Spektrofotometri

Spektrofotometri merupakan suatu metoda analisa yang didasarkan pada pengukuran serapan sinar monokromatis oleh suatu lajur larutan berwarna pada panjang gelombamg spesifik dengan menggunakan monokromator prisma atau kisi difraksi dengan detektor fototube. Spektrofotometer adalah alat untuk mengukur transmitan atau absorban suatu sampel sebagai fungsi panjang gelombang. Sedangkan pengukuran menggunakan spektrofotometer ini, metoda yang digunakan sering disebut dengan spektrofotometri. Spektrofotometri dapat dianggap sebagai perluasan suatu pemeriksaan visual dengan studi yang lebih mendalam dari absorbsi energi. Absorbsi radiasi oleh suatu sampel diukur pada berbagai panjang gelombangdan dialirkan oleh suatu perkam untuk menghasilkan spektrum tertentu yang khas untuk komponen yang berbeda. Absorbsi sinar oleh larutan mengikuti hukum Lambert-Beer, yaitu :

A=

log ( Io / It )

= abc

Keterangan : Io = Intensitas sinar datang It = Intensitas sinar yang diteruskan a = Absorptivitas b = Panjang sel/kuvet c = konsentrasi (g/l) A = Absorban Spektrofotometri merupakan bagian dari fotometri dan dapat dibedakan dari filter fotometri sebagai berikut :

1. Daerah jangkauan spektrum Filter fotometr hanya dapat digunakan untuk mengukur serapan sinar tampak (400-750 nm). Sedangkan spektrofotometer dapat mengukur serapan di daerah tampak, UV (200-380 nm) maupun IR (> 750 nm). 2. Sumber sinar Sesuai dengan daerah jangkauan spektrumnya maka spektrofotometer menggunakan sumber sinar yang berbeda pada masing-masing daerah (sinar tampak, UV, IR). Sedangkan sumber sinar filter fotometer hanya untuk daerah tampak. 3. Monokromator Filter fotometere menggunakan filter sebagai monokrmator. Tetapi pada spektro digunakan kisi atau prisma yang daya resolusinya lebih baik. 4. Detektor - Filter fotometer menggunakan detektor fotosel - Spektrofotometer menggunakan tabung penggandaan foton atau fototube. Komponen utama dari spektrofotometer yaitu : 1. 1. Sumber cahaya Untuk radisi kontinue : Untuk daerah UV dan daerah tampak :

Lampu wolfram (lampu pijar) menghasilkan spektrum kontiniu pada gelombang 3202500 nm. Lampu hidrogen atau deutrium (160-375 nm) Lampu gas xenon (250-600 nm)

Untuk daerah IR Ada tiga macam sumber sinar yang dapat digunakan : Lampu Nerst,dibuat dari campuran zirkonium oxida (38%) Itrium oxida (38%) dan erbiumoxida (3%) Lampu globar dibuat dari silisium Carbida (SiC). Lampu Nkrom terdiri dari pita nikel krom dengan panjang gelombang 0,4 – 20 nm Spektrum radiasi garis UV atau tampak :

-

Lampu uap (lampu Natrium, Lampu Raksa) Lampu katoda cekung/lampu katoda berongga Lampu pembawa muatan dan elektroda (elektrodeless dhischarge lamp) Laser 1. 2. Pengatur Intensitas

Berfungsi untuk mengatur intensitas sinar yang dihasilkan oleh sumber cahaya agar sinar yang masuk tetap konstan. 1. 3. Monokromator Berfungsi untuk merubah sinar polikromatis menjadi sinar monokromatis sesuai yang dibutuhkan oleh pengukuran Macam-macam monokromator : - Prisma - kaca untuk daerah sinar tampak - kuarsa untuk daerah UV - Rock salt (kristal garam) untuk daerah IR - Kisi difraksi Keuntungan menggunakan kisi : - Dispersi sinar merata - Dispersi lebih baik dengan ukuran pendispersi yang sama - Dapat digunakan dalam seluruh jangkauan spektrum 1. 4. Kuvet Pada pengukuran di daerah sinar tampak digunakan kuvet kaca dan daerah UV digunakan kuvet kuarsa serta kristal garam untuk daerah IR. 1. 5. Detektor Fungsinya untuk merubah sinar menjadi energi listrik yang sebanding dengan besaran yang dapat diukur. Syarat-syarat ideal sebuah detektor :

vibrasi Ditulis oleh EG Giwangkara S pada 30-06-2007 . spektrum. gelombang.chem-is-try.org/artikel_kimia/kimia_analisis/spektrofotometri/ Spektrofotometri Infra Merah Kata Kunci: atom. spektrofotometri. Macam-macam detektor : . elektromagnetik. Signal listrik yang dihasilkan harus sebanding dengan tenaga radiasi. infra merah. 6.Detektor foto (Photo detector) Photocell Phototube Hantaran foto Dioda foto Detektor panas 1. Indikator Dapat berupa : Recorder Komputer http://www. Penguat (amplifier) Berfungsi untuk memperbesar arus yang dihasilkan oleh detektor agar dapat dibaca oleh indikator.- Kepekan yang tinggi Perbandingan isyarat atau signal dengan bising tinggi Respon konstan pada berbagai panjang gelombang. Waktu respon cepat dan signal minimum tanpa radiasi. molekul. energi. 1. 7.

sinar infra merah dibagi atas tiga daerah. yaitu: a. b.000 µm atau pada Bilangan Gelombang 13. Gambaran berkas radiasi elektromagnetik diperlihatkan pada Gambar 1 berikut : Saat ini telah dikenal berbagai macam gelombang elektromagnetik dengan rentang panjang gelombang tertentu. Berdasarkan pembagian daerah panjang gelombang pada Tabel 1 dan Gambar 2. Daerah infra merah jauh. yang menyatakan bahwa cahaya secara fisis merupakan gelombang elektromagnetik.000 – 10 cm-1.75 – 1. .. artinya mempunyai vektor listrik dan vektor magnetik yang keduanya saling tegak lurus dengan arah rambatan. Daerah Infra Merah pertengahan. c. Spektrum elektromagnetik merupakan kumpulan spektrum dari berbagai panjang gelombang. Daerah Infra Merah dekat. Radiasi elektromagnetik dikemukakan pertama kali oleh James Clark Maxwell.Spektrofotometri Infra Red atau Infra Merah merupakan suatu metode yang mengamati interaksi molekul dengan radiasi elektromagnetik yang berada pada daerah panjang gelombang 0.

