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Manual de Prcticas de Patologa Clnica

10 de Febrero de 2009

DRS051803

MANUAL DE PRCTICAS DE PATOLOGIA CLNICA

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia

Universidad Autnoma de Tamaulipas

Fecha de terminacin: 10 de Febrero de 2009

Elaborador: Vernica Carvajal de la Fuente MVZ MSc.

Rev. 1

MVZ MSc. Vernica Carvajal de la Fuente

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Directorio Institucional
Rector M.E.S. JOSE Ma. LEAL GUTIERREZ Secretaria General DRA. OLGA HERNANDEZ LIMON Subsecretario Acadmico ING. JOSE ANDRES SUAREZ FERNANDEZ Subsecretario Administrativo ING. MARCO ANTONIO DELGADO BARRIO

Directorio FMVZ Director M.C. JORGE LUIS ZERTUCHE RODRIGUEZ Secretario Acadmico MVZ. FRANCISCO GUZMN SENZ Secretario Administrativo MVZ. ERNESTO LERMA DORIA.

INDICE
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DIRECTORIO INSTITUCIONAL ............................................................................. 2 I N D I C E ............................................................................................................... 3 PRCTICAS DE PATOLOGA CLNICA. PRESENTACIN ................................. 4 COMPETENCIAS PROFESIONALES .................................................................... 5 NIVELES DE DESEMPEO ................................................................................... 6 PROGRAMA DEL SISTEMA DE PRCTICAS ...................................................... 7 PRCTICAS GENERALES DE SEGURIDAD. REGLAMENTOS Y PROCEDIMIENTOS GENERALES ........................................................................ 8 BIOSEGURIDAD .................................................................................................... 8 NORMAS BASICAS PARA PREVENIR ACCIDENTES EN EL LABORATORIO ... 8 REGLAMENTO DEL LABORATORIO DE PATOLOGA CLNICA . ................... 10 NORMAS OFICIALES MEXICANAS ESPECFICAS PARA LAS PRCTICAS. . 12 CRITERIOS DE DESEMPEO COMUNES A TODAS LAS PRCTICAS ........... 12 EVIDENCIAS PARA CADA CRITERIO DE DESEMPEO .................................. 13 BIBLIOGRAFA COMN A TODAS LAS PRCTICAS ....................................... 14 PRACTICA NO. 1 TCNICAS DE EXTRACCIN DE SANGRE ..................... 15 PRACTICA NO. 2 EVALUACIN DE LOS GLBULOS ROJOS ..................... 22 PRACTICA NO. 3 EVALUACIN DE LOS GLBULOS BLNCOS ................ 33 PRCTICA NO. 4 TCNICAS DE OBTENCIN DE MUESTRAS DE ORINA ...40 PRCTICA NO. 5 ESTUDIO GENERAL DE ORINA.. .................................... 46 PPRCTICA NO. 6 CITOLOGA DIAGNSTICA. PRIMERA PARTE. ............. 55 PRCTICA NO. 7 CITOLOGA DIAGNSTICA. SEGUNDA PARTE ............... 64 SISTEMA DE EVALUACIN. ............................................................................... 72 INSTRUCCIONES PARA LLENAR EL FORMATODE REPORTES DE PRACTICAS .............................................................................................................................. 74

Prcticas de Patologa Clnica


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Presentacin
En la medicina veterinaria moderna, la disponibilidad de pruebas de laboratorio es tan importante como la historia y la exanimacin fsica del animal. Los resultados normales y anormales del laboratorio proveen informacin objetiva ya que pueden proporcionar evidencias acerca de alteraciones fisiolgicas que son productos de una enfermedad y adems, poder realizar diagnsticos diferenciales, monitoreo del tratamiento y formular un pronstico. El Mdico Veterinario Zootecnista en la prctica profesional de la clnica de los animales domsticos, necesita conocer las ventajas en el uso de la patologa clnica, como herramienta en la que se requiere de mtodos para precisar el diagnstico y criterios necesarios para seleccionar e interpretar las pruebas ms idneas utilizadas en el laboratorio clnico y as emitir diagnsticos correctos y oportunos. El siguiente manual te servir de gua a ti, alumno de licenciatura de la carrera de Medicina Veterinaria y Zootecnia, que cursas la materia de Patologa Clnica, la cual forma parte del plan estudios de la carrera de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la UAT, para que puedas realizar experimentos prcticos necesarios para comprobar los conocimientos tericos que se has visto en clase. Las prcticas incluidas en este Manual te permitir familiarizarte con los diferentes procedimientos utilizados en el laboratorio de anlisis clnicos, as como la discusin clnica que te permitir la solucin de casos simulados propuestos para explicar la fisiopatologa y la orientacin diagnstica con el fin de establecer pronsticos, y evaluacin de enfermedades y de esta manera contribuirs al mejoramiento de la calidad de vida y una mejor produccin animal. En cada prctica se te presentan los objetivos y una breve introduccin para facilitarte la comprensin de los mismos, despus se te indican los materiales necesarios y procedimientos que realizars en forma de instrucciones numeradas que se complementan con figuras y esquemas. Tambin se incluyen preguntas en forma de cuestionarios que debers resolver consultando los materiales bibliogrficos sugeridos al final de este manual.

Competencias Profesionales Este manual de prcticas te familiarizar con las diferentes pruebas de laboratorio que se utilizan en el diagnstico de enfermedades; te permitir
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comprender los cambios fisiopatolgicos de lquidos y clulas del organismo; obtener, preservar y enviar apropiadamente las muestras para anlisis de laboratorio as como aprenders a interpretar los resultados de laboratorio con el fin de realizar un diagnstico ms acertado. Competencias Profesionales a las que contribuye, y su ubicacin dentro del mapa curricular vigente. Encontrars la materia de Patologa Clnica en el ncleo de formacin disciplinaria en el quinto semestre de la carrera de Mdico Veterinario Zootecnista como se describen el en siguiente mapa curricular.
PRIMER PERIODO BIOQUMICA I M.CA12.020.06-06 FISIOLOGA CELULAR M.CA12.037.05-05 EMBRIOLOGA E HISTOLOGA VETERINARIA I M.CA12.018.07-07 ANATOMA DESCRIPTIVA I M.CA12.016.07-07 MATEMTICAS BSICAS M.EN07-080.04-04 INGLS INICIAL MEDIO M.EH47.033.04-04 INTRO. A LAS TECNOLOGAS DE LA INFORMACIN M.IT18.259.02-02 MEDIO AMBIENTE Y DESARROLLO SUSTENTABLE M.EN02.083.03-03 SEXTO PERIODO INOCUIDAD Y CALIDAD DE LOS ALIMENTOS M.CA11.123.05-05 GENTICA M.EN02.059.04-04 FARMACOLOGA Y TOXICOLOGA M.CS31.012.09-09 CLNICA DE BOVINOS M.CA12.004.07-07 OPTATIVA II OP2.5190.04-04 TCNICA QUIRRGICA I M.CA12.032.08-08 NUTRICIN II M.CA14.049.08-08 MANEJO DE RECURSOS NATURALES M.CA14.050.05-05 SEGUNDO PERIODO BIOQUMICA II M.CA12.021.06-06 FISIOLOGA VETERINARIA M.CA12.011.06-06 EMBRIOLOGA E HISTOLOGA VETERINARIA II M.CA12.019.06-06 ANATOMA DESCRIPTIVA II M.CA12.017.06-06 DESARROLLO DE HABILIDADES PARA APRENDER M.EH43.008.04-04 INGLS INICIAL AVANZADO M.EH47.034.04-04 INFORMTICA M.SA41.254.04-04 REDACCIN AVANZADA M.EH43.044.04-04 SEPTIMO PERIODO METODOLOGIA DE LA INVESTIGACION M.EH51.026.04-04 REPRODUCCIN I M.CA14.039.09-09 CLNICA Y ZOOTECNIA DE PEQUEAS ESPECIES M.CA12.007.07-07 ZOOTECNIA DE AVES M.CA14.044.07-07 ZOOTECNIA DE CERDOS M.CA14.045.07-07 OPTATIVA III OP3.5190.04-04 PRODUCCIN DE FORRAJES M.CA14.036.06-06 TCNICA QUIRRGICA II M.CA12.033.08-08 TERCER PERIODO PATOLOGA I M.CS32.153.09-09 BACTERIOLOGA I M.CS32.191.09-09 PARASITOLOGA I M.EN02.101.09-09 INMUNOLOGA M.CA12.027.07-07 INTRO AL PENSAMIENTO CIENT. M.EH44.014.03-03 TAMAULIPAS Y LOS RETOS DEL DESARROLLO M.SA50.051.03-03 CULTURA Y GLOBALIZACIN M.EH43.106.02-02 CUARTO PERIODO PATOLOGA II M.CS32.080.08-08 BACTERIOLOGA II M.CS32.136.08-08 PARASITOLOGA II M.EN02.102.08-08 VIROLOGA M.CS32.110.06-06 DIAGNSTICO CLNICO EN MEDICINA VETERINARIA I M.CA12.008.09-09 MEDICINA PREVENTIVA I M.CS32.063.06-06 BIOESTADSTICA M.EN07.008.04-04 QUINTO PERIODO NORMATIVIDAD Y REGULACIN SANITARIA M.CS30.026.05-05 MEDICINA PREVENTIVA II M.CS32.064.06-06 PATOLOGA CLNICA M.CA12.035.09-09 FARMACOLOGA M.CS31.010.09-09 DIAGNSTICO CLNICO EN MEDICINA VETERINARIA II M.CA12.009.07-07 NUTRICIN I M.CA14.048.08-08 OPTATIVA I OP1.5190.05-05

OCTAVO PERIODO REPRODUCCIN II M.CA14.040.09-09 TERAPUTICA QUIRRGICA M.CA12.034.07-07 CLINICA DE AVES M.CA12.003.08-08 CLINICA DE CERDOS M.CA12.005.08-08 MUESTREO Y DISEO EXPERIMENTAL M.EN07.103.04-04 SERVICIO SOCIAL M.SS.004.482-10 OPTATIVA IV OP4.5190.08-08

NOVENO PERIODO FUND. Y APLICACIN DE LA ADMIN. AGROPECUARIA M.SA35.364.06-06 BOVINOS PRODUCTORES DE CARNE M.CA14.020.09-09 BOVINOS PRODUCTORES DE LECHE M.CA14.021.09-09 CLNICA Y ZOOTECNIA DE EQUINOS M.CA14.022.07-07 CL Y ZOOTA DE OVI Y CAPRi M.CA12.006.07-07 ACUACULTURA DE PECES Y CRUSTACEOS M.CA14.016.06-06 SEMINARIO DE TESIS M.EH51.098.04-04

DECIMO PERIODO PROFESIN Y VALORES M.EH44.023.02-02 ADMINISTRACION Y ECONOMIA AGROPECUARIA M.SA35.367.06-06 INDUSTRIALIZACIN DE LA CARNE Y LECHE M.SA35.570.07-07 OPTATIVA VI OP6.5190.06-06 INTERNADO (PRCTICAS PREPROFESIONALES) M.CA12.013.15-15

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OPTATIVA V OP5.5190.04-04

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Niveles de Desempeo Al concluir el semestre, ste manual de prcticas te permitir obtener un nivel de desempeo 3, ya que sers capaz de tomar decisiones en cuanto a elegir el estudio ms idneo o tipo de muestras que necesita un paciente, as como interpretarlas con el fin de llegar a un diagnstico y proporcionar un tratamiento adecuado.

Nivel 1.- Se realizan funciones rutinarias de baja complejidad. Se reciben instrucciones. Se requiere baja autonoma. Nivel 2.- Se realizan un conjunto significativo de actividades de trabajo, variadas y aplicadas en diversos contextos. Algunas actividades son complejas y no rutinarias. Presenta un bajo grado de responsabilidad y autonoma en las decisiones. A menudo requiere colaboracin con otros y trabajo en equipo. Nivel 3.- Se requiere un importante nivel de toma de decisiones. Tiene bajo su responsabilidad recurso materiales con los que opera su rea. As como control de recursos financieros para adquisicin de insumos, responsabilidades comparables. Nivel 4.- Se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa, en las que se tiene que mostrar creatividad y recursos para conciliar intereses. Se debe tener habilidad para motivar y dirigir grupos de trabajo. Nivel 5.- Se desarrollan un conjunto de actividades de naturaleza diversa, en las que se tiene que mostrar un alto nivel de creatividad, as como buscar y lograr la cooperacin entre grupos e individuos que participan en la implantacin de la solucin a un problema de magnitud institucional.

