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Escuela:...................................... Asignatura: T. P Qumica Orgnica II Apellido y Nombre:............................................Curso:........................Div:.................. Profesora: Vega Claudia Alejandra Fecha: ............................

TRABAJO PRCTICO N10 INVESTIGACION DE VITAMINAS


FUNDAMENTO
Las vitaminas son sustancias orgnicas, de naturaleza y composicin variada imprescindibles en los procesos metablicos que tienen lugar en la nutricin de los seres vivos. No aportan energa, ya que no se utilizan como combustible, pero sin ellas el organismo no es capaz de aprovechar los elementos constructivos y energticos suministrados por la alimentacin. Normalmente se utilizan en el interior de las clulas como antecesoras coenzimas, a partir de las cuales se elaboran miles de enzimas que regulan las reacciones qumicas de las que viven las clulas Las vitaminas deben ser aportadas a travs de la alimentacin, puesto que el cuerpo humano no puede sintetizarlas. Una excepcin es la vitamina D, que se puede formar en la piel con la exposicin al sol, y las vitaminas K, B1, B12 y cido flico, que se forman en pequeas cantidades en la flora intestinal. De acuerdo a su solubilidad la podemos clasificar en: Hidrosolubles: Complejo B:- Liberadoras de Energa: Tiamina (B1), Riboflavina (B2), Niacina (B3), Biotina y cido Pantotnico. - Hematopoieticas: Acido Flico y Vitamina B12 - Otras: Piridoxina (B6), Piridoxal y Piridoxamina. No Complejo B: Vitamina C (Acido Ascrbico) Liposolubles: Vitamina A (Retinol, -Carotenos), Vitamina D (Colecalciferol), Vitamina K (Filoquinonas, Menaquinonas) y Vitamina E (Tocoferoles).

VITAMINA C
La Vitamina C o Acido Ascrbico (objetivo de nuestra prctica) la podemos encontrar en carnes, cereales, frutas (ctricos, sanda, meln, papaya, mango, kiwi) hortalizas, leche de vaca, verduras, entre otros. Entre sus principales funciones tenemos: - Antioxidante y captador de radicales libres - Formacin y reparacin de colgeno - Sntesis de Proteoglucanos La ausencia de sta vitamina da como resultado la enfermedad conocida como Escorbuto la cual se caracteriza por un defecto de la sntesis de colgeno, que queda de manifiesto por la falta de cicatrizacin de heridas, defectos de la formacin de los dientes, rotura de capilares que conducen a la aparicin de abundantes petequias, debilidad muscular, perdida del cabello, entre otros. El cido Ascrbico acta como un fuerte agente reductor y en su oxidacin cede dos tomos de hidrgeno para transformarse en cido dihidroscrbico, que tambin tiene actividad de Vitamina C. En este experimento se aprovechara la capacidad reductora de la vitamina C, que puede actuar sobre el yodo de acuerdo con la siguiente reaccin:

Vitamina C + I2 2I + Vitamina C oxidada El yodo al reaccionar con la vitamina C la destruye, la oxida, al igual que el aire.

El yodo, en presencia del almidn, toma una coloracin azul. Si se agrega una pequea cantidad de almidn al jugo que se quiere analizar y enseguida se le agrega yodo, el yodo reaccionara con la vitamina C del jugo. Cuando toda la vitamina C haya reaccionado con el yodo, al agregar mas yodo, este quedara libre para combinarse con el almidn presente y tomar el color azul, como se indica a continuacin:

I2 + almidn color azul


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Cul es el papel del almidn? El papel del almidn es hacer de indicador, cuando el yodo reaccione transformando la vitamina C. El exceso reacciona inmediatamente, a la primera gota con el almidn, y este se colorea de azul, indicndonos el consumo de la vitamina C.

