TEMA 3

ENZIMAS

Antes de realizar la Gua deber revisar: 1. Funcin de las enzimas. 2. Generalidades del mecanismo de accin enzimtica. Evaluacin: 1. Porqu las enzimas son calificadas como biocatalizadores? 2. Explique la reaccin representada abajo. E+S E+P

GUIA DE CLASE
SITIO ACTIVO 1. En la figura se representa la estructura de una enzima y el detalle de su sitio activo. Los R His 94, 96 y 119 estn prximos en un lugar de la molcula: el sitio activo.

a. Cmo explica que aminocidos distantes en la estructura primaria estn espacialmente tan cercanos en el espacio? b. Resuma las caractersticas estructurales del sitio activo. 2. a. Es frecuente que las enzimas requieran para catalizar las reacciones, molculas orgnicas como vitaminas o metales como Mg++, Fe++. Cmo se denominan genricamente esas molculas no proteicas? b. En qu tipo de reacciones intervienen los compuestos que aparecen a continuacin?

Nicotinamn adenin dinucletido (NAD), contiene nicotinamida y evita la pelagra:

Flavn-adenn dinucletido (FAD), proviene de la riboflavina, una vitamina:

3. La actividad de una enzima se puede establecer midiendo la velocidad con la que transcurre la reaccin. A continuacin se esquematiza la reaccin catalizada por la enzima lactato deshidrogenasa que tiene como cofactor al NAD/NADH. Analice las molculas que participan en la reaccin y proponga tres formas para medir la velocidad de la reaccin. CH3 C=O COOH NADHH+ NAD NADHH+ NAD CH3 CHOH COOH

4. Las enzimas se agrupan segn el tipo de reaccin que catalizan. El anterior es un ejemplo de reaccin catalizada por una deshidrogenasa u oxido reductasa. En los ejemplos que figuran a continuacin, reconozca cundo acta una hidrolasa y una isomerasa.

5. Las grfica A muestra la variacin de la actividad de dos enzimas medida a distintos pH. La grfica B muestra la actividad de una misma enzima a distintas temperaturas luego de ser sometida a distintos tratamientos a. Considerando los enlaces que estabilizan las enzimas, explique los grficos A y B. b. Por qu una misma enzima tiene distinta actividad a 30C?
A
vo vo a b

5 enzima 1 enzima 2

11

pH

10

30

50

60

Temp (C)

a. enzima en condiciones normales. b. enzima luego de ser sometida a ebullicin.

CINETICA ENZIMATICA 6. a. Cmo se define la velocidad inicial (vo) de una reaccin? b. Con la ayuda del cuadro que aparece a continuacin, represente grficamente la variacin de vo con respecto a la [S].

E+S

c. Identifique en la representacin grfica que realiz: la velocidad mxima de la enzima (Vmx). la KM, o sea la [S] necesaria para lograr Vmx/2 d. Por qu cuando se alcanz la Vmx, la velocidad no vara aunque aumente la [S]?

La ecuacin de Michaelis-Menten es la expresin matemtica de la curva hiperblica que indica la variacin de vo en funcin de [S] para una [E], a temperatura y presin constantes.

Vmx.[S] KM +[S] 7. A partir de la ecuacin de Michaelis Menten: a. Calcule el valor de KM cuando la velocidad de la reaccin es la mitad de la velocidad mxima. Sustituya, para eso, vo por Vmx/2 y despeje KM. b. Defina KM a partir del resultado que obtuvo e indique en qu unidades se expresa. c. Si una enzima tiene los siguientes KM: 3 y 7 M para dos sustratos por cul de ellos tiene mayor afinidad?

8. Muchas veces es conveniente transformar la ecuacin de Michaelis-Menten, en otra cuya representacin grfica es una recta. La representacin de 1/Vmx. frente a 1/[S] es conocida como representacin Lineweaver-Burk. Cmo calcula KM y Vmx a partir de la grfica?

INHIBICIN Las constantes cinticas (Vmx y KM) de una enzima para su sustrato pueden variar en presencia de otros compuestos, los inhibidores. 9. La siguiente reaccin est catalizada por la succinato deshidrogenasa, una oxido-reductasa: COO CH2 CH2 COO succinato FAD FADH2
-

FAD

FADH2

COO CH CH OOC fumarato

a. En la figura siguiente, la curva 2 representa la velocidad de la succinato deshidrogenasa en presencia de succinato y la curva 1 cuando, adems de succinato, hay oxalacetato. Indique el KM en cada caso y plantee cmo actu el oxalacetato.

b. De los compuestos que aparecen abajo el nico que acta como el oxalacetato (curva 1), es el malonato. Cmo explica este hecho? OH COOH (CH2)14 CH3 CH2 H2NCH COOH tirosina palmtico oxalacetato malonato COO C=O CH2 COO COO CH2 COO -

10. En la tabla se presentan los valores de [S] y vo de la reaccin en ausencia y en presencia de un inhibidor, (A y B respectivamente).

a. Calcule el valor de KM en cada caso a partir de la representacin grfica adecuada. b. Indique el tipo de inhibicin. ALOSTERISMO 11. El siguiente es un ejemplo de regulacin de una va metablica donde: E1, E2, E3, E4 y E5 son enzimas que catalizan las reacciones individuales de la va y A, B, C y D son los compuestos intermediarios. E1 es la enzima reguladora de la va. Observe que A es el producto de la reaccin catalizada por E1 y el sustrato de la reaccin catalizada por E2, y as sucesivamente.