PROGRAMA DEL SISTEMA DE PRCTICAS

Sesin Nombre de la prctica Objetivo de la prctica mbito de desarrollo oga Clnic a V t i Programacin Sem Duracin Nivel de desempe o

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Tcnicas de Extraccin de Sangre

Laboratorio de Anlisis Clnicos Laboratorio de Anlisis Clnicos

3h

Evaluacin de los Glbulos Rojos

3h

3 4 5

Evaluacin de la Glbulos Blancos Tcnicas de obtencin de Muestras de Orina Estudio General de Orina Tcnicas de obtencin de Muestras citolgicas

Laboratorio de Anlisis Clnicos Laboratorio de Anlisis Clnicos Laboratorio de Anlisis Clnicos Laboratorio de Anlisis Clnicos Laboratorio de Anlisis Clnicos

4 6 8 9 10

3h 3h 3h 3h 3h

3 2 3 2 3

Evaluacin de las muestras citolgicas

PRCTICAS GENERALES DE SEGURIDAD. REGLAMENTOS Y PROCEDIMIENTOS GENERALES


BIOSEGURIDAD
El trabajo que se realiza en los laboratorios siempre implica riesgos especiales
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de contagio de enfermedades infecciosas para el personal que labora en ellos. Es por ello que cada laboratorio debe implementar medidas de bioseguridad correspondientes a la peligrosidad de los agentes que maneja, y tener un control estricto para que estas medidas se lleven a cabo. La observancia de sus lineamientos repercute en la calidad de los resultados del laboratorio.

NORMAS BASICAS LABORATORIO

PARA

PREVENIR

ACCIDENTES

EN

EL

a) No debes comer, beber, almacenar alimentos, correr, fumar, o manipular lentes de contacto en el laboratorio. b) El rea de trabajo debes limpiarla y ordenarla. No debes colocarse libros, abrigos o bolsas sobre las mesadas de trabajo. c) Todos los reactivos debern estar debidamente etiquetados y almacenados en forma segura. d) Debers usar vestimenta adecuada: manga larga que cubra la ropa de calle, preferentemente de algodn, as como guantes apropiados acorde a los riesgos y los reactivos que se manipulen. e) No debes pipetear con la boca. Para tal fin podrs utilizar pipetas de vidrio o plstico con propipetas o pipetas automticas. f) Debers familiarizado con los elementos de seguridad disponibles, salidas, extintores, duchas, lavaojos. g) Toda herida, an los pequeos cortes, que se produzca durante un trabajo prctico debers informar obligatoriamente al docente. h) Los docentes involucrados en los Trabajos Prcticos de materias que utilicen productos qumicos deben conocer sus posibles efectos sobre la salud y la forma de disminuir su incidencia nociva. i) Cuando el trabajo prctico involucre gases, vapores, humos o partculas slo podr realizarse en laboratorios que dispongan de campanas. j) El personal docente debe conocer el nivel de riesgo que implica la manipulacin de microorganismos, cultivos celulares, animales, muestras de fluidos o tejidos, etc. y sus protocolos de trabajo k) Debers lavarte las manos despus de manipular agentes infecciosos y no infecciosos, animales, material contaminado, y cuando abandones el laboratorio. l) e).-Mantendrs la superficie de trabajo descontaminada, para lo cual usars un papel absorbente esponja o gasa humedecida con un desinfectante al iniciar y finalizar cada prctica. m) Todo residuo contaminado lquido y slido debers desinfectarlo mediante esterilizacin (autoclave) antes de ser desechado. n) Antes de utilizar un compuesto debers fijarte en la etiqueta para asegurarte de que es el que se necesitas y de los posibles riesgos de su manipulacin.

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o) Los productos inflamables (gases, alcohol, ter, etc.) debers mantenerlos alejados de las llamas de los mecheros. Si hay que calentar tubos de ensayo con estos productos, lo hars al bao Mara, nunca directamente a la llama. p) Si manejas mecheros de gas se debes tener mucho cuidado de cerrar las llaves de paso al apagar la llama. q) Cuando manejes productos corrosivos (cidos, lcalis, etc.) debers hacerlo con cuidado para evitar te salpique el cuerpo o la vestimenta.

EN CASO DE EMERGENCIA DEBERS RECURRIR AL RESPONSABLE DEL AREA.

REGLAMENTO CLNICA

DEL

LABORATORIO

DE

PATOLOGIA

La asistencia a las prcticas es obligatoria y se exige puntualidad. El estudiante que por causa injustificada llegue tarde, perder el derecho a realizar la prctica correspondiente.
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Para la entrada al laboratorio es obligatorio el uso de una bata que cubra hasta las rodillas y de mangas largas, la cual debe estar en buenas condiciones de preservacin y permanecer debidamente abotonada. Para poder ser admitido en el laboratorio es indispensable que el alumno traiga el manual del laboratorio. Est prohibido fumar, comer o beber dentro del laboratorio. No realice experimentos que no hayan sido autorizados. No est permitido introducir ningn tipo de objeto en los recipientes de los reactivos de uso comn del laboratorio. Todo el material, especialmente los aparatos delicados, como lupas y microscopios, deben manejarse con cuidado evitando los golpes o el forzar sus mecanismos. Los cubreobjetos y portaobjetos deben cogerse por los bordes para evitar que se engrasen. Las porciones de reactivos a utilizar deben verterse en un recipiente adecuado, debidamente rotulado y tomar de all la cantidad requerida. Los sobrantes nunca deben retornarse al frasco original. Los estudiantes trabajarn independientemente en el laboratorio salvo que el profesor indique lo contrario. A cada estudiante se le asignar material de trabajo sobre el cual es el nico responsable. Una vez recibido su material, revisarn que est en buenas condiciones, en caso contrario, avisarn a su profesor(a) de inmediato para que les sea reemplazado. De no hacerlo, el alumno o el equipo de trabajo ser responsable de dicho material y deber reponerlo en un plazo de una semana, de lo contrario no se le permitir el acceso al laboratorio y/o taller. El estudiante debe mantener su puesto ordenado y dejarlo limpio al concluir el trabajo. Las conversaciones dentro del laboratorio deben mantenerse en un tono de voz adecuado. No distraiga su atencin del trabajo que est realizando. No estn permitidas las visitas dentro del laboratorio. Todo estudiante que requiera ausentarse del laboratorio debe notificarlo al profesor. El comportamiento del alumno dentro del laboratorio debe ajustarse a su condicin universitaria. El trato y las relaciones entre Profesores, Tcnicos, y el estudiantado, deben mantenerse en el ms alto grado de respeto a fin de
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garantizar un clima de armona y colaboracin necesario para lograr los objetivos del curso. Cualquier infraccin al reglamento ser sancionada en la calificacin de la prctica.

NORMAS OFICIALES MEXICANAS ESPECFICAS PARA LASPRCTICAS.


Nombre Norma Oficial NOM-087-E Establece los requisitos para la clasificacin, separacin, embasado, COL-1995 almacenamiento, seleccin, transporte,
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Justificacin En el Centro de trabajo y prctica se identifican, envasan, recolectan, almacenan, dan tratamiento y hay

Cita http://www.ec onomia-noms .gob.mx/

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tratamiento y disposicin final de los residuos peligrosos, biolgicos infecciosos que se generan en establecimientos que presentan atencin mdica tanto en laboratorios de produccin, clnicas de enseanza e investigacin en humanos como veterinarias. Condiciones de seguridad e higiene en los NOM-01 centros de trabajo donde se manejen, 0-STPStransporten, procesen o almacenen 1999 sustancias qumicas capaces de generar contaminacin en el medio ambiente laboral. Especificaciones para la regulacin de NOM-01 productos qumicos, farmacuticos, 2-ZOObiolgicos y alimenticios para uso en 1993 animales o consumo por stos. NOM-002-S Que establece los lmites mximos EMAR-NAT- permisibles de contaminantes en las descargas de aguas residuales a los 1996 sistemas de alcantarillado. NOM-063- Especificaciones que deben cumplir los biolgicos empleados en la prevencin y ZOO-1999 control de enfermedades que afectan a los animales domsticos.

transporte interno y externo vigilado de este tipo de Residuos.

Durante la realizacin de la prctica puede haber emisin de residuos biolgicos al medio ambiente

http://www.eco nomia-noms.g ob.mx/

Durante la realizacin de la prctica puede haber emisin de residuos qumicos como formaldehido diferentes cidos y lcalis Durante la realizacin de la prctica puede haber emisin de residuos qumicos como formaldehido diferentes cidos y lcalis Durante la realizacin de la prctica puede haber emisin de residuos biolgicos al medio ambiente

http://www.ec onomia-noms .gob.mx/ http://www.ec onomia-noms .gob.mx/ http://www.ec onomia-noms .gob.mx/

CRITERIOS DE DESEMPEO COMUNES A TODAS LAS PRCTICAS

Cuando: (criterios de desempeo) Antes de realizar una prctica, debes leer detenidamente para adquirir una idea clara de su objetivo, fundamento y tcnica. Debers llegar puntual al laboratorio de lo contrario no tendrs derecho a realizar la prctica. Antes Te presentars con el material adecuado y tu bata en perfectas condiciones para la realizacin de la prctica. Se te facilitar, por el tcnico auxiliar, el material necesario para la prctica. Durante la prcticas se te checar que cumplas con los procedimientos de cada prctica, la participacin del equipo, el comportamiento y respeto hacia los animales as como el respeto a tus compaeros y maestros Al terminar cada prctica proceders a limpiar cuidadosamente el material que se ha utilizado. Realizars y entregars un reporte individual sobre las
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Durante

Despus

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observaciones que surgieron durante la prctica, as como contestars correctamente la serie de preguntas que aparecen al final de cada prctica Entregars las prcticas revisadas uno a dos das despus de haber realizado la prctica tem Resultados Esperados Entregars un reporte de la prctica donde incluyas las observaciones y las respuestas del cuestionario. Tiempo de trmino 1 da despus de haber realizado la prctica.

EVIDENCIAS PARA CADA CRITERIO DE DESEMPEO


Criterio de desempeo Te informars de las instrucciones y los procedimientos a realizar durante la prctica. Sers puntual al iniciar la prctica al laboratorio. Levars la vestimenta y el material requerido por la realizacin de la prctica. Limpiars tu mesa de trabajo al finalizar tu prctica Evidencia propuesta (descripcin) Estars familiarizado con los procedimientos de la prctica.

Estars en tu lugar de trabajo cuando el facilitador inicie la prctica. Vestirs tu bata de laboratorio y tendrs tu material de trabajo sobre la mesa.

Tu rea de trabajo estar limpia al terminar la prctica (el tcnico checar que todo quede en orden) Dispondrs de los desechos en Se les proporcionar recipientes de basura los lugares indicados por el para los desechos que se generen durante instructor la prctica. En caso de manejar muestras peligrosas se le indicar que hacer en esa prctica. Entregars un reporte con las Reporte por escrito de la prctica. observaciones y las respuestas de los cuestionarios de cada prctica. Presentars todas tus prcticas Entregars el portafolio de evidencias con calificadas al finalizar el curso todas tus prcticas calificadas.

BIBLIOGRAFA COMN A TODAS LAS PRCTICAS


Benjamin, M: Manual de Patologa Clnica en Veterinaria. Limusa. Mxico, 1991. Bush BM. Interpretation of Laboratory Results Clinicians. Blackwell Scientific, Philadelphia. 2000. for Small Animal

Coles, E. H: Diagnstico y Patologa en Veterinaria. Interamericana McGraw-Hill. 4a edicin. Mxico, 1989.


