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Cultivo de tejido de Células Vegetales

Emily A. Mercado Sepúlveda Universadad Interamericana de Puerto Rico Departamento de Ciencias Naturales Recinto Metropolitano San Juan, PR 00919-1293 Emy1611ster@gmail.com Sometido co requisito parcial BIOL 2013-Laboratorio de destrezas II 10 de diciembre de 2010

Resumen Es de una importancia capital para la subsistencia, evolución y economía humanas el poder generar suficientes satisfactores que sostengan su existencia . Dado que la cadena alimenticia inicia en los organismos autótrofos, es de una gran relevancia la producción de estos. El Cultivo de Tejidos Vegetales es, desde muchos puntos de vista, una tecnología sustentable que representa una buena respuesta a muchos problemas de suministro de alimentos y de materias primas para la industria y consumo humanos.

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La base gracias a la cual podemos hacer este tipo de cultivos es una propiedad de las células vegetales conocida como toti potencia, esta propiedad se define como la capacidad de cualquier célula de generar un organismo completa bajo condiciones adecuadas. Esto nos permite una gran diversidad en los tejidos que queramos producir bajo condiciones de laboratorio. La producción de bienes de consumo a partir de vegetales se remonta hasta los inicios de la humanidad misma. Es de destacar que no es posible un desarrollo sustentable en ninguna organización humana sin una adecuada producción de bienes de consumo a partir de vegetales. Esta producción tiene un impacto directo sobre las industrias alimentaria y textil y por ende en todos los rubros relacionados. Esto es una forma de propagar las características deseadas de una planta o animal. Este junto, con la técnica de recombinación de DNA y la fermentación son los tres componentes principales de la biotecnología. Esta técnica también conocido como micro propagación permite hacer muchas copias de una plante genéticamente idénticas a las plantas parentales, de una manera más rápida y conveniente que los métodos de reproducción convencional. En este experimento específicamente vamos a busca información de este tipo de técnica y resaltaremos situaciones parecidas a nuestro laboratorio experimental de cultivo de células vegetales.

5.3 Tabla de contenido Portada y resumen Tabla de contenido Introducción Materiales y Metodos Resultados Discusión Conclusión Referencias pág 1. 6-9 pág.2 pág 3 pág. 10-21 pág. 21 pág. 21 .5 pág.6 pág. 4.

. Por ejemplo. El cultivo de tejido vegetal también permite clonar exclusivamente una parte de la plante deseada. se pueden hacer cruces de fusión de protoplastos. se puede promover el crecimiento de algunas partes de la planta que produzcan compuestos de interés. se puede hacer en tu casa y requiere poco equipo. se puede obtener el equivalente de 120 acres de maíz en una placa Petri. Otra ventaja de esta técnica es que. Un protoplasto es una celula vegetal que se le ha removido la pared celular. De esta manaera. que se produce solo en la raíz. como lo es el caso de Taxol. Remover la pared celular de un proloplasto es un concepto importante para la transformación genética. ya que de una celula no diferenciada se puede promover el crecimiento de la raíz o del vástago. Esta técnica también permite obtener organismo libre de patógenos. sin tener que esperar a que la planta crezca. Con la misma. se puede seleccionar una característica deseable y se puede obtener un gran número de individuos en un espacio reducido.4 Introducción Mediante el cultico de plantas se puede obtener un mayor número de progiene. con algunas modificaciones. un medicamento contra el cáncer del ovario.

este procedimiento representa una ventaja. En un principio debemos colocar el explante en un medio donde se produzca callus de tejido no diferenciado. La técnica de cultivo de tejidos de plantas consiste en tomar una parte de la planta. Aunque se realizaron intentos de cultivar células y tejidos vegetales aislados desde 1902. la podemos subcultivar. Materiales y Métodos Los sistemas de cultivo de células y tejidos vegetales se fundamentan en: la teoría celular de Schleiden (1838) y Schwann (1839) la cual enuncia que células individuales en un organismo tienen la µcapacidad de vida independiente¶. un meristemo. L NAA es una toxina que rutinariamente se usa a bajas concentraciones para promover la elongación de los meristemos en las puntas del tallo. tal como la punta del tallo. la auxina ácido indolacético. La parte de la planta que se va a cultivar se conoce como explanante. Lugo podemos cambie=arlo de medio para estimular la formación de plántulas mediante la formación de tallos y raíces. Simultáneamente Philip White en los Estados Unidos. Este se coloca en un medio. cuya formulación cambia dependiendo del tipo de propagación que se desea. . un embrión o una semilla y colocarlo en un medio nutriente estéril donde se va a multiplicar. la diferenciación de órganos y para sostener el crecimiento del callus u órganos diferenciados. y en el concepto Darwiniano de regulación hormonal del crecimiento vegetal (Darwin y Darwin 1890). También podemos multiplicar los embriones para producir semilla artificial. Luego de cultivar la planta exitosamente. la NAA promuve la elongación de las raíces. Estos estuvieron fuertemente influenciados por el descubrimiento en 1934/1935 de la primera sustancia natural reguladora del crecimiento vegetal. Roger Gautheret y Pierre Nobercourt en Francia comenzaron sus famosos experimentos que llevaron al crecimiento ilimitado de raíces de plantas (1934) y células en cultivo y a la organogénesis in vitro (1939). A altas concentraciones. ya que se pueden preservar prototipos de organismo para estudiarlos o reproducirlos mas tarde. obteniendo cultivos secundarios. organizados y detallados solamente comenzaron hacia los 1930s. estudios formales.5 Un cultivo primario es el que se deriva de un organismo po primera vez. Los cultivos secundarios se pueden congelar en nitrógeno liquido y almacenar a -70 C. un nódulo.

