FORMATO ANTEPROYECTO INFORMACIÓN GENERAL Título del proyecto: Micropropagación de Venus Atrapamoscas (Dioneae muscipula) a través de la técnica de embriogénesis

indirecta. GRADO Decimo Uno Nombre de los investigadores Esneider Durango Murillo Alejandra Cardona Gaviria Pablo Alejandro Torres Estrada Melissa Patiño Arboleda Hadaluz Pulgarin Taborda GRUPO Uno Dirección electrónica esneider0509@gmail.com alejacardona15@gmail.com pablo.ate@gmail.com mely.paar@gmail.com hada.pulgarint@gmail.com

Roles Líder Comunicadora Redactor Investigadora Fotógrafa y vigía

- Nombre del profesor asesor: William Enrique Pérez Campo CATEGORÍA Científico LÍNEA DE INVESTIGACIÓN Biotecnología ÁREA TEMÁTICA Vegetal

- Tutor (asesor externo- adulto responsable administrativo para el manejo de recursos financieros y físicos): Tutor: William Enrique Pérez Asesor: Catalina Beltrán Álzate Duración del proyecto 16 meses Valor del proyecto $400.000 Aporte externo $400.000 Aporte Institucional

- ¿El proyecto es continuación de una propuesta presentada anteriormente?: SI NO x

¿Cuál es la innovación? La aplicación de diferentes cantidades de un factor de crecimiento para obtener diferentes resultados y lograr la estandarización del método. Además a la hora de desinfectar el explante utilizar diferente cantidad de hipoclorito de sodio y alcohol. Todo lo anterior para mirar la calidad de los diferentes resultados que se obtendrán. CRONOGRAMA ACTIVIDADES MES o SEMANA Actividades desencadenantes de temas Planteamiento de preguntas simples Transformación a pregunta de investigación Exploración e investigación bibliográfica Diseño de la investigación y metodología Definir pregunta de investigación Definir hipótesis y objetivo Experimentación o trabajo de campo Examinar, analizar resultado, discusión Gráficos, Tablas, Perfiles, Secuencias Conclusiones Presentación de Resultados MES o SEMANA Semana del 27 de Febrero al 9 Marzo Semana del 5 al 9 de Marzo Semana del 5 al 9 de Marzo Semana del 27 de Febrero al 23 de Marzo Semana del 19 al 24 de Marzo Semana del 9 al 13 de Abril Semana del 16 al 20 de Abril Mes de Julio Mes de Agosto Mes de Agosto Mes de Septiembre Mes de Septiembre

DESCRIPCIÓN DEL ANTEPROYECTO Título de la investigación Micropropagación de Venus Atrapamoscas (Dioneae muscipula) a través de la técnica de embriogénesis indirecta.

Resumen Para propagar la especie Dionaea muscipula mejor conocida como Venus atrapamoscas, la cual es una planta carnívora, el grupo de investigación Wavevorous ha decidido experimentar por medio de biotecnología vegetal la micropropagación de esta planta mediante el medio de cultivo Murashige y Skoog (MS) empleando el regulador de crecimiento Acido Giberélico (AG) distinguiendo diferentes proporciones para así determinar la que ofrezca mejores resultados y realizar una estandarización del protocolo de micropropagación; una de las principales razones para hacer esto es la evidente escasez de esta planta en la ciudad de Medellín, además de que es y puede utilizarse de forma ornamental y facilitaría el proceso de cultivo para futuras investigaciones o experimentos sobre ella. Planteamiento del problema Descripción del problema

El problema que se pretende solucionar es poder introducir esta especie al sistema de cultivo de tejidos in vitro dado a las propiedades ornamentales que la especie presenta, se pretende llegar hasta la etapa de aclimatación, en la cual se evaluará en nivel de adaptabilidad de las plántulas obtenidas in vitro. El grupo Wavevorous tiene como finalidad realizar un cultivo in vitro con la especie “Venus Atrapamoscas” (Dionaea muscipula) que hace parte de las plantas carnívoras, este proyecto es hecho con el propósito de estandarizar un método para su multiplicación por medio de la experimentación a través del medio de cultivo MS en diferentes proporciones. Una de las razones que influyeron en la decisión de trabajar con esta especie, es que en la ciudad de Medellín es un poco escasa y utilizando este método buscamos su propagación para evitar la extinción de la misma, además esta es un planta ornamental que ayuda a que aumente el interés de la población por esta especie. Antecedentes:

En el proyecto “Rapid in vitro multiplication of Drosera Burmanii Vahl.: A vulnerable and medicinally important insectivorous plant”1 hemos observado todo un proceso experimental. En este procesos hemos identificado elementos importantes a tener en cuenta como la adicción de azucares, pruebas con pH, cultivo en medio MS. En cuanto al cultivo en medio MS, en su proyecto, este grupo ha probado con concentraciones de 1/2, 1/3, 1/4 y una medida básica; la concentración que mejor ha actuado ha sido la de 1/4. Luego han probado en diferentes concentraciones de azucares con lo cual al obtenido el mejor resultado al utilizar un 3%.

