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1ER FORO.

OCURRENCIA Y ELIMINACIN DE LAS TOXINAS CIANOBACTERIALES EN PLANTAS DE TRATAMIENTO DE AGUA POTABLE.


OCCURENCE AND ELIMINATION OF CYANOBACTERIAL TOXINS IN DRINKING WATER TREATMENT PLANTS.
Erysson Angel Cod. 1100890 Julian Ariza Cod. 1100816 Mitchell Espinoza Cod. 1100833 Diego Pedraza Cod 1100866 Fabian Villamizar Cod 1101301 Margarita Hernandez Cod 1100846

CONTENIDO
1.

2.
3. 4. 5.

Introduccin. Materiales y Mtodos. Resultados. Discusin. Conclusiones.

Cianobacterias

Algas verdes azuladas

Produccin de toxinas

Aguas Superficiales

OMS

1 g/L

Alemania

Suiza

1. INTRODUCCIN.
European Water Framework Directive

Alta Prioridad las Cianobacterias

Regiones volcnicas

Aguas termales

Organismos omnipresentes

Desiertos

embalses

ESPECIES

TOXINAS

Microcistis

Microcistinas.

Nodularia

Nodularina
Cilidrospermosina Anatoxina

Cylindrospermopsis

Anabaena

PSP (veneno paralizante de moluscos).

Tabla 1. Concentracin de algunas especies cianobacterianas segn la normatividad de cada pas.

Microcistinas [g/l] Australia 1.3 (exposicin de por vida); 1.0 (breve periodo) 1.0 1.5 1.0 0.1 1.0 1.0 1.0

PSPs [g/l] 3.0 (breve periodo)

Anatoxina [g/l] Es mencionada pero sin valor 0.1 3.0 -

Cylindrospermopsin [g/l] Es mencionada pero sin valor 15 0.1 3.0 -

Brazil Canada Francia Europa Nueva Zelanda Oregon (USA) WHO

3.0 0.1 1.0 -

Fuente: Occurence and elimination of cyanobacterial toxins in drinking water treatment plants.

Las microcistinas y las nodularinas presentan una alta toxicidad con una dosis letal DL50 que vara de 36 a 122 g/Kg en ratones y ratas.

Los humanos nos podemos contagiar de toxinas cianobacteriales por medio de la ingestin o contacto dermal; la exposicin se puede dar normalmente por medio de actividades recreacionales, por la ingestin de productos agrcolas contaminados, moluscos y pescado contaminados.

Tabla 2. Toxinas cianobacterianas en las plantas de tratamientos de agua a nivel mundial.

Tratamiento Filtracin por carbono activado Floculacin/Sedimentacin Ozonizacin Filtracin rpida en arena Filtracin lenta Cloracin Sulfato de cobre Carbn activado granular Carbn activado particular

Cianobacterias removidas microcistis Microcistis, anabaena. Microcistis, otros. Cianobacterias no toxicas. Microcistis, anabaena, otros. Otras. Microcistis, anabaena. No reportados. Microcistis, anabaena, No reportados.

Fuente: Occurence and elimination of cyanobacterial toxins in drinking water treatment plants.

Tratamientos convencionales

Filtracin-Floculacin

inefectivos

Pre

0.5 mg/l-1.5 mg/l virus, protozoos,fenoles, policiclicos aromaticos, y microcistinas.

Sistema de filtros

Sustancias orgnicas, desintoxica y limpia. Lavado contracorriente.

Ozonizacin
intermedia

0.5 mg/l las toxinas cianobacterianas

Carbn activado

Biopeliculas que metabolizan los compuestos orgnicos. Elimina el exceso de ozono.

MATERIALES Y MTODOS
Sitios de Muestreo

Cuerpos de agua potable en Alemania y Suiza.

Tecnologas de tratamiento aplicada rutinariamente a la PTAP se encuentra en la siguiente tabla.

INFORMACIN SOBRE EL TRATAMIENTO DE AGUA POTABLE.

RECUENTO DE CLULAS

Cianobacterias
Tricomas
Las densidades fueron solo determinadas en la planta de tratamiento de agua del lago Lengg-Zurich (suiza). medidas mediante el uso de procesamiento de imagen de software del sistema (Visiometrics, Konstanz, Alemania)

El volumen de la muestra fue filtrado a travs de un filtro de acetato de amonio (0,45 Am, Schleicher y Schuell, Alemania)

TOMA Y PREPARACIN DE LAS MUESTRAS


para la determinacin cuantitativa de toxina por (ELISA/PPA/HPLC) Una porcin de cada muestra se fij con formol para la identificacin de fitoplancton/cianobacterias.

El agua del lago de Lengg-Zurich (suiza)

Se recogieron muestras en botellas de vidrio.

En los diferentes procesos de las plantas de tratamiento de agua.

el resto fue almacenada en una neverita por menos de 12 h hasta que la filtracin y almacenamiento de las muestras filtradas estn a 20 C.

En diferentes profundidades de los lagos.

para determinar los congneres de MC por (HPLC).