Al mismo tiempo se describió la formación de embriones somáticos a partir de cultivos de callos y células en suspensión provenientes de zanahoria. solamente hasta 1965 se presentó evidencia inequívoca de la totipotencia de células vegetales completamente aisladas. de ningún cultivo de importancia. Distinguiremos las regiones meristematicas de las plantas monocolidionasy dicotiledóneas. y la regeneración de plantas a partir de ellos (1971). y la mayoría de especies de leguminosas. A pesar de los esfuerzos realizados. no se han obtenido híbridos novedosos de utilidad comercial. Hasta alrededor de 1980 la regeneración de plantas estuvo limitada a algunas especies dicotiledóneas como modelo. Resultados .6 Durante el transcurso de su trabajo con el cultivo de células de raíces de plantas de tomate infectadas con virus. En este experimento vamos a mencionar las aplicaciones del cultivo de células vegetales a la biotecnología. Estos problemas se fueron superando eventualmente mediante el uso cuidadoso y sensato de los reguladores de crecimiento y de las condiciones de crecimiento. Enumeraremos las características de un medio que propicie el crecimiento de células vegetales. monocotiledóneas y leñosas continuaban siendo recalcitrantes al crecimiento sostenido y regeneración en cultivo in vitro. en combinación con las auxinas regulan la morfogénesis de brotes (1957). generó mucho optimismo para el mejoramiento vegetal mediante la producción de híbridos somáticos. fue una piedra angular importante en el desarrollo de técnicas para la regeneración de plantas a partir de células en cultivo. Aunque ya se podía obtener regeneración de plantas a partir de cultivos de tejidos o de células mediante organogénesis o embriogénesis somática. Sin embargo. los protoplastos han demostrado su utilidad para la introducción directa de DNA llevando a la obtención de plantas transgénicas y para estudios básicos en función de promotores y regulación de genes. El descubrimiento de las citoquininas y el hallazgo de que estas. Esta observación llevó posteriormente al uso de cultivos de meristemos para la eliminación de virus y a la micropropagación y estableció las bases para el trabajo actual de micropropagación industrial a nivel mundial. El aislamiento (1969) y fusión (1970) de protoplastos vegetales. White también observó que raíces subcultivadas frecuentemente se encontraban libres de virus.