Incluso se realizaron experimentos con cambios en el pH han notado que entre menos pH hay son menos los brotes además indican en su investigación que han visto resultados similares en otros tipos de plantas carnívoras. Por último hablan del uso de quinina y el BAP en los que plantean que el mejor uso es en proporciones de (1.0 y 2.0 mg L-1) Formulación del problema: ¿Cómo influye la concentración de hipoclorito de sodio y alcohol en la desinfección del explante y la concentración de AG: Ácido giberélico en la multiplicación in vitro de Venus atrapamoscas (Dionaea muscipula)?

Marco teórico o conceptual SISTEMA DE CULTIVO IN VITRO La expresión cultivo in vitro de plantas, significa cultivar plantas dentro de un frasco de vidrio en un ambiente artificial. Esta forma de cultivar las plantas tiene dos características fundamentales: la asepsia (ausencia de gérmenes, etc.), y el control de los factores que afectan el crecimiento. El avance alcanzado por las ciencias biológicas ha permitido en los últimos años el estudio detallado de las plantas tanto a nivel celular como molecular, y en condiciones de laboratorio es posible actualmente reproducir todos los factores que puedan incidir en el crecimiento y desarrollo de las plantas. Este principio general se aplica también al cultivo in vitro de plantas. Haberlandt, un científico alemán, postuló a principios del siglo pasado que las plantas eran capaces de reproducir su crecimiento a partir de células aisladas, originando la hipótesis de la totipotencia celular en plantas. Sin embargo, este investigador no pudo demostrar en forma práctica su hipótesis, debido a que la mayoría de los componentes complejos que integran los medios de cultivo actuales todavía no habían sido descubiertos. Sería recién en la década del ´50 cuando se determina la importancia del balance hormonal en las plantas, con el descubrimiento de las hormonas vegetales más usadas en la actualidad. Reproducir en condiciones de laboratorio todos los factores que conforman el ambiente de la planta en la naturaleza es técnicamente muy complejo. Por esa razón se realiza una simplificación de la realidad escogiendo aquellos factores que se puedan mantener controlados. Cuando no se realiza el estudio con todo el ser vivo sino con solamente una parte del mismo, se utiliza el término explante para indicar la parte del órgano ó tejido vegetal que se cultiva in vitro. A la dificultad de reproducir las condiciones naturales en condiciones de laboratorio, se debe añadir en este caso la dificultad de suministrar al explante todo aquello que antes obtenía del sistema completo. En resumen, el cultivo in vitro de plantas es una técnica que exige un control específico del ambiente, tanto físico como químico, en el que se sitúa al explante. Conviene, por tanto, conocer cuáles son los principales factores que conforman dicho y que deberán ser controlados. La micropropagación o propagación clonal, es una de las aplicaciones más generalizadas del cultivo in vitro, a través de la micropropagación, a partir de un fragmento (explante) de una planta madre, se obtiene una descendencia uniforme, con

plantas genéticamente idénticas, denominadas clones. El explante más usado para los procesos de propagación in vitro son las yemas vegetativas de las plantas. Los frascos que contienen las plantas se ubican en estanterías con luz artificial dentro de la cámara de crecimiento, donde se fija la temperatura en valores que oscilan entre los 21 y 23°C, además de controlar la cantidad de horas de luz. Por su parte, el medio de cultivo se compone de una mezcla de sales minerales, vitaminas reguladores de crecimiento, azúcar, agua y agar. La composición del medio depende de la especie vegetal y de la etapa del proceso de micropropagación. Con finalidad puramente descriptiva se puede clasificar los principales factores no biológicos que afectaran al desarrollo del cultivo in vitro, incluyendo: Ambiente químico • • Composición del medio de cultivo pH