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Duncan JR et al. Veterinary Laboratory Medicine. Clinical pathology. Iowa State University Press, Ames. 2003. Jain NC. Essentials of Veterinary Hematology. Lea & Febiger. Philadelphia, 2000. Feldman BV et al. Schalms Veterinary Hematology. 5th ed. Lippincott, Williams and Wilkins. Philadelphia. 2000. Todd, S.: Clinical Diagnosis and Management by Laboratory Methods. W. B. Saunders. 18th ed. Philadelphia, 1991. Wintrobe, M.; Lee, G.R.; Boggs, D.R. and Birtholl, T.C.: Clinical Hematology. Lea and Febinger. 11th ed. Philadelphia, 1993 Kaneko, J.J. : Clinical Biochemistry of Domestic Animals. Academic Press, 3rd ed. London, 1989. Harvey JW. Atlas of Veterinary Hematology. WB Saunders. Philadelphia, 2001. Kerry MG. Veterinary Laboratory Medicine. Boston. 2002. 2nd ed. Blackwell Science.

Meyer DJ, Harvey JW. Veterinary Laboratory Medicine. Diagnosis. 2nd ed. WB Saunders, Philadelphia, 2001.

Interpretation &

PRACTICA No.1 TCNICAS DE EXTRACCIN DE SANGRE

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia.

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Nmero de profesionales en formacin por unidad de prctica: 5/equipo Introduccin: La prctica clnica del mdico vetrinario incluye la obtencin de muestras de sangre y su adecuado manejo y envo al laboratorio. Este debe ser capaz de aplicar tcnicas muy precisas para que el material que remita al laboratorio est en perfectas condiciones para ser procesado, y a partir de ello, obtener resultados confiables que sirvan para estblecer un diagnstico. En la prctica veterinaria los exmenes hematolgicos se realizan generalmente en sangre venosa. La puncin venosa, mediante aguja y jeringa, se lleva a cabo en cualquiera de las venas superficiales
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prominentes. En esta prctica se puncionar los sitios ms comnmente utilizados para obtener muestras de sangre en las diferentes especies domsticas.
Objetivos:

Ubicars los sitios de donde se puede extraer sangre en animales domsticos para realizar la toma de una muestra, utilizando el equipo y material adecuado, de acuerdo al sitio de extraccin. Te Familiarizars con las condiciones necesarias para su envio al laboratorio.

Criterios de desempeo durante la prctica


Manejars con cuidado al animal, as como, se tomarn las medidas adecuadas para tener el ms mnimo riesgo de daarse o daar a los animales cuando se extraiga la muestra de sangre. Discutirs con cuales son las condiciones ms adecuadas para enviar muestras de sangre al laboratorio Resultados Esperados Entregars un reporte de la prctica. Tiempo de trmino Un da despus de la prctica.

Normas de seguridad especficas de la prctica.


Tipo de peligro Como evitarlo Como proceder en caso de un accidente Informar al Profesor. Lavar con agua y jabn el rea afectada se deben usar desinfectantes;; si se existe riesgo de microorganismos peligrosos se debe utilizar de bioseguridad.

Golpe o mordedura del Usando bozal animal Pincharse con aguja o tener contacto con fluidos corporales (sangre) contaminados. uso de bata, guantes (su uso se recomienda cuando se trate de sangre, materiales o animales que puedan tener algn agentes infecciosos.

Contaminar a otros no se debe salir con ropa animales o personas de trabajo despus de extraer sangre procedente de animales con problemas infecciosos

Ser evaluado por un mdico veterinario en caso de un animal o Doctor en caso de una persona.

Cuadro de disposicin de desechos


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Tipo de desechos Biolgicos (Sangre, jeringas etc.)

Como descartarlos Debe haber contenedores para material bio-peligroso, e incineradores para desechos contaminados

Tipo de contenedor Bolsas para desechos biolgicos. Incineradores

Material:

Guantes desechables Adaptador para extraccin por vaco tipo Vacutainer Jeringas (22x32) Tubos de vaco con anticoagulante EDTA(tapn morado) y sin anticoagulante(tapn rojo) Torundas de algodn /Gasas estriles Alcohol de 70 Rasuradora Laminillas Etiquetas identificativas Gradilla Torniquete bozal

Procedimiento: A) Vena Ceflica: el sitio que se usa con mayor frecuencia para la extraccin de pequeas cantidades de sangre en el perro. a) Se sujeta al animal en posicin cmoda con el brazo libre al rededor del cuello (Fig 1). b) El brazo aydante sostiene el miembro anterior arriba del codo y sujeta la vena con el dedo pulgar (Fig 2) c) El miembro se sostiene profundamente y la mano gira hacia afuera hasta que la vena se halla en lnea recta a lo largo de la parte superior del miembro (Fig 3) d) La presona que extraer la muestra coge el antebrazo del animal y lo estira, su tirn es resistido por el ayudante que lo atrae en direccin audal. Esta traccin y contraccin es una parte importante de la sujecin y ayuda a inmoovilizar la vena. e) El dedo pulgar de la persona a extraer la sangre descansa sobre el lado externo de la vena y ayuda a inmovilizarla. Despus de limpiar el rea con alcohol y partir el pelo sobre la vena, se hace la incercin en el centro del antebrazo utilizando una aguja calibre 20 de una pulgada, con el bisel hacia arriba y con la jeringa y la aguja descansando paralelas a la vena. (Fig 4). f) Una vez que se observa sangre en el cubo de la aguja se procede a extraer la sangre.

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B) Vena Yugular: El sitio que se usa ms frecuentemente en el caballo, bovino, ovinos,cabras y grandes mamferos salvajes, en ocaciones se usa en perros, gatos, conejos, ratas,hmsters, conejillos de indias. a) Se recomienda para perros muy pequeos o cuando se necesitan grandes cantidades de sangre. Con el perro sentado, un ayudante detiene la mandbula inferior con una mano y le voltea la cabeza hacia arriba y ligeramente de lado. El operador coloca el pulgar de la mano izquierda en el surco yugular para ocluir y anclar la vena yugular, mientras manipula la jeringa y la aguja con la mano derecha. b) En el caso de cachorritos puede ser ms conveniente sostener al animal debajo del brazo derecho del ayudante sujetando los miembros anteriores con la mano derecha. c) Se recomienda limpiar el sitio donde se va a tomar la muestra, sobre todo en animales de pelo largo. Las venas se localizan ms fcilmente cuando se fricciona el sitio de la puncin con alcohol.

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C) Vena Safena: a) Se sujeta el animal en posicin cmoda en decbito ventral con el miembro extendido, o de cubito lateral con todos los miembros extendidos. b) Agarre el tarso y metatarso con la mano izquierda e inmovilice la vena colocando el pulgar a lo largo de ella. Haga la insercin en el punto alto donde la vena cruza la tibia e itroduzca la aguja tan adentro de la vena como las circunsatancias lo permitan.

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CONSIDERACIONES GENERALES PARA ENVIAR MUESTRAS Nunca olvidar que las muestras que se envan a un laboratorio de diagnstico son potencialmente patgenas. Las muestras deben ser lo ms frescas posible. Deben estar identificadas y rotuladas. Informacin acerca del remitente, historia clnica, diagnstico presuntivo. Indicar con claridad la determinacin exacta que requiere. Si se utiliza el servicio de paquetera las muestras deben tener protecciones dobles como bolsas de plstico, cajas de cartn, unicel, o recipientes de vidrio, amortiguados con papel o aserrn que resistan y sellar las tapas y cajas con cinta adhesiva para aislarlas. Se deben evitar empaques defectuosos y tapas flojas. Es necesario la refrigeracin para evitar la descomposicin de las muestras y conservar la viabilidad de organismos. Los materiales para aislamiento de virus de preferencia deben estar congelados. Los paquetes debern especificar las condiciones de transporte como material perecedero, material congelado, entrega inmediata, material biolgico o cualquier explicacin adecuada Si se sospecha que la muestra es infecciosa para el hombre, deber etiquetarse apropiadamente por fuera del paquete, ya sellado, y colocar correctamente a la vista, el nombre del remitente y del destinatario y adems la leyenda PELIGRO, MATERIAL INFECCIOSO DE FACIL DESCOMPOSICION No es recomendable enviar las muestras en horas y das inhbiles. Identificacin de las muestras: Los especmenes debern traer consigo una historia clnica con el mayor nmero de datos disponibles sobre el caso y el animal tales como: a) b) c) d) e) f) g) h) i) j) k) l) fecha y hora en que se tomo la muestra y fecha de envo al laboratorio tipo de conservacin usada para las muestras nombre del propietario domicilio, delegacin o municipio especie raza edad sexo vacunas previas duracin del problema nmero de animales afectados lista de todos los signos cnicos observados (decaimiento, anorexia, diarrea, vmito, parlisis etc.) m) hallazgos en la necropsia n) tratamientos recibidos

Medidas de bioseguridad.
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En caso de sufrir alguna lesin o herida se recomienda cubrirla con apsitos impermeables antes de empezar a trabajar. Si las lesiones no pueden cubrirse adecuadamente se recomienda no exponerse hasta que curen Se recomienda lavado de manos despus de cada prctica No comer, beber o fumar en reas de trabajo

Evidencias de desempeo: Durante la realizacin de la prctica, se te evaluar, la puntualidad, el cumplimiento, la participacin de los alumnos, el trabajo en equipo, el respeto hacia los animales, las instalaciones, los compaeros y conocimiento del tema. Reportars por escrito los resultados obtenidos en la prctica 2 das despus de la misma. Del reporte, se te evaluar, mediante una escala de valores: La presentacin (limpieza, orden, claridad), el contenido (resultado obtenidos), la bibliografa consulta, comentarios finales y el cuestionario de evaluacin. Adems analizars cmo los resultados de esta prctica impactan en tu formacin. Al final de tu reporte por escrito, contestars el siguiente cuestionario de evaluacin: 1. Investigue cuales son los tipos de anticoagulante ms utilizados y el tipo de anlisis que se realiza con cada uno de estos 2. Qu es una muestra hemolizada y cules son sus principales causas 3. De qu manera se afectan la lectura de hemoglobina cuando la muestra de sangre est ictrica o lipmica. 4. Cul es la diferencia entre plasma y suero. Explica cmo se obtiene cada uno. *Ver instrucciones para el formato general de los reportes por escrito al final de este manual de prcticas.

PRACTICA No. 2
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EVALUACIN DE LOS GLOBULOS ROJOS


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Nmero de profesionales en formacin por unidad de prctica: 5/equipo Introduccin: La evaluacin de los glbulos rojos o eritrocitos se lleva a cabo a travs de una biometra hemtica o hemograma. Este es un examen que analiza las variaciones cuantitativas y morfolgicas de los elementos constituyentes de la sangre, y aporta datos clnicos para auxiliar al mdico en la formulacin de un posible diagnstico. Con una pequea muestra de sangre obtenida por puncin venosa o arterial, y colocada en anticoagulante especfico (EDTA), se pueden obtener los siguientes parmetros con el hemograma: La serie roja o eritrocitaria, constituida por los glbulos rojos o hemates. Dentro de esta serie, son evaluados la cantidad de hemates (y su forma) y la concentracin de hemoglobina. El hematocrito, es el porcentaje de la masa del eritrocito con relacin al volumen sanguneo. Con esos datos, se calculan los ndices hematimtricos. Objetivos: Realizars la tcnica manual para el conteo de globulos rojos, y microhematocrito Identificars la morfologia eritroctica normal en los animales domsticos y principales alteraciones en su morfologa.

Criterios de desempeo durante la prctica


Manejars con cuidado y de acuerdo a las instrucciones del profesor todas las muestras de sangre. Aprenders a confeccionar y teir frotis sanguneos y evaluars cualquier cambio morfolgico observado microscpicamente. Registrars cualquier alteracin observada en el plasma del microhematocrito Discutirs en equipo y en grupo las observaciones obtenidas. tem Resultados Esperados Entregars un reporte de la prctica. Tiempo de trmino 2 das despus de la prctica.

Normas de seguridad especficas de la prctica.


Tipo de peligro Contaminacin con muestras de sangre Ingerir sangre o Como evitarlo Uso de guantes y bata, cubrir cualquier herida que se tenga Seguir las instrucciones Como proceder en caso de un accidente Informar al facilitador. Lavar con agua y jabn el rea afectada Enjuagarse perfectamente con
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diluyente para el conteo de glbulos rojos durante el pipeteo Cortadura por laminillas rotas o tubos capilares.

correctamente, usar la manguera adecuado cuando se pipetee. Manejar con cuidado todo el material de vidrio

agua e informar al facilitador

Lavar herida con agua y jabn. Informar al facilitador. Aplicar desinfectante y cubrir herida.