se obtiene una descendencia uniforme. eficiente y en grandes cantidades.7% lysophosphatidylinositol.8% fosfatidilinositol bifosfato. el medio de cultivo se compone de una mezcla de sales minerales. Los fosfolípidos fueron identificados por comigration con patrones conocidos en las placas de capa fina. y la regeneración de plantas a partir de ellos (1971). perfumes. 1.1la micropropagación se utiliza para multiplicar o propagar plantas nuevas. Micropropagación es el conjunto de técnicas y métodos de cultivo de tejidos utilizados para multiplicar plantas asexualmente en forma rápida. Este es el primer informe de polyphosphoinositides en las células vegetales. La composición del medio depende de la especie vegetal y de la etapa del proceso de micropropagación. Sin embargo. con plantas genéticamente idénticas. a partir de un fragmento (explanto) de una planta seleccionada (llamada planta madre). agua y agar. En la micropropagación. los fosfoinosítidos como porcentaje recuperado inositol fue de 93% fosfatidilinositol. 0.7 Resumen de ³The many dimensions of plant tissue culture research´ Este cultivo ha revolucionado todo tipo de cultivos tradicional. mutagénesis o mejoramiento genético. El explanto más usado para los procesos de propagación in vitro son las yemas vegetativas de las plantas. Resumen de ³Polyphosphoinoistotides are present in plant tissue culture cells´ Polyphosphoinositides se han aislado de las células de zanahoria silvestre crecen en cultivo en suspensión. Sin embargo. no se han obtenido híbridos novedosos de utilidad comercial. Después de un día para otro el etiquetado de las células con myo-inositol [2-3H]. Los frascos que contienen las plantas se ubican en estanterías con luz artificial dentro de la cámara de crecimiento. etc. además de controlar la cantidad de horas de luz. los protoplastos han demostrado su utilidad para la introducción directa de DNA llevando a la obtención de plantas transgénicas y para estudios básicos en función de promotores y regulación de genes. Se utiliza también la micropropagacion para obtener plantas libres de enfermedades (tales como virosis) u obtener grandes cantidades de plantas que no se propagan eficientemente. Resumen de ³ plant tissue culture: an alternative for producction of useful metabolites´ Las plantas superiores contienen una variedad de sustancias que son medicamentos útiles. azúcar. A pesar de los esfuerzos realizados. 3.. El aislamiento (1969) y fusión (1970) de protoplastos vegetales. donde se fija la temperatura en valores que oscilan entre los 21 y 23 °C. denominadas clones.7 monofosfato fosfatidilinositol%. aditivos alimentarios. generó mucho optimismo para el mejoramiento vegetal mediante la producción de híbridos somáticos. Por su parte. el aumento de . tales como aquellas creadas por ingeniería genética. de ningún cultivo de importancia. vitaminas y reguladores de crecimiento. la disminución de los recursos vegetales.

Típicamente se . Una variedad de enfoques para mejorar la productividad de la cultura han sido juzgados y algunos de ellos fueron muy efectivos. En la actualidad. Debido a que las plantas de cultivo celular no se ven afectada por los cambios en las condiciones ambientales tales como el clima o la depredación natural. todavía hay algunos obstáculos que deben superarse antes de la comercialización de otros productos puede ocurrir. Sin embargo. Con el fin de disminuir los costes. mejora de la producción puede estar disponible en cualquier lugar o temporada. aumentar la eficiencia de producción por celda es un factor esencial. y la biomasa celular de ginseng a escala comercial y varios otros productos. muchas empresas industriales en Japón han tratado de aplicar esta tecnología a la producción comercial de compuestos útiles porque Japón tiene una fermentación de la tecnología altamente desarrollada. El costo de producción de los metabolitos es uno de los problemas a causa de la baja productividad de las células vegetales cultivadas. lo que significa que una mayor cantidad de productos debe producirse lo antes posible. dos empresas japonesas son la fabricación de un pigmento vegetal.8 los costes laborales y otros problemas en la obtención de estos de alto valor añadido sustancias de plantas naturales han apuntado hacia el uso de la planta de cultivo celular para la producción de los productos. Dado que las células de plantas pueden ser cultivadas en fermentadores diferentes de una manera similar a la fermentación microbiana. La técnica es ampliamente empleada para introducir variabilidad en las cepas de interés biotecnológico. shikonin. Dibuja el callus: Ahora continuaremos con la técnica de fusión de protoplastos: La fusión de protoplastos es una técnica de biotecnología en la cual se produce la fusión de las membranas de dos o más células dando lugar a un híbrido somático. incluidos los medicamentos contra el cáncer parece estar cerca de comercialización.

En biotecnología vegetal. Las auxinas son utilizadas en fruticultura para la actividad de crecimiento (por división o alargamiento celular) y en particular en hojas jóvenes y en semillas en desarrollo. Se sintetizan en las regiones meristemáticas del ápice de los tallos y se desplazan desde allí hacia otras zonas de la planta. pese a mezclar el contenido genético de dos líneas distintas. Este movimiento se realiza a través del parénquima que rodea a los haces vasculares. Esencialmente provocan la elongación de las células. estableciéndose así un gradiente de concentración. estableciéndose así un gradiente de concentración. aun cuando también puede inducir la síntesis de otras hormonas. La aplicación de auxinas a una planta. Para ello la metodología consiste en aplicar pulsos eléctricos a células en suspensión (electroporación) o inducir la desorganización de las membranas empleando polietilenglicol. Una aplicación . no está considerada ingeniería genética. como algunos hongos. un ejemplo es la generación de poliploides.9 realiza mediante protoplastos vegetales. pues en su ejecución no se emplea la tecnología del ADN recombinante. la fusión de protoplastos se emplea en programas de mejora. Este movimiento se realiza a través del parénquima que rodea a los haces vasculares. Provocan la elongación de las células. esto es. principalmente hacia la base. principalmente hacia la base. induce a que se sinteticen auxinas naturales en el tejido aplicado. Esencialmente pLas auxinas son un grupo de fitohormonas que funcionan como reguladoras del crecimiento vegetal. En condiciones de estrés hay una baja en la síntesis de auxina y un aumento en la presencia de auxinas ³unidas´. células vegetales desprovistas de pared celular. generalmente más productivos. Discusión Las auxinas son un grupo de fitohormonas que funcionan como reguladoras del crecimiento vegetal. si bien también puede efectuarse empleando otros taxones. Se sintetizan en las regiones meristemáticas del ápice de los tallos y se desplazan desde allí hacia otras zonas de la planta. Esta técnica.

