Universidad Nacional Autónoma de México Escuela Nacional Preparatoria No.

2 ³Erasmo Castellanos Quinto´

Practica 2: ´Medición de la velocidad de reacción de la catalasa´

Integrantes: -Ballesteros Mera Ricardo Alberto. -Cerecedo Sánchez Mario Alberto. -Cedillo Chávez Juan Carlos. -López Flores Evelyn Aditi. -Pérez Castro Janis. -Ramírez Cruz Emily. Grupo: 604

Introducción: Antes de analizar detalladamente esta práctica es necesario aclarar algunos conceptos; Esta práctica se basa en la elaboración de un catalasímetro el cual es un dispositivo que nos permite medir el oxígeno que se libera en la reacción enzimática de la catalasa. La catalasa es una proteína tetramérica que viene por codificada por un gen situado en el cromosoma 11p13. La función más importante de la catalasa es convertir el peróxido de oxígeno en agua y oxígeno, pero también utiliza el peróxido de oxígeno para catalizar reacciones de peroxidación. Forma parte de un conjunto de enzimas antioxidantes entre las que se encuentran la superóxidodismutasa y las peroxidasas, cuya función es proteger a los tejidos de las especies oxigenadas reactivas producidas por los neutrófilos. En particular, la catalasa protege la hemoglobina y probablemente el ADN frente a la peroxidación. (Mathews C., Van Holde K.E., Ahern A.G.,2002).

Una enzima es un catalizador especifico en la regulación de la química de las células y los organismos .La catálisis es esencial para hacer que muchas reacciones bioquímicas de importancia crucial se produzcan en condiciones fisiologías a velocidades útiles. (Mathews C., Van Holde K.E., Ahern A.G.,2002). Un catalizador es una sustancia que aumenta la rapidez o velocidad de una reacción química, sin verse alterada ella misma en el proceso global. La mayor parte de los catalizadores biológicos son proteínas que denominamos enzimas.

La sustancia sobre la que actúa una enzima se denomina sustrato de esa enzima (Mathews C., Van Holde K.E., Ahern A.G.,2002).

Cuando se une el sustrato S en el lugar activo de una enzima E, se forma un complejo intermediario(ES). Durante el estado de transición, el sustrato se convierte en producto. Tras un breve espacio de tiempo, el producto se disocia de la enzima este proceso se denota como: E+S K1/K2 ES---K3 E+P Velocidad=(P/(t = k3(ES).

Para que sea de utilidad , la velocidad de una reacción debe definirse en términos de S y E. La velocidad de formación de ES es igual a K1[E][S] , mientras que la velocidad de disociación de ES es igual a [K2+k3] [ES]. La suposición del estado estacionario iguala estas dos velocidades. [ES]= [E] [S] / (K2+K3)/KI Michaelis y Menten introdujeron una nueva constante Km la cual es igual a k2+k3 entre k1. V= Vmax[S] / [S] +Km Kcat= Vmax/ [Et] Vmax= Kcat [Et].

Y sustituyendo esta ultima en la ecuación de Michaelis tenemos que la velocidad de una reacción es igual a: V= Kcat[Et][S] / kmt[S] (Bohinski, C.R. 1991).

Por ultimo para dar introducción al proceso que llevaremos acabo en el cual pondremos por una parte en el catalasímetro hígado y le agregaremos en

cantidades proporcionales Peróxido de Hidrogeno , en el cual si en el hígado se encuentra presente la enzima conocida como catalasa (la cual es una perooxidasa) ocurrirá la siguiente reacción:

2H2O2(+acción

de

la

catalasa)

2

H2O

+

O2

se observará por lo tanto una reacción irreversible , la formación de pequeñas burbujas de gas que se forman por el desprendimiento del Oxígeno generado en la reacción catalizada por la enzima mencionada anteriormente. (Mathews C., Van Holde K.E., Ahern A.G.,2002).

Objetivo: Diseñar y elaborar un catalasímetro creado con material reciclado el cual deberá tener las condiciones necesarias para poder hacer las mediciones del volumen desplazado por el oxigeno que se liberará en la reacción que se desea llevar a cabo. Medir, por medio del catalasimetro, la tasa de reacción y el Oxigeno que se liberara durante la reacción realizada por el hígado y el agua oxigenada.

