Primavera


10


Metilación
del
ADN
en
cáncer
de
 mama.

Por
Daniel
Arturo
Zavala
Ortíz.E08020574

Traducción
del
articulo:
“DNA
methylation
in
breast
cancer”
Por
X
Yang,
L
yan

&
E
davidson.
La
cual
 responde
al
trabajo
complementario
de
la
unidad
IV
del
curso
de
Bioquímica
II.



Islas
CpG
son
regiones
de
ADN
y
conforman
aproximadamente
un
40%
de
promotores
de
 los
 genes
 de
 mamíferos.
 Son
 regiones
 donde
 existe
 una
 gran
 concentración
 de
 pares
 de
 citosina
y
guanina
enlazados
por
fosfatos.
La
"p"
en
CpG
representa
que
están
enlazados
 por
 un
 fosfato.
 Al
 contrario
 de
 sitios
 de
 CpG
 en
 la
 región
 codificante
 de
 un
 gen,
 en
 la
 mayoría
de
los
casos,
los
sitios
CpG
en
las
islas
CpG
están
desmetilados
si
los
genes
están
 expresados.


Profa.:
M.C.

Zaida
Orta
Flores.
 Bioquímica
I
I
‐9:00a.m.
–
10:00a.m..


Instituto
Tecnológico
de
Veracruz
–
Ing.
Bioquímica.



La
metilación
del
ADN
en
cáncer
de
mama.


Por
X
Yang,
L
Yan

&
E
davidson.


Programa
cáncer
de
mama,
Centro
oncológico
“The
johnsons
Hopkins”,
Universidad
johnsons
Hopkins,
escuela
 de
medicina.
Baltimore,
Maryland
21231,
USA.



Resumen:

Como
todos
los
canceres,
el
cáncer
de
mama
es
considerado
como
el
resultado
de
variadas
alteraciones
genéticas
que
 conllevan
a
la
sobre
expresión
oncogénica
y
a
la
perdida
de
la
capacidad
supresora
tumoral.

Recientemente,
el
papel
de
 los
cambios
epigenéticos
como
un
mecanismo
distintivo
y
crucial
para
silenciar
una
gran
variedad
de
tejidos
específicos
 metilados

y
genes
marcados
ha
surgido
en
muchos
tipos
de
cáncer.
La
presente
discutirá
brevemente
aspectos
básicos
 sobre
 la
 metilación
 del
 ADN,
 
 avances
 recientes
 en
 en
 las
 metiltransferasas
 del
 DNA,
 el
 papel
 de
 la
 cromatina
 con
 organización
 alterada
 y
 el
 concepto
 de
 la
 regulación
 transcripcional
 de
 los
 genes
 basados
 en
 CpGs
 metilados.
 Particularmente,
discutiremos
la
regulación
epigenética
de
ciertos
supresores
críticos
tumorales
y
los
genes
reguladores
 del
crecimiento
implicados
en
el
cáncer
de
mama,
y
su
relevancia
al
diagnostico
del
cáncer
de
mama,
el
pronostico
de
la
 enfermedad,
su
progreso
y
terapia.


 (Endocrine‐Related
Cancer
(2001)
8
115‐127.
 


Introduccion:
 Metilacion
 de
 la
 citosina
 e
 islas
 CpG
 en
 mamíferos.

En
 los
 genomas
 de
 los
 vertebrados,
 la
 metilacion
 del
 DNA
 ocurre
 en
 residuos
 e
 citosina
 de
 los
 dinucleotidos
 CpG
 en
 el
 dna
 (bird,
 1980).
 Esta
 alteración
 epigenética
 en
 el
 DNA
 es
 heredable,
sin
embargo,
no
afecta
la
secuencia
de
nucleótidos
 a
comparación
de
los
cambios
genéticos
(Weinberg
2001).
Por
 ello,
 a
 comparación
 de
 los
 cambios
 genéticos,
 las
 modificaciones
 epigenicas
 son
 potencialmente
 reversibles
 (Baylin
 et
 al.
 2001).
 Cerca
 del
 3‐6%
 de
 las
 citosinas
 se
 encuentran
metiladas
en
mamíferos.
Aproximadamente
del
70‐ 80%
 de
 los
 sitios
 CpG
 en
 el
 genoma
 humano
 se
 encuentra
 metilado
(Vanyushin
et
al
1970).
Los
residuos
de
citosina
en
el
 nuevo
 DNA
 sintetizado
 es
 metilado
 por
 la
 DNA‐Citosina
 metil
 transferasa
1
(DNMT1)
(Bestor
1998).
Esta
enzima
transfiere
un
 grupo
 metilo
 desde
 el
 donador
 de
 metilo
 (S
 adenosil
 metionina)
 al
 naciente
 DNA
 usando
 un
 molde
 de
 dna
 hemimetilado
 para
 mantener
 los
 patrones
 de
 metilacion
 durante
la
división
celular
en
mamíferos.
Los
dinucleotidos
CpG
 no
 se
 encuentran
 aleatoriamente
 distribuidos
 a
 través
 del
 genoma.
 Mas
 bien
 se
 encuentran
 frecuentemente
 agrupados
 en
“islas”
CpG,
regiones
que
son
ricas
en
sitios
CpG.
Estas
Islas
 se
extienden
se
extienden
cerca
de
0.5‐3kb,
y
estas
ocurren
en
 promedio
 cada
 100kb
 en
 el
 genoma
 y
 son
 encontradas
 frecuentemente
en
el
área
promotora
de
genes.