Las fitohormonas se producen en pequeñas cantidades en tejidos vegetales. Pueden actuar en el propio tejido donde se generan o bien a largas distancias. Se establecen fenómenos de antagonismo y balance hormonal que conducen a una regulación precisa de las funciones vegetales. Las fitohormonas ejercen sus efectos mediante complejos mecanismos moleculares. El agua es siempre como parte integrante de los medios de comunicación del gel. Un cultivo de células del callo es por lo general sostenida en los medios de comunicación en gel. Un callo célula de la planta consiste en somáticas células indiferenciadas de una planta de sujetos adultos. y del mismo modo todo proceso está regulado por la acción de varias fitohormonas. en gran parte la misma manera que las bacterias se cultivan. el enriquecimiento con nitrógeno . a diferencia de las hormonas animales. la formación del fruto y la germinación. regulación de las vías metabólicas y cambio de flujos iónicos. entre ellos el crecimiento de las plantas. Sus funciones son: . En la investigación biológica y la biotecnología. medios suficientes consisten en agar y la mezcla usual de macronutrientes y micronutrientes para el tipo celular determinado. sintetizadas en glándulas. fósforo y potasio es especialmente importante. frutos y semillas.10 de auxina a alta dosis puede estimular la síntesis de etileno y causar efectos negativos de crecimiento hasta la muerte de tejido. la caída de las hojas. un callo de células es una masa de células indiferenciadas. En biología de las plantas. cambios en el citoesqueleto. Una fitohormona interviene en varios procesos. Se producen en la zona apical. Para las células de plantas. la floración. La giberelina es una fitohormona. mediante transporte a través de los vasos xilemáticos y floemáticos. Las fitohormonas o también llamadas hormonas vegetales son sustancias químicas producidas por algunas células vegetales en sitios estratégicos de la planta y estas hormonas vegetales son capaces de regular de manera predominante los fenómenos fisiológicos de las plantas. Las hormonas vegetales controlan un gran número de sucesos. que desembocan en cambios de la expresión génica. lo que permite solucionar el problema de la ausencia de sistema nervioso. las células de callos son las células que cubren una planta de la herida.

2. Ambos se unen para formar un monoterpeno (geranio PPi) y se van uniendo más moléculas de IPP. generándose distintas Gas en cada etapa oxidativa: Ruta no hidroxilativa. Es opuesta a otra hormona vegetal denominada ácido abscísico. Inducir la brotación de yemas.-Oxidaciones: Para dar lugar al aldehído de GA12 (Ald GA12): dos partes: El ent-kaweno se transforma en ácido ent-kawenoico. 3. Éstas. pueden tener lugar en rutas alternativas. una vez formado el IPP.-Ciclación: Dividido en dos partes: el GGDP se transforma en CPP y el CDP se convierte en ent-kaweno (tetracíclico). que es un diterpenoide lineal. Catalizado pror ciclcasas en los proplastidios. que requieren una determinada duración de la noche para crecer). El ácido ent-kawenoico se transforma en aldehído de GA12.Formación del resto de GAs a partir del Ald GA12: Transformación del ALd GA12 en GA12 (puede tener lugar en dos partes: en el RE (catalizado por una monooxigenasasa) o en el citosol (catalizado por una diosigenasa). que se elimina por sucesivas oxidaciones. que tiene lugar en el citosol.11 y y y Interrumpir el periodo de latencia de las semillas. o la hidroxilación del C3 (importante para que la giberelina sea activa). El resto de reacciones de esta etapa ocurren en el citosol. diterpenoides tetracíclicos. Promover el desarrollo de los frutos (floración). haciéndolas germinar. b)Ruta de los terpenoides. La biosíntesis de giberelinas está regulada por distintos factores: a)Exógenos: Fotoperíodo: Aumentan giberelinas y se produce la floración (en plantas de día largo. en 3 etapas: 1. como la hidroxilación del C13. catalizadas por dioxigenasas: la primera modificación de la estructura básica es la oxidación y posterior eliminación del C en posición 20. Temperatura: En determinadas especies. luego el IPP se transportaba del citosol a los proplastidios. Las gibererlinas. Biosíntesis: Inicialmente se debe sintetizar su precursor inmediato. Para la formación del GGPP (geranil geranil pifosfato) tienen que actuar 2 rutas: a) Síntesis del ispentenil profosfato (IPP): Inicialmente se pensaba en la ruta del acetato/mevalonato. La GA12 tiene un grupo metilo en el C20. es necesario pasar una época fría . tiene lugar la síntesis del GGPP en los proplastidios. el grupo metilo del ent-kaweno se transforma en grupos carboxilo del ácido ent-kawenoico y la transformación del anillo B con 6 C en anillo B con 5 C. El IPP se isomeriza a dimetilalyldiP. Catalizado por monooxigenasas dependientes de P450 en el RE (transporte desde los proplastidios al RE). surgen a partir del GGDP.

