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Facultad de medicina humana

BIOLOGIA CELULAR
TEMA: DISTRIBUCIÓN DE ENZIMAS EN LOS COMPARTIMIENTOS CELULARES DOCENTE: Dr. Jaime Salazar Zuloeta Dr. Nestor Rodrigues Alayo MSc Leoncio Pacherres Mogollon Dra. Ingrid Quezada Nepo INTEGRANTES: Burga Perez Vidauro De la Cruz Montalvan Díaz Delgado Luis Enrique Hinostrosa Huaman Alex Mateo Pacora Jimmy Damian Quintana Cubas Jean Pando Sánchez Héctor C. Rioja Veja Marco Antonio Rojas Sanchez Deivi

“DISTRIBUCIÓN DE ENZIMAS EN LOS COMPARTIMIENTOS CELULARES”

Suclupe Chero Deivi H. CICLO: I Ciclo Lambayeque, 21 de Julio del 2009

INTRODUCCIÓN

Todas las reacciones metabólicas que ocurren en nuestro organismo se hayan mediados por enzimas, estas en su mayoría son de naturaleza proteica (algunas son ARN). Puede definirse a las enzimas como catalizadores, capaces de acelerar las reacciones químicas en ambos sentidos, sin consumirse en ella, ni formar parte de los productos. La diferencia fundamental es que tienen gran especificidad de reacción o sea por el sustrato sobre el cual actúan. En la célula las enzimas pueden encontrarse en el líquido celular (citosol) o bien pueden estar fijadas a determinadas organelas (ej. Adheridas a las mitocondrias), es así que en la presente exposición se hablara de la distribución de las enzimas en los compartimientos celulares.

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INDICE I. OBJETIVOS II. GENERALIDADES II.1. II.2. II.3. II.4. II.4.1. II.4.2. II.4.3. II.4.4. II.4.5. II.4.6. II.5. ENZIMAS IMPORTANCIA BIOMÉDICA DE LAS ENZIMAS CARACTERÍSTICAS DE LAS ENZIMAS PROPIEDADES ENZIMATICAS Las enzimas tienen un enorme poder catalítico. Las enzimas poseen especificidad La actividad de algunas enzimas es regulable Las enzimas transforman diferentes clases de energía La mayoría de enzimas requiere de cofactores Sensibilidad de la actividad enzimática MODELOS DE LA INTERACCIÓN SUSTRATO – ENZIMA

II.5.1. Modelo de la llave cerradura II.5.2. Modelo del ajuste inducido II.6. NOMENCLATURA Y CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS

2.6.1. Las oxido-reductasas 2.6.2. Las transferasas 2.6.3. Las Hidrolasas 2.6.4. Las Liasas 2.6.5. Las Isomerasas 2.6.6. Las Ligasas II.7. MECANISMOS ENZIMATICOS

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II.8.

FACTORES QUE INFLUYEN EN ACTIVIDAD ENZIMATICA

LA REGULACION DE LA

II.8.1. Temperatura II.8.2. pH II.8.3. Tiempo II.8.4. Concentración de la enzima ( pH y T se mantienen constante) II.8.5. Concentración del sustrato II.8.6. Activadores

III. DISTRIBUCION CELULARES III.1.

ENZIMÁTICA

EN

LOS

COMPARTIMIENTOS

ENZIMAS EN MEMBRANA

III.1.1. Transferencia de información a través de la membrana plasmática III.1.2. Principales enzimas III.1.2.1. ADENILATOCICLASA III.1.2.2. FOSFODIERASAS III.1.2.3. Proteincinasas (protein kinasas) III.1.2.4. CINASAS (kinase) III.1.2.5. LA FOSFATASA ALCALINA (FAL) III.1.2.6. NADPH OXIDASA: III.2. ENZIMAS E EL CITOPLASMA

III.2.1. ENZIMAS DEL ESPACIO SOLUBLE. III.2.2. Deshidrogenasa de lactato: III.2.3. Malato Deshidrogenasa III.2.4. Isocitrato Deshidrogenasa III.2.5. La Aconitasa III.3. ENZIMAS EN ORGANELOS

III.3.1. Enzimas en Peroxisomas III.3.1.1. Catalasa –Peroxidasa
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III.3.1.2. Oxidasas Flavinicas: III.3.1.3. Urato-Oxidasa III.3.1.4. Superóxidos Dismutasa: III.3.1.5. Nucleasas III.3.2. Enzimas en Cloroplastos. III.3.3. Enzimas en la mitocondria III.3.3.1. Enzimas en la membrana externa de la mitocondria III.3.3.2. Enzimas en el espacio intramembranoso III.3.3.3. Enzimas de la membrana interna III.3.3.4. Enzimas de la matriz mitocondrial III.3.4. Enzimas en Lisosomas III.3.5. Enzimas en Retículo Endoplasmático III.3.6. Enzimas en el Aparato de Golgi III.3.7. Enzimas en el Glioxisoma

III.4.