(Cross
&
Bird,
 1995).
De
hecho
aproximadamente
la
mitad
de
todos
los
genes
 humanos
 (‐45
 000
 genes)
 contienen
 islas
 CpG
 (Antequera
 &
 Bird,
 1993).
 La
 metilacion
 del
 DNA
 juega
 un
 papel
 
 en
 el
 cual
 diversas
 funciones
 como
 el
 marcaje
 de
 genes
 (Forne
 et
 al,
 1997),
la
inactivación
del
cromosoma
X
(Heard
&
Avner,
1994),


el
 desarrollo
 normal
 
 (Li
 et
 al,
 1993),
 la
 represión
 en
 la
 transcripción
 de
 genes
 (Keshet
 et
 al,
 1985)
 y
 la
 supresión
 de
 secuencias
 de
 DNA
 parasitarias
 (Yoder
 et
 al,
 1997).
 Se
 cree
 se
 puede
 ejercer
 su
 función
 critica
 en
 la
 expresión
 génica
 por
 diversas
 formas.
 Primero,
 la
 metilacion
 de
 las
 islas
 CpG
 es
 asociada
con
la
perdida
de
la
capacidad
de
transcripción
de
los
 genes
 objetivo.
 Segundo,
 los
 residuos
 5‐metilcitosina
 (5meC)
 son
susceptibles
a
la
desaminación
para
dar
Timina,
resultando
 en
 una
 mutación
 de
 transición
 (Schmutte
 &
 Jones,
 1998).
 Tercero,
es
posibles
que
una
hipometilacion
inapropiada
pueda
 ser
relacionada
a
la
inducción
génica
no
regulada
(Muller
et
al,
 2001).
 DNMTs
 A
 la
 fecha,
 tres
 miembros
 de
 la
 familia
 genica
 Dnmt
 han
 sido
 identificados.
 Análisis
 de
 secuencia
 directa
 ha
 revelado
 que
 la
 familia
 génica
 Dnmt
 se
 encuentra
 altamente
 conservada
 en
 eucariotas,
 lo
 cual
 sugiere
 que
 sus
 proteínas
 desempeñan
 un
 papel
crucial
para
su
desarrollo.
(Bestor
2000).


 El
DNMT1
es
el
mejor
conocido
y
el
mas
estudiado
miembro
de
 la
 familia
 DNMT.
 Es
 primordialmente
 una
 metilasa
 de
 “mantenimiento”,
 es
 decir,
 que
 reproduce
 los
 patrones
 de
 metilacion
 del
 dna
 del
 DNA
 hemimetilado
 durante
 la
 division
 celular
(bestor
1988).
De
cualquier
forma,
existe
evidencia
que
 la
 DNMT1
 puede
 tener
 actividad
 metilasa
 de
 novo,
 por
 lo
 menos
en
los
sistemas
in
Vitro
(Laayoun
&
Smith
1995,
Pradhan
 et
 al.
 1997).