probablemente no habría diferenciación de órganos vegetales. Su nombre proviene del término «citokinesis» que se refiere al proceso de división celular. Usando cultivos de tabaco. esas bajas temperaturas inducen al biosíntesis de GAs. . Las citoquininas o citocininas constituyen un grupo de hormonas vegetales que promueven la división y la diferenciación celular. flores o frutos. Sin las citocininas. Poco después de su descubrimiento Skoog y Miller propusieron que la formación de órganos en las plantas se debe al balance existente entre las citoquininas y las auxinas. Aparte de su papel como reguladores de la formación de nuevos órganos. en el cual intervienen otras sustancias con las que las citocininas realizan esta tarea conjuntamente. ya que a este proceso le antecede en importancia la diferenciación celular. las citoquininas también intervienen en la apertura de estomas. desde luego. ya sean raíces. el cual podría ser considerado como el segundo proceso madre de todos los procesos fisiológicos en los vegetales.12 para que se produzca la germinación o floración. no se realizan de manera exclusiva por las citocininas. las células vegetales son transformadas en otro tipo de células específicas para formar un órgano en particular. hojas. sino que estas hormonas son las encargadas de causar el efecto diferenciación celular. y cuando es alta la inhibe. Estos eventos. ya que cada uno tiene diferentes tipos de células. se induce su síntesis. la cual se encarga de dar origen a la formación de cada uno de los órganos de cualquier vegetal. demostraron que un balance alto de auxinas favorecía la formación de raíces mientras que un balance alto de citoquininas favorecía la formación de tallos. b)Endógenos: Sistema de retroalimentación de las giberelinas: cuando la concentración de GAs es baja. supresión de la dominancia apical e inhibición de la senescencia de las hojas entre otros procesos. Las citoquininas fueron descubiertas en la década de 1950 como factores que promueven la proliferación celular y mantienen el crecimiento de tejidos vegetales cultivados in vitro. de «dar la orden» y de dirigir el proceso. Mediante este proceso (el más primordial del reino vegetal) predominantemente citocinínico.

Dentro de las desventajas está la de una mayor probabilidad de presentar virus adventicios o latentes. al carecer del refuerzo mecánico que otorga la pared celular. Estas células. Los cultivos celulares tienen una serie de ventajas innegables. incluyendo moléculas orgánicas que sean necesarias. A su vez. Es por esto que el medio de mantención debe estar ajustado de manera que no hayan diferencias osmóticas significativas con las células mismas. su crecimiento in vitro es limitado y hay inhibición por contacto. Adicionalmente. El estar más cercanas a las células que las originaron. se puede producir una crenación del protoplasto. se ve reflejado en una mejor actividad y funcionalidad similar a su ambiente natural. quedan más proclives a destruirse por diferencias de presión osmótica con respecto al medio. Igualmente para la producción de vacunas los cultivos primarios son recomendables por tener una baja probabilidad de que se transformen en malignos. bacteriano o vegetal). sus cromosomas tienen un número diploide (2n). pero al mismo tiempo tienen desventajas que hay que tener en consideración. los protoplastos vegetales requieren un control de la luminosidad de cultivoSe usan los protoplastos en el estudio del comportamiento de la membrana plasmática. Como ventajas podemos citar: . incluyendo el ingreso de macromoléculas y virus. se debe controlar las temperaturas en las cuales se mentienen los protoplastos. un medio hipotónico puede producir citólisis del protoplasto. lo cual dependerá del tipo que sean (fúngico. esto contempla el suministro de macronutrientes y micronutrientes. Así mismo. lo que implica el desarrollo de la adecuada tecnología para el control de calidad. como vitaminas. En el caso de un medio hipertónico respecto al medio intracelular.13 Los protoplastos son mantenidos en medio de cultivo celular que permitan nutrir adecuadamente la célula. Los cultivos primarios tienen características especiales que los diferencian de las líneas celulares: conservan la morfología de las células del órgano del que fueron aisladas. por lo que en aislamientos primarios de cepas virales éstas tienen mayor sensibilidad que una Línea Celular ya establecida.

