HONGOS CONTAMINANTES COMUNES .

Ruby N. Gutirrez 5.1

- Medios de Sabouraud y Mycosel - El agar Mycosel contiene cicloheximida y cloranfenicol (antibiticos) que inhiben el crecimiento de casi todas las especies saprofitas de hongos, mientras que el agar Littman contiene estreptomicina y que impide que se rieguen las colonias de las especies saprfitas. - Dematiceos: se pueden obtener abriendo los platos de medios de cultivo, la semana anterior a la prctica por 15 minutos, exponindolos al ambiente y luego incubndolos a temperatura ambiente. - Colonias = contaminantes que pudieran esperarse de un exudado, o cualquier lesin que estuviera en contacto con el aire. - Algunas colonias son de color gris o negro-verdoso. Estas representan la familia Dermatiaceae y suelen constituir alrededor del 50%, o ms de los hongos transmitidos por el aire. Las colonias de levaduras que son blandas y pastosas no deben ser numerosas. - Colonias con tinte color verde = Aspergillus o Penicillium. - Caractersticas: o Carencia de clorofila. Se alimentan de materia orgnica = Quimioorgantrofos (Hetertrofos) o Eucariotas o Pared celular rgida de polisacridos, polipptidos y quitina o Absorben nutrientes mediante enzimas extracelulares o Levaduras estructuras unicelulares que se reproducen por gemacin o Presentan talo o micelio, constituidos por hifas (unidad bsica) o Talo o micelio Vegetativo (desarrollo, nutricin y fijacin) Reproductor (se forman los rganos de reproduccin) hifas, levaduras y pseudohifas o Levaduras: talo disociado produce colonias de crec rpido, suave, aspecto similar a bacterias. o Mohos: talo filamentoso areo entremezclado ms o menos largo o agrupado de manera compacta, de crecimiento lento salvo en los hongos oportunistas. o Dimrficos: hongos que tienen una fase parasitaria levaduriforme (37C) y una saproftica micelial (20-25C) - Espora: forma de reproduccin asexual en los hongos - Hifas: filamento que forma el tallo o cuerpo de un hongo - Micelio: conjunto de hifas entrelazadas y ramificadas - Conidias: estructura de reproduccin asexual en fase micelial de los hongos. Son esporas producidas por hifas especializadas (llamadas conidiforos) mediante estrangulamientos sucesivos en el punto de unin. - Conidiforo: estructura en los extremos de las hifas vegetativas. Dan origen a las conidias. Rhizopus Colonia de rpido crecimiento, de aspecto tpicamente algodonoso, de color blanco o blanco ceniza o negruzco dado por los rganos reproductores (hifas). Micelio vegetativo formado por hifas sin septos (cenocticas) hialinas o ligeramente coloreadas a partir de las cuales se diferencian los conidiforos (esporangioforos) sobre un rizoide tpico que le da una apariencia al hongo de los tallos estolonferos de la fresa. Estos esporangioforos terminan en vesculas (esporangiosporas) variadas en forma; coloreadas o hialinas. Especies de amplia distribucin, en todos los ambientes; saprfitas en su mayora. * Mucor es igual a Rhizopus, slo que el primero no tiene raicillas*

Aspergillus Colonias de crecimiento rpido y aspecto variable, afelpado, pulverulento o algodonoso, de colores diversos que van del blanco al amarillo plido, del rojo al rojo vinoso o marrn oscuro, de olor caracterstico a moho. Los conidiforos son fcilmente distinguibles del micelio vegetativo, de longitud variable terminando en una vescula globosa o clavada, rodeada parcial o totalmente, con sus conidias globosas o elipsoidales, hialinas o coloreadas. Gnero con especies saprfitas y algunas parsitas. Aspergillus fumigatus (el de mayor virulencia dentro del gnero) y A. flavus, son las que se encuentran vinculadas con patologas.

Fusarium Colonias de crecimiento rpido y abundante, generalmente de aspecto algodonoso, de diversos colores que van del blanco, rosado, salmn o violeta cubriendo toda la superficie del medio. Conidiforos simples o ramificados; solitarios o agrupados formando esporodoquios; conidas apicales simples (microconidias) o septadas (macroconidias) tpicas de bordes curvados (falcado o apariencia de media luna), con pices obtusos o agudos, solitarios o en cadenas; produciendo algunas especies, esporas de resistencia denominadas clamidosporas, generalmente globosas, intercalares o terminales. Se les encuentra en todos los ambientes en forma saprfita o parsita.