Ambiente físico • • • temperatura luz y fotoperiodo humedad

Dentro del proceso de micropropagación diferenciamos varias fases o etapas: • • • • • • 0: Selección y Preparación de la planta madre 1: Desinfección de las yemas de la planta y/o desinfección de semillas 2: introducción del material seleccionado in vitro 3: Multiplicación de brotes 4: Enraizamiento 5: Aclimatación

Esta secuencia de etapas abarca el ciclo completo de la multiplicación de plantas in vitro; puede ser aplicada a diferentes especies vegetales, en cada caso se podrán incluir simplificaciones o cambios de acuerdo a las características de las plantas, pero en términos generales son comunes al proceso de propagación in vitro. FASE 0: PREPARACIÓN DE LA PLANTA MADRE Para poder establecer el cultivo en condiciones de asepsia, se deben obtener explantescon un nivel nutricional y un grado de desarrollo adecuado. Para obtener estos explantes es recomendable mantener a las plantas madre, es decir la planta donadora de yemas, durante un período de tiempo que puede oscilar entre unas semanas o varios meses en un invernadero bajo condiciones controladas. En ese ambiente se cultiva la planta en condiciones sanitarias óptimas y con un control de la nutrición y riego adecuados para permitir un crecimiento vigoroso y libre de enfermedades. FASE 1: DESINFECCIÓN DEL MATERIAL VEGETAL

Una vez elegida la planta madre, se extraerán los fragmentos a partir de los cuales se obtendrán los explantes. Los explantes pueden ser yemas, trozos de hojas, porciones de raíces, semillas, etc. Antes de extraer los explantes se hará una desinfección de los fragmentos de planta madre para eliminar los contaminantes externos. Los contaminantes más comunes son los hongos y las bacterias que habitan en forma natural en el ambiente. Una vez desinfectado el material vegetal, se debe mantener en condiciones de asepsia. A efectos de obtener las condiciones de asepsia, se trabajará en cabinas de flujo laminar para extraer los explantes a partir del material vegetal. Estos explantes se introducirán en un tubo de cultivo conteniendo medio de iniciación para poder controlar la sanidad y la viabilidad, luego de realizar la desinfección del material con hipoclorito de sodio (agua clorada comercial), pura o diluida durante un período de 5 a 15 minutos, seguido por 3 a 4 enjuagues en agua esterilizada. FASE 2: INTRODUCCIÓN DEL MATERIAL IN VITRO Luego de la desinfección superficial, las semillas o las yemas dependiendo del material seleccionado, se ponen en medio de cultivo estéril. En un período de una semana o quince días, comienza el proceso de germinación o regeneración de nuevos tejidos vegetales, iniciando el ciclo de cultivo in vitro. FASE 3: MULTIPLICACIÓN DE LOS BROTES Durante esta fase se espera que los explantes que sobrevivieron la FASE 1 y 2 originen brotes (de procedencia axilar o adventicia) con varias hojas. En la base de cada hoja hay una yema que se desarrollará luego de ser puesta en contacto con el medio de cultivo. Periódicamente estos nuevos brotes se deben subcultivar en un nuevo medio mediante divisiones y resiembras en tubos de cultivo u otros recipientes adecuados. Estas operaciones se realizan en la cámara de flujo laminar o en un lugar aislado que nos permita mantener las condiciones de asepsia. De esta forma aumenta el número de plantas en cada repique o división de las plantas. El número de plantas que se obtiene dependerá de la especie vegetal y de las condiciones del medio de cultivo. El número de plantas que se obtiene por la vía de la micropropagación permite alcanzar incrementos exponenciales, considerando que todos los factores que afectan el crecimiento hayan sido optimizados. FASE 4: ELECCIÓN DE UN MEDIO DE ENRAIZAMIENTO DE LOS EXPLANTOS Para enraizar los explantes se utilizan principalmente plantines individuales de un tamaño aproximado de 2 centímetros. Los brotes obtenidos durante la fase de multiplicación se transfieren a un medio libre de reguladores de crecimiento o que solo contenga hormonas del tipo auxinas. Algunas especies de plantas no necesitan pasar por esta etapa y emiten sus raíces en el mismo medio de cultivo donde desarrollan yemas nuevas, por lo tanto el proceso de multiplicación y enraizamiento transcurren en forma simultánea.