también debe incluir vitrinas. y fisiológicos (hormonas. El área de lavado debe incluir por lo menos un lavadero grande con agua caliente y agua fría y una fuente de agua de alto grado de pureza. y también debe proveer basureros adecuados para el material vegetal.) Caracterización y homogeneidad de la muestra. Este ambiente debe contar con mesas de trabajo para la preparación de los medios y para colocar las balanzas. temperatura... El cultivo celular no puede reemplazar siempre el ensayo "in vivo" pero es una alternativa válida en muchas situaciones. factores de crecimiento. estanterías y espacio para el equipo de refrigeración. niveles de O2. presión osmótica. y los reactivos químico. Área de lavado y esterilización. preferiblemente agua doblemente destilada. los platos caliente con agitación. densidad celular.. y con un acceso directo de las células a la droga las concentraciones requeridas son mucho más bajas que en el animal completo. La investigación biomédica supone el sacrificio cada año de muchos miles de animales de experimentación. Los pasos y cosas que se necesitan para realizar un cultivo de tejido vegetal: Área de preparación. pero debe proveer también uno espacio para almacenar los materiales de vidrio y de plástico.14 Permiten un control preciso y fino del medio ambiente. tensión superficial. y otros elementos. CO2. con lo que se supera el grave problema de heterogeneidad de las muestras inherente asociado al uso de animales de experimentación. o de una línea continua son homogéneas. y para la incubadora o la cámara de crecimiento.). Las células en cultivo de una línea celular. según . Se utiliza principalmente para preparar los medios de cultivo. Motivaciones éticas. El área de esterilización debe tener espacio para el autoclave vertical y horizontal. el cual puede ser pequeño (olla de presión) o grande (de carga frontal y de enfriamiento lento y rápido). con morfología y composición uniformes. Se pueden obtener con facilidad un número elevado de réplicas idénticas. el medidor de pH. En un cultivo se pueden controlar todos los factores del medio: Físico-químicos (pH.. Suponen una economía en el uso de reactivos o drogas a estudiar pues al realizarse en volúmenes reducidos. inorgánico y de vidrio que se deseche. Economía..

En cualquier caso. Área de trasferencia En esta área del laboratorio se realiza el trabajo de escisión. Sin embargos ciertas operaciones de inoculación como la excision y el cultivo de ápices y meristemas en tubo de ensayo de boca angosta. es necesario tomas precauciones para evitar el calentamiento excesivo. se pueden realizar sobre una mesa limpia. Dado que este trabajo demanda los mas alto nivel de limpieza ambiental.50 m. o la construcción de cuartos de trasferencia. la distancia entre entrápanos es de 0. se recomida la estalación de gabinetes de flujo horizontal o vertical de aire filtrado bajo presión. Área de incubación Los cultivos se incuban en un cuarto apropiado o en gabinetes o cámaras de crecimiento. El área de incubación o crecimiento in vitro debe proporcionar un buen control de la temperatura (20-28 oC). En el cuarto de incubación se instalan estanterías metálica o de madera para colocar los cultivos. instalando alarmas y controles para cortar la iluminación cuando falle el aire acondicionado. Área de incubación . Es necesario propiciar una buena distribución del aire en este cuarto para evitar zonas de recalientamento por efecto de las luces. Estas estanterías puede tener dimensiones variables: el ancho entre 0. pero son más costosas. Esta área puede incluir espacio para estufas. en un lugar alejado de las puertas y con un mínimo de corriente de aire. inoculación y trasferencia de los espantes a los medios de cultivo. de la iluminación (variables según las necesidades: 1000 a 5000 lux) y de la humedad relativa (70-80%). ubicada en un lugar del laboratorio libre de corrientes de aire y polvo. Esta área debe incluir.15 sea el volumen del material que se procese.30m y 1. es conveniente sacar los balastros fuera de este cuarto. además uno espacio para cultivos en agitación y para cultivos estático en oscuridad. en lo posible. Las regulación de la temperatura se puede lograr por medios de aparato de aire acondicionado de pared o de sistema central. Cuando se utilizan tubos fluorescentes. Los gabinetes de flujo laminar deben ubicarse.20 a . estas pueden ser más eficientes en cuanto al control ambiental.20 m. con el fin de prolongar la vida útil de los filtros.80 a 2.00 m. y la altura total de 1. el largo de acuerdo con el tamaño del cuarto. secadores y un lavadero con agua caliente y fría.