ENZIMAS EN EL NÚCLEO

III.4.1. Enzimas enlazadas a Cromatina III.4.2. Enzimas enlazadas al Nucléolo IV. CONCLUSIONES V. ANEXOS VI. BIBLIOGRAFIA

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I.
1.

OBJETIVOS Reconocer la distribución de las enzimas en los compartimientos celulares (citoplasma, organelos y núcleo).
2.

Reconocer la clasificación de las enzimas de acuerdo a la reacción que catalizan.

3. Entender la importancia biológica de la presencia de enzimas en las células. 4. Conocer las características generales de las enzimas, así como su mecanismo de acción.

II.

GENERALIDADES: II.1. LAS ENZIMAS

Derivan del vocablo griego enzyme, que significa fermento, término

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propuesto por Kuhne en 1887. Las enzimas son proteínas globulares producidas por el tejido vivo que actúan como biocatalizadores, es decir, aceleran las reacciones químicas en los seres vivos sin modificarse. Al acelerar las reacciones disminuyen la energía de activación y tiempo de reacción. Cada célula y cada tejido tienen su actividad propia, lo que comporta continuos cambios en su estado bioquímico, en la base de la cual están las enzimas. Los propios genes son reguladores de la producción de las enzimas; por tanto, genes y enzimas pueden ser considerados como las unidades fundamentales de la vida. Este concepto, se ha desarrollado y concretado cada vez más, y constituye un componente esencial de diversas disciplinas: la microbiología, la fisiología, la bioquímica, la inmunología y la taxonomía, formando además parte del campo aplicado, en gran variedad de industrias. El conjunto de enzimas constituye el grupo de biomoléculas más extenso y más especializado del organismo. La vida es, en síntesis, una cadena de procesos enzimáticos, desde aquellos que tienen por sustratos los materiales más simples, como el agua (H20) y el anhídrido carbónico (C02), presentes en los vegetales para la formación de hidratos de carbono, hasta los más complicados que utilizan sustratos muy complejos. La formación de las proteínas, los glúcidos y los lípidos es un ejemplo típico: Son a la vez degradados y reconstruidos por otras reacciones enzimáticas, produciendo energía a una velocidad adecuada para el organismo, sin el gasto energético que exigen los métodos químicos de laboratorio.

II.2. • •

IMPORTANCIA BIOMÉDICA DE LAS ENZIMAS

Sin enzimas, no sería posible la vida que conocemos. Intervienen en la biocatálisis que regula la velocidad a la cual tienen
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lugar los procesos fisiológicos. • Las enzimas llevan a cabo funciones relacionadas con salud y la

enfermedad. En tanto que, en la salud todos los procesos fisiológicos ocurren de una manera ordenada y se conserva la homeostasis, durante los estados patológicos. • Su importancia es tal que puede considerarse la vida como un "orden

sistemático de enzimas funcionales". Cuando este orden y su sistema funcional son alterados de algún modo, cada organismo sufre más o menos gravemente y el trastorno puede ser motivado tanto por la falta de acción como por un exceso de actividad de enzima.

II.3. • • • • •

CARACTERÍSTICAS DE LAS ENZIMAS

Se sintetizan a nivel intracelular. Químicamente son proteínas, excepto los ribozimas que es un ARN. Se necesitan en ínfimas cantidades para su acción. No son destruidas por la reacción que catalizan, son rehusables. Pueden actuar a nivel intracelular, es decir, en la célula donde se formo

o a nivel extracelular. • Se denomina sustrato a toda molécula sobre la que actúa una enzima.

Esquema de una reacción enzimática:

E Donde:

+

S

ES

E+P

E: Enzima S: Sustrato ES: Complejo enzima sustrato P: Productos

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Son catalizadores de naturaleza proteínica con un peso molecular

bastante elevado y con propiedades catalíticas especificas.

Presentan gran difusibilidad en los medios líquidos, la mayoría solubles

en agua.

II.4.