VITAMINA A
Vitamina A (Retinol). Pigmento esencial para la visin. No se presenta en los vegetales, pero muchas plantas contienen carotenoides, pigmentos que absorben la luz y pueden convertirse enzimaticamente en vitamina a por ruptura del beta caroteno por la mayora de los animales. La deficiencia en vitamina A produce piel seca, membranas mucosas secas, desarrollo y crecimiento retardado y ceguera nocturna.

cidos Nucledos
El ADN es una de las partes fundamentales de los cromosomas, estas son estructuras constituidas por dos pequeos filamentos o brazos, que pueden ser iguales o desiguales, estn unidos por un punto comn llamado Centrmero; varan en forma y tamao, pueden verse fcilmente al momento de la divisin celular por medio de un microscopio. Los cromosomas qumicamente estn formados por protenas y por el cido Desoxiribonucleico o ADN. Estructura del ADN El ADN est formado por unidades llamadas nucletidos, cada una de las cuales tiene tres sustancias: el cido fosfrico, un azcar de cinco carbonos llamado pentosa y una base nitrogenada. El cido fosfrico forma el grupo fosfato; la base nitrogenada es de cuatro clases: adenina (A), guanina (G), citocina (C) y timina (T). La pentosa es una 2-desoxirribosa. Segn los descubridores del ADN, James Watson y Francis Crick, el ADN est formado por una doble cadena de nucletidos que forman una especie de doble hlice semejante a una escalera en espiral; a los lados se disponen en forma alternada un fosfato y un azcar y en los peldaos dos bases nitrogenadas. Funciones y Propiedades del ADN a) El ADN controla la actividad de la clula. b) Es el que lleva la informacin gentica de la clula, ya que las unidades de ADN, llamadas genes, son las responsables de las caractersticas estructurales y de la transmisin de estas caractersticas de una clula a otra en la divisin celular. Los genes se localizan a lo largo del cromosoma. c) El ADN tiene la propiedad de duplicarse durante la divisin celular para formar dos molculas idnticas, para lo cual necesita que en el ncleo existan nucletidos, energa y enzimas.

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INVESTIGACION DE VITAMINAS PROCEDIMIENTO


Determinacin de vitamina C Primer paso: Prepara cuatro tubos de ensayo. Tubo 1: se coloca agua destilada. Tubo 2: se pone agua destilada caliente y un poco de almidn. Tubo 3: un pedazo de pastilla de vitamina C disuelta en el agua. Tubo 4: adems de contener una disolucin anloga a la del tercero, se le aade un poco de la disolucin de almidn. Segundo paso: Aadirle una gota de lugol a los cuatro tubos de ensayo. Al tubo 4 agregar gota a gota hasta o obtener el color azul. Anotar los colores intermedios de este tubo.

Repetir los tubos 3 y 4 con jugo de limn o naranja.

Reconocimiento de vitamina C (cido ascrbico) mediante azul de metileno.


El azul de metileno es un colorante que se reduce fcilmente formando un compuesto incoloro. Debido a esta facilidad de cambiar de color (azul = oxidado, blanco = reducido) ser utilizado para el reconocimiento de la vitamina C. En varios tubos de ensayo numerados se vierten 3 ml. de zumo de limn o de naranja y solucin de pastillas de vitamina C, se les aade unas gotas de azul de metileno, formndose una mezcla azul. Agitar las mezclas y dar una interpretacin de lo ocurrido en cada tubo de ensayo. Accin del calor y el cobre sobre la vitamina C. El calor y los cationes metlicos (cobre, hierro, etc.) destruyen la vitamina C. Si sometemos el zumo de limn a ebullicin se destruir el cido ascrbico; la accin ser ms eficaz si a la vez aadimos cobre. En un tubo de ensayo (nmero 1) se vierten 4 ml. de zumo de limn o naranja, se les aade unas gotas de disolucin de sulfato de cobre al 1 % y se deja reposar para una observacin posterior. En un segundo tubo se vierten otros 4 ml. de zumo de limn o naranja, unas gotas de la disolucin de sulfato de cobre y se hierve durante diez minutos. Se retira, se deja enfriar y se le aade una gota de azul de metileno. Observar lo ocurrido. En el tercer tubo de ensayo se vierte slo 4 ml. del zumo u otra bebida. A los quince minutos de iniciada la experiencia se aade una gota de azul de metileno a los tubos 1 y 3. Se observarn y se interpretarn los resultados obtenidos.