Satuan yang sering digunakan dalam spektrofotometri infra merah adalah Bilangan Gelombang ( ) atau disebut juga sebagai Kaiser. yaitu perpindahan dari satu titik ke titik lain. dan 3. Setiap senyawa pada keadaan tertentu telah mempunyai tiga macam gerak. Interaksi Sinar Infra Merah Dengan Molekul Dasar Spektroskopi Infra Merah dikemukakan oleh Hooke dan didasarkan atas senyawa yang terdiri atas dua atom atau diatom yang digambarkan dengan dua buah bola yang saling terikat oleh pegas seperti tampak pada gambar disamping ini. Jika pegas direntangkan atau ditekan pada jarak keseimbangan tersebut maka energi potensial dari sistim tersebut akan naik. yaitu bergetar pada tempatnya. Gerak Rotasi.000 – 200 cm-1. yaitu berputar pada porosnya. Gerak Translasi.5 – 50 µm atau pada bilangan gelombang 4. yaitu : 1. . 2.Dari pembagian daerah spektrum elektromagnetik tersebut diatas. Gerak Vibrasi. daerah panjang gelombang yang digunakan pada alat spektrofotometer infra merah adalah pada daerah infra merah pertengahan. yaitu pada panjang gelombang 2.

yaitu kebalikan dari panjang gelombang dalam satuan cm-1. Energi yang dimiliki oleh sinar infra merah hanya cukup kuat untuk mengadakan perubahan vibrasi. Jumlah energi total adalah sebanding dengan frekwensi vibrasi dan tetapan gaya ( k ) dari pegas dan massa ( m1 dan m2 ) dari dua atom yang terikat.0 x 1010 cm/detik n = indeks bias (dalam keadaan vakum harga n = 1)  = panjang gelombang . maka energi vibrasi secara terus menerus dan secara periodik berubah dari energi kinetik ke energi potensial dan sebaiknya.Bila ikatan bergetar.s c = Kecepatan cahaya . Persamaan dari hubungan kedua hal tersebut diatas adalah : . cm  = frekwensi .6262 x 10-34 J. Panjang gelombang atau bilangan gelombang dan kecepatan cahaya dihubungkan dengan frekwensi melalui bersamaan berikut : Energi yang timbul juga berbanding lurus dengan frekwesi dan digambarkan dengan persamaan Max Plank : sehingga : dimana : E = Energi. Joule h = Tetapan Plank . Hertz Dalam spektroskopi infra merah panjang gelombang dan bilangan gelombang adalah nilai yang digunakan untuk menunjukkan posisi dalam spektrum serapan. 3. 6. Sedangkan bilangan gelombang ( ) adalah frekwensi dibagi dengan kecepatan cahaya. Panjang gelombang biasanya diukur dalam mikron atau mikro meter ( µm ).

Hal ini bergantung pada atom-atom dan kekuatan ikatan yang menghubungkannya. Vibrasi regangan ada dua macam. gram Setiap molekul memiliki harga energi yang tertentu. Vibrasi Regangan (Streching) 2. yaitu diturunkan dari hukum Hooke tentang pegas sederhana yang bergetar. Perubahan Energi Vibrasi Atom-atom di dalam molekul tidak dalam keadaan diam. yaitu : dimana : Keterangan : c = kecepatan cahaya : 3. tetapi biasanya terjadi peristiwa vibrasi. maka tingkatan energi di dalam molekul itu akan tereksitasi ke tingkatan energi yang lebih tinggi. Vibrasi Bengkokan (Bending) Vibrasi Regangan (Streching) Dalam vibrasi ini atom bergerak terus sepanjang ikatan yang menghubungkannya sehingga akan terjadi perubahan jarak antara keduanya. maka yang akan terjadi pada molekul itu adalah perubahan energi vibrasi yang diikuti dengan perubahan energi rotasi. Bila suatu senyawa menyerap energi dari sinar infra merah. Vibrasi molekul sangat khas untuk suatu molekul tertentu dan biasanya disebut vibrasi finger print.Posisi pita serapan dapat diprediksi berdasarkan teori mekanikal tentang osilator harmoni. yaitu: . Vibrasi molekul dapat digolongkan atas dua golongan besar.0 x 1010 cm/detik k = tetapan gaya atau kuat ikat. dyne/cm µ = massa tereduksi m = massa atom. Sesuai dengan tingkatan energi yang diserap. yaitu : 1. walaupun sudut ikatan tidak berubah.

4. unit struktur bergerak mengayun asimetri tetapi masih dalam bidang datar. Vibrasi Kibasan (Wagging). Vibrasi Pelintiran (Twisting). maka dapat menimbulkan vibrasi bengkokan atau vibrasi deformasi yang mempengaruhi osilasi atom atau molekul secara keseluruhan. . 2. unit struktur bergerak mengayun simetri dan masih dalam bidang datar. unit struktur berputar mengelilingi ikatan yang menghubungkan dengan molekul induk dan berada di dalam bidang datar. Vibrasi Goyangan (Rocking). Regangan Asimetri. unit struktur bergerak mengibas keluar dari bidang datar. Vibrasi Bengkokan (Bending) Jika sistim tiga atom merupakan bagian dari sebuah molekul yang lebih besar. Regangan Simetri. yaitu : 1.1. unit struktur bergerak bersamaan dan searah dalam satu bidang datar. 2. Vibrasi bengkokan ini terbagi menjadi empat jenis. Vibrasi Guntingan (Scissoring). 3. unit struktur bergerak bersamaan dan tidak searah tetapi masih dalam satu bidang datar.