FASE 5: ACLIMATACIÓN DE LOS EXPLANTOS ENRAIZADOS Los explantes recién enraizados son muy sensibles a los cambios ambientales, de manera que el éxito o el fracaso de todo el proceso depende de la aclimatación. En esta etapa las plantas sufrirán cambios de diferente tipo que permitirán la adaptación de las mismas a vivir en condiciones naturales. En el momento en que se extraen los explantes o plantines enraizados de los frascos, están poco adaptados a crecer en un invernáculo, ya que estos explantes han enraizado y crecido en ambientes con una humedad relativa muy elevada y generalmente tienen estomas (estructuras responsables de regular la transpiración y pérdida de agua en la planta) que no son completamente funcionales frente a descensos de la humedad relativa, y por lo tanto demasiado lentos para evitar la desecación del explante. Por otra parte, crecer en ambientes tan húmedos también suele implicar la falta de una cutícula con cera bien desarrollada, que representa la barrera física para evitar la pérdida de agua a lo largo de toda la superficie de la planta. La siguiente lista presenta una comparación de las características de una planta en condiciones de laboratorio (in vitro) respecto a una planta en condiciones naturales (in vivo): In vitro • • • • • • • In vivo • • • • • • • Realiza fotosíntesis Crecimiento en condiciones no controladas Exposición a los patógenos y gérmenes del ambiente Humedad relativa variable Estomas funcionales Presencia de pelos radiculares Presencia de cera en la cutícula No realiza fotosíntesis Crecimiento en condiciones controladas Crecimiento en condiciones de asepsia Alta humedad relativa Estomas no funcionales Ausencia de pelos radiculares Ausencia de cera en la cutícula

Los plantines enraizados, deben ser aclimatados a las condiciones de humedad del invernadero disminuyendo progresivamente la humedad relativa e incrementando progresivamente la intensidad de luz. Estos plantines se plantarán en contenedores (almacigueras) cubiertos por un plástico, para mantener la humedad relativa elevada. La elección de un sustrato con buenas características físicas, es clave para el éxito de esta etapa. Para el trasplante, elegimos un sustrato suelto, poroso, con mezcla de arena turba, cáscara de arroz quemado, para permitir un desarrollo y crecimiento de raíces muy rápido. Las mezclas son diferentes y muy variadas de acuerdo a la especie

con la que estamos trabajando. Luego de retirar cuidadosamente el agar de las raíces para evitar dañarlas, los Plantines se enjuagan y se colocan en almacigueras con la mezcla de sustratos seleccionada y cubiertos con nylon. Todos los días se debe controlar el nivel de humedad en las almacigueras. Si es necesario, se aplica un riego con una pulverizadora manual, para mantener un ambiente húmedo a nivel del sustrato. A los 15 días del trasplante, se puede comenzar a levantar la cobertura de nylon en las horas de menor calor (temprano en la mañana o en la última hora de la tarde). Al comienzo las plantas se dejan media hora por día destapadas. A la semana siguiente se dejan destapadas durante una hora. Al mes del trasplante, se dejan tapadas durante la noche y si hay crecimiento de nuevas hojas, las plantas pueden permanecer destapadas. Las condiciones del cultivo in vitro, generan cambios en algunos aspectos anatómicos y fisiológicos de las plantas, por esta causa, durante la aclimatación, los cambios deben ser muy graduales, para minimizar el estrés y tener mayor tasa de sobrevivencia. 2 VENUS ATRAPAMOSCAS Lineo le puso el nombre de Diana, diosa griega del amor y de la belleza. Se localiza en Carolina del Norte (EEUU) y suele ser la preferida de la gente y la más conocida también. Con buenos cuidados llegan a vivir 25 años. Las Plantas Carnívoras son un grupo diferente dentro del Reino Vegetal. Sus formas extrañas, su alimentación a base de insectos y sus estrategias para capturarlos son sencillamente fascinantes. En realidad la gran mayoría de especies sólo comen insectos, solo alguna especie puede alimentarse de lagartijas y pequeños roedores. Por esta razón, dejó de llamárseles "plantas insectívoras" y pasó a denominarse "plantas carnívoras". La mayoría viven en terrenos pobres en alimento, de ahí que desarrollaran métodos para atrapar animales y completar así sus necesidades nutritivas asimilando alimento desde sus hojas/trampas. TRAMPAS DE CAPTURA Es en forma de cepo bilobulado, y se encuentra en el extremo de cada hoja. Al sentir que el insecto vibra en el interior de la trampa se dispara como una trampa para osos, cerrando en 0,1 segundos aprox. Las trampas llegan a tener unos 40 a 50mm cuando la planta es adulta, esto varía según las técnicas de cultivo y ubicación geográfica. Si tocamos las trampas se dispararan y no capturaran nada, esto es muy perjudicial para la planta. Cada trampa tiene una vida útil, que ronda el ciclo cierre-apertura 3 veces cuando atrapa algún insecto, y 6 veces cuando se cierra sin atrapar nada. El cierre continuo de las trampas hará que la planta se debilite y muera. No debe estar comiendo todo el tiempo, la planta atrapa sola. Con un insecto cada 10 días alcanza. Sus hojas carnosas son la fuente principal para generar fotosíntesis, no deben cortarse o dañarse mientras estén activas. Según la época del año estas son más anchas o más alargadas. Una vez secas es conveniente retirarlas manualmente, esto es una tarea suave, si las hojas no se desprenden naturalmente se pueden cortar con una tijera filosa. Este procedimiento va a prevenir la formación de hongos. RIEGO El agua adecuada es: Agua destilada o desmineralizada - Agua de lluvia - Agua que cae

