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Introduo

Esfregao, exame a fresco de matria orgnica (clulas vivas) na qual as mesmas so preparadas em lmina de vidro. Tal procedimento requer uma preparao especfica para cada tipo de matria orgnica que ser examinada e para qual propsito se dedica, cabendo ao examinador escolher a melhor forma de fixar as clulas em anlise na lmina. Neste mtodo de anlise foram atribudos dois mtodos distintos de fixao da matria orgnica (clulas bacterianas provenientes da lngua e tecido epitelial de revestimento da mucosa bucal), a fixao pelo calor (fixao fsica) e a fixao por reagentes qumicos (fixao qumica).

Objetivo
Objetivo Geral: Visualizar, identificar, caracterizar e ilustrar clulas da mucosa bucal e bactrias provenientes da lngua. Objetivo Especfico: Visualizar na objetiva 5x, identificar, caracterizar e ilustrar na objetiva de 40x o tecido epitelial pavimentoso no queratinizado das clulas epiteliais da mucosa bucal Visualizar na objetiva de 5x, identificar, caracterizar e ilustrar na objetiva de 40x as bactrias provenientes da lngua.

Materiais e Reagentes
Lminas e Lamnulas Cotonetes Bico de Bunsen lcool 70% lcool 95% Violeta Genciana Safranina Papel Filtro Conta Gotas Becker 250 ml

Microscpio ptico ou de Luz gua da torneira

Procedimentos
1. Antes de ser iniciado o procedimento deve-se ocorrer a identificao da lmina,para que no ocorra dvida em questo do lado que foi feito o procedimento e troca da sua lmina com um colega.Com um cotonete em mos proceder captao de clulas bacterianas da regio superior da lngua,essa captao foi feita atravs de esfregao,ou

seja,esfregando o cotonete na parte superior da lngua, (regio esta escolhida devido grande presena de bactrias provenientes do seu constante contato com meio externo do corpo, atravs da fala e da ingesto de alimentos). 2. Espalhar levemente o material coletado na lmina, fazendo para isso movimentos em sentido nico, da direita para a esquerda ou o oposto e em duas camadas,no podendo ocorrer o erro de passar o cotonete duas vez no mesmo lugar,pois assim no ocorrer o acumulo de clulas. preferncia cobrindo a rea a ser visualizada e deixando um espao para possveis manuseios da lmina; 3. Fixe-o pelo calor, passando a lmina na chama de um bico de bunsen, exatamente trs vezes com a amostra virada para cima e em movimentos rpidos para que no aquea de mais. 4. Novamente com um cotonete, esfregue a parte interna da bochecha e, depois,passe sobre a regio da lmina em que previamente foi colocado o material coletado da lngua; 5. Mergulhar a lmina em lcool 70% para fixar as clulas; 6. Coloque uma gota de corante (violeta genciana, que tem como finalidade corar organelas basfilas, ou seja, organelas cidas que reagem a substncias (no caso o corante) bsicas colorindo-o com um tom bem forte, como por exemplo, o ncleo das clulas que contm cidos nuclicos) sobre o material e aguarde 3 minutos. De preferncia aguarde com a lmina na posio horizontal evitando o escorrimento do corante.

7. Remova o corante, passando a lmina em um pequeno fluxo de gua corrente. A lmina dever estar na posio vertical, para que o material contido nela no seja despejado juntamente com corante; 8. Remover o excesso de corante em lcool 95% rapidamente. Mergulhar a lmina no lcool; 9. Lave em gua rapidamente; 10. Cubra a lmina com safranina (outro tipo de corante, porm utilizado para corar organelas acidfilas, ou seja, organelas bsicas que reagem a substncias cidas, como por exemplo, o citoplasma) por 1 minuto. Este ter um tom bem mais leve em relao ao ncleo; 11. Lave novamente com gua corrente; 12. Coloque sobre a chapa de aquecimento por alguns segundos,at que seque completamente a lmina que ser observada ao microscpio; 13. Decorrida a focalizao correta das clulas presentes na lmina, proceder para a observao em 40x, de um determinado grupo de clulas; 14. Realizar a ilustrao da rea visualizada na objetiva, em papel adequado e colorir a ilustrao exatamente como visualizado na lmina; 15. Aps, proceder para a visualizao na objetiva de imerso 100x, para isso faa a retirada da lmina do microscpio (sem alterar o foco) e pingar uma gota do leo utilizado para imerso da objetiva; 16. Realizar a ilustrao da rea visualizada na objetiva.

Resultados e Discusso
Durante o incio da visualizao ao microscpio ptico ou de luz na objetiva 5x, notou-se de imediato a possibilidade de visualizao do ncleo das clulas epiteliais da bochecha, isso devido ao destaque da forte cor presente (violeta escuro). Notou-se tambm um agrupamento, j esperado, das clulas epiteliais comprovando assim o seu formato ou, tipo de tecido ser considerado um epitlio de revestimento estratificado (por conter vrias camadas de clulas) pavimentoso no-queratinizado (representa que o tecido faz parte de uma rea que reveste cavidades midas).

proporo

que

foi

mudando-se

de

objetiva

de

5x para

10x e

consequentemente para 40x, notou-se uma pequena diferena entre os ncleos observados, no qual alguns deles encontravam-se no formato arredondado e outros mais alongados. Tal diferenciao devida forma do desenvolvimento da clula, pois quanto mais alongada for a clula mais alongado ser o seu ncleo, esta particularidade ocasionada pela caracterstica do ncleo seguir o crescimento da clula, dando assim a aparncia de um basto quanto este encontra-se em uma clula prismtica e/ou um circulo quando encontra-se em uma clula de formato cbico. Contudo tal observao s pde ser fundamentada com um aprofundamento dos assuntos em bibliografias do gnero, pois mesmo com a colorao do ncleo e do citoplasma serem bem diferenciadas, alguns ncleos encontravam-se muito prximos uns do outros e de imediato cogitar-se-ia a no presena de membranas plasmtica as delimitando, mas como tal fato infundado nota-se que pelo fato das clulas serem unidas por junes celulares, e estas por sua vez estabelecidas atravs das membranas, percebe-se que o fator que influencia a no possibilidade de sua visualizao alm da no colorao da mesma a no focalizao proporcionada pelo microscpio, ou seja, a capacidade de visualizao do microscpio de luz zoom no esta a nvel de estruturas to microscpicas, podendo diferenciar apenas as membranas no justapostas (uma ao lado da outra). Ao proceder para a objetiva 100x pode-se visualizar alguns microorganismos, bactrias da lngua, porm no com tanta perfeio quanto visualizao das clulas epiteliais.

Concluso
O objetivo desta prtica foi realizado com pleno xito. Ocorrendo apenas alguns erros durante a realizao do foco, devendo esta falha estar vinculada a algum defeito no microscpio ptico ocasionado por mau uso ou falta de manuteno.

Referncias bibliogrficas
JUNQUEIRA, Luiz C.; CARNEIRO, Jos. Histologia Bsica. 11. ed. Rio de Janeiro, Guanabara Koogan, 2008. 66p.