COO+ H3N C H E1 A
E2

COOB E3 C E4 D
E5

+ H3N C

H C OH treonina deshidratasa CH3 L-treonina

H C OH CH2 CH3 L- isoleucina

a. La L-isoleucina regula negativamente la actividad de la treonina deshidratasa, primer enzima de la va. Caracterice este tipo de enzima considerando su estructura e importancia biolgica. b Dnde se une la isoleucina a la enzima? La regulacin de la actividad enzimtica por modificaciones covalentes y zimgenos se ver en metabolismo. 12. Marque la/s afirmacin/es verdadera/s y explique brevemente por qu. a. En la inhibicin competitiva el inhibidor se une al sitio alostrico de la enzima. b. La especificidad est determinada por el sitio activo. c. Los inhibidores competitivos pueden ser desplazados cuando se aumenta la concentracin de sustrato.

LAS ENZIMAS EN LA CADENA AGROALIMENTARIA Las enzimas se utilizan en la produccin de muchos alimentos como el queso o yogur. Su funcin es transformar sustancias para dar productos atractivos desde el punto de vista gustativo o visual, o para aumentar su conservacin. En algunos casos en la produccin de alimentos se utilizan enzimas inmovilizadas, procedimiento que consiste en el acoplamiento de molculas de enzima a un soporte, ya sea por adsorcin o por enlace covalente. En la figura se presentan dos ejemplos de enzimas inmovilizadas: a) en geles de polmeros naturales como agar, colgeno, celulosa, y b) en microcpsulas de un polmero orgnico. Las enzimas inmovilizadas usualmente se colocan en columnas segn se observa en c).

A continuacin se describen ejemplos de aplicaciones industriales de la inmovilizacin de enzimas. Hidrlisis de lactosa con - galactosidasa inmovilizada. La lactosa, un glcido que se encuentra exclusivamente en la leche, es hidrolizada por la - galactosidasa. Ms de dos terceras partes de los adultos del mundo tienen deficiencia de esta enzima en su sistema digestivo. La lactosa, entonces, no se hidroliza en sus componentes que son ms fciles de absorber, contina por el tracto digestivo y, por efectos osmticos produce diarrea. La leche puede hacerse bebible an para estas personas, utilizando - galactosidasa inmovilizada en triacetato de celulosa. Luego del pasaje por la columna con la enzima inmovilizada, la lactosa es hidrolizada, la leche adquire un gusto ms dulce debido a la presencia de glucosa libre, uno de los productos de la hidrlisis de la lactosa. El mismo proceso puede utilizarse con suero de queso, producto de desecho que, si no se utiliza, se transforma en un contaminante para el medio ambiente. La posibilidad de hidrolizar la lactosa con - galactosidasa inmovilizada, permite obtener un producto que luego puede ser secado para ser usado como edulcorante en la produccin de helados, bebidas o productos de panadera y confitera. La ventaja de este producto seco, con respecto al que se obtendra secando suero de queso, es que no aparecen cristales de lactosa hecho que es importante sobre todo en la fabricacin de helados. Tratamiento de la cerveza con enzimas proteolticas Cuando la cerveza recin preparada se almacena entre 5C y 8C, se enturbia por precipitacin de protenas, y adems puede adquirir un gusto desagradable. Este

proceso se evita con la utilizacin de enzimas proteolticas como la papana que degrada las protenas que producen la turbidez. El proceso de hidrlisis debe hacerse de forma controlada para evitar que se degraden otras protenas y, como consecuencia, se produzcan cambios de gusto y la cerveza pierda la capacidad de formar espuma. La utilizacin de papana inmovilizada en una columna por donde se pasa la cerveza, y la regulacin de la velocidad de flujo, permiten que la hidrlisis sea controlada. Produccin de queso con ayuda de una proteasa inmovilizada La primera fase en la produccin de queso es la coagulacin de la leche con una enzima proteoltica, la renina. Esta enzima se extrae del estmago de los terneros (*) y tiene como ventaja frente a otras enzimas proteolticas que hidroliza slo algunos enlaces de la casena produciendo su coagulacin. La mayora de las dems enzimas proteolticas son capaces tambin de cuajar la leche pero su efecto contina despus de coagulada la casena y producen maduracin excesiva de los quesos, con la formacin de productos de sabor amargo. La produccin de queso en Uruguay no se realiza de esta forma pero el uso de la renina inmovilizada se utiliza en otros pases. (*) La renina se obtiene actualmente de forma sinttica. Obtencin de fructosa a partir de almidn A partir del almidn de maz se puede obtener fructosa por un procedimiento qumico relativamente sencillo. El proceso consiste en hidrolizar el almidn e isomerizar la glucosa a fructosa, procedimiento este ltimo que se realiza por una isomerasa inmovilizada. La ventaja de esto es que la fructosa tiene un poder edulcorante estimado en 120, mientras la sacarosa de 100. En Uruguay este proceso se us en la dcada de los 80 e inicios del 90, y si bien actualmente no se elabora en el pas, la tcnica sigue siendo usada para fabricar fructosa a efectos de edulcorar bebidas y otros alimentos. Centre la discusin en: a. Las condiciones en que se deben encontrar las columnas donde estn inmovilizadas las enzimas para que el proceso deseado ocurra. b. Ventajas del uso de fructosa como edulcorante. c. Tipo de enzimas inmovilizadas usadas en estos ejemplos.