del aire acondicionado. Se riegan por el "método de la bandeja" en lugar de echar el agua desde arriba, se coloca agua en la bandeja que se entrega con las plantas. Consiste en poner la maceta dentro de la bandeja y colocar de 1 a 2 cm de agua en la bandeja. El sustrato hace de esponja e ira absorbiendo el agua desde abajo. No regar desde arriba. En Primavera-Verano: debe tener disponible constantemente agua en la bandeja de riego. En Otoño-Invierno: una vez que absorbió todo el agua de la bandeja, dejar sin agua 2 días y colocar nuevamente. Aunque por momento no estará encharcada nunca debe secarse por completo el sustrato. DONDE UBICARLAS Pueden ir tanto en interior como exterior. Adentro debe ser al lado de una ventana donde reciba buena luz y un poco de sol directo suave. Afuera debe estar debajo de un techo o reparo, para evitar la lluvia directa. No debe estar expuesta a corrientes de aire, calefacción cerca o aire acondicionado. TEMPERATURAS ADECUADAS - HIBERNACION Primavera-Verano: son plantas muy resistentes, soportan altas temperaturas siempre y cuando tengan agua disponible en la bandeja de riego y no estén expuestas al sol directo. Otoño-Invierno: con el frío entran en un período de hibernación, durante el cual la planta no crecerá y tendrá muy poco movimiento. En esta época es conveniente ubicarlas en un lugar donde reciban la temperatura natural de invierno (menores a 15°C), pueden estar afuera bajo techo o adentro en un lavadero o patio sin calefacción. Si por razones geográficas el invierno no es frío, es conveniente colocarlas durante 2 meses en la parte inferior del refrigerador (heladera) para simular un invierno frío. El no cumplimiento del proceso de letargo - hibernación tendrá consecuencias muy desfavorables o mortales para la planta. VELOCIDAD DE CRECIMIENTO El cultivo se realiza desde semillas y su crecimiento desde pequeñas es muy lento. Al nacer, la primera hoja ya genera una pequeña trampa que es capaz de atrapar pequeños insectos generados en la humedad del sustrato, su alimentación no es muy ineficiente durante esta etapa. Recién al año, cuando generan trampas que pueden atrapar un insecto del tamaño de un mosquito, su crecimiento se acelera gracias a los nutrientes asimilados en sus cepos. A los dos años sus trampas llegan al centímetro de largo y a los tres años ya podemos considerarla una planta joven-adulta. Florecen al partir del tercer al quinto año de vida. No se auto polinizan, para que las semillas sean fértiles debe haber un plantel floreciendo al mismo tiempo para intercambio de polen. Hay que tener en cuenta que solo crecen en la época cálida del año, pues durante la época fría, la planta esta hibernando y acumulando energía en sus raíces. La planta llega a los 35/40 de diámetro a los 7 años de vida. TIPOS DE PRESAS Esta especie atrapa a cualquier insecto que se pose o pase por sus trampas atraído por el néctar y color que generan. Desde arañas, moscas, hormigas, lagartijas, etc. Si bien

