen aparecem em posies as mais variadas, porm duas so bsicas: polar e equatorial. As imagens do plen nessas duas posies, assim como a cara e o perfil retangular da moeda, revelam toda informao que precisamos para compreender a sua forma espacial. Resta desvendar os detalhes da sua parede. Deixando um pouco de lado as imagens panormicas, voltando agora a ateno para a parede dos gros de plen, estaremos num mundo sub-microscpico e ainda em face do mesmo problema da posio relativa objeto-observador. Nas imagens superficial e lateral da parede, os elementos da sua estrutura aparecem em diferentes posies e formam desenhos diferentes. Integrando essas duas imagens temos uma idia da forma tridimensional da parede. Imagine que uma floresta ou uma plantao de milho so dois tipos de paredes de gros de plen. Em uma vista area ficariam evidenciadas as folhas - um tapete verde e felpudo, no primeiro caso, ou algo parecido com uma escova, no segundo. Se estivermos no cho, olhando lateralmente, teramos frente uma paisagem de troncos ou galhos. Tanto a disposio e a altura dos troncos, em vista lateral, como a superfcie verde, revelam imagens distintas do mesmo objeto: a floresta, a plantao de milho ou, por analogia, a parede do gro de plen. Para interpretao da imagem em superfcie da parede dos gros de plen emprega-se o que se convencionou chamar de anlise de Luz-Obscuridade (LO). E para se ter uma imagem lateral, o corte tico, que a focalizao do contorno do gro de plen. Voltaremos a esse tpico mais frente. A seguir, discorremos sobre as principais caractersticas usadas na definio das formas dos gros de plen. Nas descries foram feitas simplificaes e modificaes na terminologia tcnica para facilitar a compreenso.

Definindo a morfologia dos gros de plen Gros isolados e agrupados A distino entre gros de plen isolados ou agrupados o primeiro passo importante para identificao das espcies vegetais que os produzem.

Nas flores, os gros de plen so formados em grupos de 4 a partir das clulas-me de gro de plen, no interior das anteras. Quando atingem a maturidade os gros de plen podem permanecer na forma de ttrades (4 clulas) ou de agrupamentos maiores, ou podem se desprender uns dos outros, ficando isolados. Os gros isolados so mais comuns na natureza, seguindo-se os agrupados em ttrades. Outros tipos de gros agrupados so: dades (duas clulas), comuns na famlia Podostemaceae; polades (formas com mais de 4 gros), que aparecem em Mimosoideae (monjoleiro, esponjinha, dormideira, etc.), Annonaceae, Hypocrataceae, Celastraceae, Gentianaceae, Asclepiadaceae (erva de rato) e Orchidaceae (orqudeas); mssulas (muitos gros fundidos, de difcil individualizao) e polneas (conjunto de gros de plen de uma ou mais cavidades da antera), que so comuns nas famlias Asclepiadaceae e Orchidaceae. As ttrades podem ter vrios tipos de arranjos. Quando os gros esto dispostos todos no mesmo plano, temos uma ttrade uniplanar, que pode ser dos seguintes tipos: tetragonal (a) ( spiguinha, e Mimosa daleoides, p.ex.), romboidal (b), linear (c) ou em forma de T (d). Se os gros se arranjam em mais de um plano, formam-se ttrades multiplanares dos seguintes tipos: invertida (e) (p.ex., Mimosa taimbensis) ou tetradrica (f) (p.ex., Mimosa velloziana).

Figura 01. Tipos de arranjos de gros de plen na ttrade

Com 4 bolinhas de ping-pong temos uma idia dos possveis arranjos dos gros de plen nas ttrades: colocando-as lado-a-lado sobre uma mesa formando um quadrado, temos a ttrade tetragonal; se deslocarmos lateralmente duas bolinhas, de modo que uma delas toque a juno das outras duas, encontramos a figura romboidal; obtm -se a forma tetradrica, colocando 3 bolinhas justapostas sobre a mesa, formando um tringulo, e a quarta bolinha acima desse conjunto, no centro do tringulo; na ttrade invertida as bolinhas, duas -a-duas, formam um X com um dos braos acima do outro. Formas tpicas e regulares de polades lembram dois pratos sobrepostos de maneira invertida, com oito ou 6 clulas formando a circunferncia maior e quatro ou 3 clulas, acima e abaixo, representando o fundo dos pratos. Tm essa forma as polades do ingazeiro (nga) e do canudoI de-pito (Acacia), p.ex.. H tambm polades irregulares, como a esponjinha ( alliandra twedii). C Polnias e mssulas em geral apresentam formas variveis, sendo difcil definir o nmero de gros presentes. Os gros isolados tambm apresentam uma grande variedade de formas, como veremos mais adiante.