DETERMINACIN Y CUANTIFICACIN DE
TOXINAS
Comparacin entre la capacidad inhibidora de PPA con la curva de calibracin de MC-LR

Anlisis radiactivo de la protena fosfatasa (rPPA)

Limite de deteccin del (rPPA) 0,05 g MC-LR/l

Fosfatasa extrada de semillas de colza, PATP, microcistina-LR

La capacidad de inhibicin de la PPA se calculo como % de actividad de la fosfatasa

Las muestras fueron analizadas 3 veces

La P32 libre en el sobrenadante se extrajo con acido molibdato

Se aadi coctel de centelleo midiendo la radiactividad en un contador de centelleo

Ensayo radioactivo de la Proteina fosfatasa. Contador de centelleo Placas ELISA- 96 pocillos.

ELISA- ENSAYO POR INMUNOABSORCIN


LIGADO A ENZIMAS
Se cubren las placas ELISA durante la noche con (OVA-ADDA-HG) en 50l/pocillo de buffer de carbonato de sodio a un ph=9.6 y a 20C

Se agrega el anticuerpo secundario (Anti-sheep) 100l y se incuba por 2 h.

El liquido en los pocillos se aspira y se lava n con PBS y PBST

El material no consolidado se elimina por aspiracin

Se lavan los pocillos 2 veces con PBST y PBS

Se aade sustrato TMB (100l) e incubado por 30 min. Se adiciona 50l H2SO4 para detener la reaccin

Las placas se lavan 3 veces con PBS y se utilizan inmediatamente o se almacenan a 4C 7 dias

Se aade la muestra 50 l a los pocillos junto con el antisuero AB 824. Se incuban de 20-25C durante 2 horas.

se determina la absorbancia con un lector de microplacas de 450 nm. Limites de deteccin 0,2 y 0,05 g/l

Cromatografa liquida de alto rendimiento.

Las toxinas fueron analizadas de acuerdo a Lawton et al. (1994).

Los estndares externos fueron preparados por MCLR (Alexis, Suiza), MC-RR (Sigma), MC-YR (Sigma), y desmetil-MC-LR y RR.

Las muestras (en el 20% de metanol) se inyectaron en el HPLC (detector de diodos SPD-M10A, Auto inyector SIL-10AD, horno de columna CTO-10AC, el controlador del sistema SCL-10A, cromatografa lquida de LC-10AT, desgasificador DGU-14 A Shimadzu

Columna: Grom-Sil ODS-HE, 250 de 4,6 mm, 5 am) y los picos se compararon con las normas.

RESULTADOS
Planta de Tratamiento-Zurich/Lengg

RESULTADOS_2
.
Planta de Tratamiento-Wahnbachtalperre/Siegburg/Alemania

DISCUSIN
El Adda-ELISA

Se arrojaron concentraciones distintas de toxinas El PPA Se basa en la interaccin bioqumica de toxinas con las fosfatasas. Pero la capacidad inhibidora de la fosfatasa , influye en la capacidad de las toxinas de unirse a las fosfatasas.

Las molculas de microcistinas deberan estar intactas por este mtodo.

El Adda-moiety es tericamente posible, aunque no existe evidencia que otras molculas de microcistinas posean Adda como un modulo en su cadena.

Con la ozonizacin mostraron perder su capacidad para inhibir la protena fosfatasa

Los resultados proporcionan el equilibrio entre los compuestos inhibidores de la fosfatasa y de la actividad fosfatasa

DISCUSIN

Los valores determinados por los mtodos HPLCDAD y RPPA fueron 10 veces menores a los determinados por Adda-ELISA , lo cual puede ser explicado por 2 razones
1. 2.

Una posible razn podra ser los productos de degradacin de micro cistinas Otra posible explicacin es la diferencia en la capacidad de inhibir la protena fosfatasa de diferentes congneres de micro cistinas

DISCUSIN
Realizado el tratamiento, solo un 5% de la toxicidad inicial es observada. A travs de la floculacin y filtracin solo se puede remover el 60% de la toxicidad (Alemania)

Mejoras con procesos de oxidacin o filtracin por carbono activado.

Los mtodos de limpieza presentados son completamente diferentes debido a que son capaces de eliminar concentraciones distintas de toxinas cianobacterianas del agua sin tratar.

Eliminacin del color, mal sabor y olor, productos qumicos, y los microorganismos debe estar garantizada

En pases industrializados, las normatividades deben regular la calidad de los productos alimenticios y agua potable.

Muchos lagos y depsitos de agua potable en Alemania y Suiza predominan los P. rubescens. El agua cruda a menudo es contaminada con la alta densidad de P. rubescens.

La concentracin de MC no sobrepas valor de referencia de 1.0 g/l en cualquiera de los casos presentados aqu; sin embargo, la contaminacin del agua despus de meses de haberse tratado, aparecen con concentraciones de MC por debajo de 0.2 g/l no puede ser excluida.

Las puntos de muestra fueron tomadas del agua durante y despus de la planta de purificacin de agua, pero no en las casas a las cuales se suministra el agua. Debido a la cloracin o la dilucin con el agua contaminada, la contaminacin de agua del grifo con toxinas cianobacterias en realidad podra ser claramente inferior.

Las Cianobacterias producen una amplia variedad de otras toxinas (por ejemplo, saxitoxinas, las aflatoxinas, las cilindrospermopsins) y las molculas con potencial txico desconocido (por ejemplo, microviridins y aeruginosins), por lo tabto demuestra dicultades en calcular los trabajos de purificacin del agua, que son dependientes del agua cruda de aguas superficiales