atrapa todo tipo de insectos algunos le son perjudiciales y pueden llegar a secar la trampa que los capturó. Una vez que se cierra no se abrirá hasta digerirlo. SUSTRATO y MACETAS - TRANSPLANTE Pueden trasplantarse cada año desde pequeñas y cada 2 años a partir del 3° año de vida, la tierra a utilizar se llama sustrato, y es una mezcla de distintos componentes. No se debe utilizar tierra común ni ningún otro componente que no esté especificado. Las macetas deben ser plásticas. DATOS UTILES No exponer al sol directo fuerte - No es necesario proveerles insectos, si se desea debe dársele insectos vivos. No son venenosas ni peligrosas para mascotas ni niños - No tocar las trampas y cerrarlas en forma artificial, esto dañará a la planta en forma peligrosa. No regarse nunca con agua corriente, de pozo ni mineral. No agregar ningún tipo de fertilizante o abono. No exponer a insecticidas o productos agresivos. Al cambiarla de hábitat o transportarla la Planta sufre un Shock natural que dura unos días, hasta que se adapta nuevamente; puede perder velocidad y energía. 3 ÁCIDO GIBERÉLICO El ácido giberélico (o giberelina A3, AG, y AG3 es una fitohormona hallable en plantas. Su fórmula química es C19H22O6. Cuando purificada, es un polvo cristalino blanco a pálido amarillo, soluble en etanol y algo soluble en agua. El AG, ácido giberélico es una simple giberelina, promoviendo crecimiento y elongación celular. Afecta la descomposición vegetal y ayuda a su crecimiento si está en bajas proporciones, aunque eventualmente la planta desarrolle tolerancia al compuesto. Este ácido estimula a las células de las semillas germinantes a producir moléculas de ARN mensajero (ARNm) que codifican las enzimas hidrolíticas. El ácido giberélico es una muy potente hormona cuya presencia natural en plantas controla su desarrollo. Sabiéndose de su poder regulatorio, las aplicaciones de muy bajas concentraciones pueden resultar en profundos efectos,mientras que muy altas pueden dar el efecto opuesto. Se lo usa generalmente en concentraciones de 0,01 a 10 mg/L . El AG fue primero identificado en Japón en 1935, como un subproducto metabólico del fitopatógeno Gibberella fujikuroi, que enferma al arroz; la variedad fujikuroi de plantas infectadas desarrolla bakanae, causándole un exagerado crecimiento, por lo que la planta se muere por no autosoportarse su propio peso. Las giberelinas tienen un número de efectos sobre el desarrollo vegetal:    Estimulan rápido crecimiento de tallos Inducen divisiones mitóticas en las hojas de algunas especies Incrementan la tasa de germinación de semillas

El AG se usa a veces en laboratorio y en invernáculo para acelerar la germinación de semillas que de otro modo permanecerían endormancia. Es muy usado en la industria de las vides como la hormona inductora de la producción de más largos sarmientos,

especialmente Sultanina (variedad sin semilla), y en Okanagan se lo usa en la industria de los cherries como regulador de crecimiento.4 Objetivos General: Estandarizar un procedimiento para la micropropagación de la planta Venus Atrapamoscas (Dionaea muscipula) utilizando diferentes protocolos de desinfección y diferentes concentraciones de reguladores de crecimiento.

Específicos Establecer un protocolo de desinfección para el explante de la Venus Atrapamoscas utilizando hipoclorito de sodio y alcohol para liberar de patógenos la muestra. Evaluar los reguladores de crecimiento que se deben agregar al medio de cultivo para obtener brotes y continuar con el sistema de cultivo in vitro. Evaluar los reguladores de crecimiento que ayuden a la multiplicación de la Venus Atrapamoscas para adquirir una mayor cantidad de las mismas. . Extraer los explantes del medio de cultivo in vitro para proceder a su enraizamiento por medio de reguladores de crecimiento.

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Diseño metodológico Hipótesis: La implementación de diferentes cantidades de Ácido giberélico como regulador de crecimiento a la micropropagación de la planta carnívora Venus Atrapamoscas (Dionaea muscipula) y NaCl (Hipoclorito de sodio) y alcohol como método de desinfección del explante ayudaría a que la misma planta estando en el sistema tenga las vitaminas necesarias para sobrevivir además de lograr un control aséptico de plagas o patógenos que quieran dañar la planta. Selección de la muestra: Métodos y técnicas de investigación: Desinfectar el explante de la Venus Atrapamoscas extraído de un medio natural por medio de NaOCl (Hipoclorito de sodio) y alcohol para poder empezar a desarrollar el sistema de cultivo in vitro. Inducir callos a los explantes retirados de dicha planta ya puestos en sistema de cultivo in vitro por medio de reguladores de crecimiento para seguir con el proceso de micropropagación. Multiplicar el explante de la Venus Atrapamoscas que se encuentran en sistema de cultivo in vitro por medio de reguladores de crecimiento para obtener mayor cantidad de las mismas.