Polaridade e simetria

Para caracterizar a forma de um gro de plen importante reconhecer os seus plos. Este termo foi adotado por analogia forma da Terra e, da mesma maneira, indica uma posio bem definida. Aps atingir a maturidade, na maioria das espcies vegetais, os gros de plen desprendem-se uns dos outros. Quando esto isolados, nem sempre possvel reconhecer os polos. Isto ocorre com alguns gros esfricos (p. ex. capixingui - Croton floribundus), que por isso so chamados de

gros apolares (sem polos discernveis). Nos gros isolados, com polos e regio equatorial bem definidos, os polos distal e proximal podem ser semelhantes gros isopolares (com polos iguais; iso = igual), como a laranjeira ( itrus) ou diferentes gros heteropolares (polos desiguais; C hetero = diferente), como o cip-uva (Serjania). Antes de atingir a maturidade, os gros de plen usualmente acham-se reunidos em ttrades. Nesta fase fcil definir o que se denomina polaridade dos gros de plen. A face de cada gro que est voltada para o interior da ttrade o plo proximal (plo prximo ao centro) e a face oposta e externa, o plo distal (distante do centro). A faixa compreendida entre os plos distal e proximal a regio equatorial. A Terra com seus dois plos e o equador fornece uma boa comparao.

Figura 02. A) Plos proximal (PP) e distal (PD) e eixos equatorial (EE) e polar (EP) em relao posio do gro de plen na ttrade. B) Analogia com o globo terrestre. A linha imaginria que vai de um plo ao outro chamada de eixo polar (P) (imagine o eixo de rotao da Terra, p.ex.). Um corte imaginrio, passando de alto a baixo pelo eixo polar, divide a maioria dos gros de plen em pores iguais. De acordo com o nmero de cortes que resultam em metades iguais, diferenciam-se os gros com simetria bilateral (um ou dois cortes dividem o gro em duas pores iguais) daqueles com simetria radial (vrios cortes imaginrios dividem o gro em duas metades iguais). Um cachimbo, p.ex., tem simetria bilateral, pois existe apenas um corte (imaginrio ou real), ao longo do seu eixo maior, capaz de dividi-lo em 2 pores iguais. J uma ma, um prato, p.ex. possuem simetria radial.

Forma

A forma o aspecto espacial de qualquer corpo: uma bola esfrica, uma televiso cbica. Outros objetos, entretanto, no possuem formas to fceis de definir: um prato, um sapato, uma cenoura, etc., e, de maneira geral, os gros de plen. Os gros de plen no lembram figuras geomtricas tpicas, por isto estabeleceu-se um critrio particular para definir a sua forma, a partir das medidas do eixo polar (P) e do eixo equatorial (E). P o eixo que vai de plo-a-plo, como mencionamos acima, e E o dimetro do gro de plen exatamente no equador. De acordo com o valor da diviso de P por E (P/E), Erdtman cunhou alguns termos tcnicos para designar a forma dos gros de plen: p. ex., se P/E = 1, o gro esferoidal, se for menor do que 1, temos um gro oblato e se for maior do que 1 temos o gro prolato. Cada uma dessas classes com algumas subdivises aparecem na tabela seguinte:

Forma dos Gros de Plen

Relao P/E Denominao da forma 0,50 0,50 - 0,74 0,75 - 0,87 0,88 - 0,99 1,00 1,01 - 1,14 1,15 - 1,33 1,34 - 2,00 2,00 Peroblato Oblato Suboblato Oblato-esferoidal Esfrico Prolato-esferoidal Subprolato Prolato Perprolato

Relao entre as medidas do dimetro polar e equatorial dos gros de plen e a denominao de sua forma. Extrado de Salgado-Labouriau (1973), com modificaes

Quando observados ao microscpio ptico, muitos gros de plen aparecem em duas posies bem definidas: a vista equatorial, onde vemos o equador de frente, e a vista polar, onde vemos o plo de frente.