. Dari Tabel 2 diketahui bahwa vibrasi bengkokan C–H dari metilena dalam cincin siklo pentana berada pada daerah bilangan gelombang 1455 cm-1.Daerah Spektrum Infra Merah Para ahli kimia telah memetakan ribuan spektrum infra merah dan menentukan panjang gelombang absorbsi masing-masing gugus fungsi. Vibrasi suatu gugus fungsi spesifik pada bilangan gelombang tertentu. Artinya jika suatu senyawa spektrum senyawa X menunjukkan pita absorbsi pada bilangan gelombang tersebut tersebut maka dapat disimpulkan bahwa senyawa X tersebut mengandung gugus siklo pentana.

karena vibrasi regangan maupun bengkokan mengakibatkan absorbsi pada daerah tersebut. yaitu yang berada di daerah bilangan gelombang 2000 – 400 cm-1. sehingga daerah tersebut sering juga disebut sebagai daerah sidik jari (fingerprint region). Daerah ini menunjukkan absorbsi yang disebabkan oleh vibrasi regangan. Karena di daerah antara 4000 – 2000 cm-1 merupakan daerah yang khusus yang berguna untuk identifkasi gugus fungsional. . Dalam daerah 2000 – 400 cm-1 tiap senyawa organik mempunyai absorbsi yang unik. khususnya goyangan (rocking). Sedangkan daerah antara 2000 – 400 cm-1 seringkali sangat rumit. Meskipun pada daerah 4000 – 2000 cm-1 menunjukkan absorbsi yang sama. pada daerah 2000 – 400 cm-1 juga harus menunjukkan pola yang sama sehingga dapat disimpulkan bahwa dua senyawa adalah sama.Daerah Identifikasi Vibrasi yang digunakan untuk identifikasi adalah vibrasi bengkokan.

org/artikel_kimia/kimia_analisis/spektrofotometri_infra_merah/ Pengertian Dasar Spektrofotometer Vis. Karena sifat tersebut maka beberapa parameter perlu diketahui misalnya panjang gelombang. Sinar atau cahaya yang berasal dari sumber tertentu disebut juga sebagai radiasi elektromagnetik. Panjang gelombang (l) didefinisikan sebagai jarak antara dua puncak. UV-Vis 15 Komentar Posted by Emel Seran pada 4 Juli 2011 Spektrofotometri merupakan salah satu metode dalam kimia analisis yang digunakan untuk menentukan komposisi suatu sampel baik secara kuantitatif dan kualitatif yang didasarkan pada interaksi antara materi dengan cahaya. Radiasi elektromagnetik yang dijumpai dalam kehidupan sehari-hari adalah cahaya matahari. Sedangkan pengertian spektroskopi lebih luas misalnya cahaya maupun medan magnet termasuk gelombang elektromagnetik.http://www. Dalam interaksi materi dengan cahaya atau radiasi elektromagnetik. diabsorbsi atau dihamburkan sehingga dikenal adanya spektroskopi hamburan. UV. UV dan inframerah. spektroskopi absorbsi ataupun spektroskopi emisi. Radiasi elektromagnetik memiliki sifat ganda yang disebut sebagai sifat dualistik cahaya yaitu: 1) Sebagai gelombang 2) Sebagai partikel-partikel energi yang disebut foton. Cahaya yang dimaksud dapat berupa cahaya visibel.chem-is-try. Pengertian spektroskopi dan spektrofotometri pada dasarnya sama yaitu di dasarkan pada interaksi antara materi dengan radiasi elektromagnetik. Peralatan yang digunakan dalam spektrofotometri disebut spektrofotometer. frekuensi dan energi tiap foton. sedangkan materi dapat berupa atom dan molekul namun yang lebih berperan adalah elektron valensi. Namun pengertian spektrofotometri lebih spesifik atau pengertiannya lebih sempit karena ditunjukan pada interaksi antara materi dengan cahaya (baik yang dilihat maupun tidak terlihat). radiasi elektromagnetik kemungkinanan dihamburkan. .

v atau λ = c/v atau v = c/λ Persamaan Planck: hubungan antara energi tiap foton dengan frekuensi E=h.Hubungan dari ketiga parameter di atas dirumuskan oleh Planck yang dikenal dengan persamaan Planck.626 x 10-34 J. v = frekuensi sinar c = kecepatan cahaya (3 x 108 m.s).v E = h .s-1). . Hubungan antara panjang gelombang frekuensi dirumuskan sebagai c = λ . c/ λ dimana E = energi tiap foton h = tetapan Planck (6.

baik cahaya Uv.6116×1019 16. Secara sederhana Instrumen spektrofotometri yang disebut spektrofotometer terdiri dari : sumber cahaya – monokromator – sel sampel – detektor – read out (pembaca).6021x-19 Kalori 2.2418×1018 2.3901×10-1 1 24.8687×10-3 4.1849×107 1 atm = 1.2418×1011 6. Perbedaannya terletak pada panjang gelombang yang digunakan.volt = 1.8687×1010 9. Vis.volt 6.5611×10-20 E. Vis maupun Ir oleh materi sehingga spektrofotometri disebut juga sebagai spektroskopi absorbsi. Hal ini disebabkan UV memiliki panjang gelombang (λ) yang lebih pendek (100–400 nm) dibanding panjang gelombang yang dimiliki sinar tampak (400–800 nm). Berbagai satuan energi beserta faktor konversinya dapat dilihat pada tabel: Erg 1 erg = 1 J joule = 107 1 kalori 4.6021×10-12 Joule 10-7 1 4.atm 9.3901×10-8 2.0133×102 1.Dari rumus di atas dapat diketahui bahwa energi dan frekuensi suatu foton akan berbanding terbalik dengan panjang gelombang tetapi energi yang dimiliki suatu foton akan berbanding lurus dengan frekuensinya. UV-Vis dan Ir) memiliki prinsip kerja yang sama yaitu “adanya interaksi antara materi dengan cahaya yang memiliki panjang gelombang tertentu”. . Dari 4 jenis spektrofotometri ini (UV.0133×109 1 E. Misalnya: energi yang dihasilkan cahaya UV lebih besar dari pada energi yang dihasilkan sinar tampak.1291×10-2 1 1.6248×1020 1 Interaksi antara materi dengan cahaya disini adalah terjadi penyerapan cahaya.8291×10-20 l.1840 1.218 3.