instalando alarmas y controles para cortar la iluminación cuando falle el aire acondicionado. potenciómetro. bandejas o camas apropiadas.50 m. Esta área debe incluir. la distancia entre entrápanos es de 0. El área de incubación o crecimiento in vitro debe proporcionar un buen control de la temperatura (20-28 oC).20 m.30m y 1. de la iluminación (variables según las necesidades: 1000 a 5000 lux) y de la humedad relativa (70-80%). dependiéndoos de las condiciones climáticas del lugar donde esta ubicado el laboratorios e los requierimentos de los aislamientos de los materiales por razones fitosanitarias. Después del trasplante. Estas estanterías puede tener dimensiones variables: el ancho entre 0. .16 Los cultivos se incuban en un cuarto apropiado o en gabinetes o cámaras de crecimiento. y la altura total de 1. Estas operaciones se pueden llevar a cabo en tinglados. Equipo para el laboratorio En el área de preparación: refrigerador. Área de crecimiento Las plantas que se regeneran en el área de incubación se pueden acondicionar o aclimatar y luego trasplantar in macetas. balanzas (una macrobalanzas y una de precisión). es conveniente sacar los balastros fuera de este cuarto. etc.80 a 2. botellas y material de vidrio o plástico (see manual). estas pueden ser más eficientes en cuanto al control ambiental. 250 y 500 ml). En cualquier caso. frascos (125. es necesario tomas precauciones para evitar el calentamiento excesivo. Las regulación de la temperatura se puede lograr por medios de aparato de aire acondicionado de pared o de sistema central. lo cual se puede lograr usando nebulisacion. plancha eléctrica con agitador magnético.20 a .00 m. el largo de acuerdo con el tamaño del cuarto. pero son más costosas. Es necesario propiciar una buena distribución del aire en este cuarto para evitar zonas de recalientamento por efecto de las luces. casas de malla o invernaderos. En el cuarto de incubación se instalan estanterías metálica o de madera para colocar los cultivos. las plantas generalmente necesita un acondicionamiento gradual a las condiciones de campo. además uno espacio para cultivos en agitación y para cultivos estático en oscuridad. Cuando se utilizan tubos fluorescentes. cámaras húmedas de plástico.

A las raíces de las plantas les cuesta penetrar este suelo. Hay tres pasos básicos para cultivar las plantas con éxito: 1. La capa superficial del suelo está entre ocho a catorce pulgadas por encima del suelo. la "atmósfera" adecuada para el suelo.17 En el área de lavado y esterilización: Autoclave manual o automático (see manual). un jardín nuevo no ha tenido tiempo de construir un suelo muy friable (que se desmenuza fácilmente) lleno de nutrientes y microorganismos. y es más oscura y más fértil que el subsuelo. Hay 3 tipos básicos de suelo: arcilloso. Pero aún así puede conseguir una buena cosecha el primer año. corteza molida. Debe contener materia orgánica. Jardín Ecológico: Pasos básicos para crearlo con éxito Hay muchas maneras de producir un suelo vivo que contenga todos los minerales conocidos y desconocidos y miles de millones de microorganismos. ligero y desmenuzable. . recipientes de plástico grandes. Su capa superficial del suelo puede haber "desaparecido" a causa de los constructores. o su valor puede disminuir al mezclarlo con el subsuelo. organismos vivos. arenoso y margoso. El yeso y la cal pueden mejorar la aeración y el drenaje de estos suelos. Si el suelo de su jardín ha sido maltratado por contaminación con fertilizantes químicos. musgo). si sique unos pocos pasos sencillos. En cualquier caso. Producir un suelo vivo. La materia orgánica mejorará la circulación del aire (compost. pesticidas y herbicidas. o por el agotamiento de su materia orgánica sin volver a reciclarla en el suelo. serrín. El arcilloso absorbe el agua lentamente. destilador de vidrio. gradillas para secado. humedad y nutrientes para el crecimiento de las plantas y microorganismos. que retenga bien al agua y que contenga todas las sustancias necesarias para la vida vegetal. el drenaje es muy débil y la aeración es limitada. granular. Un suelo virgen también puede haber sido dañado. conseguir que el sistema se equilibre requerirá medidas heroicas y una periodo de tiempo más largo. bandejas de aluminio y de plástico de vario tamaños. estufas para esterilización y secado. mantillo.