PROPIEDADES ENZIMATICAS:

II.4.1. Las enzimas tienen un enorme poder catalítico. Las enzimas aceleran las reacciones multiplicando su velocidad por un millón de veces o más. Gracias a la energía libre emitida al formar los múltiples enlaces débiles e interacciones entre la enzima y su sustrato Por ejemplo: el peróxido de hidrogeno (H2O2) se descompone con gran lentitud si la reacción no es catalizada, pero una sola molécula de la enzima catalasa ocasiona la descomposición de cinco millones de moléculas de H2O2 por minuto a 0 ºC. La catalasa protege las células, porque el peróxido de hidrogeno es un subproducto toxico de varias reacciones celulares.

II.4.2.

Las enzimas poseen especificidad

Dado que existe una relación estrecha entre la forma del sitio activo y la forma del sustrato, la mayoría de las enzimas son altamente específicas. Casi todas son capaces de catalizar solo unas pocas reacciones químicas estrechamente relacionadas o, en muchos casos, una sola reacción. Por ejemplo, la enzima ureasas, que descompone la urea en amoniaco y dióxido de carbono, no actúa en ningún otro sustrato. De igual modo, la enzima sacarasa desdobla solo la sacarosa, sin actuar en la maltosa ni la lactosa. Unas cuantas enzimas son específicas solo en el sentido de requerir un sustrato con determinado tipo de enlace químico. Por ejemplo, la lipasa que secreta el páncreas rompe los enlaces éster que conectan el glicerol y los ácidos grasos en una amplia variedad de grasas.

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II.4.3. La actividad de algunas enzimas es regulable La especificidad de las enzimas está bajo control fisiológico. La síntesis de la lactosa es un ejemplo adecuado, lactato sintetasa, la enzima que cataliza la síntesis de lactosa consta de una subunidad catalítica y otra su unidad modificadora.

II.4.4. Las enzimas transforman diferentes clases de energía En muchas reacciones de bioquímica la energía de las sustancias reaccionantes se convierte en una energía diferente con una eficiencia muy elevada, por ejemplo en la mitocondria en las moléculas pequeñas derivadas de los alimentos se convierte en un tipo de energía diferente, el adenosin trifosfato (ATP).

II.4.5. La mayoría de enzimas requiere de cofactores Muchas enzimas requieren cofactores. Por ejemplo la pepsina, secretada por el estomago, consisten solo en proteínas, en tanto que otras tienen dos componentes, una proteína llamada apoenzima y otro componente químico adicional, el cofactor. Ni la apoenzima ni el cofactor por si solos tiene capacidad catalítica; sólo cuando ambos se combinan puede funcionar la enzima. El cofactor puede ser una molécula inorgánica u orgánica. Algunas enzimas requieren como cofactor un ion metálico específico. Dos cofactores inorgánicos muy comunes son los iones Magnesio y los iones Calcio. La mayoría de los oligoelementos (como hierro, cobre, zinc y manganeso, necesarios en cantidades mínimas) funcionan como cofactores. Un compuesto orgánico no polipeptídico que se une a la apoenzima y sirve como cofactor se denomina coenzima. La mayoría de las coenzimas pueden

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clasificarse como agentes de transferencia - esto es, agentes que transfieren algún componente de una molécula a otra-. Algunos ejemplos de coenzimas que transportan electrones son el NADH, NADPH y FADH2, el ATP actúa como coenzima, ya que se encarga de transferir grupos fosfatos. Otra coenzima muy conocida es la coenzima A, la cual participa en la transferencia de grupos derivados de ácidos orgánicos. La mayoría de las vitaminas (compuestos orgánicos que los organismos requieren en pequeñas cantidades pero no pueden sintetizar por si mismos) son coenzimas o componentes de coenzimas. Las vitaminas B hidrosolubles aportan componentes importantes de numerosas coenzimas Vitamina B1 o Tiamina: su derivado, el pirofosfato de tiamina es esencial para el metabolismo energético de los glúcidos.

Vitamina B2 o Riboflavina: sus derivados son nucleótidos coenzima ticos con gran poder reductor como el FAD y el FMN. Vitamina B3 o Niacina: sus derivados son nucleótidos coenzimáticos con gran poder reductor como el NAD+ o el NADP+. Vitamina B5 o ácido Pantoténico: su principal derivado es la coenzima A (Co-A), con gran importancia en diversos procesos metabólicos. Vitamina B6 o Piridoxina. Sus principales derivados son los coenzimas PLP (fosfato de piridoxal) y PMP (fosfato de Piridoxamina), esenciales en el metabolismo de los aminoácidos. Vitamina B7 o Biotina (vitamina H). Su derivado, la Biocitina, es esencial para el funcionamiento de numerosas carboxilasas (enzimas). Vitamina B9 o Acido fólico (vitamina M). Su derivado, el FH4 es esencial en la síntesis de purinas. Vitamina B12 o Cianocobalamina: coenzima B12.