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Enraizar los explantes de Venus atrapamoscas ya retirados del sistema de cultivo in vitro utilizando reguladores de crecimiento para lograr una adaptabilidad de la misma en el exterior.

Referencias bibliográficas 1. Kottapalli Jayaram and M.N.V.Prasad. Rapid in vitro multiplication of Drosera indica L.: a vulnerable, medicinally important insectivorous plant. [Versión electrónica] Volume 1, Number 2 (2007), 79-84, DOI: 10.1007/s11816-007-00147. Resumen recuperado el 6 de abril del 2012 de la base de datos SpringerLink http://www.springerlink.com/content/33v23j68t474w8h5/. 2. Propagación de plantas por cultivo in vitro: una biotecnología que nos acompaña hace mucho tiempo. (s.f). recuperado el 18 de abril del 2012 de, http://www.inia.org.uy/publicaciones/documentos/lb/ad/2004/ad_382.pdf 3. DIONAEA MUCIPULA (Venus atrapamoscas). (s.f). Recuperado el 27 de marzo del 2012 de, http://www.neocultivos.com/pdf/Plantas_Carnivoras_Venus_Dionaea_neocultivos .pdf 4. WIKIPEDIA. Ácido giberélico. (s.f) Recuperado el 9 de abril del 2012 de, http://es.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_giber%C3%A9lico Bibliografía consultada Dr. Laurent Legendre. IN VITRO CULTURE OF PINGUICULA AND DROSERA. (s.f). Recuperado el 17 de abril del 2012 de, http://www.pinguicula.org/pages/culture/in_vitro.htm Toscano G. Jarvis Yamith; Siabatto F. Helbert David. Medio de cultivo in vitro para la micropropagación de la planta insectívora Drosera colombiana. (s.f) Recuperado el 15 de abril del 2012, del sitio web de Revistas de la Universidad Nacional de Colombia (Acta Biológica): http://www.revistas.unal.edu.co/index.php/actabiol/article/view/27461#

h. Cronograma ACTIVIDADES MES o SEMANA Actividades desencadenantes de temas Planteamiento de preguntas simples Transformación a pregunta de investigación Exploración e investigación bibliográfica Diseño de la investigación y metodología MES o SEMANA Semana del 27 de Febrero al 9 Marzo Semana del 5 al 9 de Marzo Semana del 5 al 9 de Marzo Semana del 27 de Febrero al 23 de Marzo Semana del 19 al 24 de Marzo

Definir pregunta de investigación Definir hipótesis y objetivo Experimentación o trabajo de campo Examinar, analizar resultado, discusión Gráficos, Tablas, Perfiles, Secuencias Conclusiones Presentación de Resultados

Semana del 9 al 13 de Abril Semana del 16 al 20 de Abril Mes de Julio Mes de Agosto Mes de Agosto Mes de Septiembre Mes de Septiembre

i. Recursos Nombre del articulo servicio requerido Computador o Cantidad Justificación de su Valor uso 5 Necesitamos literatura para poder instruirnos en el tema de investigación. 1 Necesitamos un guía del proyecto que nos aconseje sobre el mismo y lograr la viabilidad. 2 Alguien que esté con nosotros durante todo el proyecto para la revisión del mismo sería de muy buena ayuda. Fuente Colegio Loyola

Asesor

ONDAS

Tutores

Colegio Loyola

Aspectos de seguridad: NORMAS DE SEGURIDAD EN EL LABORATORIO NORMAS PERSONALES El grupo Wevorous estará pendiente de que los lugares en donde trabaje estén y mantengan limpios así como los instrumentos que sean utilizados se encuentren esterilizados y listos para usar. De esta manera garantizar la higiene de cada material. Cada integrante de nuestro equipo deberá estar siempre con una bata para garantizar la seguridad de nuestra salud a la hora de entrar en contacto con materiales que pueden ser riesgosos, además este implemento es necesario y representa higiene. Las mujeres que hacen parte del equipo deben recoger sus cabellos. Todos tendremos gafas por asuntos de seguridad.

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A la hora de manipular elementos como ácidos es indispensable usar guantes de goma. Nadie podrá ingresar ni bebidas, ni comidas para garantizar seguridad e higiene.