Penicillium Descubierto en 1929 por Alexander Fleming Slo una especie es patgena: Penicillium marnefeii. Colonias de crecimiento rpido y abundante, de aspecto variable, afelpado, algodonoso o pulverizado, de colores diversos que van del blanco, azul-verdoso a verde olivo. Con o sin produccin de exudado, confiriendo o no color al medio de cultivo, de olor fcilmente reconocible a moho. Micelio vegetativo con hifas septadas coloreadas o hialinas; micelio reproductor diferenciado a partir de las hifas vegetativas, formando los conidiforos simples o ramificados simtricos, que dan lugar a las ramas o mtulas en cuyos extremos se tienen los esterigmas o filides, los cuales sostienen a las conididas dispuestas en cadenas. Conidias unicelulares hialinas o coloreadas, globosas y ovoides, de contorno liso o irregular. Gnero ampliamente distribuido en todos los ambientes teniendo especies saprfitas y parsitas.

LEVADURAS DE IMPORTANCIA CLNICA

- Medio agar harina de maz - Poseen crecimiento similar a las bacterias - Se caracterizan por las blastosporas y artrosporas (se dan cuando las hifas se segmentan en clulas rectangulares de paredes gruesas, de donde resultan esporas asexuales) - Hongos superiores poseen hifas y micelios, mientras que las levaduras poseen pseudohifas y pseudomicelios.

Levadura con Azul de Lactofenol

Artrosporas

Candida albicans Pseudohifas Blastosporas = son esporas asexuales simples que se desarrollan por gemacin de la clula madre, y su separacin subsecuente del brote. Medio de Sabouraud Clamidospora (TIPICA) = las clulas de las hifas aumentan de tamao y se rodean de paredes gruesas. Estas esporas asexuales son resistentes a condiciones ambientales desfavorables y germinan cuando las condiciones se hacen ms favorables para el crecimiento vegetativo. Prueba en suero humano = tubo germinativo (UNICA) luego de 2 3 horas en la incubadora

Tincin de Gram

Tubos germinales

Clamidosporas

Rhodotorula NARANJA!! API y VITEC = pruebas de azcares para levaduras Cryptococcus neoformans En pulmones Contagio por excretas de palomas y otras aves Cryptococcus gatis eucalipto. No necesariamente en inmunosuprimidos Microorganismo ENCAPSULADO!!

Tincin de Tinta China

Tejido infectado

Malassezia furfur Pityriasis versicolor / Tinea versicolor

Tincin con Azul de Algodn

PREGUNTAS 1. Muestras clnicas que podemos procesar para el hallazgo de levaduras: a. LCR b. Sangre c. Esputo d. Biopsias 2. Caracterstica de Cryptococcus neoformans: cpsula 3. Pruebas estudiadas para un diagnstico rpido de Candida albicans: prueba en suero, ya que nos puede dar tubos germinales en 2 horas a una temperatura de 37C 4. Pruebas bioqumicas para el diagnstico de levaduras: a. Azcares b. Asimilacin de carbohidratos 5. Mtodo comercial para pruebas de asimilacin de azcares: Disco de azcares

ESTUDIO DE LOS DERMATOFITOS

Los dermatofitos son hongos que afectan solamente los tejidos superficiales queratinizados como la piel, pelo y uas Tia el nombre depende del lugar que este afectando. Es lo mismo que mazamorra o pie de atleta Las colonias de los dermatofitos son algonodosas y poseen color Habitats de donde proceden: o Antroflicos o Zooflicos o Geoflicos Diagnstico: o Limpieza con alcohol al 70% o Examen directo KOH 20% Azul de Algodn o Cultivo a temperatura ambiente de 2 a 4 semanas Medio de Sabouraud Medio de Mycosel o Observacin Macroscpica = colonias Microscpica = 10x y 40x Trichophyton rubrum MICELIO: crecimiento moderado (14 das); de color blanco con difusin del pigmento; aspecto aterciopelado, algodonoso o granuloso y plano; al reverso de se puede observar la colonia de color rojo. HIFAS: pectinadas y con clamidosporas. Los microconidios son piriformes en forma de lgrima a los lados del filamento; macroconidios escasos, fusiformes, largos, estrechos, en "punta de lpiz". In vitro perfora pelos y produce pigmento en agar papa y harina de maz.

Trichophyton mentagrophytes es el agente responsable ms frecuente de pie de atleta. MICELIO: de crecimiento moderado (7 a 10 das); de color blanco marfil; de aspecto polvoriento, granuloso, plano y centro acuminado. HIFAS: en raqueta, astas de ciervo, espirales, zarcillos; microconidios abundantes, en racimos y redondos; macroconidios escasos, en cigarro o salchicha, pared delgada y de 1 a 6 lculos. In vitro perfora pelos, es ureasa (+).

