08/03/2012

ENZIMAS
BQ. Pamela Luttges Dittborn
BIO 062 – I SEMESTRE 2012

Generalidades Nomenclatura Propiedades de las enzimas Cómo actúan las enzimas Factores que afectan la velocidad de reacción La ecuación de Michaelis-Menten Inhibición de la actividad enzimática Regulación de la actividad enzimática Enzimas de utilidad para el diagnóstico clínico

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Generalidades
Son de naturaleza proteica (la mayoría) y catalizan (aceleran) reacciones químicas Altamente específicas: sólo actúan sobre sus sustratos Sumamente efectivas: se requiere sólo pequeñas cantidades No se modifican permanentemente ni se consumen durante la reacción. Actúan a una temperatura y pH óptimos Su acción es regulada

Nomenclatura
Nombres recomendados

Algunas enzimas tienen nombres descriptivos (tripsina, quimiotripsina, pepsina, etc.) Se denominan con la terminación -asa tomando como base el tipo de reacción que catalizan.

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08/03/2012 Nombres sistemáticos OXIDO REDUCTASAS TRANSFERASAS HIDROLASAS LIASAS ISOMERASAS LIGASAS transferencia de electrones de una molécula donadora a una aceptora. 4ed. 2010) 3 . Reacomoda átomos dentro de una molécula.C. Hidrólisis: ruptura de enlaces químicos.) Comisión Internacional de Enzimas (Garrett & Grisham. Suelen requerir de coenzimas: NAD. 5ed. etc. : Comisión Internacional de Enzimas (Lippincott. agregando agua Sustitución de dobles enlaces por grupos químicos o a la inversa. carboxilo. etc. transferencia de grupos químicos: amino. acoplado a hidrólisis de una molécula de ATP E. Unión de dos moléculas. FAD. fosfato. Forma isómeros.

08/03/2012 Propiedades de las enzimas Sitio activo Eficiencia catalítica Especificidad Holoenzimas Regulación Localización celular SITIO ACTIVO Zona de la proteína donde se lleva acabo el evento catalítico. Lisozima 4 .

08/03/2012 Kcat: N° de reacciones de un sitio activo de una determinada enzima por segundo (Stryer. 7ed. 2012) 5 .

2005- 6 . Color Atlas in Biocem. Koolman. 2ed.08/03/2012 Preferencia que presentan las enzimas hacia ciertos sustratos.

Una enzima desprovista de los cofactores o los grupos prostéticos se denomina apoenzima. manganeso. la cual es catalíticamente inactiva. Los cofactores pueden ser iones metálicos o sustancias orgánicas (coenzimas). La enzima activa (holoenzima) resulta de la combinación de una apoenzima y su(s) cofactor(es). mientras que otras tienen porciones no proteicas. Cuando los cofactores o las coenzimas se encuentran unidos covalentemente a la enzima se llaman grupos prostéticos. magnesio. Un tercio de los enzimas requieren algún ión metálico para catalizar Estos pueden ser iones inorgánicos como el hierro. 7 . etc. llamadas cofactores. Zinc.08/03/2012 Algunas enzimas consisten enteramente de proteínas.

8 . la actividad enzimática puede estar aumentada o disminuida.08/03/2012 Muchas vitaminas son cofactores o precursores de cofactores de enzima De acuerdo a las necesidades celulares.

08/03/2012 Cómo actúan las enzimas Actúan reduciendo la energía de activación: energía necesaria para que el sustrato alcance el estado de transición. 1M ∆Gº’: Sistemas Biológicos. • • A T* B Las enzimas aceleran las reacciones disminuyendo la energía de activación (Garrett & Grisham) G: Energía libre de Gibbs ∆G: cambio en la energía libre estándar ∆Gº : 298ºK. Sólo la velocidad. 1 atm. ni el equilibrio de la reacción. No afectan ni la dirección. es decir de mayor energía. 9 .

