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Universidad de San Carlos de Guatemala Facultad de Odontologa rea Bsica Bioqumica Lic.

Julio Antonio Turcios Prez

REPORTE DE SEGUNDO LABORATORIO IDENTIFICACION DE AMINOACIDOS Y PROTEINAS

Da de laboratorio 29 de Marzo de 2011 Segundo A Ericka Gabriela Polanco Ixquiac 200910677 Erick Emilio Aguilar Garca 200922369 Julio Anbal Car Chigichon 200818117 Eddison Gamaliel Gonzales Gonzales 200817296 Andrea Mara Rivadeneira Fernndez 200718122 Gerber Arnoldo Oroxom Sban 200610531 Guatemala, 16 de mayo del 2011

INTRODUCCIN:
Las protenas son molculas muy grandes compuestas por aminocidos unidos mediante enlaces peptdicos, con funcin estructural (como el colgeno, que forma parte de la piel), reguladora de reacciones qumicas (como la insulina), o de reserva energtica (como la albmina del huevo). La secuencia (orden) de los aminocidos es la estructura primaria de la protena. Esta cadena puede enrollarse o curvarse formando una estructura secundaria. A su vez esta cadena enrollada puede formar trenzas dando la estructura terciaria o ser ms complejas formando as estructuras cuaternarias o quinarias. Estas estructuras puede perderse por efecto de la temperatura, o al ser tratadas con soluciones salinas, cidos, alcohol, etc. Un mtodo para la identificacin de protenas es la cromatografa, la cual es un mtodo que permite separar los componentes de una mezcla de compuestos por distribucin entre dos fases, una de las cuales es mvil y la otra estacionaria. La fase estacionaria puede ser un slido o un liquido, este ultimo debe de estar inmvil sobre un soporte inerte. La fase mvil pude ser un lquido o un gas. Dependiendo de la naturaleza de las fases usadas; la cromatografa puede clasificarse en varios tipos: solido-liquido, liquido-liquido, solido-gas y liquido-gas; por esta diversidad, la cromatografa en las ltimas dcadas ha adquirido un gran valor, ya que su empleo ha contribuido no solo a la identificacin sino tambin al aislamiento de compuestos que son de origen biolgico. Principalmente en este laboratorio se pretende llegar a conocer esta tcnica para luego posteriormente aplicarla y usarla adecuadamente en un futuro para identificacin de aminocidos y protenas que nos den un posible diagnostico de alguna enfermedad o un anlisis molecular de un mapa gentico entre otros. En este laboratorio identificaremos los aminocidos, pptidos y protenas de uso comn en las ciencias de la salud, para esto utilizaremos dos tipos de mecanismos diferentes: una de ellos es la cromatografa en papel, que distingue a los aminocidos segn la diferente velocidad con que se mueve cada uno a travs de un medio poroso, arrastrados por un disolvente en movimiento. El siguiente proceso ser por reacciones que se utilizan para la identificacin de protenas como lo es la reaccin de Biuret; Esta reaccin se debe a la presencia del enlace peptdico CO-NH, de manera que la presentan las protenas pero no los aminocidos, en este caso encontraremos diferentes reacciones ante las distintas soluciones que se formen durante la practica. Se tratara de definir e identificar los distintos aminocidos que se contengan en la determinada solucin por medio de la cromatografa para luego hacer un anlisis de los mismos, as como la identificacin de protenas si las hay o no en las distintas reacciones que se llevaron a cabo durante la prctica. Para una mejor comprensin se presenta un informe detallado con los procesos llevados, datos obtenidos y explicacin de los resultados.

RESUMEN:
La prctica que se realizo fue con respecto a la cromatografa e identificacin de protenas. Empezaremos describiendo que la cromatografa en papel consta de una fase mvil y una fase estacionaria la cual esta constituida simplemente por una tira de papel whatman. Este papel se caracteriza ya que tiene tbulos rectos los cuales permite que por capilaridad suba o atraviese el eluente. La muestra se deposita en un extremo colocando pequeas gotas de la solucin (cistena y glutamina) y evaporando el disolvente. Luego el solvente empleado como fase mvil (N-butanol y acido actico) se hace ascender por capilaridad. Se coloca la tira de papel verticalmente y con la muestra del extremo inferior de un recipiente que contiene liquido en el fondo. Para realizar la fase mvil y la estacionaria anteriormente se hicieron clculos. No olvidemos que la cromatografa en papel, es una de las tcnicas ms sencillas para identificacin de aminocidos, sustancias qumicas y la separacin de las mismas. En la parte de identificacin de protenas y aminocidos, se realizaron varias reacciones como la de Biuret, Benedict y Nihidrina por cada reaccin se tomo seis tubos de ensayo a cada uno con una solucin de agua, casena, albmina, gaseosa, jugo de naranja, en los tubos 1, 3, 4, 5, 6, pero en el nmero 2 en la reaccin de Biuret se le agrego gelatina, en la reaccin de Benedict se le agreg cistena, y en la reaccin de Nihidrina se le agreg glutamina anotando el cambio que ocurri en cada reaccin ya que se les colocaron 10 gotas de cada reactivo, a los respectivos tubos de ensayo, uno de ellos como en el de Biuret, provoco un cambio de coloracin: violeta, prpura o azul esto se debe a que el color depende de la naturaleza de las protenas y pptidos, esto nos dir si nuestro valor es negativo o positivo en la solucin. En el caso de la reaccin de Benedict este identifica la presencia de carbohidratos, especialmente las azcares con grupo reductores libres la reaccin con cada solucin nos dio una coloracin la cual dependi de la concentracin de xido de cobre y sta a su vez de la reduccin del cobre y va desde verde, amarillo, anaranjado o rojizo, como ya lo mencionamos nos indicara si nos dio un valor positivo o negativo en la solucin. La Nihidrina tiene como objetivo detectar y cuantificar cantidades de aminocidos libres, esta al reaccionar con cada una de las soluciones nos dio la formacin de productos en colores azul o prpura (valor positivo), segn sea el caso ya que tambin nos dieron valores negativos.