Cuadro de disposicin de desechos


Tipo de desechos Biolgicos (Sangre, jeringas etc.) Como descartarlos Debe haber contenedores para material bio-peligroso, e incineradores para desechos contaminados Tipo de contenedor Bolsas para desechos biolgicos. Incineradores

Materiales: 5 ml de sangre fresca con anticoagulante con EDTA Portaobjetos Tincin de Wright Gasas Algodn Tubos para microhematocrito Critoseal Microcentrifuga Lector de Microhematocrito Microscpio Aceite de inmersin Alcohol de 96 Agua destilada Solucin para glbulos rojos (Solo. De Gower) Pipetas de Thoma Cmara de Newbauer Calculadora

I.

Determinacin del Hematocrito


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A. Mtodo del microhematocrito a. Se utilizan tubos capilares lisos y se llenan aproximadamente a un centmetro del borde. b. Se seca la sangre que queda fuera del tubo cuando todava est hmedo. Se sella el extremo con un plstico especial. c. Colocar los tubos en una microcentrfuga y centrifugarlos por 5 minutos a 10,000 rpm. d. Se retiran los tubos y se lee el porcentaje del hematocrito en cualquiera de los diferentes lectores para tubo de hematocrito. e. Cuando se usa un cuadro lineal o lectura grfica, se necesita colocar el tubo del hematocrito en la escala con el menisco del plasma en la lnea superior. f. Se desliza el tubo hasta el fondo de la capa de eritrocitos que corresponda con la lnea cero. g. La lnea que intercepta la parte superior de la capa de eritrocitos se sigue hasta el punto donde puede leerse en la escala al final de la lnea.

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II.

Cuenta eritroctica

A. Llenado de la pipeta. 1. Se usa sangre con anticoagulante a. La sangre deber mezclarse con cuidado, invirtiendo el tubo por lo menos 20 veces. No agitar vigorosamente. b. Se coloca una pieza de caucho a una pipeta para dilucin de eritrocitos de Thoma, que se identifica por la marca 101 por encima del bulbo, se extrae la sangre exacta hasta llagar a la marca de 0.5, usando succin suave en la pieza de boca. (Fig 1)

Pipetas utilizadas para conteo de glbulos rojos y blancos.

c. Cando se extrae sangre de ms que sobrepasa ligeramente la lnea, se debe expeler el exceso por medio de pequeos golpes sobre la punta de la pipeta con el dedo. d. La sangre que queda en la punta de la pipeta deber secarse e. Insertar la pipeta en la solucin de Gower y llenar la pipeta con esta solucin hasta llegar a la marca de 101 por encima del bulbo. f. La sangre de diluye al 1:200 g. Se pone la pipeta en posicin horizontal y se tapa la punta con un dedo antes de retirar la pieza de caucho. La pipeta debe agitarse por lo menos 2-3 minutos en un agitador mecnico B. Llenado de la cmara. a. Para esto se necesita una cmara graduada o hemocitmetro y un cubreobjetos especial que debern limpiase cuidadosamente, quitando la pelusa y la grasa.

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b. Se coloca el cubreobjetos especial con los extremos ms largos paralelos los a los bordes de la cmara contadora. c. Se descarta por lo menos una tercera parte. Con esto se elimina el lquido de la porcin capilar de la pipeta que no se ha mezclado con la sangre. d. Con el ndice sobre el extremo superior de la pipeta, se toca con la punta el espacio que se encuentra entre la cmara contadora y el cubreobjetos. El lquido llenar el espacio por capilaridad, cuando el lquido ha fluido las tres cuartas partes de la pipeta, se saca sta pues ya habr quedado suficiente lquido para llenar el espacio. e. Se esperan 3 minutos para que las clulas sedimenten, deber evitarse la evaporacin para no introducir un grave error. f. Con el objetivo de poco aumento (10X) cerca del foso central, se localiza el cuadro central de los nueve cuadros grandes. Con el objetivo de gran poder (45X) se cuentan todos los eritrocitos en 5 de los 25 cuadros pequeos del rea central. Cada uno de los 5 cuadros pequeos se divide en 16 cuadros ms pequeos. Se cuenta en un total de 80 cuadros pequeos. g. Se cuentan las clulas empezando las clulas empezando a la izquierda de la fila superior de los cuatro cuadros pequeos, luego de derecha a izquierda en la siguiente fila y as sucesivamente. h. Hay que evitar la duplicacin al contar las clulas que tocan las lneas

C. Clculo de eritrocitos La suma de las clulas en los 5 cuadros pequeos se multiplican X 10,000 = ertirocitos totales /microlitro III. Determinacin de Hemoglobina (Hb). La concentracin de hemoglobina sirve para medir la capacidad de trasporte de oxigeno por los eritrocitos. La mayora de los mtodos usados para entre 3 para obtener la hemoglobina (o sea 15 gr/dl de Hb)

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Volumen Globular Medio (VGM). El VGM es una expresin, en trminos absolutos, del volumen promedio de los eritrocitos. Se obtiene de la siguiente manera: VGM = HCT (10) / No. eritrocitos. La unidad para reportar VGM = femtolitros (10-15L) Ejemplo: Hct = 14.4 Globulos rojos = 1.87 x 1012 = 77.0 Fl

VGM = 14.4 (10) / 1.87 x 1012 Interpretacin: VGM - implica macrocitosis

VGM - implica microcitosis

Concentracin de hemoglobina globular media (CHGM) Es la concentracion de hemoglobina del eritrocito; este parmetro es exacto ya que no requiere de la cuenta de GR para calcularse:
Hemoglobina (g/dl) X 100 CHGM = Hematocrito

Ejemplo: Hb = 14.4 Hct = 42 14.4 g/dl X 100 CHGM = 42 = 34.2 gr/dl

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EVALUACIN CUALITATIVA DE LOS ERITROCITOS PREPARACION OBSERVACION DEL FROTIS SANGUINEO A.- Mtodo de extensin. a. Se colocar una pequea gota en uno de los extremos del portaobjetos, el cual debe estar en una superficie plana y slida.

b. Se coloca el extremo de un segundo portaobjetos para extender contra la superficie del primero, sostenindolo a un ngulo de 45 grados aproximadamente. c. El portaobjetos se desliza suavemente para extender la gota de sangre, cuando este se haya extendido sobre aproximadamente dos tercios del ancho del portaobjetos, se mueve hacia adelante con movimiento firme y uniforme. La sangre correr formando una pelcula uniforme. d. La preparacin se seca rpidamente ondendola en el aire. La desecacin se facilita con movimiento en forma de abanico, nunca soplando o por calor. La rpida desecacin evita la deformacin de los glbulos sanguneos. e. La tincin debe hacerse antes de una hora. Si la laminilla no puede teirse en ese lapso deber preservarse por medio de la fijacin en alcohol metlico absoluto. TINCIN DEL FROTIS SANGUINEO A.- Mtodo de tincin. a. El frotis de sangre seca se cubre completamente con el colorante de Wright (2ml) y se deja reposar por 1 a 3 minutos. b. Se agrega igual cantidad de agua destilada amortiguada la cual se distribuye sobre todo el frotis, teniendo cuidado de que la solucin no se corra sobre los bordes. c. Se deja reposar la mezcla 8 minutos despus de este tiempo debe aparecer una espuma metlica color verde. d. Enjuagar con agua destilada. e. Se coloca la laminilla en posicin vertical y se deja secar. f. Observar al microscopio con aceite de inmersin a 100x.

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B. EXAMEN DEL FROTIS a. El frotis sanguneo se observa de poco aumento para ver la distribucin de las clulas y seleccionar la porcin del frotis que este cerca del extremo ms delgado donde los eritrocitos no se sobreponen. Se cambia al objetivo de inmersin en aceite para el resto del examen. b. A los eritrocitos se les estudia. Tamao. Variacin (anisocitosis), normociticos, macrociticos o microciticos. Forma variacin (Poiquilocitosis) clulas blanco, esferocitos, acantocitos. Color: normocrmicos, hipercrmicos, hipocrmicos. Estados anormales: Policromacia, reticulocitos, eritrocitos nucleados, cuerpos de Howell-Jolly, punteado basfilo, parsitos etc. Formas anormales comnmente encontradas en los eritrocitos

a.microcto b. macrocto

Eritrocitos nucleados

Clulas crenadas

Clulas en diana o blanco

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Esquistocitos o fragmentos

Hipocromasia

Pila de monedas o rouleaux Ovalocito

Policromasia

Puntilleo Basoflico

Aglutinacin

Medidas de bioseguridad. En caso de sufrir alguna lesin o herida se recomienda cubrirla con apsitos impermeables antes de empezar a trabajar. Si las lesiones no pueden cubrirse adecuadamente se recomienda no exponerse hasta que curen Se recomienda lavado de manos despus de cada prctica No comer, beber o fumar en reas de trabajo Evidencias de desempeo: Durante la realizacin de la prctica, se te evaluar, la puntualidad, el cumplimiento, la participacin de los alumnos, el trabajo en equipo, el respeto hacia los animales, las instalaciones, los compaeros y conocimiento del tema.

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Reportars por escrito los resultados obtenidos en la prctica 2 das despus de la misma. Del reporte, se te evaluar, mediante una escala de valores: La presentacin (limpieza, orden, claridad), el contenido (resultado obtenidos), la bibliografa consulta, comentarios finales y el cuestionario de evaluacin. Adems analizars cmo los resultados de esta prctica impactan en tu formacin. Al final de tu reporte por escrito, contestars el siguiente cuestionario de evaluacin: Menciona 2 causas de anisocitosis 1. Especie domstica donde los eritrocitos son de tamao ms pequeo 2. A que se refiere el trmino Rolouxe o formacin de pilas de monedas y en que especie es comnmente observado. 3. Menciona dos tipos de hemoparsitos 4. Con que enfermedades se asocia la presencia de cuerpos de Heinz 5. En las anemias hemolticas es comn observar aglutinacin marcada y presencia de esferocitos explica detalladamente porque suceden estos fenmenos.

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PRACTICA

No. 3

EVALUACIN DE LOS GLBULOS BLANCOS

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Nmero de profesionales en formacin por unidad de prctica: 5/equipo Introduccin: La evaluacin de los glbulos blancos se lleva a cabo a travs de una biometra hemtica o hemograma. Este es un examen que analiza las variaciones cuantitativas y morfolgicas de los elementos constituyentes de la sangre, y aporta datos clnicos para auxiliar al mdico en la formulacin de un posible diagnstico. La llamada serie blanca o leucocitaria est constituida por los glbulos blancos o leucocitos. Dentro de esa serie se evala el nmero de leucocitos, adems de eso, se hace la diferenciacin celular. Objetivo: Aprenders la tcnica manual para realizar el conteo de globulos blancos, as como, a evaluar su morfologa normal y anormal en diferentes animales domsticos.

Criterios de desempeo durante la prctica


Manejars con cuidado y de acuerdo a las instrucciones del profesor todas las muestras de sangre. Aprender a confeccionar y teir frotis sanguneos y evaluars cualquier cambio morfolgico observado microscpicamente en los glbulos blancos. Discutirs en equipo y en grupo las observaciones obtenidas. tem Resultados Esperados Entregars un reporte de la prctica. Tiempo de trmino 2 das despus de la prctica.

Normas de seguridad especficas de la prctica.


