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TODO LO QUE USTED SIEMPRE QUISO SABER SOBRE LA VACUNA RB51 Y NUNCA SE ATREVI A PREGUNTAR Nueva vacuna contra

la brucelosis bovina, obtenida a partir de una cepa rugosa de B. abortus Los rebrotes de brucelosis bovina en reas geogrficas limitadas, con importantes tasas de incidencia, que hacen difcil su control nicamente con los mtodos establecidos de diagnstico serolgico y sacrificio de los reaccionantes positivos, permiten que se plantee la posibilidad de autorizar la vacunacin en esas zonas. Hasta hace pocos aos las vacunas disponibles contra la brucelosis inducan anticuerpos en los animales vacunados que podan interferir ms tarde con el diagnstico de la enfermedad, segn la forma en que se hubiera practicado la vacunacin. La aparicin de una nueva vacuna denominada RB51, obtenida a partir de una cepa rugosa, logra una proteccin efectiva sin inducir anticuerpos que interfieran con el diagnstico. En los animales la brucelosis es producida por las que han sido catalogadas como 6 especies diferentes del gnero Brucella. B. melitensis, B. abortus, B. suis, B. canis, B. ovis y B. neotomae. La brucelosis afecta a todas las especies domsticas, numerosos animales silvestres y al hombre, pero las distintas especies de Brucella se han adaptado a hospedadores especficos entre los animales domsticos. As la brucelosis bovina es producida por B. abortus, la porcina por B. suis y la ovina y caprina por B. melitensis. Las enzootias tpicas son el resultado de este tipo de interaccin germen-hospedador. El "salto" (migracin) de una especie de brucela a otra especie animal, se caracteriza porque no se da en sta la diseminacin posterior, con su correspondiente curso enzotico, o se presenta slo en raras ocasiones. El hombre es susceptible a la infeccin por B. melitensis, B. abortus, B. suis y B. canis. No se han comprobado casos humanos por B. ovis, responsable de la epididimitis infecciosa de los moruecos ni por B. neotomae, slo detectada en la rata del desierto Neotoma lepida. Colonias lisas y rugosas Si se cultiva Brucella en medios slidos, sus colonias pueden aparecer con morfologa lisa o rugosa y algunas muestran un fenotipo mucoide. Las colonias lisas tienen la capacidad de volverse rugosas espontneamente y algunas cepas rugosas tambin pueden revertir a la forma lisa. La morfologa lisa o rugosa de las colonias de Brucella depende de la composicin de las molculas de lipopolisacrido (LPS) de la pared externa de la bacteria. Las lisas tienen una cadena O de polisacrido compuesta de un homopolmero de N-formil-perosamina (N-formil-4-amino-4,6-didesoxi-manosa) mientras que en las rugosas la molcula de LPS carece de cadena O. La cadena O de N-formilperosamina desempea un papel fundamental en el diagnstico serolgico de la brucelosis ya que es un antgeno inmunodominante que induce la formacin de anticuerpos en la mayora de los animales expuestos a las cepas lisas de brucela y prcticamente todos los mtodos de diagnstico serolgico de brucelosis, de uso habitual, se basan en la deteccin de anticuerpos de la cadena O. Tests serolgicos Segn la OIE, debe recalcarse que la seroaglutinacin no es adecuada para la deteccin de la brucelosis bovina y su empleo para propsitos de comercio internacional debe ser descartado. A pesar de esto, muchos pases, incluida la Unin Europea, requieren an que los animales no reaccionen al test de la seroaglutinacin (SAT) en un nivel que exceda las 30 UI para el comercio internacional y as lo recoge, consecuentemente, tambin la legislacin espaola en su "Real Decreto 1716/2000, de 13 de octubre, sobre normas sanitarias para el intercambio intracomunitario de animales de las especies bovina y porcina" que incorpora al ordenamiento jurdico interno varias Directivas europeas sobre el control veterinario de los intercambios intracomunitarios de estos animales, dejando tambin la posibilidad de emplear otras pruebas serlogicas autorizadas. La Unin Europea tambin establece un nivel superior para la fijacin de complemento de 20 UIFC (Unidades Internacionales de Fijacin de Complemento). La FC es ms sensible y especfica y tiene un sistema estandarizado de unidades. Debe recomendarse su empleo como prueba de confirmacin. El rendimiento de los ELISAs es comparable al

de la FC y como tcnicamente son ms fciles de realizar, pueden ser preferidos en muchos laboratorios como pruebas de chequeo y de confirmacin. Para el control de la brucelosis suele ser necesario en primer lugar el chequeo con un mtodo simple y rpido, de gran sensibilidad y posteriormente se aplica sobre las muestras positivas un segundo mtodo, ms especfico, de confirmacin. La prueba del antgeno brucelar tamponado, el Rosa de Bengala, la prueba de aglutinacin tamponada en placa o el ELISA, son mtodos adecuados para el chequeo. Las muestras reaccionantes positivas, deben ser comprobadas luego con un mtodo de confirmacin adecuado. La legislacin espaola, en el "Real Decreto 2611/1996, de 20 de diciembre, por el que se regulan los programas nacionales de erradicacin de enfermedades de los animales", en su Anexo 2, sobre el diagnstico de la brucelosis bovina, contempla las pruebas de la seroaglutinacin, la fijacin del complemento, el antgeno brucelar tamponado coloreado con rosa bengala, la prueba del anillo y el ELISA. Fija como Laboratorio Nacional de Referencia el de Sanidad y Produccin Animal de Santa Fe (Granada), perteneciente al Ministerio de Agricultura Pesca y Alimentacin. Vacunacin Se puede prevenir la infeccin y, por consiguiente, la aparicin de la enfermedad, por medio de la vacunacin. La normativa espaola, en el Real Decreto 2611/1996, antes mencionado, prohbe en su artculo 14 la vacunacin contra la brucelosis bovina. No obstante, en el apartado 4 del mismo artculo, establece una excepcin: "cuando la situacin epidemiolgica de la enfermedad valorada en cada regin as lo aconseje, se podr autorizar la vacunacin de bovinos de edad comprendida entre tres y seis meses, en determinadas reas o explotaciones con la vacuna B-19 u otra vacuna oficialmente aprobada." Como norma general, la induccin de una respuesta inmune protectora, efectiva y duradera en el caso de patgenos intracelulares facultativos (como es el caso de la brucela) requiere el uso de vacunas vivas o, en algunos casos, el empleo de varias inoculaciones de antgenos protectores adecuados, en presencia de coadyuvantes, que favorecen la induccin de inmunidad mediada por clulas. Esto ltimo es un componente fundamental de la respuesta inmune protectora en la infeccin con cepas lisas de Brucella spp., aunque los anticuerpos frente la cadena O tambin desempean un papel ms o menos importante en la proteccin, dependiendo de la especie animal involucrada. B. abortus cepa 19 y B. mellitensis Rev-1 son vacunas vivas que se basan en cepas lisas atenuadas. Ambas pueden inducir grados variables de proteccin y ambas, tambin, estimulan la produccin de anticuerpos frente a la cadena O lisa. La cepa 19 se aisl inicialmente como una cepa virulenta de la leche de una vaca Jersey en 1923 y se dej a temperatura ambiente en un laboratorio durante un ao. Fue descrita por J.M. Buck en 1930. Es una cepa atenuada, de morfologa lisa, incapaz de crecer en presencia de eritritol. Aunque es de baja virulencia para el ganado, la vacunacin subcutnea del bovino gestante puede llevar al aborto, pero es un caso ms bien raro, oscilando entre el 1 y el 2,5% en condiciones de campo. Algunas bacterias de la cepa 19 aisladas de abortos son capaces de crecer en presencia de eritritol. La vacuna Rev.1 es una cepa viva atenuada de B. melitensis aislada a partir de una cepa virulenta que se torn dependiente de estreptomicina para su crecimiento pero que perdi esta caracterstica al seguir cultivndose. Protege al ovino y caprino contra la infeccin por B. melitensis y al morueco contra la infeccin por B. ovis. Es una vacuna atenuada pero conserva cierta virulencia. Segn la dosis administrada, durante la gestacin, los abortos pueden ser frecuentes. En los moruecos la vacuna es aparentemente avirulenta o de baja virulencia. Es una cepa lisa y por lo tanto induce serologa positiva que interfiere con el diagnstico. Se ha investigado el empleo de la Rev. 1 en el vacuno y los resultados indican que da una buena proteccin, mejor que la de la cepa 19. La cepa de B. abortus 45/20, es una cepa rugosa con muy pequea o ninguna capacidad de inducir anticuerpos anticadena O. Se desarroll inicialmente como una vacuna viva, pero se desech en esa forma por su tendencia a revertir hacia la virulencia y posteriormente se emple, con cierto xito, como vacuna muerta con adyuvante oleoso. Su capacidad de inducir una proteccin significativa frente a B. abortus indica que las formas rugosas se pueden emplear

para inducir una respuesta inmune protectora, evitando, de este modo, los problemas diagnsticos asociados a las cepas lisas. RB51 Fue seleccionada a partir del crecimiento de la cepa de B. abortus 2308 en presencia de rifampicina. Se emple para denominarla la "R" por ser una cepa rugosa, la "B" por Brucella y "51" no indica el nmero de pases necesarios para obtenerla sino que corresponde a una nomenclatura interna del laboratorio que la desarroll. La cepa RB51 est desprovista de la cadena O, es rugosa y muy estable tras numerosos pases in vitro e in vivo a travs de varias especies animales. Dado que carece de cadena O, no induce anticuerpos anti-O de forma detectable por los mtodos serolgicos convencionales o el ELISA, independientemente de la edad, dosis o frecuencia de las inoculaciones. La cepa RB51 es una cepa atenuada, como lo indican los ensayos efectuados en ratn, cobayo, caprino y vacuno, de los cuales se elimina en un espacio de tiempo relativamente corto con capacidad abortiva pequea o nula. Cuando se emplea en protocolos de vacunacin de una sola dosis, su capacidad protectora en el vacuno es similar a la de la cepa 19. Recientes experimentos de campo, llevados a cabo en reas de alta y baja prevalencia de brucelosis, indican que la inmunidad inducida por la RB51 en el bovino (al menos un ao tras la vacunacin) es semejante o mejor que la inducida por la cepa 19. El ensayo en ratn indica que la respuesta protectora inducida por la RB51 est mediada nicamente por las clulas T, puesto que la transferencia a otro animal de anticuerpos inducidos por la RB51 no protege, mientras que la de clulas T s lo hace. Un trabajo reciente, que se present en la quincuagsima conferencia sobre investigacin de brucelosis, en Chicago, en noviembre de 1997, sugiere que la vacunacin con RB51 induce la formacin de clulas T citotxicas especficas, capaces de destruir los macrfagos infectados con Brucella. Puede distinguirse de la B. abortus aislada en el campo por mtodos moleculares. Los estudios en el ratn indican que la cepa RB51 puede proteger contra las infecciones por B.abortus, B.melitensis, B.suis y B.ovis. Los trabajos en marcha con varias especies animales confirman una actividad protectora excelente en cerdos contra la infeccin por B. suis en condiciones de campo (Lord, et al., 1998) y ha demostrado que la RB51 puede proteger hasta al 93% de las cabras vacunadas, contra la infeccin por B. melitensis. Los resultados preliminares en el ovino sugieren que la RB51 no induce una inmunidad protectora en esta especie cuando se usa como dosis nica; siendo necesarios ms estudios. Tras la vacunacin con RB51, todas las especies chequeadas permanecieron serolgicamente negativas en todas las pruebas serolgicas convencionales de brucelosis. Actualmente se han vacunado ms de 6 millones de terneras por va subcutnea con la dosis recomendada de 1 -3.4 x 10 10 microorganismos, sin efectos deletreos. Existen observaciones no publicadas sobre la eficacia protectora que sugieren que la inmunizacin debe comenzar en animales no menores de 4 meses. El bovino gestante se puede vacunar con seguridad por va subcutnea con 10 9 microorganismos de RB51, sin que se produzca aborto o placentitis. La inoculacin intravenosa de bovino gestante con 10 10 microorganismos provoc infeccin placentaria y fetal pero no aborto, lo que sugiere que la vacunacin del bovino adulto no gestante con una dosis completa, debera ser segura. Sin embargo, informes no publicados de la Colorado Serum Company, que fabrica la vacuna en U.S.A. indican que la vacunacin de bovino gestante con una dosis reducida de (1x 109) de la cepa RB51 puede dar abortos en un 0.5% de los vacunados y, por lo tanto, la vacunacin de hembras gestantes debe ser evitada o empleada solo en reas de alta incidencia al comienzo del programa de erradicacin. Desde 1996, la cepa RB51 de B. abortus es la vacuna oficial en USA para la profilaxis de la brucelosis en el ganado bovino y el empleo de la cepa 19 ha sido prohibido. Otros pases donde la vacuna ha recibido aprobacin oficial y se emplea actualmente son: Argentina, Chile, Colombia, Costa Rica, Mxico, Paraguay y Venezuela. Cada pas usa mtodos ligeramente diferentes para administrar la vacuna. En USA se vacunan las terneras por va subcutnea entre 4 y 12 meses de edad por va subcutnea con una dosis de 1-3.4 x 1010 microorganismos viables de la cepa RB51. La vacunacin de los mayores de 12 meses se lleva a cabo slo bajo autorizacin del Estado o de los funcionarios federales de Sanidad Animal y la dosis recomendada es de 1 x 109

En otros pases se recomienda vacunar las terneras de 4-12 meses de edad con una dosis de 1-3.4 x 1010 y revacunacin a partir de los 12 meses con una dosis similar para evitar interferencias con la posible inmunidad

maternal y como refuerzo. La experiencia de campo indica que la vacunacin de hembras gestantes puede inducir un pequeo porcentaje de abortos, en particular si los animales no se han vacunado como terneras. Sin embargo, parece que la RB51 tiene menor potencial abortivo que la cepa 19. La vacuna se puede aplicar varias veces si se quiere, sin inducir anticuerpos reactivos en tests serolgicos tanto si se emplean clulas completas como el antgeno liso LPS. La administracin oral de la RB51 a ratones y bovinos ha inducido tambin inmunidad protectora, abriendo as un campo de estudio para la inmunizacin de la fauna salvaje. Biopeligrosidad Parece que la cepa RB51 no tenga, o en un grado muy pequeo, virulencia para las personas con un sistema inmunitario normal, ya que no ha sido descrita oficialmente ninguna infeccin humana aunque se han producido numerosas inoculaciones accidentales por pinchazos de agujas al manipularla y algunos autores han considerado que encierra potencial para un posible desarrollo de una vacuna humana. Sin embargo s se han observado reacciones de hipersensibilidad que aparecieron en algunas personas unas pocas horas tras la inoculacin accidental. Dado que la cepa RB51 es muy sensible a la tetraciclina, se ha recomendado emplearla de forma preventiva en las inoculaciones accidentales. La OIE en su manual de estndares para diagnsticos y vacunas dice al respecto que: La cepa 19 de Brucella abortus, aunque atenuada es an capaz de provocar enfermedad en los humanos. Los cultivos celulares y las suspensiones deben manejarse bajo las condiciones adecuadas de contencin de biopeligrosidad. La reconstitucin y subsecuente manejo de la vacuna reconstituida debe realizarse con cuidado de evitar inoculaciones accidentales o contaminacin en los ojos o la piel. Los residuos de vacuna y el equipo de inyeccin debe descontaminarse con un desinfectante adecuado (un preparado fenlico, yodforo o aldehdico) a la concentracin recomendada y se deben seguir las indicaciones del mdico en caso de exposicin accidental. Sobre la RB51 dice que: No se dispone de informacin suficiente para valorar la virulencia de la cepa RB51 de Brucella abortus para los humanos, no obstante, no se han descrito infecciones accidentales. Es recomendable manejar la cepa RB51 con las mismas precauciones que la 19. La cepa RB51 de Brucella abortus es muy sensible a las tetraciclinas y en los casos de inoculacin accidental se debera considerar el tratamiento preventivo con este antibitico. VetTek Veterinary Technologies Corporation, (http://www.vettek.com) Compaa Estadounidense de biotecnologa en el campo del desarrollo de vacunas y reactivos para diagnstico, fundada en 1993 y con los derechos sobre la marca registrada RB51 hace las siguientes recomendaciones prcticas sobre la aplicacin de la vacuna. Resumen de recomendaciones de uso de la cepa RB51 En EEUU se recomienda vacunar todas las terneras con la dosis completa (10-34 miles de millones de bacterias vivas en 2 ml) entre 4 -12 meses de edad va subcutnea. Los adultos se pueden revacunar con una dosis reducida (mil millones de bacterias vivas). Sin embargo, estas recomendaciones son para las condiciones imperantes en un pas en que prcticamente se alcanz la erradicacin y la incidencia de la enfermedad es baja. En pases con incidencia ms alta las recomendaciones pueden ser distintas. En general recomendaramos: Vacunar todas las terneras a la edad de 4 - 10 meses de edad con dosis completa subcutneamente. La edad ptima sera entre 5 -8 meses. Los machos no se vacunan. Revacunar a los 12-16 meses de edad o antes del encaste (unas 2-3 semanas antes de poner con el toro o inseminacin). Esto aumenta la inmunidad en los animales. Mientras ms severo el problema de la brucelosis ms recomendable es la revacunacin. Animales sobre 12 meses de edad se pueden revacunar con la dosis completa o reducida. Dependiendo de la severidad de la situacin, los animales revacunados pueden revacunarse nuevamente; esperar por lo menos 6 meses desde la ltima revacunacin.

Es mejor evitar la vacunacin de animales preados ya que existe un pequeo riesgo de aborto. El riesgo de aborto debera ser ms alto con la dosis completa. Se pueden revacunar con cepa RB51 animales que fueron vacunados previamente con cepa 19. Si la vacunacin con cepa 19 indujo seropositividad, la vacunacin con RB51 no eliminar esta reaccin. Qu hacer con un predio con alta incidencia de Brucelosis con abortos. En este caso, se recomendara vacunar todas las hembras del predio (incluso los animales preados) y luego seguir con el programa recomendado anteriormente. La incidencia de abortos debido a la infeccin bajar despus de la vacunacin. BIBLIOGRAFA Aunque por el ttulo no lo parezca, el contenido del artculo es serio y riguroso; habindose extractado y traducido, entre otros y principalmente, de los documentos reseados a continuacin. No se vayan a pensar. World Health Organization. WHO/EMC/ZDI/98.14. The Development of New/Improved Brucellosis Vaccines: Report of WHO Meeting. with the participation of the Food and Agriculture Organization of the United Nations (FAO) and the Office International des Epizooties (OIE). Geneva, Switzerland. 11-12 December 1997. http://www.who.org Office International des Epizooties. Manual of Standards for Diagnostic Tests and Vaccines 2000. CHAPTER 2.3.1. BOVINE BRUCELLOSIS. http://www.oie.int/eng/normes/mmanual/A_00048.htm Brucella abortus Vaccines: Smooth and Rough Strains. Gerhardt G. Schurig Virginia- Maryland Regional College of Veterinary Medicine. Virginia Tech, Blacksburg, Virginia. U.S.A. http://www.fao.org/livestock/agah/id/brunet_main/brunet/public_sub8_p1.html Brucella Serology. J.A.Stack and A.P.MacMillan. FAO/WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Brucellosis, Central Veterinary Laboratory, New Haw, Addlestone, Surrey Kt15 3NB, United Kingdom. http://www.fao.org/livestock/agah/id/brunet_main/brunet/public_sub4_p1.html The Immune Response to Brucella. Gary A. Splitter. Department of Animal Health and Biomedical Sciences, University of Wisconsin-Madison, 1655 Linden Drive, Madison, WI 53706-1581, USA http://www.fao.org/livestock/agah/id/brunet_main/brunet/public_sub6_p1.html Identification and Biotyping of Brucella spp. J.A.Stack and A.P.MacMillan. FAO/WHO Collaborating Centre for Reference and Research on Brucellosis, Central Veterinary Laboratory, New Haw, Addlestone, Surrey Kt15 3NB, United Kingdom. http://www.fao.org/livestock/agah/id/brunet_main/brunet/public_sub1_p1.html BIBLIOGRAFA COMPLEMENTARIA Brucelosis animal. Jos M. Blasco y Carlos Gamazo. Investigacin y Ciencia, Noviembre 1994 http://193.146.205.151/web/articulos/art07/art07.htm Manual de brucelosis. JUNTA DE CASTILLA Y LEN, Consejera de Sanidad y Bienestar Social, 2001. http://www.jcyl.es/jcyl/csbs/dgsp/brucelosis/manualbrucelosis.pdf