El mecanismo de acción de una coenzima es el siguiente: 1.-La coenzima se une a una enzima, 2.-La enzima capta su sustrato específico,

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3.-La enzima ataca a su sustrato arrancándole algunos de sus átomos, 4.-La enzima cede a la coenzima dichos átomos, 5.-La coenzima acepta dichos átomos y se desprende de la enzima, 6.-La coenzima no es el aceptor final de estos átomos, sino que debe liberarlos, 7.-La coenzima transporta dichos átomos y acaba cediéndolos, recuperando así su capacidad para aceptar nuevos átomos.

II.4.6. Sensibilidad de la actividad enzimática Algunas sustancias química inhiben (disminuyen la actividad) a muchas enzimas o incluso las destruyen. Esta inhibición puede ser reversible o irreversible:
a)

Inhibición reversible: esta inhibición ocurre cuando un inhibidor forma enlaces químicos débiles con la enzima. Puede ser competitiva o no competitiva. En la inhibición competitiva, el inhibidor compite con el sustrato normal por la unión con el sitio activo de la enzima. Dicho inhibidor suele ser estructuralmente similar al sustrato normal, de modo que se ajusta al sitio activo y se combina con la enzima. Sin embrago, tal similitud no basta para sustituir por completo al sustrato en la reacción química, de manera que la enzima no puede atacarlo para formar productos de

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reacción. El inhibidor competitivo ocupa los sitios activos solo por un tiempo y no produce daños permanentes en las enzimas. En la inhibición competitiva, un sitio activo es ocupado por el inhibidor parte del tiempo y por el sustrato normal otra parte. Si la concentración del sustrato se eleva respecto a la del inhibidor, por lo común el sitio activo será ocupado por el sustrato. Esta forma de inhibición puede reconocerse experimentalmente por el hecho de que puede revertirse incrementando la concentración de sustrato. En la inhibición no competitiva, el inhibidor se une con la enzima en un sitio que no es el activo, esto hace que se inactive la enzima por modificación de su forma, debido a lo cual el sitio activo no puede unirse con el sustrato. Muchos inhibidores no competitivos de importancia son sustancias metabólicas que regulan la actividad enzimática al combinarse con la enzima de manera reversible. La inhibición no competitiva comparte algunas características con la inhibición alostérica.

b)

En la inhibición irreversible: el inhibidor se combina con un grupo funcional de la enzima y la desactiva o destruye en manera permanente. Muchos venenos son inhibidores irreversibles. Por ejemplo, los metales pesados como mercurio y plomo se unen irreversiblemente a muchas proteínas, incluso enzimas, y las desnaturalizan. Algunos gases nerviosos atrofian la enzima acetilcolinesterasa, de importancia en el funcionamiento de nervios y músculos. Diversos insecticidas y medicamentos son inhibidores enzimáticos. También puede ocurrir inhibición enzimática irreversible si una proteína es desnaturalizada debido al calor o solventes orgánicos.

II.5.
II.5.1.

MODELOS DE LA INTERACCIÓN SUSTRATO – ENZIMA Modelo de la llave cerradura:

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Enunciado: “La enzima y el sustrato tienen una interacción semejante a la llave con la cerradura, es decir la enzima tiene un sitio rígido para el sustrato” Este modelo fue propuesto por Fisher en 1894. Llamado modelo rígido.

II.5.2. Modelo del ajuste inducido: Enunciado: “El sustrato induce un cambio conformacional en la enzima, de esta manera el o los sitios activos de la enzima es complementario del sustrato”. Este modelo fue propuesto por Kosland. Llamado modelo ameboide. Es el modelo aceptado actualmente.

II.6.