Microsporum canis no suelen afectar las uas (ni canis ni gypseum) MICELIO: de crecimiento moderado (6 a 10 das); de color blanco amarillento; aspecto velloso, plano, radiado o lanoso; al reverso color anaranjado. HIFAS: en raqueta con clamidosporas y cuerpos nodulares; microconidios ocasionales; macroconidios en huso, extremos afilados, pared gruesa y con 6 o ms lculos.

Microsporum gypseum MICELIO: de crecimiento rpido (6 das); de color caf canela; aspecto polvoriente, granuloso y plano. HIFAS: con microconidios ocasionales y macroconidios en huso, paredes delgadas y menos de 6 lculos.

PREGUNTAS 1. Significado de: a. Microconidias o microaleurisporas: conidias pequeas unicelulares. Son estructuras de reproduccin asexual en dermatofitos b. Macroconidias o macroaleurisporas: conidias grandes multicelulares c. Septas: paredes transversas que se pueden ver en las hifas septadas. 2. Parte del cuerpo atacada por: a. Microsporum: pelo y piel b. Trichophyton: pelo, piel y uas c. Epidermophyton floccosum: piel y uas 3. Tineas: son dermatofitosis. 4. Ejemplos: a. Tinea pedis (pie) b. T. unguium (ua) c. T. corporis (piel) d. T. capitis (cabello)

DEMATIACEOS
Proceden del ambiente Lesiones = protuberancias que asemejan un coliflor. Examen directo = KOH 20%

Colonias de los dematiceos Los cultivos se realizan en medios como Sabouraud simple o con antibiticos; crecen ms rpido en agar papa y fructifican mejor en agar harina de maz; se desarrollan a la temperatura ambiente o a 37C. El crecimiento es lento, en 7 a 12 das se observan colonias de superficie vellosa o algodonosa, de color negro o ligeramente gris verdoso, verde oscuro o caf desde una vista superior e inferior del plato petri o tubo de ensayo. Asemejan color centavo chocolate oscuro (CROMOBLASTOMICOSIS)

Phialophora Filides en forma de florero o botella, son ssiles, de base ancha y cuello estrecho, con collarete terminal en el cual se encuentran las fialosporas, que son ovaladas, hialinas y de pared delgada. Las fialosporas se unen por un material adhesivo y se aglutinan en forma de ramillete.

Cladosporium Conidiforos cortos y pigmentados, con formacin acroptala de conidios (slo es terminal) y cada conidio produce al subsecuente por gemacin, de manera que forman cadenas. Las cadenas pueden ser cortas, de 3 a 4 esporas y son muy ramificados y con conidios elpticos de tamao constante.

PREGUNTAS 1. Estructuras observadas en los hongos dimrficos: a. Filides b. Fialosporas c. Macroconidias d. Conidiforos y conidios 2. Tipos de esporulacin a. Cladosprica b. Phialophrica c. Acrotheca 3. Defina: a. Anamorfo: Hongo de reproduccin asexual b. Teleomorfo: Hongo de reproduccin sexual c. Holomorfo: Hongo de reproduccin sexual y asexual 4. Diagnstico con muestras de: a. Aspirados b. Material de biopsias c. Raspado de piel 5. Estructura microscpica patognomnica para un hongo dematiceo en el examen directo de la muestra clnica: clulas furnagoides

Hongos dimrficos
Son dimrficos porque poseen dos fases: o Vegetativa (micelios) a temperatura ambiente o Levaduriforme (37C)

Histoplasma capsulatum Se encuentra principalmente donde hay guano de murcilago. Descrito primero en Panam Fase micelial muy infectiva El cultivo se realiza en agar sangre, agar papa, agar con extracto de levadura, sin antibiticos y se coloca a 25C durante 6 a 12 semanas. Las colonias son lisas, blanquecinas o de color rosado al principio, despus son vellosas y de color blanco o caf parduzco. Hifas son largas, ramificadas y septadas; a los lados hay microconidias esfricas. Las macroconidias (CARACTERSTICO!!) son equinuladas o tuberculadas, redondeadas o piriformes y nacen en conidiforos tubulares. La conversin a la fase de levadura se logra al sembrar en agar sangre acondicionado de peptona y cistena, a pH de 7,4 o en medio de Kurung; se colocan a 37C y se tapan los tubos para aumentar la tensin de CO2. Al principio aparece pseudomicelio, despus la colonia es lisa y se encuentran levaduras al microscopio con blastosporas de cuello estrecho y un solo ncleo.