Figura 03. Vista polar (A) e equatorial (B) do gro de plen. Podemos fazer uma analogia com um cigarro, sendo o filtro e a extremidade acesa os dois plos e a poro mediana o equador. O comprimento do cigarro seria a medida P, enquanto a largura seria a medida E. No caso do cigarro P/E muito maior do que 1, e a forma portanto do tipo prolato (na verdade perprolato, pois neste caso P tem mais que o dobro do comprimento de E). Olhando o cigarro lateralmente, vemos um contorno retangular, que a vista equatorial. Segurando o cigarro entre os dedos, como se fossemos lev-lo boca, vemos a base do filtro. Nesta posio, temos uma vista polar do cigarro, que no caso circular. A forma do cigarro no nem retangular nem circular, mas sim cilndrica (cilindro com base circular). Precisamos fazer este tipo de composio de imagem com o gro de plen. A vista polar dos gros de plen recebe o nome de mbito. O mbito pode apresentar formas variadas, porm 3 so mais comuns: triangular, quadrangular e circular.

Figura 04. Vistas polares (mbitos) de gros de plen.

Dependendo ainda de como as aberturas (ver a seguir) aparecem e vista polar ou mbito, os m gros podem ser classificados nos seguintes tipos principais:

- plano aperturado - com abertura em lados retos (o contorno do mbito) - D, E, G - ngulo aperturado - com aberturas nos ngulos - A, C, F - fossaperturado - com aberturas em depresses - B, H

Aberturas

Muitos gros de plen apresentam aberturas na parede. Na verdade, a abertura pode ser uma regio mais estreita, da mesma espessura ou ainda mais grossa do que a rea circunjacente da parede polnica. Portanto, no correspondem necessariamente a buracos, mas sim a regies que funcionam como aberturas, na medida em que formam um ponto de ruptura quando o gro de plen aumenta de volume (isto acontece quando o gro de plen cai sobre a superfcie do rgo feminino da flor; assim o tubo polnico pode se projetar para fora, alcanando e fertilizando o vulo). As aberturas variam quanto ao nmero, forma, posio e estrutura, dependendo da espcie vegetal. Por isso, so importantssimas na identificao dos gros de plen das diferentes espcies vegetais. Quanto ao nmero, existem desde gros de plen sem nenhuma abertura at gros com dezenas de aberturas. A nomenclatura usada a seguinte: Quanto forma das aberturas, existem dois tipos principais: alongadas e arredondadas. Essas aberturas ainda se diferenciam quanto sua posio nos gros de plen, recebendo por isso nomes diferentes.

Figura 05. Forma e nmero de aberturas nos gros de plen. Entre parnteses est indicada a denominao dada ao gro de plen, de acordo com o tipo de abertura: um gro com colpo dito colpado, e assim por diante.

Tipo de Abertura equador arredondada alongada Poro (porado) Colpo (colpado)

Posio no Gro de Plen plo Ulco (ulcado) Sulco (sulcado) todo o gro Formen (foraminado) Ruga (rugado)

Um exemplo de poro observa-se no gro de plen de chal-chal (Allophyllus edulis); um ulco, em milho (Zea mays); formen, em Silene; colpo, em salvia (Salvia); e sulco, na palmeira jeriv (Syagrus). No o aspecto da abertura que varia, necessariamente, mas sim a sua posio.

Todos esses termos tcnicos visam facilitar a comunicao entre especialistas, mas evidentemente podem ser simplificados para finalidades prticas, como a anlise de rotina de mis. Aqui, todas as aberturas circulares e alongadas sero denominadas de poro e sulco, respectivamente (j que nem sempre a posio da abertura importante na definio da forma final do gro de plen). As aberturas alongadas podem se unir nos plos, pelas suas extremidades. Quando isso ocorre sem que fique nenhum espao entre elas, diz-se que o gro sincolpado (ex. cip-uva); e quando as extremidades das aberturas se ramificam antes de se unirem, deixando uma rea entre elas, diz-se que o gro parassincolpado (eucalipto. p.ex.). Em vez dos termos sincolpado e parassincolpado podemos ver sulcos com extremidades unidas e sulcos com extremidades ramificadas e unidas, respectivamente.