NOMENCLATURA Y CLASIFICACIÓN DE LAS ENZIMAS

Las enzimas reciben nombre y se clasifican de acuerdo a las reacciones que catalizan. La mayor parte de las enzimas tienen un nombre que se forma adicionando el sufijo “asa” al nombre del sustrato sobre el cual actúan o a un término que describe las reacciones que cataliza. Así, la ureasa tiene la urea como sustrato. La alcohol deshidrogenasa cataliza la remoción de hidrógenos de los alcoholes (es decir, cataliza la oxidación de los alcoholes). A pesar de ello, algunas enzimas como la tripsina o la quimiotripsina, aun se reconocen por sus nombres históricos. Un comité de la Unión Internacional de Bioquímica publico un esquema de

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clasificación que asigna un número a cada enzima y clasifica a las enzimas en seis grupos importantes de acuerdo a la clase general de reacciones químicas que catalizan. II.6.1. Las oxido-reductasas Son las enzimas relacionadas con las oxidaciones y las reducciones biológicas que intervienen de modo fundamental en los procesos de respiración y fermentación. Las oxidorreductasas son importantes a nivel de algunas cadenas metabólicas, como la escisión enzimática de la glucosa, fabricando también ATP, verdadero almacén de energía. Extrayendo dos átomos de hidrógeno, catalizan las oxidaciones de muchas moléculas orgánicas presentes en el protoplasma; los átomos de hidrogeno tomados del sustrato son cedidos a algun aceptor. La mayor parte de estas enzimas se conocen como deshidrogenasas, pero algunas de ellas reciben el nombre de oxidasas, peroxidasas, oxigenasas, o reductasas. II.6.2. Las transferasas Catalizan reacciones de transferencia de grupos (obtenidos de la rotura de ciertas moléculas) a otras sustancias receptoras. Muchas de ellas requieren de la existencia de coenzimas. Estas enzimas o sus coenzimas son sustituidas en forma covalente por una porción de la molécula del sustrato. Suelen actuar en procesos de interconversión de azucares, de aminoácidos, etc. Ejemplo: transaldolasas, Transcetolasas, Transaminasas. II.6.3. Las Hidrolasas Son una clase especial de transferasas, el agua les sirve como un receptor del grupo transferido. Verifican reacciones de hidrólisis con la consiguiente obtención de monómeros a partir de polímeros. Suelen ser de tipo digestivo, por lo que normalmente actúan en primer lugar. Las más importantes son: las Esterasas, carbohidrasas, protidasas, lipasas y fosfatasas. II.6.4. Las Liasas

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Son enzimas que regulan reacciones en las cuales se rompen enlaces con pérdida de grupos y con la aparición generalmente de dobles enlaces. En la dirección inversa, una liasa cataliza la adición de un sustrato a un doble enlace de un segundo sustrato. Una liasa que cataliza una reacción de adición en las células se denomina con frecuencia sintetasa. Entre algunos ejemplos de liasas están las aldolasas, descarboxilasas. II.6.5. Las Isomerasas Transforman ciertas sustancias en otras isómeras, es decir, de idéntica formula empírica pero con distinto desarrollo. Son las enzimas que catalizan diversos tipos de isomerización, sea óptica, funcional, de posición, etc. Debido a que estas reacciones tienen un solo sustrato y un producto, son lo por regular reacciones enzimáticas más sencillas. Suelen actuar en procesos de interconversión. Por ejemplo: Isomerasas de azúcar, epimerasas, multasas. II.6.6. Las Ligasas Catalizan la ligadura o unión de dos sustratos en reacciones sintéticas que requieren el ingreso de la energía química potencial de un nucleosido trifosfato, como el ATP. La acción de estas enzimas se manifiesta con la formación de enlaces entre átomos de carbono y oxigeno de diversas moléculas, o bien entre carbono y azufre, carbono y nitrógeno y carbono y carbono. A este grupo pertenecen enzimas de gran relevancia reciente, como las aminoácido –ARTt ligasas conocidas habitualmente con el nombre de sintetasas de aminoácidos – ARTt o enzimas activadoras de aminoácidos que representan el primer paso en el proceso biosintético de las proteínas, y que forman uniones C-O, A-sintetasa, que forma acetil coenzima. A las ligasas se les da el nombre de sintetasas. Ejemplo: carboxilasas, péptidosintetasas. II.7. MECANISMOS ENZIMATICOS

Los mecanismos son los eventos atómicos o moleculares que ocurren durante las reacciones. Los mecanismos individuales de las enzimas se han deducido a partir de experimentos y más recientemente a partir de estudios estructurales

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de las enzimas, en particular por la cristalografía con rayos X. Se procede de la siguiente manera:

Orienta a los sustratos: parte de la energía de activación se utiliza para que los sustratos roten y se enfrenten con los átomos correctos para formar los enlaces.