Paracoccidioides brasiliensis PANAMA!! El examen directo con KOH o Lugol se realiza en esputo, exudado o triturado de la biopsia. Se observan levaduras esfricas u ovales de doble pared y con gemacin mltiple (UNICA LEVADURA MULTIGEMANTE) Las blastosporas a veces forman cadenas de 4 a 12 esporas adoptando una disposicin en "timn de barco" u "orejas de Mickey Mouse"; tambin puede observarse en frotis y teirse con Giemsa o Wright. La colonia micelial muestra filamentos septados y ramificados, hifas en espiral, clamidosporas y microaleuriosporas no caractersticas. En la fase de levadura se encuentran las clulas multigemantes

Blastomyces dermatitidis Europa, EUA, Asia Para el examen directo se obtiene esputo, lavado bronquial o pus. Se practica con solucin salina o KOH. La fase levaduriforme es igual a la de P. brasiliensis. Se observa una levadura con brote germinativo de base muy ancha; la blastospora generalmente crece sin separarse de la clula madre y se presentan en pares. Al principio del cultivo llevado a cabo a 25C, el micelio se encuentra fragmentado, despus aparecen conidios ovoides o piriformes, laterales o terminales que semejan una "paleta". La colonia a 37C es cremosa y plegada, microscpicamente se encuentran levaduras de 8 a 15 um con blastosporas de base ancha.

Sporotrix schenkii Dimrfico, pero no sistmico. Afecta al haber pinchanzos de plantas. En el examen directo se pueden encontrar levaduras o cuerpos asteroides en solucin salina con 1 gota de formol 10%; que de manifiesto la levadura rodeada por la Inmunoglobulina del husped. El crecimiento del cultivo se da entre 3 a 5 das en gelosa de Sabouraud y agar sangre a 25C. Al principio la colonia es cremosa y brillante, despus tornan beige, marrn o negra. A 35-37C adopta color gris o crema. En su forma micelial, posee hifas delgadas, septadas y ramificadas; la reproduccin es por conidios acrgenos o simpodulosporas que se forman a los lados del filamento y dan la imagen de "duraznos en floracin" o conidiforos en forma de margarita.

Pneumocystis jirovecii no es dimrfico, pero es sistmico No se puede cultivar Tincin de plata (Gimori) Se crea antes como parsito Trofozotos = esporas Invade pulmones PREGUNTAS 1. Muestras clnicas para el hallazgo de Histoplasma capsulatum a. Orina b. Esputo c. Biopsia d. Raspado e. Lesiones 2. Poblacin ms expuesta a infeccin por Sporothrix schenckii: jardineros 3. Medios de cultivo adecuados para trabajar hongos dimrficos: a. Littman b. Mycosel c. BHI 4. Caractersticas morfolgicas de Coccidiodes immitis en ambas fases: a. Fase micelial = hifas con autoconidias intercaladas b. Fase levaduriforme = cridosporas 5. Diferencias entre P. brasiliensis y B. dermatitides en forma de levadura: P. brasiliensis es multigemante 6. Cultivo en lmina, definicin y valor en el diagnstico micolgico: sirve para identificar dermatiasis. Se puede hacer en agar harina de maz o agar dextrosa de papa.

VIROLOGIA
Clulas Vero

Efecto citoptico

Ojo de bho por CMV En infeccin por CMV se observan clulas ms grandes que las normales, con inclusiones intranucleares basoflicas. Dicha inclusin tiene apariencia de un "ojo de bho". El CMV es un virus de ADN, por ello su dao es a nivel nuclear.

Cuerpos de Negri Sucede por Rabdovirus. En esta muestra de tejido cerebral se observa la formacin de inclusiones intracitoplasmticas conocidas como "cuerpos de Negri".

Coilocitos

Cuerpo de Cowdry

Dilucin del suero del paciente Se colocan microplatos con cultivo de clulas, se les aade a cada uno una cantidad constante del virus y luego el suero del paciente. Si el paciente tiene anticuerpos para el virus se evitar la formacin de Placas lticas (se observan como manchas transparentes en el medio azul). A mayor concentracin de suero del paciente, mayor cantidad de anticuerpos y menor formacin de Placas lticas.

Dilucin de una suspensin viral En este caso se toma la muestra al paciente, se hace una suspensin del virus de la muestra y luego se hacen varias diluciones las cuales se aaden a este medio clulas cultivadas. En este caso, a mayor dilucin de la suspensin viral, menor ser la formacin de las Placas lticas (las placas lticas son producto del efecto del virus sobre las clulas).