Tipo de peligro Como evitarlo Como proceder en caso de un accidente Informar al facilitador. Lavar con agua y jabn el rea afectada Enjuagarse perfectamente con agua e informar al facilitador

Contaminacin con Uso de guantes y bata, muestras de sangre cubrir cualquier herida que se tenga Ingerir sangre o Seguir las instrucciones diluyente para el conteo correctamente, usar la de glbulos blancos manguera adecuado durante el pipeteo cuando se pipetee. Cortadura por laminillas Manejar con cuidado Lavar herida con agua y jabn. rotas. todo el material de vidrio Informar al facilitador. Aplicar desinfectante y cubrir herida.
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Cuadro de disposicin de desechos


Tipo de desechos Como descartarlos Tipo de contenedor Biolgicos (Sangre, Debe haber Bolsas para desechos jeringas etc.) contenedores para biolgicos. Incineradores material bio-peligroso, e incineradores para desechos contaminados Materiales: IV. 5 ml de sangre fresca con anticoagulante con EDTA Portaobjetos Tincin de Wright Gasas Algodn Alcohol de 96 Agua destilada Solucin para glbulos blancos (Sol. de Turk) Pipetas de Thoma Cmara de Newbauer Aceite de inmersin Calculadora Cuenta Leucocitos a) Llenado de la pipeta. b) Se usa sangre con anticoagulante EDTA c) La sangre deber mezclarse con cuidado, invirtiendo el tubo por lo menos 20 veces. No agitar vigorosamente. d) Se coloca una pieza de caucho a una pipeta para dilucin de eritrocitos de Thoma, que se identifica por la marca 11 por encima del bulbo, se extrae la sangre exacta hasta llagar a la marca de 0.5, usando succin suave en la pieza de boca. e) Cando se extrae sangre de ms que sobrepasa ligeramente la lnea, se debe expeler el exceso por medio de pequeos golpes sobre la punta de la pipeta con el dedo. f) La sangre que queda en la punta de la pipeta deber secarse g) Insertar la pipeta en la solucin de cido actico y llenar la pipeta con esta solucin hasta llegar a la marca de 11 por encima del bulbo. h) La sangre de diluye al 1:20 i) Se pone la pipeta en posicin horizontal y se tapa la punta con un dedo antes de retirar la pieza de caucho. La pipeta debe agitarse por lo menos 2-3 minutos en un agitador mecnico
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Pipetas utilizadas para conteo de glbulos rojos y blancos.

Llenado de la cmara. a. Para esto se necesita una cmara graduada o hemocitmetro y un cubreobjetos especial que debern limpiase cuidadosamente, quitando la pelusa y la grasa. b. Se coloca el cubreobjetos especial con los extremos ms largos paralelos a los bordes de la cmara contadora. c. Se descarta por lo menos una tercera parte. Con esto se elimina el lquido de la porcin capilar de la pipeta que no se ha mezclado con la sangre. d. Con el ndice sobre el extremo superior de la pipeta, se toca con la punta el espacio que se encuentra entre la cmara contadora y el cubreobjetos. El lquido llenar el espacio por capilaridad, cuando el lquido ha fluido las tres cuartas partes de la pipeta, se saca sta pues ya habr quedado suficiente lquido para llenar el espacio. e. Se esperan 3 minutos para que las clulas sedimenten, deber evitarse la evaporacin para no introducir una grave error. f. Con el objetivo de poco aumento (10 X) se cuentan las clulas de cada uno de los 4 cuadros grandes de las esquinas. g. Se cuentan las clulas empezando las clulas empezando a la izquierda de la fila superior de los cuatro cuadros pequeos, luego de derecha a izquierda en la siguiente fila y as sucesivamente. h. Hay que evitar la duplicacin al contar las clulas que tocan las lneas i. Para que puedan detectarse los leucocitos como objetos uniformes obscuros, es necesario reducir la iluminacin lo ms que se pueda. j. Hay que excluir a los leucocitos que toquen las lneas

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D. Clculo. Clulas encontradas en los 4 cuadros X 50 = leucocitos totales /microlitro. PREPARACION DEL FROTIS SANGUINEO V. A.- Mtodo de extensin. a) Lo ideal es hacer los frotis con sangre fresca, recin extrada. La sangre debe mezclarse bien, agitando suavemente antes de llenar el tubo capilar para colocar una pequea gota en uno de los extremos del portaobjetos, el cual debe estar en una superficie plana y slida. b) Se coloca el extremo de un segundo portaobjetos para extender contra la superficie del primero, sostenindolo a un ngulo de 30 grados aproximadamente. c) El portaobjetos se desliza suavemente para extender la gota de sangre, cuando este se haya extendido sobre aproximadamente dos tercios del ancho del portaobjetos, se mueve hacia adelante con movimiento firme y uniforme. La sangre correr formando una pelcula uniforme. d) La preparacin se seca rpidamente ondendola en el aire. e) La tincin debe hacerse antes de una hora. Si la laminilla no puede teirse en ese lapso deber preservarse por medio de la fijacin en alcohol metlico absoluto.

TINCIN DE FROTIS SANGUINEO A.- Mtodo de tincin. a) El frotis de sangre seca se cubre completamente con el colorante de Wright y se deja reposar por 1 a 3 minutos. b) Se agrega igual cantidad de agua destilada amortiguada la cual se distribuye sobre todo el frotis, teniendo cuidado de que la solucin no se corra sobre los bordes.
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c) Se deja reposar la mezcla 8 minutos debe aparecer una espuma metlica color verde. d) Enjuagar con agua destilada. e) Se coloca la laminilla en posicin vertical y se deja secar. f) Observar al microscopio con aceite de inmersin a 100x. C. EVALUACIN DEL FROTIS SANGUNEO. 1. Consideraciones Generales Evaluar la calidad del frotis como la distribucin de las clulas, color del fondo del frotis (si es excesivamente azul, podra sugerir un aumento de la concentracin de protenas). El frotis sanguneo se observa de poco aumento para ver la distribucin de las clulas y seleccionar la porcin del frotis que este cerca del extremo ms delgado donde los eritrocitos no se sobreponen. Se cambia al objetivo de inmersin en aceite para el resto del examen. 2. Diferencial leucocitario. - Primero se debe de identificar el tipo de leucocito utilizando el microscopio de 1000X. (aqu se observa mejor la morfologa) - Cuenta y clasifica 100 clulas nucleadas. Se empieza con el examen a lo largo del margen externo del frotis por aproximadamente tres campos, se mueve un poco hacia dentro (1 mm o 3 campos y posteriormente hacia atrs, a la orilla del frotis. - Se repite el procedimiento cuantas veces sea necesario para identificar el nmero de clulas requerido - La cuenta diferencial de los leucocitos se expresa en porcentaje, el nmero relativo de los diferentes tipos de leucocitos que se encuentran el la sangre. - Prximo paso: toma el porcentaje de cada clula y multiplcala por el total de glbulos blancos para obtener la cuenta absoluta para cada tipo de leucocito. 3. Evaluacin de su morfologa Aqu se observa: Tamao Citoplasma: color, cantidad relativa y grnulos Ncleo: forma, color, estructura de la cromatina y nuclolo, cambios txicos desviacin a la izquierda (presencia de clulas inmadura

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MORFOLOGIA DE LOS DIFERENTES TIPOS DE LEUCOCITOS

Medidas de bioseguridad. En caso de sufrir alguna lesin o herida se recomienda cubrirla con apsitos impermeables antes de empezar a trabajar. Si las lesiones no pueden cubrirse adecuadamente se recomienda no exponerse hasta que curen Se recomienda lavado de manos despus de cada prctica No comer, beber o fumar en reas de trabajo Evidencias de desempeo: Durante la realizacin de la prctica, se te evaluar, la puntualidad, el cumplimiento, la participacin de los alumnos, el trabajo en equipo, el respeto hacia los animales, las instalaciones, los compaeros y conocimiento del tema. Reportars por escrito los resultados obtenidos en la prctica 2 das despus de la misma. Del reporte, se evaluar, mediante una escala de valores: La presentacin (limpieza, orden, claridad), el contenido (resultado obtenidos), la bibliografa consulta, comentarios finales y el cuestionario de evaluacin. Adems analizars cmo los resultados de esta prctica impactan en tu formacin. Al final de tu reporte por escrito, contestars el siguiente cuestionario de evaluacin:

1. A qu se refiere el trmino desviacin a la izquierda? 2. Que son los cuerpos de Barr y en qu tipo de animales se pueden observar? 3. En qu especies es ms comnmente observar una reaccin Leucemoide? 4. Menciona que medicamentos te podran provoca Linfopenia 5. Enlista 5 causas de Eosinofilia *Ver instrucciones para el formato general de los reportes por escrito al final de este manual de prcticas.

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PRCTICA

No. 4

TCNICAS DE OBTENCIN DE MUESTRAS DE ORINA

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Nmero de profesionales en formacin por unidad de prctica: 5/equipo Introduccin: El urianlisis o anlisis urinario es un mtodo diagnostico bsico para todos los animales enfermos, pues no solamente sirve para verificar anomalas en las vas urinarias, sino tambin es til para evaluar: Endocrinopatas como la diabetes mellitus o el hiperadrenocorticismo Problemas hemolticos como la hemlisis intravascular por leptospirosis aguda, babesiosis o anemia hemoltica inmunimediada por IgM. Problemas electrolticos Cncer como el plasmosarcoma (mieloma mltiple) Estado de hidratacin Hepatopatas a travs de la deteccin de bilirrubinuria, de cristales de biurato de amonio etc. Coagulopatas reflejadas por hematuria Problemas del equilibrio cido- base por la presencia de aciduria o alcaliuria Intoxicaciones como el etilenglicol Miopatas como la rabdomiolisis Problemas genitales como la pimetra y prostatitis

Objetivos: Relizars la coleccin de muestras de orina atravs del chorro directo, sondeo y puncin de vejiga (cistocentsis). Aprenders a transportar las muestras para su envo al labortorio

Criterios de desempeo durante la prctica


Manejars con cuidado al animal, as como, se tomarn las medidas adecuadas para tener el ms mnimo riesgo de daarse o daar a los animales cuando se extraiga la muestra de orina Aprenders a sondear y a puncionar la vejiga urinaria para colectar muestras estriles de orina
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Discutirs con cuales son las condiciones ms adecuadas para enviar muestras de orina al laboratorio Discutirs en equipo y en grupo las observaciones obtenidas. tem Resultados Esperados Entregars un reporte de la prctica. Tiempo de trmino 2 das despus de la prctica.

Normas de seguridad especficas de la prctica.


Tipo de peligro Contaminacin con muestras de orina Como evitarlo Uso de guantes y bata, cubrir informar al facilitador cualquier herida que se tenga Usando bozal Como proceder en caso de un accidente Informar al facilitador. Lavar con agua y jabn el rea afectada Informar al Profesor. Lavar con agua y jabn el rea afectada se deben usar desinfectantes;; si se existe riesgo de microorganismos peligrosos se debe utilizar de bioseguridad.

Golpe o mordedura del animal Pincharse con aguja o tener contacto con fluidos corporales (orina) contaminados.

uso de bata, guantes (su uso se recomienda cuando se trate de sangre, orina, materiales o animales que puedan tener algn agentes infecciosos.

Cuadro de disposicin de desechos


Tipo de desechos Biolgicos (Sangre, orina jeringas etc.) Como descartarlos Debe haber contenedores para material bio-peligroso, e incineradores para desechos contaminados Tipo de contenedor Bolsas para desechos biolgicos. Incineradores

Desarrollo de la prctica Materiales: Perro o Gato Recipientes de Vidrio Estriles para colectar la orina (puede ser vasitos de Gerber) Jeringas de varios calibres
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Yodo o cualquier otro desinfectante Mquina de rasurar 2 Sondas para obtencin de orina (el tamao depende de la talla del paciente)
MTODOS DE OBTENCIN DE LA ORINA Es importante emplear el mtodo adecuado de obtencin de orina. Los principales

son: 1) 2) 3) 4) Por miccin espontnea Por compresin de la vejiga Por cateterizacin Por cistocentsis

1) La orina obtenida por miccin espontnea, puede encontrarse contaminada con la flora bacteriana del ltimo tercio de la uretra, con infecciones del tero, de la vagina, del prepucio, etc., lo cual invalida los resultados. Este mtodo no es adecuado para realizar un cultivo

2) La orina colectada a travs de la compresin vesical, tambin puede estar contaminada por las mismas causas antes mencionadas. Con este mtodo se puede provocar una cistorrexis (ruptura de vejiga) en caso de obstrucciones o de bloqueos totales del tracto urinario, resultando en un uroperitoneo. Este Toma de muestra por compresin mtodo no es adecuado para realizar un cultivo vesical urinario.

3) A travs de la cateterizacin se obtienen muestras de mejor calidad que las anteriores, aunque frecuentemente con gran cantidad de clulas epiteliales por el uso de catteres de dimetro inadecuado.