Metodología Para hacer este experimento se requirieron de diversos materiales y dispositivos, el dispositivo más importante es el catalasímetro (Imagen1) hecho con materiales reciclables. Un catalasímetro es un dispositivo que nos permite medir el oxígeno que se libera en la reacción enzimática de la catalasa, el medio que se empleó fue medirlo a través del volumen de agua que desplaza en un recipiente. Como se pidió que el dispositivo estuviera hecho de material reciclable, se usaron

elementos que ya no servían y que se pudieran reutilizar; el más importante de estos fue un tupper hermético que ya no servía puesto también se que estaba

perforado,

emplearon

mangueras, una jeringa de 20ml y un recipiente que se graduó con ayuda de una probeta. Al armar el dispositivo se consideraron varios aspectos pero el más importante fue que el dispositivo fuera un sistema hermético, también se hicieron varias pruebas para

comprobar la eficacia del mismo. Imagen1: Muestra el catalasímetro elaborado por el equipo

Una vez que se obtuvo el catalasímetro se procedió con el experimento en el cual se empleó hígado de pollo previamente triturado (ya que así la reacción es más eficaz) y peróxido de hidrógeno (agua oxigenada). Una vez que se obtuvieron estos materiales se comenzó con el experimento en el cual se colocaron 4 gr. de hígado de pollo dentro del tupper, se cerró el recipiente hermético, se prepararon 10 ml de agua oxigenada dentro de la jeringa, se llenó el recipiente graduado con agua y se colocó boca abajo dentro de una bandeja con agua. Una vez realizado todo esto se incorporó el agua oxigenada al hígado y de inmediato se inició la reacción, un factor importante dentro de este experimento es el cronometrar ya que así se puede apreciar cuánta agua se desplaza en un tiempo determinado y se puede graficar. Finalmente se repitió el experimento 3 veces más y se obtuvieron los datos de tiempo y volumen desplazado. Con esto se tienen 4 mediciones las cuales deben arrojar un resultado muy similar, cabe mencionar que todo este experimento fue grabado con ayuda de un teléfono celular.

Resultados

En la tabla 1 se muestran los datos obtenidos en la reacción química producida al poner 2g de hígado de pollo con 10 ml de H2O2 Tabla 1:
tiempo(s) 2 4 6 8 10 12 14 16 volumen (ml) 4 8 11 15 17 21 26 30 Volúmenes teóricos 3.83 7.4523 11.0713 14.6903 18.3093 21.9283 25.5473 29.1663

Mediante una regresión lineal de los datos obtenidos. (grafica 1) Se obtuvo:

y = 1.8095x + 0.2143 R² = 0.993 Donde: m = 1.8095 ml /s b = 0.2143 Con estos resultados y sustituyendo en la formula anterior, ³x´ con el tiempo que se cuantifico para la reacción se obtuvieron los volúmenes teóricos.

Gráfica 1:
35 30 25 volumen (ml) 20 15 10 5 0 0 5 10 tiempo (S) 15 20

Llevando a cabo el mismo procedimiento que en la (grafica 1 ) y en la( tabla 1) se obtuvieron los datos de las 3 reacciones restantes: Tabla 2:

tiempo(s) 2 4

volumen (ml) 4 7 12

Volúmenes teóricos 4.0001 7.6073 11.2145 14.8217 18.4289 22.0361 25.6433 29.2505

6 16 8 18 10 22 12 26 14 30 16

y = 1.8036x + 0.3929 R² = 0.9867 Donde: m= 1.8036 ml /s b= 0.2143 Gráfica 2:
35 30 25 Volumen (ml) 20 15 10 5 0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18

tiempo (s)

Tabla 3:
tiempo(s) 2 4 6 8 10 12 14 16 volumen (ml) 5 9 13 16 20 25 30 34 Volúmenes teóricos 4.4999 8.6427 12.7855 16.9283 21.0711 25.2139 29.3567 33.4995

y = 2.0714x + 0.3571 R² = 0.9957 Donde: m= 2.0714 ml/s b= 0.3571 Gráfica 3:
40 35 30 volumen (ml) 25 20 15 10 5 0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18

tiempo (s)

Tabla 4:
tiempo(s) 2 volumen (ml) 4 7 4 12 6 16 8 10 12 14 16 19 23 26 29 15.1783 18.8211 22.4639 26.1067 29.7495 11.5355 Volúmenes teóricos 4.2499 7.8927

y = 1.8214x + 0.6071 R² = 0.9953 Donde: m= 1.8214 ml /s b=0.6071 Gráfica 4:
35 30 25 volumen (ml) 20 15 10 5 0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18

tiempo (s)