08/03/2012 Cómo se une una enzima a su sustrato? (Campbell & Farrell) 2 modelos El centro activo de las enzimas es complementario al estado de transición de la reacción catalizada 10 .

Encaje inducido: modificación temporal de la enzima y el sustrato Catálisis: reacción química Liberación de productos: la enzima puede iniciar nuevamente el ciclo. Cinética Enzimática Actividad Enzimática Factores que afectan la velocidad de reacción Modelo de cinética enzimática Ecuación de Michaelis-Menten Conclusiones de la Ecuación de Michaelis-Menten Curvas de Lineweaver-Burk 11 .08/03/2012 Etapas de la acción enzimática Formación de complejo enzima-sustrato.

Efecto de la temperatura La temperatura a la cual la actividad catalítica es máxima se llama temperatura óptima Las células básicamente son isotermas (se encuentran a temperatura constante). por unidad de tiempo. 12 . pero sin cambiar él mismo durante el proceso.08/03/2012 Actividad Enzimática ¿Qué tan rápido puede trabajar una enzima? Velocidad de reacción La velocidad se define como el cambio en la cantidad de materiales iniciales o de productos. Un catalizador incrementa la velocidad de la reacción química.

• Según el pH del medio. Los enlaces se rompen. en parte. Este es el llamado pH óptimo. estos grupos pueden tener carga eléctrica positiva. Esto significa que la proteína pierde su estructura secundaria y terciaria o cuaternaria. habrá un pH en el cual la conformación será la más adecuada para la actividad catalítica. negativa o neutra. de sus cargas eléctricas. se inactiva. 13 . ∆ Desnaturalización de la enzima Efecto del pH • Los enzimas poseen grupos químicos ionizables en las cadenas laterales de sus aminoácidos.08/03/2012 Efecto de la temperatura Si una enzima se calienta por arriba de su temperatura óptima. • La conformación de las proteínas depende.

que sigue una cinética de Michaelis-Menten.08/03/2012 Efecto del Sustrato v= Vmax S    Km + S    Para una reacción catalizada por enzima. da lugar a una curva hiperbólica. A baja [S]. la enzima está casi saturada y la v0 de la reacción no cambia mucho. la curva tiende a una recta que asciende con mucha pendiente. cuando aumenta la [S] Modelo de la Cinética Enzimática En donde: • S es el Sustrato •E es la Enzima •ES es el complejo Enzima-Sustrato •P es el Producto •k1. la unión de cada punto del experimento. En esta región la curva depende de [S]. Para una alta [S]. k-1 y k2 son las constantes eq. [E]<<[S] Velocidad inicial (Vo) 14 .

[ES] se mantiene en un estado estacionario (no varía en el tiempo) 3. EC. MICHAELIS-MENTEN Garret & Grisham 15 . para poder asumir que la formación de complejo ES a partir de P es despreciable.08/03/2012 Ecuación de Michaelis-Menten Michaelis- vo = velocidad inicial Vmax = velocidad maxima Km = Constante de Michaelis = [(k-1 + k2)/k1] [S] = concentración de sustrato Para que la Ecuación de Michaelis-Menten se cumpla se asume que: 1. La [S] >>> [E] 2. Las medidas de velocidad se realizan lo antes posible.

08/03/2012 Conclusiones acerca de la ecuación de MM : Km Valores de KM Pequeño Valores de KM Grandes afinidad afinidad Stryer. Short Course Biochem. 2010 16 .

sobre la velocidad inicial (v0) de una reacción catalizada a una [S] fija de saturación. Conclusiones acerca de la ecuación de MM : N° orden N° Km>>[S] Vo dependiente [S]: 1°n orden Km<<[S] Vo es independiente de la [S]: orden 0 17 .08/03/2012 Conclusiones acerca de la ecuación de MM : [E] •Efecto de [E].

debido a la dificultad para su extrapolación. Hans Lineweaver y Dan Burk convirtieron esta relación hiperbólica a la siguiente función lineal: Calculo de Km y Vmax por la representación de Lineweaver-Burk (“dobles recíprocas” de Michaelis-Menten) 1 18 .08/03/2012 Gráfica de Lineweaver-Burk LineweaverLa gráfica de V vs [S] con forma hiperbólica. no es una herramienta muy útil. para la determinación cuantitativa de los parámetros cinéticos clave Km y Vmax.