Ada banyak lensa warna dalam satu alat yang digunakan sesuai dengan jenis pemeriksaan. Sumber sinar polikromatis berfungsi sebagai sumber sinar polikromatis dengan berbagai macam rentang panjang gelombang. Sedangkan filter optik berupa lensa berwarna sehingga cahaya yang diteruskan sesuai dengan warnya lensa yang dikenai cahaya. dengan adanya pendispersi hanya satu jenis cahaya atau cahaya dengan panjang gelombang tunggal yang mengenai sel sampel. Untuk sepktrofotometer     UV menggunakan lampu deuterium atau disebut juga heavi hidrogen VIS menggunakan lampu tungsten yang sering disebut lampu wolfram UV-VIS menggunan photodiode yang telah dilengkapi monokromator. Jika digunakan grating maka cahaya akan dirubah menjadi spektrum cahaya. Proses dispersi atau penyebaran cahaya seperti yang tertera pada gambar. lampu pada panjang gelombang IR. Pada gambar di atas disebut sebagai pendispersi atau penyebar cahaya. Pada gambar di atas hanya cahaya hijau yang melewati pintu keluar. 2. Jenis monokromator yang saat ini banyak digunakan adalan gratting atau lensa prisma dan filter optik. Infra merah. Monokromator berfungsi sebagai penyeleksi panjang gelombang yaitu mengubah cahaya yang berasal dari sumber sinar polikromatis menjadi cahaya monaokromatis.Fungsi masing-masing bagian: 1. .

Cuvet biasanya berbentuk persegi panjang dengan lebar 1 cm. Untuk sampel dalam bentuk larutan dimasukan ke dalam sel natrium klorida. Signal listrik yang dihasilkan harus sebanding dengan tenaga radiasi. jika sampel yang dimiliki sangat sedikit dan harganya mahal. Detektor berfungsi menangkap cahaya yang diteruskan dari sampel dan mengubahnya menjadi arus listrik.UV. Syarat-syarat sebuah detektor :      Kepekaan yang tinggi Perbandingan isyarat atau signal dengan bising tinggi Respon konstan pada berbagai panjang gelombang. namun kuvet dari kuarsa yang terbuat dari silika memiliki kualitas yang lebih baik. Hal ini disebabkan yang terbuat dari kaca dan plastik dapat menyerap UV sehingga penggunaannya hanya pada spektrofotometer sinar tampak (VIS). . untuk sampel cair dan padat (dalam bentuk pasta) biasanya dioleskan pada dua lempeng natrium klorida. Sel sampel berfungsi sebagai tempat meletakan sampel .IR. 4.3. Phototube . Macam-macam detektor :    Detektor foto (Photo detector) Photocell. Kuvet biasanya terbuat dari kuarsa atau gelas. Waktu respon cepat dan signal minimum tanpa radiasi. VIS dan UV-VIS menggunakan kuvet sebagai tempat sampel. misalnya CdS. Sel ini akan dipecahkan untuk mengambil kembali larutan yang dianalisis.

Sedangkan gerakan berputar elektron terjadi pada energi yang lebih rendah lagi misalnya pada gelombang radio. Jika zat menyerap cahaya tampak dan UV maka akan terjadi perpindahan elektron dari keadaan dasar menuju ke keadaan tereksitasi. berputar (rotasi) dan bergetar (vibrasi) jika dikenai suatu energi. yang dapat diukur adalah It/I0 atau I0/It (perbandingan cahaya datang dengan cahaya setelah melewati materi (sampel)). Proses Absorbsi Cahaya pada Spektrofotometri Ketika cahaya dengan panjang berbagai panjang gelombang (cahaya polikromatis) mengenai suatu zat. maka cahaya dengan panjang gelombang tertentu saja yang akan diserap. Read out merupakan suatu sistem baca yang menangkap besarnya isyarat listrik yang berasal dari detektor. Pada spektrofotometri. Elektron-elektron yang dimiliki oleh suatu molekul dapat berpindah (eksitasi). Perpindahan elektron ini disebut transisi elektronik. Dimana zat yang ada dalam sel sampel disinari dengan cahaya yang memiliki panjang gelombang tertentu. sebagian akan dihamburkan dan sebagian lagi akan diteruskan. Apabila cahaya yang diserap adalah cahaya inframerah maka elektron yang ada dalam atom atau elektron ikatan pada suatu molekul dapat hanya akan bergetar (vibrasi). Proses penyerapan cahaya oleh suatu zat dapat digambarkan sebagai berikut: . Atas dasar inilah spektrofotometri dirancang untuk mengukur konsentrasi suatu suatu yang ada dalam suatu sampel. cahaya datang atau cahaya masuk atau cahaya yang mengenai permukaan zat dan cahaya setelah melewati zat tidak dapat diukur. Ketika cahaya mengenai sampel sebagian akan diserap. Di dalam suatu molekul yang memegang peranan penting adalah elektron valensi dari setiap atom yang ada hingga terbentuk suatu materi.   Hantaran foto Dioda foto Detektor panas 5.

rumus yang digunakan untuk menghitung banyaknya cahaya yang hamburkan: dan absorbansi dinyatakan dengan rumus: . dari gambar terlihat bahwa zat sebelum melewati sel sampel lebih terang atau lebih banyak di banding cahaya setelah melewati sel sampel Cahaya yang diserap diukur sebagai absorbansi (A) sedangkan cahaya yang hamburkan diukur sebagai transmitansi (T). berbunyi: “jumlah radiasi cahaya tampak (ultraviolet.Gambar Proses penyerapan cahaya oleh zat dalam sel sampel. inframerah dan sebagainya) yang diserap atau ditransmisikan oleh suatu larutan merupakan suatu fungsi eksponen dari konsentrasi zat dan tebal larutan”. Berdasarkan hukum Lambert-Beer. dinyatakan dengan hukum lambertbeer atau Hukum Beer.