NORMAS DE UTILIZACIÓN DE PRODUCTOS QUÍMICOS En el momento en que se utilice un compuesto la persona encargada debe mirar si es necesario su uso. Para esto debe fijarse bien en el rotulo. Nuestro grupo es consciente que a la hora de tener que manipular un producto químico el profesor encardo del laboratorio es que lo debe proporcionar. Tenemos claro que no se bebe devolver a los frascos de origen los sobrantes de los productos utilizados sin hacer antes una consulta al profesor encargado. Cuando un producto químico de desecho se vierta en la pila de desagüe, aunque estén neutralizados, dejaremos que corra abundante agua para evitar problemas posteriores. A la hora de interactuar con productos químicos nuestro grupo no los manipulara ni con las manos ni con la boca, para así evitar alguna inflamación o una reacción que tenga nuestro cuerpo. No pipetear con la boca. Alizar la bomba manual, una jeringuilla o artilugio que se disponga. Teniendo en cuenta que los ácidos requieren un cuidado especial, cuando cualquier integrante quiera diluirlos nunca echara agua sobre estos, al contrario sabemos que se vierte el ácido sobre agua. Los producto que son inflamables como los gases, alcohol, etc., no se tendrán cerca de fuentes de calor para evitar incendios, Si tenemos que calentar tuvo con estos productos lo haremos al baño maría, nunca directamente a la llama. Si en el momento de manipular algún acido se presenta algún inconveniente como que se derrame sobre algún integrante del equipo tenemos claro que se debe lavar con abundante agua y avisar al profesor. Cuando se prepare cualquier disolución se colocara en un frasco limpio y rotulado para no olvidar nada y ser organizados con cada trabajo.

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NORMAS UTILIZACIÓN VIDRIO Es importante que cada integrante del grupo tenga cuidado con los objetos de vidrio. Cuando el vidrio está caliente no se diferencia a simple vista del frio, sabemos que para evitar quemaduras hay que dejarlo enfriar un tiempo apropiado antes de tocarlo. Cuando tengamos que calentar a la llama el contenido de un tubo de ensayo, sabemos que hay que tener cuidado y estas pendientes de que la boca del tubo no apunte a ningún compartimiento, para así lograr evitar un accidente. También Hay que calentar por el lateral del tubo de ensayo.

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Al determinar masas de productos químicos con balanza, colocaremos el papel de filtros sobre los platos de la misma. Debemos evitar cualquier perturbación que conduzca a un error, como vibraciones debidas a golpes, aparatos en funcionamiento, soplar sobre los platos de la balanza.

ASPECTOS ÉTICOS Para cada una de las personas que conforman este grupo es muy importante el aspecto ético, porque nos formaron inculcándonos valores y principios, sabemos que es importante en este caso para que no ocurran cosas como la alteración, extracción o eliminación de elementos que son indispensables para nuestro proyecto, de esta manera nuestro grupo se compromete a que en cada lugar e instante de nuestra vida actuar de forma ética. Debemos definir a conciencia cual es el procedimiento para reflexionar si el objetivo que esperamos alcanzar justifica la intervención y sus consecuencias sobre el entorno natural. En el momento de realizar una investigación de manera ética no significa que no podamos tocar o intervenir la naturaleza, sino ser conscientes de sus consecuencias, tratar de minimizarlas y tener claro para qué estamos haciendo nuestra investigación. CONSIDERACIONES AMBIENTALES IMPACTO AMBIENTAL Puede ser considerado como la diferencia entre las condiciones ambientales que existirían y las condiciones ambientales que existen. EVALUACION DE IMPACTO AMBIENTAL (EIA) Es un procedimiento que garantiza un examen de los efectos ambientales de una acción propuesta y de sus alternativas. Es un instrumento que asegura un proceso de toma de decisiones adecuado al interés público. ESTUDIO DE IMPACTO AMBIENTAL Es un paso que implica predicción de efectos sobre el sistema ambiental, su valoración cualitativa o cuantitativa, la formulación de acciones para minimizar los aspectos negativos y positivos. DECLARACION DE IMPACTO AMBIENTAL (DIA) Es un informe que debe ser acreditado por un equipo técnico, donde se presenten resultados de estudios para la evaluación final por parte de los decisores. DICTAMEN AMBIENTAL Este es un documento público emitido por autoridad competente por medio del cual se revisan procedimientos y resultados. Y en base a esto se aprueba, condiciona o rechaza el proyecto. ESTUDIO DE IMPACTO AMBIENTAL

Tiene como objetivo esencial producir la información necesaria para la elaboración del informe o declaración de impacto ambiental.

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