Figura 06. Vistas polares de gros de plen, indicando a unio das aberturas, do tipo sincolpado (a) e parassincolpado (b)

Quanto estrutura, as aberturas podem ser simples, como aquelas mostradas na Figura 05, ou compostas (Figura 07). A rea delimitada pelas aberturas simples exatamente coincidente nas diferentes camadas da parede polnica (ver item a seguir - estrutura e escultura). Na abertura composta, a rea delimitada na camada superficial da parede no se sobrepe totalmente rea da camada interna. Neste caso, a abertura apresenta-se com formas diferenciadas nas duas camadas. P.ex.., alguns gros tm abertura com a forma alongada na camada superior e circular na camada interna da parede, formando um clporo. Se tomarmos a casca de uma melancia e fizermos uma fenda externa, retirando apenas a poro verde, e em seguida, escavarmos com a faca apenas a regio central dessa fenda, extraindo agora a parte branca, alargando-a de modo a avanar lateralmente sob a casca verde das laterais da fenda superficial, teremos um quadro comparativo de uma abertura composta. A poro interna de abertura composta recebe o nome de s (boca; plural = ora). Os ora podem ser circulares ou alongados, no sentido longitudinal e paralelos abertura externa (s lolongado), ou no sentido latitudinal e transversais abertura externa (s lalongado).

Figura 07. Tipos de aberturas compostas, indicando variaes na forma da abertura interna (s)

As aberturas compostas recebem o nome de acordo com a forma da fenda superficial acrescido da terminao ora: p. exemplo, se a abertura externa for um poro teremos um gro porado, se for um colpo, um gro colporado. Para simplificar, ser usado apenas o termo abertura composta. Um

exemplo: o gro de plen de eucalipto triaperturado, colporado, parassincolpado; o que equivale a dizer que possui aberturas compostas que se ramificam e se unem nos plos.

Estrutura e escultura da parede

A parede do gro de plen apresenta duas camadas que podem ser visualizadas, ao microscpio, e diferenciadas quimicamente. A camada externa, formada por esporopolenina (polmeros oxidados e steres de carotenides), muito resistente e apresenta padres morfolgicos tpicos para cada espcie ou grupo de plantas. A camada interna formada por celulose, menos resistente e com aparncia homognea. A camada externa recebe o nome de exina e a interna de intina (Figura 08). A intina freqentemente desaparece nos gros de plen submetidos a solues cidas, como a acetlise. Como esse tratamento qumico amplamente usado pelos palinlogos, muitas vezes a intina no mencionada nas publicaes cientficas. Em estudos do plen no mel, entretanto, comum a preparao do plen a fresco, isto , sem acetlise, de modo que a intina e o contedo celular se conservam e tambm podem ser usados na identificao. A exina contm os principais componentes morfolgicos que se prestam caracterizao dos gros de plen. Apresenta uma poro externa mais ou menos esculturada, a sexina (do ingls, scultured exine) e uma poro interna, relativamente homognea e sem esculturas, a nexina (do ingls non-sculptured exine). Os elementos estruturais da sexina so, basicamente, colunas (pila, singular = pilum), que se projetam a partir da superfcie da nexina. Esses elementos apresentam Figura 08. Parede do gro de formas variveis nos diferentes gros de plen, mas plen, mostrando o arranjo geralmente, apresentam uma poro cilndrica (bcula, espacial das camadas. singular = baculum) com uma expanso na extremidade (capta, singular = caput). Em alguns gros, as colunas podem aparecer isoladas na superfcie da parede, a semelhana de pregos numa cama de faquir. Em outros, a extremidades superiores dessas colunas se expandem e se fundem, formando um s pequeno teto, como uma laje suportada por pilares. Tanto nos gros com teto como naqueles sem teto podem existir elementos estruturais com outras formas, tais como verrugas, espinhos, etc. (Figura 09).