Faktor-faktor yang sering menyebabkan kesalahan dalam menggunakan spektrofotometer dalam mengukur konsentrasi suatu analit: . dengan panjang gelombang tunggal (monokromatis). b .dimana I0 merupakan intensitas cahaya datang dan It atau I1 adalah intensitas cahaya setelah melewati sampel. 5. Konsentrasi analit rendah. Karena apabila konsentrasi tinggi akan menggangu kelinearan grafik absorbansi versus konsntrasi. Sinar yang masuk atau sinar yang mengenai sel sampel berupa sinar dengan 2. Penyerapan terjadi di dalam volume larutan yang luas penampang (tebal kuvet) yang sama. 3. Secara eksperimen hukum Lambert-beer akan terpenuhi apabila peralatan yang digunakan memenuhi kriteria-kriteria berikut: 1. Rumus yang diturunkan dari Hukum Beer dapat ditulis sebagai: A= a . 4. Penyerapan sinar oleh suatu molekul yang ada di dalam larutan tidak dipengaruhi oleh molekul yang lain yang ada bersama dalam satu larutan. c atau A = ε . Artinya larutan yang diukur harus benar-benar jernih agar tidak terjadi hamburan cahaya oleh partikel-partikel koloid atau suspensi yang ada di dalam larutan. Penyerapan tidak menghasilkan pemancaran sinar pendafluor. b . c dimana: A = absorbansi b atau terkadang digunakan l = tebal larutan (tebal kuvet diperhitungkan juga umumnya 1 cm) c = konsentrasi larutan yang diukur ε = tetapan absorptivitas molar (jika konsentrasi larutan yang diukur dalam molar) a = tetapan absorptivitas (jika konsentrasi larutan yang diukur dalam ppm).

spektrum berupa garis dapat terjadi pula pada spektroskopi NMR karena hanya terjadi rotasi elektron. Spektrum UV. Spektrum yang dihasilkan dari setiap spektroskopi berbeda antara satu dengan yang lainnya. Sedangkan pada IR hanya terjadi vibrasi elektron maka spektrum yang dihasilkan berupa garis atau puncak tajam. Kesalahan fotometrik normal pada pengukuran dengan absorbansi sangat rendah atau sangat tinggi. Serapan oleh kuvet. yaitu larutan yang berisi selain komponen yang akan dianalisis termasuk zat pembentuk warna. hal ini dapat diatur dengan pengaturan konsentrasi. UV-VIS dan IR Data-data yang dikeluarkan oleh UV atau VIS dapat berupa absorbansi atau transmitansi yang langsung dibaca pada spektrofotometer.1. UV-VIS dan IR data yang dikeluarkan dapat berupa spektrum jika telah dihubungkan dengan komputer. sesuai dengan kisaran sensitivitas dari alat yang digunakan (melalui pengenceran atau pemekatan). 3. Hal ini dapat diatasi dengan penggunaan blangko. Adanya serapan oleh pelarut. Pita melebar dari UV-VIS disebabkan karena energi yang dimiliki selain menyebabkan transisi elektronik terjadi pula rotasi dan vibrasi elektron dalam molekul. Untuk membedakannya dapat dilihat pada gambar: . Spektrum yang dikeluarkan oleh UV. VIS. Namun untuk UV. 2. VIS maupun IR dapat dibedakan dengan mudah. namun kuvet dari kuarsa memiliki kualitas yang lebih baik. Spektrum yang dihasilkan oleh UV. Kuvet yang ada biasanya dari bahan gelas atau kuarsa. Para kimiawan spektrum UV. VIS dan UV-VIS berupa pita yang lebar sedangkan pada pita yang dikeluarkan oleh IR berupa garis atau puncak tajam. VIS. Selain pada IR. VIS dan UV-VIS tidak berbeda jauh namun sangat sangat berbeda bila dibanding spektrum IR.

Yang dimaksud sinar tampak adalah sinar yang dapat dilihat oleh mata manusia.com/2011/07/04/pengertian-dasar-spektrofotometer-vis-uv-uvvis/ Spektrofotometri visible disebut juga spektrofotometri sinar tampak. . Namun spektrum dari spektrofotometer VIS dan UV-VIS menyerupai spektrum UV Gambar spektrum IR.Gambar spektrum UV.wordpress. Cahaya yang dapat dilihat oleh mata manusia adalah cahaya dengan panjang gelombang 400-800 nm dan memiliki energi sebesar 299–149 kJ/mol. Pita tertinggi mengarah ke bawah sedangkan pada UV pita yang paling tinggi mengarah ke atas hal ini disebabkan spektrofotometer IR ditulis dalam bentung bilangan gelombang http://wanibesak.

Elektron pada keadaan normal atau berada pada kulit atom dengan energi terendah disebut keadaan dasar (ground-state). sumber cahaya biasanya menggunakan lampu tungsten yang sering disebut lampu wolfram. Cahaya yang diserap oleh suatu zat berbeda dengan cahaya yang ditangkap oleh mata manusia. Cahaya yang tampak atau cahaya yang dilihat dalam kehidupan sehari-hari disebut warna komplementer. Wolfram digunakan sebagai lampu pada spektrofotometri tidak terlepas dari sifatnya yang memiliki titik didih yang sangat tinggi yakni 5930 °C. Wolfram merupakan salah satu unsur kimia. Untuk lebih jelasnya perhatikan tabel berikut. Panjang gelombang (nm) 400 – 435 435 – 480 480 – 490 490 – 500 500 – 560 560 – 580 580 – 595 595 – 610 610 – 800 Warna warna yang diserap Ungu Biru Biru kehijauan Hijau kebiruan Hijau Hijau kekuningan Kuning Jingga Merah Warna komplementer (warna yang terlihat) Hijau kekuningan Kuning Jingga Merah Ungu kemerahan Ungu Biru Biru kehijauan Hijau kebiruan Pada spektrofotometer sinar tampak. Energi yang dimiliki sinar tampak mampu membuat elektron tereksitasi dari keadaan dasar menuju kulit atom yang memiliki energi lebih tinggi atau menuju keadaan tereksitasi. . Misalnya suatu zat akan berwarna orange bila menyerap warna biru dari spektrum sinar tampak dan suatu zat akan berwarna hitam bila menyerap semua warna yang terdapat pada spektrum sinar tampak. dalam tabel periodik unsur wolfram termasuk golongan unsur transisi tepatnya golongan VIB atau golongan 6 dengan simbol W dan nomor atom 74.