08/03/2012 Representación de Lineweaver-Burk Inhibición de la actividad enzimática Inhibición competitiva Inhibición no competitiva 19 .

pravastatina (Pravachol). como la atorvastatina (Lipitor). hidroximetilglutaril–CoA reductasa 20 . por que compite con el sustrato por ese sitio.08/03/2012 Inhibición competitiva Este tipo de inhibición ocurre cuando el inhibidor se une reversiblemente al mismo sitio que se une el sustrato. inhibiéndola. son análogos estructurales del sustrato de la enzima HMGCoA reductasa. bajando finalmente los niveles de colesterol plasmático. Inhiben el primer paso en la síntesis de colesterol de novo. Las estatinas. Las estatinas Las estatinas son ejemplos de drogas que son inhibidores enzimáticos competitivos.

Regulación de la actividad enzimática Regulación Alostérica Regulación por modificaciones covalentes Inducción y represión de la síntesis enzimática 21 . que puede ser en la enzima o en el complejo ES.08/03/2012 Inhibición no competitiva Este tipo de inhibición ocurre cuando el inhibidor se une a un sitio diferente al sitio que se une el sustrato.

o ambos.08/03/2012 Regulación Alostérica La regulación alostérica puede funcionar en forma inhibitoria o activadora y pueden alterar la Vmax o el Km. 22 .

para controlar esta última. están colocadas estratégicamente y son reguladas por mecanismos de retroalimentación. Regulación por modificación covalente Algunas enzimas permanecen inactivas hasta que son modificadas covalentemente Fosforilación y desfosforilación 23 .08/03/2012 Regulación Alostérica por Retroalimentación Las enzimas reguladoras específicas. Frecuentemente la primera enzima en una ruta metabólica está colocada estratégicamente al principio de la vía.

08/03/2012 Modificación covalente: inhibición irreversible Algunas sustancias se combinan de forma covalente con las enzimas y las inactivan de manera irreversible Casi todos los inhibidores enzimáticos irreversibles son sustancias tóxicas (naturales o sintéticas) Regulación de la [E] Vida Media: Las enzimas tienen tiempos de vida media distintos. Las enzimas que se degradan más rápidamente. 24 . Control genético: Puede controlarse la síntesis de enzimas de novo. esto ayuda cuando las enzimas sólo se necesitan en determinadas ocasiones. en respuesta a hormonas. ocupan puntos clave en las rutas metabólicas.

08/03/2012 Regulación por activación proteolítica Los Zimógenos o Proenzimas son enzimas que deben sufrir cambios para alcanzar su conformación activa. ya sea por la pérdida de algunos residuos o la ganancia de algún grupo funcional. Por ejemplo las pro-enzimas Cascada de la Coagulación Cascada del Complemento Activación de proenzimas digestivas Enzimas de utilidad para el diagnóstico clínico Alteración de los niveles plasmáticos de enzimas en la enfermedad 25 .

la lactato deshidrogenasa presenta isozimas distintas en músculo y corazón. algunos enzimas de la glicolisis del feto son diferentes de las mismas enzimas en el adulto.08/03/2012 Enzimas plasmáticas como herramientas de diagnóstico ISOENZIMAS Enzimas que tienen distinta estructura molecular aunque su función biológica es similar Podemos observar la existencia de isoenzimas en función de: el tipo de tejido: Por ej. el momento concreto del desarrollo del individuo: Por ejemplo. el compartimento celular donde actúa: Por ej. la malato deshidrogenasa del citoplasma es distinta de la de la mitocondria. 26 .

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