RECONOCIMIENTO DE LAS VITAMINAS A Preparacin de la pastilla de vitamina A - Disolver la pastilla de vitamina A en cloroformo, utilizar esta solucin para reconocerla.

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Extraccin de Vitamina A de la zanahoria


Colocar una cucharada de zanahoria rallada y deshidratada en un mortero, agregar media cucharada de arena y 10ml de cloroformo, triturar todo y filtrar. Utilizar la solucin del filtrado para el reconocimiento de vitamina A.

Reconocimiento de la Vitamina A.
1) Limpiar el vidrio de reloj con etanol. 2) Una gota de aceite de hgado de bacalao en el centro (vit A). 3) 3-4 gotas de Cl3Sb. Se forma un color azulado. Esto es debido a que la vit a posee enlaces dobles conjugados, y en presencia de metales de transicin (Sb), la coloracin se vuelve fuerte. Repetir el procedimiento con la solucin extrada de la zanahoria y con la pastilla de vitamina A

Extraccin de ADN
PROCEDIMIENTO Solucin Tampn: 240 ml agua destilada + 3g de sal ClNa+ 10 g de bicarbonato + 10 ml de detergente. Enfriar a 0 C. El tampn contiene una concentracin muy alta de iones que permite romper las membranas de las clulas y del ncleo 1. Picar y triturar una cebolla en un mortero. Aadir arena y agua destilada para que al triturar se puedan romper las membranas de las clulas y queden los ncleos sueltos. Al triturar las verduras lo que hacemos es romper las membranas de muchas clulas con lo que liberamos su contenido (orgnulos, ncleos, protenas, ADN, ARN ...) 2. Aadir al triturado, 50 centmetros cbicos de agua destilada. Remover hasta hacer una especie de papilla o pur. 3. Filtrar sobre una tela para separar los restos de tejidos que hayan quedado por romper. 4. Medir el volumen del filtrado con una probeta. 5. Aadir al filtrado un volumen igual de solucin Tampn. Mezclar vigorosamente durante 2mit. Al mezclar el pur con el tampn conseguimos que se rompan las membranas de las clulas y de los ncleos sin que se estropee el ADN que queremos obtener y quede libres las fibras de cromatina. Adems el detergente que lleva el tampn ayuda a terminar de romper las membranas de los ncleos celulares en los que se encuentra el ADN y adems elimina protenas que se encuentran protegiendo el ADN. 6. Se centrfuga durante 5mit. Tras la centrifugacin se recoge el sobrenadante (con cuidado de no coger el precipitado) de cada uno de los tubos de ensayo; para ello nos ayudamos de una pipeta Pasteur. Este sobrenadante lo pondremos en el vaso de precipitados pequeo. Con la centrifugacin se separan los materiales ms grandes, como clulas enteras, membranas, grandes orgnulos (se quedan en el fondo del tubo) de los materiales ms pequeos como protenas, pequeos orgnulos, ADN y ARN (que quedan en el lquido sobrenadante). 7. Se aaden en el vaso de precipitados sobre nuestra muestra con mucho cuidado: para ello se va dejando caer 10ml de etanol sobre las paredes del vaso de precipitados. Tras aadir el etanol en nuestra muestra han quedado dos fases, una superior (contiene el etanol) y otra inferior. El etanol hace que el ADN precipite en la interfase etanol-agua, mientras que el resto de materiales se quedan en el pur. 8. Introducir una varilla de vidrio e ir removiendo en la misma direccin en forma muy lenta. Sobre la varilla se van adhiriendo unas fibras blancas, visibles a simple vista, que son el resultado de la agrupacin de muchas fibras de ADN. 9. Extraer la hebra y colocarla en un porta objeto agregarle una gota de safrina o fucsina, tapar con el cubre objeto y observar al microscopio.

Traer para la prctica limn o naranja, pastilla de Vitamina A y C, y una cebolla

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