2. La adición de estas y otras materias orgánicas acabarán transformando un suelo arenoso en un buen suelo margoso. Pocos jardineros son lo bastante afortunados como para contar con un suelo margoso natural pero puede crearse gradualmente en casi cualquier parte. No conviene regar en exceso el jardín o los árboles y no es necesario regar cada día. Es mejor regar por la mañana temprano o a última hora de la tarde. que contenga un equilibrio de partículas de diferentes tamaños. pero prácticamente no contiene nutrientes (además en grandes cantidades puede aumentar la acidez del suelo. tanto que el agua y los nutrientes hidrosolubles lo atraviesan demasiado rápidamente. . El musgo es ese material y tiene la ventaja de que se descompone lentamente. Una ligera llovizna de menos de media pulgada no es motivo para no regar. Para los jardínes y las vides la altura debería oscilar entre tres a seis pulgadas y para los árboles frutales entre seis a nueve pulgadas.18 Los suelos arenosos tienen el problema contrario: dejan pasar mucho oxígeno y las raíces lo atraviesan fácilemente. 3. Mantenga el suelo de su jardín de verduras y el suelo debajo de sus árboles frutales cubierto siempre con aproximadamente seis pulgadas de mulch orgánico. El suelo margoso es el suelo ideal. El agua poco profunda hace que las raíces se vuelvan hacia arriba buscando la humedad y puede matar a las plantas. Los productos de madera y las cáscaras no son muy beneficiosos para el suelo arenoso. Es necesario añadir materia orgánica que tenga una textura fina y esponjosa que retenga el agua y los nutrientes.) El compost se descompone más rápido pero suministra nutrientes al suelo. Un riego profundo una vez o dos veces a la semana es preferibe a un riego ligero cada día. Se puede añadir arcilla y de este modo equilibrarlo. Este suelo margoso estará lleno de nutrientes valiosos y será capaz de producir plantas comestibles sanas y vigorosas. Un regado profundo hace que las raíces sean profundas y fuertes. Tiene un drenaje demasiado bueno. y un buen suministro de humus (sustancia oscura y pejagosa creada por la descomposición de las materias orgánicas). Proporcione la humedad adecuada.

Cave un pie o así evitando llegar a la capa superficial del suelo. interleucinas. Por otra parte a bajas concentraciones. COMO EMPEZAR Limpie el jardín de maleza y malas hierbas y cave ligeramente para mullir la tierra. las proteínas más complejas que son glicosiladas (modificadas mediante el agregado de carbohidratos) deben producirse en células animales. inmunobiológicos (anticuerpos monoclonales. Un ejemplo relevante de tales proteínas complejas es la hormona eritropoyetina. A altas concentraciones la NAA promueve la elongación de las raíces. Giberalina Es otra auxina usada principalmente para . En años sucesivos es posible que apenas tenga que volver a cavar. IAA Se encuentra en altas concentraciones. Los productos biológicos producidos mediante la tecnología del ADN recombinante en cultivo celular incluyen enzimas. disminuye el crecimiento del callus. porque el suelo será fácil de trabajar. A pesar de que muchas proteínas pueden producirse mediante ADN recombinante en cultivos bacterianos. hormonas sintéticas.19 No conviene usar agua ablandada artificialmente porque a menudo contiene demasiado sodio. NAA es una auxina que rutinariamente se usa a bajas concentraciones para promover la elongación de los meristemos en la punta del tallo. Tampoco conviene usar agua artificialmente fluorada o agua cuyo contenido en fluor natural sea alto porque las puntas de las hojas se volverán marrones. linfoquinas y agentes anticancerígenos). Aplicaciones del cultivo de celulas vegetales son: El cultivo masivo de líneas celulares animales es fundamental para la manufactura de vacunas virales y diversos productos biotecnológicos. si cultiva de forma orgánica. debido al alto costo que implica producir tales proteínas complejas en células de mamíferos. se están realizando investigaciones para producir tales proteínas complejas en células de insectos o de plantas superiores. estafitohormona promueve la formación de raíces. Actualmente. con un mulch permanente.

Citoquiniasis Son un grupo de reguladores de crecimiento que promueven la elongación del tallo y la proliferación de raíces secundarias.html F. Tosado.M.Manual de Laboratorio Destrezas II . 2009.tripod. Conclusión En este experimento virtual aprendimos varios conceptos acerca del cultivo de célula vegetales. Explicamos los efectos de las auxinas y de las geberelinas sobre crecimiento en las plantas y mencionamos las aplicaciones de cultivo de células vegetales a la biotecnología. tales como que son auxinas.20 promover la elongación de yemas. Enumeramos las características de un medio que propicio el crecimiento de células vegetales. Oquendo. así como otros términos antes mencionados. Mirando y L Gonzalez. apuntesdebioquimica. giberalina. Explicamos los principios básicos de las técnicas de cultivo de tejido vegetal. protoplastos. fitohormonas. Discutimos las ventajas y desventajas de hacer cultivos primario y secundario. Medina.R. Referencias Cultivo de Tejodos Vegetales. C. citoquinina. entre otras. También distinguimos entre las regiones meristematicas de las plantas monocotiledóneas y dicotiledóneas.com/botanica/id2.

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