El
 ratón
 knockout
 dnmt1
 (ratón
 el
 cual
 su
 DNA
 ha
 sido
 genéticamente
 modificado
 para
 que
 este
 no
 exprese
 ciertas
proteínas)
muere
a
la
mitad
de
su
gestación

con
 niveles
 reducidos
 de
 DNA
 metilado
 (Li
 et
 al,
 1992)
 indicando
 que
 el
 mantenimiento
 de
 la
 metilacion
 del
 DNA
 es
 primordial
 para
 el
 desarrollo.
 El
 gen
 humano
 DNMT1
 esta
 localizado
 en
 el
 cromosoma
 humano
 19p13.2
(Yen
et
al,
1992)
y
codifica
a
una
proteína
de
200
 kDa
 ,
 de
 la
 cual
 el
 dominio
 catalítico
 de
 la
 metil
 transferasa
se
localiza
en
el
C
terminal
de
la
proteína.

La
 porción
 grande
 n
 terminal
 de
 la
 DNMT1
 se
 enfoca
 a
 la
 replicación
focio
a
través
de
la
proliferación
de
antigeno
 celular
 nuclear
 (PCNA)
 (Chuang
 et
 al
 1997).
 Estudios
 recientes
 han
 identificado
 han
 identificado
 nuevas
 funciones
 para
 este
 dominio.
 Primero,
 su
 secuencia
 de
 aminoácidos
(653‐730)
un
patrón
CXXC
que
interacciona
 directamente
con
la
histona
deacetilasa
(HDACs),
la
cual
 actúa
para
remover

colas
deacetiladas
de
las
histonas
en
 el
 nucleosoma
 para
 generar
 una
 cromatina
 con
 estructura
 transcripcionalmente
 inactiva
 (Fuks
 et
 al,
 2000).
 Segundo,
 a
 través
 de
 sus
 primeros
 120
 aminoácidos,
 se
 une
 al
 co‐represor
 transcripcional,
 DMAP1,
que
inhibe
la
transcripción
independientemente
 de
 la
 actividad
 HDAC
 (Rountree
 et
 al,
 2000).
 Por
 ultimo
 los
 aminoácidos
 416‐913
 el
 la
 zona
 N
 terminal
 del
 DNMT1
 interacciona
 con
 la
 proteína
 retinoblastoma,
 Rb
 (Robertson
 et
 al,
 2000).
 Por
 esto,
 la
 porción
 N
 terminal
 del
 DNMT1
 solo,
 o
 en
 colaboración
 con
 otros
 co‐ represores
 y
 HDACs
 “reclutados”
 inhibieron
 significativamente
la
transcripción
in
Vitro.

 Una
gran
cantidad
de
datos
demuestran
que
la
actividad
 de
 la
 DNMT1
 es
 elevada
 en
 células
 neoplasicas,
 y
 estas
 actividades
 elevadas
 se
 encuentra
 asociada
 con
 una
 incrementada
proliferación
celular
(El‐Deiry
et
al
,
1991),
 genesis
tumoral
(De
Marzo
et
al,
1999)
y
una
progresión
 tumoral
(Issa
et
al,
1993).
Por
ejemplo,
la
sobreexpresion
 de
la
DNMT1
puede
transformar
las
células
fibroblasticas
 de
raton
NIH‐3T3
(Wu
et
al,
1993),
y
l
ainhibicion
de
esta
 enzima
 por
 estructuras
 antisentido
 puede
 inducir
 a
 una
 demetilacion
 global
 del
 DNA
 y
 revertir
 el
 fenotipo
 maligno
 (Ramchandani
 et
 al,
 1997).
 Además,
 
 las
 transformaciones
 fos‐mediadas
 de
 fibroblastos
 sanos
 esta
 asociada
 con
 un
 incremento
 de
 la
 expresión
 de
 DNMT1
y
el
contenido
total
de
metilacion
en
el
genoma
 (Bakin
 &
 Curran,
 1999).
 Finalmente,
 se
 reporta
 también
 que
 la
 elevación
 de
 DNMT1
 es
 un
 componente
 esencial
 de
 transformación
 inducido
 por
 el
 antigeno
 grande
 T
 SV40

mediante
las
vías
en
que
se
implica
a
la
Rb
(Slack
et
 al,
1999).
 De
 cualquier
 forma,
 una
 expresión
 incrementada
 de
 DNMT1
 no
 es
 aparentemente
 un
 componente
 obligatorio
 en
 células
 malignas
 (eads
 et
 al,
 1999).
 
 Las
 expresión
 de
 células
 somáticas
 knockout
 de
 DNMT1
 
 en


células
cancerigenas
de
colon
no
es
un
evento
letal.