Existe contaminacin de la muestra con el lubricante, observndose una gran cantidad de glbulos de grasa. La muestra puede estar contaminada con bacterias del ltimo tercio de la uretra o con pequeas cantidades de sangre, Toma de cuando se tiene dificultad para cateterizar. Tambien cateterizacin existe el peligro de perforar la vejiga si no se tiene la precaucin de medir la distancia que hay del glande o del orificio uretral a la vejiga.
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muestra

por

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4) La cistocentesis es el mtodo mas apropiado y con mayor aceptacin para tomar una muestra de orina

Es un mtodo poco invasivo, las muestras para bacteriologa no se contaminan, ni se arrastran clulas epiteliales de todo el tracto urinario que dificultan la interpretacin de la muestra.

Tomademuestrapor

CONSERVACIN Y ENVO DE LA MUESTRA Despus de su coleccin se recomienda evaluar la orina tan rpido como sea posible, pues mientras ms tiempo pase para su examen, menos confiables sern los resultados. Se consideran que las muestras de orina deben analizarse dentro de los siguientes 30 minutos despus de su coleccin. En caso de no ser posible, debe refrigerase a 4 oC. Si el anlisis se realizar hasta el da siguiente se sugiere dividir la muestra en dos tubos. Uno se congela para el estudio fsico qumico y el otro se refrigera para el examen microscpico. Si la evaluacin se realizar despus de 10 horas, se debe adicionar una gota de formol al 40% por cada 20 ml de orina. Es muy importante no exponer la muestra a la luz o a los rayos solares, pues algn metabolito como la bilirrubina puede volverse indetectables.

Medidas de bioseguridad. En caso de sufrir alguna lesin o herida se recomienda cubrirla con apsitos impermeables antes de empezar a trabajar. Si las lesiones no pueden cubrirse adecuadamente se recomienda no exponerse hasta que curen Se recomienda lavado de manos despus de cada prctica No comer, beber o fumar en reas de trabajo Evidencias de desempeo: Durante la realizacin de la prctica, se te evaluar, la puntualidad, el cumplimiento, la participacin de los alumnos, el trabajo en equipo, el respeto hacia los animales, las instalaciones, los compaeros y conocimiento del tema. Reportars por escrito los resultados obtenidos en la prctica 2 das despus de la misma. Del reporte, se evaluar, mediante una escala de valores: La presentacin (limpieza, orden, claridad), el contenido (resultado obtenidos), la
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bibliografa consulta, comentarios finales y el cuestionario de evaluacin. Adems analizars cmo los resultados de esta prctica impactan en tu formacin. Al final de tu reporte por escrito, contestars el siguiente cuestionario de evaluacin:

1. Qu desventajas podramos tener al tomar muestras por chorro directo? 2. Cunto tiempo despus de haber tomado la muestra se considera viable? para obtener unos resultados confiables? 3. Cules son los requisitos para transportar una muestra de orina? *Ver instrucciones para el formato general de los reportes por escrito al final de este manual de

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PRACTICA

No. 5

ESTUDIO GENERAL DE ORINA

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Nmero de profesionales en formacin por unidad de prctica: 5/equipo Introduccin: Un anlisis de orina o Estudio General de Orina (EGO) es una examinacin de la orina por medios fsicos o qumicos y comprende una serie de exmenes qumicos y microscpicos que ayudan al tamizaje de infecciones del tracto urinario, enfermedad renal y enfermedades de otros rganos que hacen que aparezcan metabolitos anormales (productos de descomposicin) en la sangre. Este se divide en tres partes que son: el examen fsico, el examen qumico y el examen microscpico de la orina.

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Objetivo: Realizars un estudio generla de orina completo e interpretars los resultados indicando posible alteraciones o enfermedades asociadas con dichos resultados.

Criterios de desempeo durante la prctica


Manejars con cuidado y de acuerdo a las instrucciones del profesor todas las muestras de orina. Aprender a evaluar la orina macro y microscpicamente Discutirs en equipo y en grupo las observaciones obtenidas. tem Resultados Esperados Entregars un reporte de la prctica. Tiempo de trmino 2 das despus de la prctica.

Normas de seguridad especficas de la prctica.


Tipo de peligro Contaminacin con muestras de orina Como evitarlo Uso de guantes y bata, cubrir cualquier herida que se tenga Manejar con cuidado todo el material de vidrio Como proceder en caso de un accidente Informar al facilitador. Lavar con agua y jabn el rea afectada Lavar herida con agua y jabn. Informar al facilitador. Aplicar desinfectante y cubrir herida.

Cortadura por tubos de vidrio o laminillas rotas.

Cuadro de disposicin de desechos


Tipo de desechos Biolgicos (orina,Sangre, jeringas etc.) Como descartarlos Debe haber contenedores para material bio-peligroso, e incineradores para desechos contaminados Tipo de contenedor Bolsas para desechos biolgicos. Incineradores

Materiales:

1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

20 ml de orina fresca (cualquier especie) Refractmetro Tiras reactivas Probeta Tubos de Ensaye Centrfuga Microscpio
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8. Laminillas 9. Cubreobjetos
Evaluacin Fsica: Color El color amarillo claro de la orina normal es conferido por los urocromos y por la urobilina. Si la orina es mas densa el color amarillo es mas obscuro, y si la orina esta muy diluida el color es mas claro. El color de una muestra de orina es evaluada subjetivamente y se reporta como: color rojo, caf, amarillo, etc. o combinacin de stas. Tambin se pueden hacer modificaciones en la intensidad del color como ligeramente amarillo o fuertemente rojo o caf etc. Algunas coloraciones amorales y sus causas se enlistan abajo:

Transparencia

La Turbidez o transparencia se reporta como: clara, ligeramente turbia, turbia u opaca La orina normal debe ser muy clara a ligeramente turbia. Exceso de turbidez resulta de la presencia de partculas suspendidas en la orina. La causa puede ser determinada evaluando el sedimento urinario por medio del microscopio. Causas comunes de orina turbia incluyen: Aumento de clulas (eritrocitos, leucocitos etc), numerosos cristales, bacterias, lipiduria, moco (especialmente en caballo), semen o contaminacin fecal

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C) Densidad La densidad o gravedad especfica (peso de la orina/peso del agua) es una estimacin por refractometra de la osmolaridad de la orina. Depende del numero y tamao de las partculas y sirve para evaluar la capacidad que tienen los tbulos renales para concentrar o para diluir la orina, segn sea el estado de hidratacin del paciente.
Refractmetro

Evaluacin qumica de la orina

Para realizar este examen se necesitan tiras reactivas de orina las cuales consisten en unas pequeas cintas de plstico rgido, de unos pocos centmetros de longitud y alrededor de medio centmetro de anchura, a las que van pegados unos reactivos, que son diferentes dependiendo de lo que se quiera analizar. Por ejemplo, si es un reactivo para azcar en orina, pues al contacto con esta glucosa reaccionan cambiando el color. Los reactivos son unos pequeos cuadraditos de un material poroso, de colores suaves. Segn las tiras, puede haber diferente nmero de ellos a lo largo de la misma.

El anlisis qumico incluye generalmente la evaluacin de de: pH Glucosa Cuerpos cetnicos Bilirrubina
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Urobilingeno Presencia de sangre, de hemoglobina o de mioglobina Protenas

Procedimiento: Se necesitan por lo menos 10 -15 ml de orina fresca en un tubo de ensaye Se introducen las tiras a la orina Despus de haber mojado las tiras, se sacan y se da tiempo para que hagan reaccin. Segn lo que se pretenda medir el tiempo es mayor o menor, pero normalmente esta informacin est includa en el envase. Cuando ha transcurrido lo suficiente, se procede a su lectura. Hay diversos mtodos: Las tiras cualitativas, que slo dicen si hay o no una sustancia en la orina: si cambian de color, son positivas. Si no cambian, negativas. Por ejemplo, los test de embarazo comercializados habitualmente. Las tiras cuantitativas, que cambian ms o menos de color segn cunta sustancia haya en la orina: traen una escala de colores en el envase; se coloca la tira al lado de dicha escala, y se decide a cul de los colores correspondientes se parece ms. El nmero que trae debajo dicho color nos dir la concentracin aproximada en orina. Por ejemplo, las de medir la glucosa. En este grupo, hay tambin tiras que miden varias cosas a la vez, como sangre, leucocitos, glucosa, protenas... En estos casos, la escala de colores del envase lleva las referencias del color en el mismo orden que la tira. Se coloca la tira a lo largo de la escala, de forma que el primer cuadro de la tira coincida con el primero de la escala, el segundo con el segundo... y se procede a la misma comparacin explicada. Evaluacin Microscpica del Sedimento Urinario Procedimiento

Se colocan 20 ml de orina fresca en un tubo limpio, seco y etiquetado. El tubo se centrifuga a 5,000 rpm por 3 minutos, remover de la centrifuga tendiendo cuidado de no alterar el sedimento

El tubo es inmediatamente invertido descargando todo el sobrenadante visible y despus colocarlo en su posicin original.

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Se agita el tubo vigorosamente para asegurar la resuspensin de todo el sedimento observado.

El sedimento resuspendido se coloca en un portaobjetos y se cubre con cubre objetos de 22 mm .

Observar al microscopio con el objetivo de 10 y 40 x.

En una evaluacin microscpica se puede observar: Clulas

Clulas tubulares

Clulas de transicin

Clulas escamosas

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Eritrocitos y leucocitos: Los eritrocitos se observan como cuerpos refrctales incoloros. Los leucocitos se observan como clulas redondas granulares incoloras

Cristales

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Cilindros Se forman en la ausencia de clulas en el lumen tubular. Existen diferentes tipos de cilindros y su nombre depende de la sustancia o clulas con lo compone

Cilindro Hialino Cilindro Granular

Cilindro Seroso

Cilindro de grasa

Cilindro celular

Agentes

infecciosos

Bacterias Las bacterias pueden ser observadas en sedimentos sin teir cuando se presentan en cantidades suficientes Hongos as hifas de hongos pueden indicar un sobrecrecimiento Parsitos como Capillaria plica o stephanurus dentatus etc.,. El anlisis urinario se divide en tres partes que son: el examen fsico, el examen qumico y el examen microscpico de la orina. Medidas de bioseguridad. En caso de sufrir alguna lesin o herida se recomienda cubrirla con apsitos impermeables antes de empezar a trabajar. Si las lesiones no pueden cubrirse adecuadamente se recomienda no exponerse hasta que curen Se recomienda lavado de manos despus de cada prctica No comer, beber o fumar en reas de trabajo Evidencias de desempeo: Durante la realizacin de la prctica, se te evaluar, la puntualidad, el
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cumplimiento, la participacin de los alumnos, el trabajo en equipo, el respeto hacia los animales, las instalaciones, los compaeros y conocimiento del tema. Reportars por escrito los resultados obtenidos en la prctica 2 das despus de la misma. Del reporte, se evaluar, mediante una escala de valores: La presentacin (limpieza, orden, claridad), el contenido (resultado obtenidos), la bibliografa consulta, comentarios finales y el cuestionario de evaluacin. Adems analizars cmo los resultados de esta prctica impactan en tu formacin. Al final de tu reporte por escrito, contestars el siguiente cuestionario de evaluacin: 1. En una tabla enliste los colores anormales que se pueden encontrar en una muestra de orina y cuales serian sus posible causas 2. Qu me indica una gravedad especfica baja (menos de 1.010) en un animal con alto grado de deshidratacin? 3. Qu tipo de cristales son comnmente observados en la orina de equinos? 4. Menciona 2 causas de glucosuria 5. Menciona 2 tipos de proteinuria prerenal.

*Ver instrucciones para el formato general de los reportes por escrito al final de este manual de prcticas.

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PRACTICA

No. 6

CITOLOGIA DIAGNOSTICA. Parte 1.