Gambar Kurva hubungan absorbansi vs konsentrasi Faktor-faktor yang menyebabkan absorbansi vs konsentrasi tidak linear: . UV.8 (0. Sedangkan gambar kedua adalah spectronic-20 terbaru. Panjang gelombang yang digunakan untuk melakukan analisis adalah panjang gelombang dimana suatu zat memberikan penyerapan paling tinggi yang disebut λmaks. Berdasarkan hukum Beer absorbansi akan berbanding lurus dengan konsentrasi. maka data yang diperoleh makin akurat atau kesalahan yang muncul makin kecil.2-0. karena b atau l harganya 1 cm dapat diabaikan dan ε merupakan suatu tetapan. Gambar atas merupakan spectronic-20 lama yang sudah jarang bahkan mungkin tidak diproduksi lagi. UV-Vis) Hubungan antara absorbansi terhadap konsentrasi akan linear (A≈C) apabila nilai absorbansi larutan antara 0. Jika absorbansi yang diperoleh lebih besar maka hubungan absorbansi tidak linear lagi. begitupun sebaliknya konsentrasi makin rendah absorbansi yang dihasilkan makin rendah. Hal ini disebabkan jika pengukuran dilakukan pada panjang gelombang yang sama.8) atau sering disebut sebagai daerah berlaku hukum Lambert-Beer.2 ≤ A ≥ 0. Kurva kalibarasi hubungan antara absorbansi versus konsentrasi dapat dilihat pada Gambar. (Hukum Lamber-Beer dan syarat peralatan yang digunakan agar terpenuhi hukum Lambert-Beer Baca Pengertian Dasar Spektrofotometer Vis. Artinya konsentrasi makin tinggi maka absorbansi yang dihasilkan makin tinggi.Gambar 2 jenis spektronic-20 yang bekerja pada rentang panjang gelombang sinar tanpak.

sehingga pembentukan warna yang dikehandaki tidak sempurna. yaitu larutan yang berisi selain komponen yang akan dianalisis termasuk zat pembentuk warna. 7. 3. Oleh sebab itu harus dibuat baru dan kurva kalibarasi yang baru harus dibuat saat setiap kali analisis. 6. Kesalahan fotometrik normal pada pengukuran dengan absorbansi sangat rendah atau sangat tinggi. Dikatakan spesifik karena hanya bereaksi dengan spesi yang akan dianalisis. Jika tidak berwarna maka larutan tersebut harus dijadikan berwarna dengan cara memberi reagen tertentu yang spesifik. Berikut adalah sifat-sifat yang harus dimiliki oleh reagen pembentuk warna: 1. Adanya serapan oleh pelarut. Reagen ini disebut reagen pembentuk warna (chromogenik reagent). Reaksi dengan komponen yang dianalisa harus berlangsung secara stoikiometrik. dapat menyebabkan timbulnya semacam cendawan bila disimpan. 2. sehingga warna yang terjadi benar-benar merupakan ukuran bagi komponen tersebut saja. waktu beberapa jam. 5. hal ini dapat diatur dengan pengaturan konsentrasi. Hal ini dapat diatasi dengan penggunaan blangko. 3. Pembentukan warna yang dianalisis harus cepat. 4. Tidak boleh ada gangguan-gangguan dari komponen-komponen lain dalam larutan yang dapat mengubah zat pereaksi atau komponen komponen yang dianalisa menjadi suatu bentuk atau kompleks yang tidak berwarna. Zat yang dapat dianalisis menggunakan spektrofotometri sinar tampak adalah zat dalam bentuk larutan dan zat tersebut harus tampak berwarna. Pereaksi tidak boleh menyerap cahaya dalam spektrum dimana dilakukan pengukuran. dalam pelarut yang dipakai. Pereaksi-pereaksi yang berubah sifatnya dalam 2. Pereaksi harus selektif dan spesifik (khas) untuk komponen yang dianalisa. . Kestabilan dalam larutan.1. Kuvet yang ada biasanya dari bahan gelas atau kuarsa. namun kuvet dari kuarsa memiliki kualitas yang lebih baik. sehingga analisis yang didasarkan pada pembentukan larutan berwarna disebut juga metode kolorimetri. Pereaksi yang dipakai harus dapat menimbulkan hasil reaksi berwarna yang dikehendaki dengan komponen yang dianalisa. sesuai dengan kisaran sensitivitas dari alat yang digunakan (melalui pengenceran atau pemekatan). Serapan oleh kuvet.

5. Warna larutan yang akan diukur harus mempunyai intensitas yang cukup tinggi (warna harus cukup tua) yang berarti bahwa absortivitas molarnya (ε) besar. suhu maupun kondisis-kondisi yang lain. yang mengakibatkan menyusutnya warna larutan (fading). c atau A = ε . absorbansi dengan teliti. Larutan standar yaitu larutan yang konsentrasinya telah diketahui secara pasti. Langkah-langkah yang perlu dilakukan dalam penentuan konsentrasi zat dengan kurva kalibarasi: 1. 3. Ambilah salah satu larutan standar. Menentukan konsentrasi sampel dengan cara kurva kalibrasi Konsentrasi sampel dalam suatu larutan dapat ditentukan dengan rumus yang diturunkan dari hukum lambert beer (A= a . Konsentrasi larutan standar dibuat dari yang lebih kecil sampai lebih besar dari konsentrasi analit yang diperkirakan. Warna larutan yang diukur sebaiknya bebas daripada pengaruh variasivariasi kecil kecil dalam nilai pH. 2. Hasil reaksi yang berwarna ini harus larut dalam pelarut yang dipakai. Dalam melakukan analisis Maching kuvet harus dilakukan agar kesalahannya makin kecil. Dalam hal ini dengan memilih pereaksi yang memiliki kepekaan yang cukup tinggi. c). b . suhu dan jenis pelarut. satu untuk sampel. 3. Maching kuvet : mencari dua buah kuvet yang memiliki absorbansi atau transmitansi sama atau hampir sama. Membuat larutan standar pada berbagai konsentrasi. Namun kadang-kadang dengan mengubah kondisi larutan dapat diperoleh kestabilan yang lebih baik. satu untuk blanko. Cara ini sebenarnya masih tetap bertumpu pada hukum Lambert-Beer yakni absorbansi berbanding lurus dengan konsentrasi. pengaruh keasaman. disebabkan oleh oksidasi oleh udara. penguraian secara fotokimia. Namun ada cara lain yang dapat digunakan untuk menentukan konsentrasi suatu spesi yang ada dalam suatu larutan yakni dengan cara kurva kalibarasi.Setelah ditambahkan reagen atau zat pembentuk warna maka larutan tersebut harus memiliki lima sifat di bawah ini: 1. 4. b . kemudian ukur pada berbagai panjang gelombang. Kestabilan warna yang cukup lama guna memungkinkan pengukuran 2. Ketidakstabilan. Hal ini dilakukan untuk mengetahui pada panjang gelombang . Dua buah kuvet inilah yang akan digunakan untuk analisis. Sistem yang berwarna ini harus memenuhi Hukum Lambert-Beer. Hal ini dapat dikontrol dengan mengubah pelarutnya.

