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Departamento de Ciencia y Tecnologa MICROBIOLOGA GENERAL

SEMINARIO N 2 1. MICROSCOPIA
1) Diga si las siguientes afirmaciones son verdaderas o falsas. Justifique su respuesta a) El microscopio de contraste de fase se utiliza principalmente para estudiar la estructura interna de las clulas. b) Las clulas vivas no pueden ser estudiadas en ningn tipo de microscopio electrnico, ya que todo el sistema funciona en vaco y los tratamientos que sufren las clulas afectan su viabilidad. c) Para observar la morfologa de las clulas sin teir se utiliza el microscopio de campo claro, ya que las clulas y el medio que las rodea tienen ndices de refraccin muy distintos. d) El microscopio de campo oscuro se utiliza para observar la motilidad de los microorganismos. e) El uso de un filtro, en la fuente de luz, que solo deja pasar luz roja aumenta la resolucin del microscopio ptico 2) Que tipo de microscopio seria el ms adecuado para observar las siguientes muestras. a) Un extendido de bacteria teidas b) Bacterias de tamao pequeo, no teidas. Cuando no se requiere demasiado detalle c) Tejido vivo no teido, cuando se desean algunos detalles intracelulares d) Una muestra que emite luz cuando es irradiada con UV e) Detalles intracelulares de una clula de un 1m de longitud. 3) Cual es limite superior de magnificacin de un microscopio ptico? 4) De que factores depende el poder de resolucin? 5) Qu representa la apertura numrica de un lente? 6) Cual es el efecto del uso del condensador en un microscopio ptico? 7) En un microscopio ptico de campo oscuro los microorganismos se ven brillantes sobre un fondo oscuro. A que se debe esto?, Cules son las diferencias con el microscopio de campo claro? 8) Por qu son retrasados los rayos de luz al pasar por una clula?, Cmo se utiliza este efecto en el microscopio de contraste de fases? 9) Cul es objetivo de inmersin o hmedo y por que recibe ese nombre? 10) En el microscopio de fluorescencia cual es la fuente de luz? 11) Cul es la diferencia entre el microscopio electrnico de Barrido y el de Transmisin ? 12) Por qu los microscopios electrnicos poseen mayor resolucin que los pticos? 13) Usando un microscopio ptico de un poder de resolucin de 0.3m, lentes oculares 10X y objetivo de inmersin 100X. Usted sera capaz de discernir, Dos objetos separados por 3m, 0.3m o 300m?

2. TINCIONES
1) Para que se utilizan las tinciones en Microbiologa? 2) Cul es la diferencia entre una tincin diferencial y una simple?. 3) Cul es la importancia de la fijacin al realizar una tincin? Qu mtodos de fijacin conoces? 3) Qu sucede si a un cultivo envejecido de Bacillus sp. se le realiza una tincin de Gram?. 4) Cmo espera observar las bacterias luego de la tincin de Gram si se olvida de realizar el paso de decoloracin ?. 5) Qu suceder si no se calienta en presencia del colorante en las tinciones de cido resistencia y esporas?. 6) Por qu no se tien las clulas cido alcohol resistentes por la coloracin de Gram?. 7) Qu caractersticas debe tener un colorante para ser empleado en una tincin negativa?. 8) Las tinciones de Gram, esporas y Ziehl Neelsen (Acido Alcohol resistentes) permiten determinar diferencias estructurales en clulas de distintos gneros. Cules son esas diferencias y cul es el paso de cada coloracin que las pone en evidencia ?. Qu tipos de colorantes se utilizan en cada caso ?.

9) Bacillus subtilis presenta color violeta al microscopio ptico luego de una tincin de Gram y color rosado al efectuarse una coloracin de esporas. Por qu motivo el cristal violeta en el primer caso y la safranina en el segundo tien la bacteria de esa manera ?. 10) Indique cual o cuales de las tinciones realizadas en los trabajos prcticos ponen en evidencia diferencias estructurales de la pared bacteriana. Explique brevemente. 11) Diga si las siguientes afirmaciones son verdaderas o falsas y justifique su respuesta. a) En una tincin negativa los colorantes utilizados tienen afinidad slo por la pared bacteriana. b) En la tincin de esporas el verde de malaquita no tie el citoplasma celular porque es removido por los solventes orgnicos que se utilizan en el paso de decoloracin. c) Las clulas Gram negativas no se tien con cristal violeta porque el mordiente no puede atravesar la pared de peptidoglicano. d) El calentamiento en la coloracin de cido resistencia permite que la fucsina fenolada se combine con el cido miclico presente en la pared bacteriana. 12) Se dispone de un kit de Gram y un frasco de verde de malaquita. Con estos colorantes podra realizar una tincin para determinar la ubicacin de las esporas en una especie de Bacillus que se quiere identificar?. Explique. 13) Cul es el propsito de utilizar un contra colorante? 14)Usted esta tratando de identificar una bacteria Gram negativa desconocida. Cuales de las siguientes tinciones no son necesarias? a) tincin negativa b) cido alcohol resistente c) tincin de Flagelo d) tincin de esporas

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