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Nmero de profesionales en formacin por unidad de prctica: 5/equipo Introduccin: La examinacin citolgica ha empezado a reconocerse como una herramienta til para la prctica de los mdicos veterinarios. En la mayora de los casos las muestras citolgicas se pueden recolectar rpida y fcilmente, a un bajo costo y con poco o ningn riesgo para el paciente. Frecuentemente, las muestras pueden ser preparadas, teidas e interpretadas mientras el dueo del animal espera.
Objetivos:

Aprenders a tomar muestras citolgicas a travs de las tcnicas de aspiracin con aguja delgada, Improntas, Hisopos y raspados, as como, conservarlas para poder ser transportadas adecuadamente al laboratorio.

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Criterios de desempeo durante la prctica


Manejars con cuidado al animal, as como, tomars las medidas adecuadas para tener el ms mnimo riesgo de daarse o daar a los animales cuando se extraiga la muestra de sangre. Discutirs con cuales son las condiciones ms adecuadas para tomar muestras citolgicas y cmo enviarlas al laboratorio. tem Resultados Esperados Entregars un reporte de la prctica. Tiempo de trmino Un da despus de la prctica.

Normas de seguridad especficas de la prctica.


Tipo de peligro Golpe o mordedura del animal Pincharse con aguja o tener contacto con fluidos corporales (sangre) o tejidos contaminados. Como evitarlo Usando bozal Como proceder en caso de un accidente Informar al Profesor. Lavar con agua y jabn el rea afectada se deben usar desinfectantes;; si se existe riesgo de microorganismos peligrosos se debe utilizar de bioseguridad.

uso de bata, guantes (su uso se recomienda cuando se trate de sangre, materiales o animales que puedan tener algn agentes infecciosos.

Contaminar a otros animales o personas despus de extraer sangre procedente de animales con problemas infecciosos Cortadura por tubos de vidrio o laminillas rotas.

no se debe salir con ropa Ser evaluado por un mdico de trabajo veterinario en caso de un animal o Doctor en caso de una persona.

Manejar con cuidado todo el material de vidrio

Lavar herida con agua y jabn. Informar al facilitador. Aplicar desinfectante y cubrir herida.

Cuadro de disposicin de desechos


Tipo de desechos Biolgicos (Sangre, tejidos, jeringas etc.) Como descartarlos Debe haber contenedores para Tipo de contenedor Bolsas para desechos biolgicos. Incineradores
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material bio-peligroso, e incineradores para desechos contaminados Material: 1. Jeringas y agujas 2. Gasas y algodn 3. Alcohol de 70 4. Rasuradora o rastrillo 5. Laminillas 6. Colorante de Wright 7. Alcohol de 96 8. Microscpio 9. Aceite de inmmersin 10. Hoja de Bistur 11. Hisopos 12. Vaso de Coplin con alcohol de 96 (fijador) 13. Esptula de Ayre 14. Espejo vaginal 15. Lpiz diamante 16. Frasco tipo Gerber

Procedimiento: Masas firmes: masa cutneas, masas subcutneas palpables, masas internas palpables (o localizadas por radiologa), o masas que se obtienen por medio de cirugas. Aspiracin con aguja fina: consiste en la aspiracin de clulas por medio de una guja de pequeo calibre (generalmente aguja 22). El calibre de la aguja debe ser lo suficientemente pequeo para aspirar clulas individuales o pequeos grupos celulares y lo suficientemente larga para prevenir dao (lisis) de las clulas. Una aspiracin con aguja fina tambien se puede realizar en masas obtenidas de cirugas. Ejemplo de tejidos que se exfolian fcilmente con esta tcnica son los ndulos linfticos. Procedimiento: - Inserta la aguja en la masa (unida a una jeringa de 10 o 12 cc) (figura a) - Una vez adentro la aguja retira el embolo (figura b) - Mueve ligeramente la aguja dentro de la masa - Podemos ver que aparezca material en la base de la aguja - Libera suavemente la presin de la jeringa soltando el embolo (figura c) - Retira la aguja de la masa (figura d) - Retira la aguja del barril de la jeringa - Llena la jeringa con aire
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Inserta nuevamente la aguja a la jeringa y deposita el material colectado en la laminilla Confecciona un frotis (semejante a los frotis sanguneos o desliza suavemente otra laminilla encima de la laminilla donde se deposit el materia. Esto se hace con el fin de separar adecuadamente las clulas.) Etiqueta la laminilla Scala al aire (o se fija en alcohol segn la tcnica de tincin que se vaya a realizar) Tie la laminilla y examina

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Improntas: Esta es una excelente tcnica cuando tenemos tejidos frescos disponibles. Si se manda algn tejido para histopatologa se recomienda hacer laminillas para examinacin citolgica, incluso puedes guardar las laminilla despus de que hayas obtenido el diagnstico histopatolgico.

Procedimiento: - Utilizar una pequea pieza de tejido (< de 0.5 cm de dimetro) - Usar la parte fresca cortada de una masa (de preferencia por debajo de cualquier superficie inflamada) - Secar la sangre y humedad excesiva del tejido con una gasa - Suavemente toque la superficie de la muestra con la laminilla. Se recomienda hacer 2 lneas rectas de impresiones sobre la laminilla. Las 2 lneas sern fcil de identificar bajo el microscopio. - Etiquetar las laminillas - Secar las improntas al aire - Tie y examina

Raspados: Se recomienda hacer raspados junto con improntas de tejido fresco. Los raspados son la mejor manera de obtener clulas en tejidos compuestos de clulas mesenquimales (msculo, hueso, etc,) ya que las clulas de tejido conectivo se encuentran adheridas a una matriz extracelular y generalmente no se exfolian tan fcilmente. Procedimiento: - Se recomienda que la superficie de la muestra sea fresca (como en las improntas) - Raspe la superficie con una navaja de bistur para colectar un pequea cantidad de tejido - El material obtenido extindelo sobre la laminilla. Asegrate de que quede lo suficientemente delgado para observar adecuadamente las clulas. - Etiquetar las laminillas - Secar al aire y teir para examinar bajo el microscpico

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Frotis Vaginal: Procedimiento: - Se separan los labios y se introduce en la vagina la esptula o el hisopo humedecidos con agua destilada. - Para obtener el material citolgico se deber hacer movimientos rotatorios con el hisopo o la esptula sobre las paredes de la mucosa. - Con el material obtenido se realiza el frotis deslizando la esptula o el hisopo sobre la superficie del portaobjeto, tratando de que el material quede distribuido en una monocapa. - Hecho el frotis se introduce de inmediato en el vaso de Coplin o en el frasco tipo gerber, que contiene alcohol de 96 para que el material se fije en forma adecuada.

Como enviar muestras citolgicas al laboratorio de diagnstico. Se recomienda que las nuestras que van a ser examinadas se enven a un laboratorio de diagnstico veterinario ya que pueden existir grandes diferencias sobre todo en especmenes citolgicos. Por ejemplo, en los humanos no existe equivalencia para el Sarcoide Equino, Tumor Venreo Transmisible, Histiocitoma Canino y Adenoma Perianal Canino. Estos tipos de tumores probablemente sern mal interpretados si son enviados a laboratorios donde patlogos de medicina humana trabajan. Probablemente
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estos se diagnostiquen como tumores malignos cuando en realidad son benignos. Por lo tanto, se recomienda que patlogos veterinarios examinen muestras de animales. Siempre incluyen junto con la muestra una historia clnica completa del animal: - Especie, raza, edad, sexo. - Localizacin de la lesin (piel, tejido subcutneo, tejidos blandos, si est unida al hueso etc.) - Descripcin de la lesin (tamao en centmetros, color, textura, movilidad, si est ulcerada o no, si es dolorosa etc) - Cuanto tiempo lleva con la lesin y que tan rpido ha crecido ltimamente. - Si existen lesiones previas o algn otro diagnstico. - Evidencia de metstasis (checar otros rganos especialmente los ndulos linfticos. Si se va a enviar muestras lquidas (lquido asctico, pericrdico, torcico etc.), se recomienda hacer un frotis directo y un frotis despus de haber concentrado la muestra y mandar tanto el frotis secado al aire y el lquido en un tubo. En el frotis se podrn examinar clulas poco degeneradas y en el lquido se realizarn otras pruebas tales como conteo celular y determinacin de protenas. No refrigeres las muestras o congeles las laminillas ya que en estas condiciones las clulas se pueden destruir o formar precipitaciones alterando su morfologa. Si tienes alguna duda de cmo mandar este tipo de muestras es mejor llamar al laboratorio para preguntar.

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FORMATO PARA EL ENVO DE MUESTRAS CITOLGICAS


Fechadeenvo: Exp.No: Especie:

NombredelPaciente: Sexo: Edad:

Raza:

Nombredelpropietario:

mdicoqueremiteelcaso:

Indiqueenelesquemalalocalizacindelalesin:

Lalesindescritaseencuentraen: Piel( )Tejidosubcutneo( )Msculo ( )Hueso ( )Otrorgano( ) Tamao(cm)_______ Color:__________Consistencia:suave( ) firme( ) dura ( ) Existenmsmasasademsdeladescrita?___ cuntasysulocalizacin?____________ Hacecuantoapareci? Haidocreciendodetamaodurantelasltimassemanas?____ Esmviloestfuertementeadheridaatejidosubcutneoomsculo?______ Estulcerada?_____ Sangra?____

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Medidas de bioseguridad. En caso de sufrir alguna lesin o herida se recomienda cubrirla con apsitos impermeables antes de empezar a trabajar. Si las lesiones no pueden cubrirse adecuadamente se recomienda no exponerse hasta que curen Se recomienda lavado de manos despus de cada prctica No comer, beber o fumar en reas de trabajo Evidencias de desempeo: Durante la realizacin de la prctica, se te evaluar, la puntualidad, el cumplimiento, la participacin de los alumnos, el trabajo en equipo, el respeto hacia los animales, las instalaciones, los compaeros y conocimiento del tema. Reportars por escrito los resultados obtenidos en la prctica 2 das despus de la misma. Del reporte, se evaluar, mediante una escala de valores: La presentacin (limpieza, orden, claridad), el contenido (resultado obtenidos), la bibliografa consulta, comentarios finales (y el cuestionario de evaluacin. Adems analizars cmo los resultados de esta prctica impactan en tu formacin. Al final de tu reporte por escrito, contestars el siguiente cuestionario de evaluacin: 1. Menciona cuales son las tcnicas de tincin ms utilizada en citolpatologa 2. Realiz un esquema donde muestres las diferencias citolgicas observadas en las diferentes etapas del celo en una perra *Ver instrucciones para el formato general de los reportes por escrito al final de este manual de prcticas.

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PRACTICA No. 7 CITOLOGIA DIAGNOSTICA Segunda Parte


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Nmero de profesionales en formacin por unidad de prctica: 5/equipo Introduccin El principal uso de la citologa es la diferenciacin de reacciones inflamatorias, neoplsicas o hiperplsicas. La evaluacin citolgica de los procesos neoplsicos, en casi todos los casos puede determinar si un proceso es benigno o maligno y en mltiples oportunidades identifica correctamente el tipo especfico de neoplasia en cuestin. La interpretacin de la citologa es de gran ayuda al momento de establecer un diagnstico, identificar el proceso de una enfermedad, formular un pronstico y/o indicar que otros procedimientos diagnsticos se realizarn despus. Objetivo: Identificard el tipo de proceso patolgico (inflamacin vs neoplasia) en diferentes muestras citolgicas.

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Normas de seguridad especficas de la prctica.


Tipo de peligro Cortadura por tubos de vidrio o laminillas rotas. Como evitarlo Manejar con cuidado todo el material de vidrio Como proceder en caso de un accidente Lavar herida con agua y jabn. Informar al facilitador. Aplicar desinfectante y cubrir herida.