En la Tabla 5 se hace un promedio de las 4 pendientes (velocidades de reacción) anteriores se obtuvo la velocidad de reacción parcial de esta reacción química enzima-sustrato Tabla 5. Velocidades de reacción y velocidad promedio Velocidad de reacción (m) Reacción 1 Reacción 2 Reacción 3 Reacción 4 Promedio de velocidad 1.8595 1.8036 2.0714 1.8214 1.888975 Coeficiente de correlación múltiple ( R) .993 .9867 .9957 .9953

Discusión Como se puede observar, de acuerdo a los datos obtenidos de las 4 reacciones realizadas, la velocidad de reacción es muy similar en cada una de ellas, lo cual nos confirma que nuestro dispositivo funcionó correctamente y que la reacción fue continua como se supone debe ser en presencia de una enzima como la catalasa, ya que el volumen desplazado era regular de acuerdo al tiempo. La razón mas probable por la cual los resultados de la velocidad de reacción pudieron haber tenido esa pequeña variación (que fue de menos de 0.3) pudo haber sido el error humano al medir las cantidades de oxigeno desplazada ya que era difícil marcar el lugar preciso en el tiempo que se debía marcar al ser desplazado el volumen de agua, pero aun así los resultados fueron bastante precisos y demostraron que el dispositivo era hermético y fusiona bastante bien para lo que fue diseñado, medir el volumen de oxigeno desplazado por la reacción de la catalaza.(Mathews C., Van Holde K.E., Ahern A.G.,2002).

Otra razón pudo haber sido alguna falla en el dispositivo (catalasimetro) al transportarse el oxigeno a través de las mangueras haberse tardado algunas milésimas mas por los pliegues que a veces se presentaban, aunque se trato de minimizar esta situación lo mas posible y no se dejaron lo menos posible de curvas en la manguera por donde pasaba el oxigeno.

También pudimos ver que no hizo falta energía de activación, ya que como menciona (Mathews C., Van Holde K.E., Ahern A.G.,2002), la enzima que actúa como catalizador hace que la reacción no necesite la energía de activación y pueda comenzar de manera inmediata con un máximo de eficiencia y un gasto mínimo de energía.

Conclusiones:

La práctica de la prueba de la catalasa hecha con el dispositivo que revisamos y comprobamos en clase y se relaciona con lo visto en la unidad 2 de nombre Metabolismo y el tema de reacciones químicas ya que lo que se presenció es una reacción química que se lleva a cabo gracias a un catalizador. Podemos concluir que este tipo de reacción es de desplazamiento, son irreversibles ya que el producto (O2) se libera en forma de gas, también podemos relacionarlo con la ley de la conservación de la energía porque solamente cambió de forma liberando energía en forma de calor, libera oxígeno y forma agua; al igual tenemos como fundamento la energía de activación ya que es la cantidad mínima de energía cinética requerida para que en un sistema de partículas tengan lugar reacciones químicas y se pude disminuir drásticamente con una enzima, y así fue, la energía de activación fue prácticamente innecesaria ya que la enzima llevo a cabo la reacción, y si ocupábamos más sustrato del que se empleó la reacción se efectuaría más rápidamente. Es una reacción exergónica ya que se liberó más energía de la que se absorbió y para estas se requieren suministros de energía para iniciarse. Pudimos medir la

tasa de reacción dependiendo de cómo bajaba el agua de nuestro dispositivo y tomando el tiempo cada 2 seg., es importante mencionar que la temperatura, la presión y la concentración de los reactivos fueron iguales para que no se alteraran nuestros resultados. Después de cierto tiempo la reacción efectuada llego a un equilibrio químico ya que en determinado momento dejó de descender el agua.

Bibliografía: Bohinski, C.R. 1991. Bioquímica. A-W. Iberoamericana. E.U.A. p.p. 174-222. Mathews C., Van Holde K.E., Ahern A.G. 2002, Bioquímica. Pearson, tercera edición, Madrid , p.p 400-427

Autoevaluacion Ballesteros Ricardo Aporte de material Participación en practica Elaboración de reporte Cooperación y trabajo en equipo Cedillo Juan Cerecedo Mario López Evelyn Pérez Janis Ramírez Emily

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