DISCUSIN DE RESULTADOS:
Reaccin de Biuret El nombre de la reaccin procede del compuesto coloreado formado por la condensacin de dos molculas de rea con eliminacin de amonaco. Esta reaccin est dada por aquellas sustancias cuyas molculas contienen dos grupos carbamino (-CO.NH) unidos directamente o a travs de un solo tomo de carbono o nitrgeno. El reactivo de Biuret contiene Cu2SO4 en solucin acuosa alcalina (gracias a la presencia de NaOH o KOH). La reaccin se basa en la formacin de un complejo de coordinacin entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrgeno que forma parte de los enlaces peptdicos. Esta ltima reaccin provoca un cambio de coloracin: violeta, prpura incluso rosado segn sea la solucin. Debe sealarse que el color depende de la naturaleza de las protenas y pptidos.

Reaccin de Benedict Una de las reacciones ms comunes en la identificacin de carbohidratos es la reaccin de Benedict. Esta reaccin es especfica para azcares con grupo reductores libres (C=O). Todos los monosacridos poseen un grupo reductor libre. Los disacridos maltosa y lactosa tienen grupos reductores libres, pero la sacarosa no los posee, ya que se pierden los grupos reductores de sus componentes cuando sta es formada. Se basa en la capacidad del carbohidrato de reducir el Cu2+ en un medio alcalino. Este Cu1+ se oxida y precipita en forma de Cu2O, lo que proporciona la coloracin positiva de la reaccin. La coloracin depender de la concentracin de xido de cobre y sta a su vez de la reduccin del cobre; va desde verde, amarillo, anaranjado o rojizo, pero en algunas de las soluciones como lo fue el caso de el agua y cistena no se nos torno en tonos de azul y esto es porque, la solucin de Benedict, torna azul a la solucin cuando es alcalina pero porque entonces es agua si esta en teora es neutra, pero en realidad en pH de el agua potable es entre 6,5 y 8,5 es muy probable que en ese momento el agua utilizada hubiese estado entre un pH alcalino pues este reactivo comprueba la presencia del aldehdo cuyo grupo funcional es -CHO. La solucin se calienta, para la aceleracin del proceso, produciendo la formacin de un precipitado aunque no en todos los casos. Una solucin de Benedict presenta: Sulfato cprico, citrato de sodio, carbonato anhidro de sodio.

Reaccin de Ninhidrina La ninhidrina (hidrato de tricetohidrindeno) es un agente oxidante que reacciona con todos los alfa aminocidos, es un reactivo usado para ver las manchas de bandas de aminocidos separados por cromatografa o electroforesis. La reaccin de la ninhidrina cuantifica la reaccin de los aminocidos del grupo alfa amino, reacciona rpidamente con el grupo amino NH2, lo oxida y libera amonio el cual se condensa con la ninhidrina reducida, y con otra molcula de ninhidrina libre, para producir un aducto o complejo azulvioleta, llamado prpura de Ruhemann." En esta reaccin se pierde la cadena lateral en forma de aldehdo. Esta reaccin sirve para detectar aminocidos en varios sustratos ya que la mayora de los polipptidos y las protenas pueden desarrollar coloracin en esta reaccin, pero a diferencia de los aminocidos, no liberan CO2. Pero cuando estructuralmente no poseen un grupo amino libre, sino un grupo imino, la coloracin final es amarilla.

RECOMENDACIONES:
Hacer uso adecuado de la cristalera de laboratorio al momento de efectuar las reacciones para no daarlas y adems efectuar su limpieza para no dejar residuos. Mantener orden y limpieza en el rea de trabajo para no tener accidentes con cualquiera de los reactivos que se utilicen. Efectuar cada reaccin de manera rpida y ordenada para as tener tiempo de realizar todos los procedimientos. Al momento de utilizar el acido actico, no jalar con la pipeta, simplemente dejar que por capilaridad suba hasta la medida necesaria. Usar guantes para rociar con Ninhidrina por cualquier contacto que pudiera haber y si hubiera, lavar con agua inmediatamente. Hacer un efectivo uso de los reactivos, especialmente de la Ninhidrina, ya que esta podra causar irritacin en la piel, y si en dado caso llegara a tener contacto con la piel, lavar rapidamente con abundnte agua. Ademas de utilizar la cristaleria con mucho cuidado y mantener siempre un area de trabajo limpia y ordenada. Tener precaucin al momento de jalar el cido actico con la pipeta para traspasarlo al beacker para no causar dao interno en el estudiante. Es importante siempre estar pendiente del nombre en los frascos para no confundir los reactivos para no obtener efectos no deseados al momento de efectuar alguna solucin.

Haber estudiado el instructivo de laboratorio previamente y seguir las instrucciones del docente lo ms exacto posible para evitar accidentes.