Cuadro de disposicin de desechos


Todas las laminillas ya se encuentran teidas y montadas, por lo que no representan riesgo biolgico para los alumnos. Material: Laminillas con diferentes tipos de tumores teidas con Wright Microscopio Aceite de inmersin Gasa o algodn Evaluacin de las preparaciones citolgicas (masas slidas y muestras lquidas)

Examinacin macroscpica. Procedimiento: El frotis debe ser examinado antes de ser tenido. Evala la textura del frotis (grasos vs seco). Despus de teir el frotis busca agrupamientos de clulas los cuales vers en el microscopio. Evaluando bajo el microscopio con el objetivo de 10x: Identifica reas con agrupamientos de clulas o elementos no celulares. Nota la celularidad en general, por ejemplo: si es escasa, moderada o altamente celular. Empieza a identificar el tipo de clula o clulas que se encuentran presentes. Evaluando con el objetivo de 100x (se necesita aceite de inmersin): Evala las poblaciones celulares y clasifcalas como de origen INFLAMATORIO vs NO INFLAMATORIO. Identifica la poblacin celular inflamatoria y caracteriza la reaccin inflamatoria presente. Piensa en algunos agentes infecciosos que pudieran estar asociados con el tipo de reaccin inflamatoria presente. Busca e identifica la presencia de algn agente patgeno. Identifica cualquier tipo de material que no sea de origen celular (por ejemplo,
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cristales, grasa, protenas o cuerpos extraos). Evala y caracteriza cada poblacin de clulas que no sean de origen inflamatorio. Por ejemplo: clasifica de acuerdo al tipo general de clulas ya sean de origen epitelial, mesenquimal, o clulas redondas. Identifica cuando te sea posible. Evala cada poblacin de origen no inflamatorio identificando si son de origen maligno o benigno.

A Clasificacin de hallazgos citolgicos Solo clulas inflamatorias presentes: Inflamacin Neutroflica (inflamacin activa) Se caracteriza por la gran infiltracin de neutrfilos (PMN > 70% de clulas inflamatorias ). PMN significa clulas polimorfo nucleares. Tcnicamente, los eosinfilos y basfilos se encuentran en esta categora pero casi siempre se usa como una abreviacin para los neutrfilos. Es importante clasificar posteriormente a los neutrfilos como neutrfilos degenerados y no degenerados. Alteraciones degenerativas sugieren la presencia de toxinas bacterianas en el sitio de la inflamacin por lo tanto, es importante buscar agentes infecciosos. Cambios degenerativos en los Neutrfilos El ncleo de los neutrfilos normales debe ser bien lobulados o segmentados con agrupamientos de cromatina bien marcados. Los neutrfilos no viven mucho fuera del torrente sanguneo y su destino normal es morir despus de haber sido fagocitados por los macrfagos. La muerte celular normal se refleja por picnosis del
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ncleo o algunas veces cariorrexis. Los cambios degenerativos se reportan cuando se observa hinchazn del ncleo y prdida de la definicin de los segmentos o lbulos. Esto puede seguir con cambios ms severos como prdida de la textura de la cromatina y perdida de la membrana nuclear. La etapa final es la ruptura de la clula. Inflamacin subaguda o Inflamacin activa crnica (reaccin inflamatoria mixta) Caracterizada por la infiltracin de neutrfilos y clulas mononucleares tales como macrfagos linfocitos y clulas plasmticas. Este tipo de inflamacin se compone de un 50-70% de PMN, 30-50% de mononucleares. es importante evaluar cambios degenerativos en los neutrfilos. Reacciones inflamatorias subagudas pueden asociarse con agentes infecciosos que son menos irritantes que aquellos que causan un inflamacin Neutroflica. Este tipo de reacciones tambin pueden ser de origen no infeccioso. El tipo de clula mononuclear provee informacin sobre el agente causal, como por ejemplo, la presencia de clulas plasmticas se asocian con una estimulacin antignica que resulta en la produccin de anticuerpos. Inflamacin Crnica. Se dice que hay una inflamacin crnica cuando >50% de las clulas inflamatorias son clulas mononucleares.

Otros trminos que se utilizan: Inflamacin purulenta Se utiliza cuando >85% de las clulas inflamatorias corresponden a neutrfilos y presentan cambios degenerativos. Inflamacin granulomatosa. Se usa cuando hay infiltracin de clulas gigantes, macrfagos y otro tipo de clula mononuclear (linfocitos yo clulas plasmticas). Inflamacin Piogranulomatosa. Infiltracin de clulas gigantes multinucleadas, macrfagos epiteliales y PMN. Generalmente se asocia con micosis sistmicas o bacterias como Nocardia o Actimonyces u ocasionalmente a reacciones de cuerpos extraos. Inflamacin Eosinoflica. Se presenta cuando >20% est compuesta por eosinfilos. Puede ser un componente de cualquiera de inflamacin descrita anteriormente (por ejemplo, inflamacin subaguda con inflamacin eosinoflica). Generalmente se asocias con reacciones de hipersensibilidad tipo I (alergias, asma etc).

Identificacin de tipos celulares en neoplasias Si los componentes celulares de la muestra indican un proceso neoplsico, se debe diferenciar entre una neoplasia epitelial, mesenquimal o de clulas discretas o redondas y si la neoplasia es benigna o maligna.

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Neoplasia de Origen Epitelial

Neoplasias de origen Mesenquimal

Neoplasias de Clulas Redondas


TumordeClulasCebadas Linfosarcoma

TumorVenreo

Histiocitoma

Apariencia General de las tres Categoras Bsicas de Tumores (Modificado de Cowell and Tyler 1993)

Clulas epiteliales. Las muestras presentan una alta celularidad. En general la mayora de las clulas se encuentran en grupos o racimos y pocas se encuentran de manera individual con bordes citoplasmticos poco definidos. Las clulas presentan forma oval a redonda, grandes, de moderado a abundante citoplasma basoflico y ncleo redondo con intensidad de tincin suave y un patrn de cromatina fino. Presencia de uno o ms nuclolos prominentes. Dependiendo del origen pueden presentar citoplasma vacuolado. Clulas mesenquimales. Clulas que se originan a partir de tejido conectivo. Muestran poca celularidad ya que se exfolian en menor proporcin que las clulas epiteliales y se encuentran incrustadas en una matriz extracelular. Las clulas individuales (no tienden a agruparse) y presentan forma fusiforme (prolongaciones citoplasmticas) o forma poligonal, de tamao mediano a pequeo con citoplasma claro, pueden presentar bordes citoplasmticos indefinidos. Ncleo redondo a oval, de intensidad media y patrn de cromatina fino. El nuclolo poco o no visible. Clulas discretas o redondas. Celularidad alta. Clulas pequeas a medianas, redondas e individuales. Bordes citoplasmticos bien definidos, ncleo redondo. Las clulas que se incluyen en este grupo tenemos a los
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linfocitos, clulas cebadas, histiocitos y clulas del tumor venreo transmisible. CRITERIOS CITOLGICOS DE MALIGNIDAD Para estimar el potencial de malignidad, es ms confiable tomar en cuenta el criterio de malignidad en el ncleo ms que el del citoplasma, debido a que en general, el ncleo sufre menos modificaciones en procesos inflamatorios, hiperplsicos o displsicos que el citoplasma. El reconocimiento de ms de tres criterios de malignidad en el ncleo en un alto porcentaje de las clulas es una evidencia fuerte de malignidad. Criterios Generales Celularidad. En general las muestras con alta celularidad sin un componente inflamatorio significante, son malignas. Este criterio es apropiado nicamente en tejidos epiteliales y mesenquimales. Pleomorfismo. La mayora de los tejidos normales presentan una poblacin celular uniforme tanto en forma como en tamao. En neoplasias malignas, esta uniformidad de forma y tamao (anisocitosis) se pierde, al grado en que en algunos casos llega a ser muy difcil la distincin del tipo tisular. Localizacin. Un criterio simple y obvio es la localizacin anormal de una poblacin celular en particular o sea, encontrar cualquier tipo celular neoplsico en tejidos que normalmente no presentan ese tipo celular. Por ejemplo encontrar clulas epiteliales neoplsicas en ganglios linfticos indica la presencia de una metstasis.

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Medidas de bioseguridad. En caso de sufrir alguna lesin o herida se recomienda cubrirla con apsitos impermeables antes de empezar a trabajar. Si las lesiones no pueden cubrirse adecuadamente se recomienda no exponerse hasta que curen. Se recomienda lavado de manos despus de cada prctica, No comer, beber o fumar en reas de trabajo Evidencias de desempeo: Durante la realizacin de la prctica, se te evaluar, la puntualidad, el cumplimiento, la participacin de los alumnos, el trabajo en equipo, el respeto hacia los animales, las instalaciones, los compaeros y conocimiento del tema. Reportars por escrito* los resultados obtenidos en la prctica 2 das despus de la misma. Del reporte, se evaluar, mediante una escala de valores: La presentacin (limpieza, orden, claridad), el contenido (resultado obtenidos), la bibliografa consulta, comentarios finales (y el cuestionario de evaluacin. Adems analizars cmo los resultados de esta prctica impactan en tu formacin.

Al final de tu reporte por escrito, contestars el siguiente cuestionario de evaluacin: En una tabla enliste las neoplasias ms comnmente encontradas en la piel. Describe el Tumor Venreo Transmisible (perros). Menciona 4 neoplasias de origen mesenquimal y 5 de origen epitelial Cmo se vera en un esquema y qu tipo de clulas participan en una inflamacin piogranulomatosa? 5. Qu pronstico esperaras tener en un animal con un hemangiosarcoma en bazo y porqu?

1. 2. 3. 4.

*Ver instrucciones para el formato general de los reportes por escrito al final de este manual de prcticas.

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SISTEMA DE EVALUACIN.
Al final de cada prctica, se revisar tu desempeo mediante la revisin de los Siguientes puntos: a) Evidencia de desempeo: Las descritas de manera general para el manual de prcticas y de manera particular para cada prctica. b) Evaluaciones intermedias: Habr una evaluacin acerca de las tcnicas y eventos cubiertos por las diferentes prcticas. c) Mtodo de asignacin de calificaciones: 1. Asistencia: 10% 2. Criterios de desempeo: 25% 3. Reporte por escrito : 65% Evaluacin Actividad profesional Evaluacin en formacin Fuiste puntual en cada prctica? Leste previamente el contenido de tu prctica? Utilizaste la bata de laboratorio de manera adecuada? Cumpliste con el Material que se te solicit? Utilizaste los guantes, cuando se requera, durante la prctica? instructor Final Observaciones

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Realizaste la prctica conforme a las instrucciones? Al final de la prctica limpiaste tu rea de trabajo? Dispusiste de los desechos de cmo indica el manual? Te comportaste con la profesionalidad requerida?

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INSTRUCCIONES PARA LLENAR EL FORMATO DE REPORTES DE PRCTICAS


El reporte debe ser un escrito sencillo donde con tus propias palabras describirs lo realizado y observaciones encontradas durante cada prctica. El contenido del reporte, debe incluir por lo menos los siguientes apartados: Ttulos de la prctica: como encabezado de la primera pgina, sta debe tener el titulo del experimento o nombre de la prctica, estar centrado en tamao de letra ms grande que el resto del texto y de preferencia en estilo negrita. Introduccin. Aqu debes documentar tericamente todo sobre las variables de objeto de estudio tal como su uso, importancia etc. La informacin recopilada no debe ser un acto de copiar y pegar bajada de internet o extrada de algn libro o artculo, esta debes redactarla con tu propio lenguaje. La informacin recopilada debe ser organizada en forma coherente, sin frases sueltas o que no tenga relacin con el tema que se est tratando. Objetivo. Es el propsito, la razn o motivo del por qu realizaste la prctica. Metodologa. Es la descripcin sobre lo que hiciste durante la prctica. Resultados. Es la parte medular de tu reporte. Aqu agrega los cuadros comparativos que realizaste junto con tus compaeros. Seala lo que te llam la atencin. Es conveniente que anexes tablas, dibujos, fotografas o esquemas de lo que observaste durante la prctica. Las tablas deben estar enumeradas y tener una leyenda indicando brevemente a que corresponde. Conclusiones. Aqu resume los puntos ms importantes y relevantes sobre el trabajo de laboratorio que realizaste. Los comentarios deben centrarse en los conceptos aprendidos con la realizacin de la prctica y cmo estos se relacionan con los objetivos generales del curso. Puedes utilizar cuadros comparativos u otra herramienta que te sea til para presentar la informacin. Bibliografa. Para todo trabajo que se documente deber citarse las fuentes consultadas. Nota:
El profesor debe publicar con suficiente anticipacin cada prctica por realizar Todo reporte deber tener buena presentacin La redaccin deber hacerse sin falta de ortografa Las pginas del reporte debern estar enumeradas El reporte debe entregarse en un folder indicando en el costado el nmero de equipo o nombre del alumno

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