9 konsentrasi 2 ppm 4 ppm 6 ppm 8 ppm 10 ppm 12 ppm 14 ppm 16 ppm Grafiknya adalah 6.2 0. Dari hukum Lambart-Beer jika absorbansi yang dihasilkan berkisar antara 0. Panjang gelombang yang menghasilkan absorbansi paling besar atau paling tinggi disebut panjang gelombang maksimum (lmaks). 4. absorbansi yang dihasilkan paling besar.4 0.7 0. Maka jika ditarik garis lurus konsentrasi sampel akan sama dengan konsentrasi larutan standar 10 ppm. 5. Ukurlah absorbansi larutan yang belum diketahui konsentrasinya.2-0. Maka grafiknya sebagai berikut: . Misalkan absorbansi yang diperoleh 0. Misalkan absorbansi yang dihasilkan dari larutan standar yang telah dibuat adalah Absorbansi 0.8 maka grafik akan berbentuk garis lurus. Catat absorbansi yang dihasilkan dari semua larutan standar.8 0.3 0.5 0.6.6 0.berapa. Setelah diperoleh absorbansinya. masukan nilai tersebut pada grafik yang diperoleh pada langkah 5. namun hal ini tidak dapat dipastikan. kemudian alurkan pada grafik absorbansi vs konsentrasi sehingga diperoleh suatu kurva yang disebut kurva kalibarasi. Ukurlah absorbansi semua larutan standar yang telah dibuat pada panjang gelombang maksimum.

. Metode fluoresensi dan fosforesensi melibatkan penyerapan radiasi dan pengemisian radiasi yang umumnya lebih panjang gelombangnya atau lebih rendah energinya. Metode serapan merupakan metode yang berkaitan dengan pengukuran intensitas radiasi elektromagnetik yang diserap oleh suatu sampel. bisa diukur radiasi yang dibaurkan bisa pula yang tidak terbaurkan. Tergantung pada peralatan yang digunakan.com/2011/07/04/spektrofotometri-sinar-tampak-visible/ Jenis Spektrofotometri  Penerapan analitis penyerapan dan pengemisian Banyak cara untuk memanfaatkan penyerapan dan pengemisian dalam analisis sehingga kita mengenal beberapa metode dasar. metode fluorosensi dan fosforesensi. Energi radiasi yang tidak teremisikan dalam bentuk radiasi kemudian diubah menjadi energi termal.Selain dengan cara diatas konsentrasi sampel dapat dihitung dengan persamaan regresi linear: persamaan di atas dapat dihitung dengan bantuan kalkulator. Metode emisi mengukur panjang gelombang dan intensitas radiasi yang diemisikan oleh atom. metode pengemisian yang lebih dikenal sebagai metode emisi.wordpress. Metode pembauran foton melibatkan penyerapan radiasi diikuti dengan pengemisian kembali radiasi yang sama panjang gelombangnya dengan arah yang berlainan. Setelah diperoleh persamaan di atas. emisi terjadi pada waktu sekitar 10-3 detik setelah penyerapan sementara fluorosensi lebih cepat terjadi yaitu dalam waktu 10-6 – 10-9 detik setelah penyerapan. Metode-metode tersebut ialah metode penyerapan yang lebih sering disebut metode serapan. Fluorosensi maupun fosforesensi berkaitan dengan perubahan energi vibrasi. Pada fosforesensi. http://wanibesak. Turbidimetri memperhatikan radiasi yang tidak dibaurkan sedangkan Nefelometri memperlihatkan radiasi yang dibaurkan. Hubungan tersebut menjadi dasar analisis kuantitatif. Energi yang diperlukan untuk menaikkan partikel tersebut ke keadaan tereksitasi bisa diperoleh dengan berbagai cara dan salah satu diantaranya ialah dengan pemanasan. metode pembauran foton. Panjang gelombang radiasi yang diemisikan tergantung pada jenis zatnya sedangkan intensitasnya tergantung pada jumlahnya. atau molekul yang menyerapnya. ion. absorbansi sampel yang diperoleh dimasukan sebagai nila y sehingga diperoleh nila x. Pengukuran tersebut bisa untuk tujuan kualitatif maupun kuantitatif. ion ataupun molekul tereksitasi. Hal ini merupakan dasar analisis kualitatif sampel. Panjang gelombang radiasi yang diserap sampel khas untuk atom. Selain itu jumlah foton yang diserap berbanding langsung dengan jumlah partikel penyerap. Nilai x yang diperoleh merupakan konsentrasi sampel yang dianalisis. Perbedaan antara kedua fenomena tersebut ialah dalam selang waktu antara penyerapan dan emisi. Metode ini bisa juga melibatkan pembauran foton oleh permukaan partikel koloid.