Figura 09. Estrutura de paredes de gros de plen com teto (direita) e sem teto (esquerda). A) verrucada; B) gemada; C) pilada; D) clavada; E) espinhosa.

As colunas podem aparecer isoladas, fundidas totalmente, formando tetos contnuos (lajes), ou parcialmente, formando tetos descontnuos (Figura 10). No caso de fuso parcial formam-se muros que cercam reas sem teto, com desenhos variados, como retculos (como uma rede de pesca), estrias (como num solo arado), etc. Quando esses muros so muito curvos, diz-se que a superfcie da parede ornada.

Figura 10. Vista em perspectiva de paredes de gros de plen, com variao no arranjo e fuso das colunas (bculas): a - ausncia de fuso (superfcie pilada); b - d - fuso parcial em retculo (b), em estria (c) e em ornamento (d); e - fuso total (superfcie lisa)

Dependendo do nmero de fileiras de colunas (bculas) que sustentam os muros, estes so classificados em: simplibaculados (1 fileira de colunas ou bculas), duplibaculados (2 fileiras), etc. (Figura 11).

Figura 11. Variao no nmero de colunas (bculas) sob os muros. a. simplibaculado; b. duplibaculado; multibaculado.

Os espaos sem teto so chamados de lumens nos gros com retculo. A relao entre a largura dos muros e dos lumens tambm uma varivel importante para identificar os gros de plen. Um muro considerado largo quando tem espessura igual ao dimetro do lmen, e estreito, quando sua espessura inferior a 1/5 daquele dimetro. Entre esses extremos as larguras podem ser consideradas medianas. Nas descries simplificadas o termo bcula ser substitudo por coluna. E, dependendo da ocorrncia ou no de fuso das colunas na poro superior, diremos apenas que a parede apresenta ou no teto, descrevendo o aspecto da sua superfcie (estrias, retculos, etc.)

Luz e obscuridade

A anlise de LUZ-OBSCURIDADE (LO) foi proposta por Erdtman (1956, ver Erdtman, 1966), um destacado palinlogo, e se baseia na focalizao da superfcie da parede do gro de plen em estratos sucessivos, ao microscpio ptico. O termo LO se deve ao fato de que, com as mudanas

de foco sobre a parede h alternncia na iluminao das estruturas: aquelas no plano do foco aparecem intensamente iluminadas e claras (LUZ), enquanto aquelas situadas abaixo ou acima aparecem ligeiramente escurecidas (OBSCURIDADE). Imagine-se olhando uma floresta de cima e que seja possvel focalizar apenas a superfcie mais alta das folhas e a seguir apenas o plano imediatamente abaixo. Na primeira imagem as folhas apareceriam ntidas, cheias de luz, enquanto na segunda apareceriam embaadas, escurecidas, e os ramos que as sustentam seriam mais ntidos (assumindo que a viso e a luz sejam capazes de atravessar as folhas que esto acima). Isto reflete o que j sabemos sobre a floresta, mas que nem sempre fcil de perceber na parede de um gro de plen: as superfcies claras, no primeiro plano, escurecem quando passamos para o segundo plano de focalizao visual da imagem, porque a luz deixa de incidir diretamente sobre elas. Aps as sucessivas focalizaes em superfcie, a organizao tridimensional da parede deduzida pelo observador, com auxlio de uma imagem lateral (corte ptico). A imagem lateral no obtida com um corte real da parede, mas sim atravs da focalizao do contorno do gro de plen. A Figura 12 mostra a imagem em superfcie quando o foco incide em duas posies diferentes, indicadas pela seta na estrutura em perfil da parede.

Figura 12. Posicionamento do foco do microscpio em dois planos (indicados pelas setas) de diferentes tipos de paredes de gros de plen em corte ptico ( esquerda), mostrando as imagens observadas em superfcie ( direita). A) sem teto, superfcie pilada (com pilares livres); B) com teto interrompido (barras ligando alguns pilares), superfcie reticulada; C) com teto contnuo (laje sobre os pilares), superfcie lisa.