Mas
 allá
 de
 todo,
 el
 contenido
 total
 de
 CpG
 metilado
 fue
 reducido
 a
 solamente
 cerca
 del
 20%
 y
 ciertos
 patrones
 de
genes
específicos
de
las
islas
CpG
fueron
mantenidos
 (Rhee
 et
 al,
 2000).
 Estos
 hallazgos,
 junto
 con
 la
 observación
 de
 que
 las
 células
 de
 tallo
 embriónicas
 (ES)
 de
ratones
knockout
DNMT1
son
capaces
aun
de
mutilar
 de
novo,
sugieren
la
posible
existencia
de
otros
dnmtS
(Li
 et
 al,
 1992,
 Lei
 et
 al,
 1996).
 De
 una
 familia
 dnmt,
 La
 dnmt2
 fue
 separada
 por
 diversos
 grupos
 (Okano
 et
 al,
 1998).
 Sin
 
 embargo,
 su
 dominio
 catalítico
 carece
 de
 actividad
dnmt
en
el
humano
y
no
es
mas
discutido
aquí.

 Dos
 isoformas
 de
 la
 familia
 enzimática
 DNMT3,
 DNMTs
 3ª
 y
 3b
 de
 novo
 (Dnmt3a
 y
 3b)
 fueron
 recientemente
 separadas
 en
 ratones
 (Okano
 et
 al,
 1999).
 Estos
 metilan
 los
dinucleotidos
CpG
del
DNA
tanto
hemimetilado
como
 no
 metilados
 in
 Vitro.
 Los
 dos
 genes
 son
 sobre
 expresados
 en
 células
 ES
 y
 relativamente
 con
 bajos
 niveles
en
tejido
somático
adulto.
El
DNMT3a
humano
ha
 sido
vislumbrado
en
el
cromosoma
2p23

mientras
que
la
 DNMT3b
se
mapeo
en
el
cromosoma
20q11.2
(Robertson
 et
al,
1999).
 La
 interrupción
 de
 Dnmt3a
 y
 Dnmt3b
 en
 ratones
 con
 bloques
de
genes
objetivo
bloquea
la
metilacion
de
novo
 en
células
ES
y
embriones
jóvenes,
pero
no
tienen
efecto
 alguno
 en
 la
 continuidad
 de
 los
 patrones
 de
 metilacion
 previamente
marcados
(Okano
et
al,
1999).
Sin
embargo,
 la
 capacidad
 metiladora
 se
 retiene
 después
 de
 la
 inactivacion
 del
 Dnmt3a
 o
 3b,
 indicando
 cierta
 redundancia
 en
 la
 funcion
 de
 estas
 dos
 metilasas
 de
 novo.
 La
 Dnmt3b
 parece
 mostrar
 ser
 critica
 para
 la
 metilacion
de
un
compartimiento
especial
del
genoma;
la
 perdida
 de
 la
 actividad
 catalitica
 de
 la
 DNMT3b
 por
 una
 mutacion
 genica
 en
 el
 sindrome
 de
 inmunodeficiencia,
 inestabilidad
centromerica
y
anomalias
faciales
causal
la
 desmetilacion
 de
 solamente
 familias
 especificas
 de
 secuencias
 repetidas
 y
 de
 islas
 CpG
 eb
 el
 cromosoma
 inactivo
 X
 (Hansen
 et
 al.
 1999).
 La
 DNMT3a
 humana
 es
 ubiquitosamente
 expresado,
 pero
 la
 DNMT3b
 es
 expresada
 en
 menores
 concentraciones
 salvo
 en
 los
 testículos,
 en
 la
 tiroides
 y
 huesos
 de
 medula.
 La
 sobre
 expresión
 tanto
 de
 DNMT3b
 y
 de
 DNMT3a
 parece
 que
 caracteriza
 múltiples
 tipos
 de
 tumores
 humanos
 (Xie
 et
 al,
 1999).
 
 Cuatro
 formas
 empalmadas
 de
 DNMT3b
 con
 actividad
 enzimática
 alterada
 fueron
 expresadas
 de
 una
 manera
a
tejido
especifico
(Robertson
et
al,
1999).
Serán
 necesarios
 nuevos
 estudios
 para
 elucidar
 las
 posibles
 actividades
 de
 los
 miembros
 de
 la
 familia
 DNMT3
 en
 la
 génesis
 tumoral,
 la
 metilacion
 de
 novo
 en
 tejidos
 específicos
 y
 en
 la
 regulación
 transcripcional
 en
 tejidos
 somáticos.