2. frekuensi serta intensitasnya dikenal sebagai hamburan Raman. yang menyatakan bahwa cahaya secara fisis merupakan gelombang elektromagnetik. Hamburan yang berbeda dengan radiasi semula (sumber radiasi) tersebut berbeda dalam hal panjang gelombang.000 – 10 cm-1. Percikan hamburan pada larutan suspensi dan sistem koloida panjang gelombangnya mendekati ukuran partikel molekul suspensi atau sistem koloid tersebut. Saat ini telah dikenal berbagai macam gelombang elektromagnetik dengan rentang panjang gelombang tertentu. Menurut temuan Raman tampak gejala pada molekul dengan struktur tertentu apabila dikenakan radiasi infra merah dekat atau radiasi sinar tampak. Radiasi hamburan rersebut dikenal sebagai hamburan Tyndal atau hamburan mie yang melahirkan metode turbidimetri. § Daerah Infra Merah pertengahan. maka sebagian dari radiasi tersebut akan dipercikkan oleh atom atau molekul tersebut. Berdasarkan pembagian daerah panjang gelombang sinar infra merah dibagi atas tiga daerah. Jenis-jenis Spektrofotometri 1. Spektrum lektromagnetik merupakan kumpulan spektrum dari berbagai panjang gelombang. Hamburan . dalam ilmu fisika telah dilakukan oleh Chandra Venkrama Raman seorang ahli fisika berkebangsaan India. Spektrofotometri Raman Interaksi Radiasi Elektro Magnetik (REM) dengan atom atau molekul yang berada dalam media yang transparan.000 µm atau pada Bilangan Gelombang 13. Spektrofotometri Infra Merah Spektrofotometri Infra Red atau Infra Merah merupakan suatu metode yang mengamati interaksi molekul dengan radiasi elektromagnetik yang berada pada daerah panjang gelombang 0. Radiasi elektromagnetik dikemukakan pertama kali oleh James Clark Maxwell. yaitu: § Daerah Infra Merah dekat. Suatu penelitian yang sulit dengan hasil temuan yang sangat berarti. Demikian pula yang tejadi pada molekul-molekul dengan diameter yang besar atau teragregasi sebagai contoh molekul suspensi atau koloida. pada tahun 1928. Radiasi percikan tersebut tidak tampak oleh karena panjang gelombangnya adalah pada daerah ultraviolet.75 – 1. akan memberikan sebagian kecil hamburan yang tidak sama dengan radiasi semula. Percikan radiasi oleh atom atau molekul tersebut menuju ke segala arah dengan panjang gelombang dan intensitas yang dipengaruhi ukuran partikel molekul. § Daerah infra Merah jauh. Radiasi hamburan tersebut dikenal dengan hamburan Rayleigh. artinya mempunyai vektor listrik dan vektor magnetik yang keduanya saling tegak lurus dengan arah rambatan. Apabila media transparan tersebut mengandung hanya partikel dengan ukuran dimensi atom (permukaan 0.01 A2) maka akan terjadi percikan radiasi dengan intensitas yang sangat lemah.

Purcell (dari Harvard university) menemukan bahwa inti atom terorientasi terhadap medan magnet.001% dari garis spektra sumber radiasinya. setelah mengabsorpsi radiasi tersebut. 4. Kekurangpuasan mereka terutama dari segi analisis kuantitatif. bisa mengemisikan radiasi dengan panjang gelombang yang umumnya lebih besar daripada panjang gelombang radiasi yang diserap. penentuan struktur dan gugus hidrokarbon yang dirasa banyak memberikan informasi. Spektrofotometri Fluorescensi dan Fosforescensi Suatu zat yang berinteraksi dengan radiasi. Fluoresensi biasa terjadi pada suhu sedang dalam larutan cair. Spektrum RMI akan mampu menjawab beberapa pertanyaan yang berkaitan dengan inti atom yang spesifik seperti: § Gugus apa yang dihadapi? § Di mana lokasinya gugus tersebut dalam molekul? § Beberapa jumlah gugus tersebut dalam molekul? § Siapa dan dimana gugus tetangganya? § Bagaimana hubungan gugus tersebut dengan tetangganya? Hasil spektoskopi RMI seringkali merupakan penegasan urutan gugus atau susunan atom dalam satu molekul yang menyeluruh. Spektrofotometri RMI sangat penting artinya dalam analisis kualitatif. Fluoresensi terjadi dalam selang waktu lebih pedek daripada fosforesensi. Pada waktu itu dirasa perlu menambah anggota teknik spektroskopi untuk tujuan lebih banyak memberikan informasi gugus hidrokarbon dalam molekul. Pada fluoresensi dan fosforesensi terjadi perubahan energi vibrasi molekul sebagai akibat darip enyerapan radiasi oleh molekul tersebut. Selain itu kondisi yang menyebabkan fluoresensi dan fosforesensi pun berbeda. 3. sedangkan fosforesensi biasa terjadi pada suhu sangat rendah dan pada media pekat. Fenomena tersebut disebut fotoluminensi yang mencakup dua jenis yaitu fluoresensi dan fosforesensi. Selanjutnya menurut Bloch dan Purcell setiap proton di dalam molekul yang sifat kimianya berbeda akan memberikan garis-garis resonansi orientasi magnet yang diberikan berbeda. . Spektrofotometri Resonansi Magnetik Inti Sebelum era 1950 para ilmuwan khususnya yang berkecimpung dalam bidang kimia organik mersakan kurang puas terhadap apa yang telah dicapai dalam analisis instrumental. khususnya dalam penentuan struktur molekul zat organik. Dua orang ilmuwan dari USA pada tahun 1951 yaitu Felix Bloch dan Edwardo M. Para ilmuwan di Indonesia mempopulerkan metode ini dengan nama spektrofotometer Resonansi Magnet Inti (RMI). Bertolak dari penemuan ini lahirlah metode baru sebagai anggota baru teknik soektroskopi yang diberi nama “Nuclear Magnetic Resonance (NMR)”.Raman tersebut memberikan garis Raman dengan intensitas tidak lebih dari 0.

Sumber: http://rahma-alchemist.com/2010/03/jenis-jenis-spektrofotometri.blogspot.html .

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful