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FACULTAD DE BIOANALISIS REGION XALAPA LABORATORIO INMUNOHEMATOLOGIA III WILLIANS SANCHEZ RODRIGUEZ GRUPO 702

“DETERMINACIÓN DE SECRETORES”
OBJETIVO:
• Aplicar una reacción de inhibición de la aglutinación para determinar si un individuo es o no es secretor de las sustancias de grupo sanguíneo

FUNDAMENTO:
Las sustancias de los grupos sanguíneos presentes en la saliva se detectan por la inhibición de la hemaglutinación, después de hervir y centrifugar. Si a un suero para diagnostico anti-A se le agrega una sustancia secretora de tipo A sus aglutininas inactivan el reactivo que ya no podrá aglutinar los glóbulos rojos A.

GENERALIDADES
• • Los antigenos del sistema ABO entre otros antígenos corporales no siempre se limitan al glóbulo rojo, en el cuerpo el Ag se puede adoptar la forma soluble en H2O o soluble en alcohol. Loa antígenos solubles en agua A, B y antígenos de la sustancia H están presentes en muchos fluidos como semen, orina, jugo digestivo, leche, saliva, sudor, plasma, estas sustancias son glicoproteínas solubles en H2O, que pueden ser útiles en la identificación Ac´s. Un segundo numero de antigenos son los que son solubles en alcohol, que están presentes en el cuerpo , excepto en las lagrimas, estos antígenos solubles en alcohol solubles en alcohol están influidos por el gen secretor.(3)

EL GEN SECRETOR
• Su presencia en los antígenos ABO en líquidos es controlada por el gen secretor, Se, que es autosomico dominante, las sustancias del ABO se hallan en el plasma de todos los individuos independientemente de que sean secretores o no, ahora bien, son muchos más abundantes en el plasma de los secretores.

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El 80% de los individuos causacoides heredan el gen Se y son llamados secretores (genotipo sese). No se ha identificado ningún producto específico del gen Se, aunque se sabe que este gen regula la formación de sustancia H en las secreciones y en el plasma. Así, un secretor del grupo A tiene sustancias A y H en sus líquidos orgánicos. Los no secretores (sese) no tienen sustancias ABH en sus secreciones. Otras sustancias de grupo sanguíneo también se pueden encontrar en el plasma y la saliva(chido, lewis, rodgerI), aunque su presencia en los líquidos orgánicos no está controlada por el gen Se. .(2) • La inmunoglobulina A (IgA) es la clase predominante de anticuerpo en las secreciones seromucosas del organismo tales como saliva, lágrimas, calostro y secreciones respiratorias, gastrointestinales y genitourinarias. En sangre, se encuentra como una molécula monomérica, pero en mucosas se encuentra en forma dimérica (IgA secretora). Su función principal es identificar a los antígenos e impedir que se localicen en las mucosas.

Los anticuerpos de la IgA se encuentran en las lágrimas, saliva, en el moco, en la leche, en las secreciones gastrointestinales, en la sangre y en la linfa y brinda protección localizada en la membrana de la mucosa. Las formas secretoras de la IgM y IgA forman complejos multiméricos en los que dos o más de las unidades estructurales básicas de anticuerpo de cadenas están unidas por medio de enlaces covalentes.(1)

IGA
Las primeras células B con expresión de IgA aparecen inicialmente en la semana 11 después del nacimiento, a diferencia de lo que ocurre con IgG e IgM, de aparición más temprana. Habitualmente el nivel sérico de IgA es indetectable en el momento del nacimiento y los niveles del adulto no se logran hasta la pubertad. En sujetos adultos, la mayoría de las células plasmáticas está confinada a la producción de esta inmunoglobulina, la de mayor producción diaria. De hecho, se genera más IgA por día (66 mg/kg/día) que de cualquier otra clase de inmunoglobulina. La IgA es la inmunoglobulina más heterogénea y tiene forma de T a diferencia de las restantes Ig con forma de Y. Existen dos subclases de IgA: IgA1 e IgA2, que difieren por la ausencia de una secuencia de 13 aminoácidos en la región en bisagra de la IgA2. Esta diferencia estructural explica la resistencia de la IgA2 a las proteasas bacterianas y explica por qué este subtipo es más frecuente en las mucosas. En suero, la IgA representa la quinta parte de las inmunoglobulinas debido a su rápido catabolismo (vida media de sólo 3 a 6 días). La IgA1 monomérica es la forma predominante en sangre. La IgA del suero es producida por linfocitos B en la médula ósea y en algunos órganos linfoides periféricos.

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En las secreciones mucosas (saliva, lágrimas, calostro, fluidos gastrointestinales, secreción nasal y bronquial y orina), las células plasmáticas locales pueden producir IgA como IgA polimérica (IgAp), casi exclusivamente en forma de dímeros unidos por una cadena J y con un componente secretorio (IgAS). • Recientemente se propuso que la IgAS deriva de dos fuentes principales: linfocitos B1 y B2. Los primeros, presentes fundamentalmente en la cavidad peritoneal, contribuyen con alrededor del 25% de la IgAS. Se ha sugerido que la IgA producida por linfocitos B1 representa un sistema primitivo, independiente de células T y destinado al reconocimiento de bacterias comensales. Los linfocitos B2 producen el 75% restante de la IgAS. Dichas células se organizan en centros germinales del tejido linfoide asociado con mucosas (MALT) como las placas de Peyer. La formación de esta IgA depende de la colaboración de linfocitos T. La IgA de mucosas es producida por células plasmáticas en forma de IgA dimérica con una cadena J de unión.

Se une y forma complejos covalentes con el receptor de Ig polimérica, presente en la cara basolateral de las células epiteliales en mucosas. El complejo se transporta en forma activa a través de la célula del epitelio a la porción apical, donde la IgA se libera del complejo. El componente secretorio permanece asociado a la IgA dimérica.

Funciones de la IgA
Las mucosas del organismo cubren una superficie aproximada de 400 m2, en contacto permanente con múltiples agentes infecciosos. Cada día se movilizan más del 70% de las células inmunes para resistir posibles infecciones. La IgA con el componente secretorio (IgAS) interviene en forma crucial en la inmunidad innata al evitar la penetración de microorganismos y de proteínas extrañas en la mucosa. También neutraliza toxinas y organismos infecciosos. La incapacidad de la IgAS de activar el complemento o de actuar como una opsonina es una ventaja en las secreciones a cuyo nivel el inicio de una respuesta inflamatoria podría comprometer el sistema de defensa local y la integridad de las mucosas.

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• •

Si bien la función de la IgA de mucosas se conoce bien, no ocurre lo mismo con la IgA sérica. Sin embargo, se considera que esta última puede ser un «guardián pasivo» ya que los inmunocomplejos con IgA son eliminados por el sistema fagocítico sin inflamación asociada.

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IgA Niveles DE Activación Más aún, la IgA sérica monomérica tiene actividad antiinflamatoria y es capaz de inhibir ciertas funciones como fagocitosis inducida por IgG, actividad bactericida, estallido respiratorio y liberación de citoquinas. La deficiencia selectiva de IgA (la deficiencia primaria más frecuente) predispone a los enfermos a la aparición de alergia y autoinmunidad. La interacción de la IgA con el FcALFARI en células fagocíticas tisulares puede representar una segunda línea de defensa en el caso de infecciones bacterianas. Tipos de receptores de IgA (FcALFAR) • Existen cinco tipos no relacionados estructuralmente. Tres de ellos se consideran genuinos: el receptor de IgA polimérica está involucrado en el transporte de IgM e IgA a través de las barreras mucosas. El segundo tipo (el CD89) es el receptor específico de IgA (FcALFARI) que une IgA1 e IgA2. El tercer tipo une IgA e IgM mientras que los dos restantes, alternativos, son el receptor de asialoglucoproteína y de transferrina (TfR).

Inmunoglobulina

SUBTIPOS

Cadena pesada dominios A1 A2

Forma secretora

Tamaño de la forma secretora

IgA

IgA 1 IgA2

Mónomero, dímero, trímero

150, 300 0 o 400

Material:

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• • • • • • • • • • 6 tubos de 12 x 75 1 gradilla 1 pizeta 4 pipetas pasteur Centrífuga 1 vaso precipitado termómetro Tripie Mechero Sueros anti-A y B

Muestra biológica: Eritrocitos A y B Saliva

TECNICA

1. Recolectar 3-5 ml de saliva en un tubo de ensaye de persona de grupo sanguíneo A y B. 2. En un vaso precipitado se calienta saliva 56°C durante 5 minutos 3. Centrifugar 2000 rpm durante 5 minutos y separar el sobrenadante que se utilizara 4. En tubos de 12 x 75 marcar en como A y B y colocar 4 gotas de la saliva a estudiar y se le agrega 1 gota de suero anti-Ay B respectivamente 5. Mezclar y dejar reposar a temperatura ambiente durante 15 minutos 6. Preparar tubo testigo positivo con 4 gotas de solución salina y 1 gota suero anti-A y B 7. Agregar a cada tubo 1 gota de eritrocitos conocidos y mezclar 8. Esperar 3 minutos buscando aglutinación 9. Reportar en cruces • Interpretación: cualquier grado de aglutinación es indicativo de que el individuo es secretor

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http://quimicosclinicosxalapa04.spaces.live.com OBERVACIONES:

RESULTADO: no aglutino, es secretor CONCLUSIONES: Cuando se inactivo la saliva(se destruyen enzimas que inactiven a las sustancias del grupo ABO, se hizo reaccionar con un suero especifico( anti-B), para que se uniera la sustancia del grupo B presente en la saliva ant(AgB) se neutraliza el anticuerpo del suero debido a que ya esta formada la reacción antígeno- anticuerpo, cuando se hace reaccionar con sus eritrocitos (AgB) con su antígeno especifico, no reacciona con el suero debido a que la persona no fue secretor , debido a que ya están ocupados los determinantes antigenicos.

REFERENCIAS: 1. Abbas, K, Inmunología Celular Y Molecular, Cuarta edición, 2002, Editorial McGrawhill, Mexico. 2. Albarran, S.C. , Manual técnico de banco de sangre, Editorial la prensa medica mexicana, México, 1986, paginas:93 3. Bryant, A.H. Introduction inmunohematology, 1994, Editorial Saunders, pagina:111 4. http://www.med.uio.no/rh/patologi/liipat/secretory_immunity/pictures/TI-fig1big.htm 5. http://es.wikipedia.org/wiki/Inmunoglobulina_A 6. http://www.bago.com/BagoArg/Biblio/alergweb155.htm

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