Agregan carga a los sustratos: las cadenas laterales de (R) de los aminoácidos de las enzimas pueden participar directamente haciendo a los sustratos químicamente mas reactivos.

Inducen la deformación del sustrato: cuando una sustancia se une al sitio activo, la enzima puede causar que los enlaces se estiren, poniéndolo en un estado de transición estable.

Cambio de forma de la enzima al unirse al sustrato: este cambio por la unión al sustrato se denomina ajuste inducido.

La actividad de la enzima depende en parte de la disposición o arreglos de los aminoácidos y grupos prostéticos en determinada región de la proteína. II.8. FACTORES QUE INFLUYEN EN ACTIVIDAD ENZIMATICA La actividad de una enzima depende de un cierto número de factores, entre los cuales están la temperatura, el pH, la concentración de sustratos, los activadores y los inhibidores. II.8.1. Temperatura Si se suministra a una reacción enzimática energía en forma de calor, al ser captada por las moléculas es transformado en energía cinetica. Ello favorece la actividad de la enzima, pero si la temperatura es excesiva la enzima se desnaturaliza por tanto la actividad enzimática cesa. II.8.2. pH LA REGULACION DE LA

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Todas las enzimas tienen dos valores límites de pH entre los cuales son efectivas. Traspasados estos valores, la enzima se desnaturaliza y deja de actuar. Entre estos dos valores extremos se sitúa un pH en el cual la enzima alcanza una efectividad máxima: es el llamado pH óptimo. Cada reacción tendrá su pH optimo, por ejemplo, la pepsina es mas efectiva sobre la hemoglobina a pH=2.2 y sobre la albumina a pH=1.5. II.8.3. Tiempo A medida que se consume el sustrato y la reacción se acerca al equilibrio, la velocidad de la reacción misma disminuye hasta cero. II.8.4. Concentración de la enzima ( pH y T se mantienen constante) En presencia de exceso de sustrato la velocidad de la reacción es directamente proporcional a la concentración de la enzima. II.8.5. Concentración del sustrato En toda reacción enzimática, si se incrementa la concentración del sustrato se produce un aumento de la velocidad de formación del producto. En este proceso la enzima no varía. Si la concentración del sustrato es excesiva, la velocidad de reacción no aumentará, debido a que todas las enzimas están en forma de complejo E-S. II.8.6. Activadores Algunos iones favorecen la unión de la enzima con el sustrato, por ejemplo: la enzima fosfolirasa, que regula la formación de ATP a partir de ADP y el grupo fosfato (Pi), se ve activa por la presencia de iones Mg++.

III.

DISTRIBUCION CELULARES III.1.

ENZIMÁTICA

EN

LOS

COMPARTIMIENTOS

ENZIMAS EN MEMBRANA

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III.1.1.

Transferencia de información a través de la membrana plasmática

¿Cómo puede una hormona extracelular u otra molécula regulatoria transmitir información al interior de la célula sin cruzar físicamente la membrana plasmática? Casi todas las moléculas señalizadoras dependen de la interacción del sistema de proteínas integrales de membrana para transmitir información por traducción de señales. Luego que el ligando (una hormona señal, como una hormona u otra molécula regulatoria) se une al receptor de membrana, la señal es transmitida a través de una serie de proteínas. La molécula sintetizadora a veces se denomina primer mensajero. A menudo, en la vía participan cinasas de proteína, enzimas que transfieren grupos fosfatos del ATP a determinadas proteínas integrales de membrana, llamadas proteínas G, así llamadas porque su forma activa se une a un trifosfato de guanosina (GTP) una molécula similar al ATP pero que contiene la base nitrogenada guanina en lugar de adenina. La proteínas G catalizan la hidrólisis de GTP a GDP, un proceso exotérmico. En una serie compleja de sucesos, una proteína G transfiere el mensaje del receptor a una enzima como la ciclasa del adenililo, que cataliza la producción de un segundo mensajero, a menudo a AMPc (adenosin monofosfato cíclico). Típicamente el segundo mensajero activa cinasas de proteínas, enzimas que a su vez, activan a determinadas proteínas fosforilándolas. Esta secuencia de reacciones, que comienza con el enlace de la molécula señalizadora con el receptor, ocasiona un cambio en alguna función celular. Las proteínas G participan en varias traducciones de señales importantes, que incluyen la acción de muchas hormonas. Algunas proteínas G regulan conductos que permiten que los iones crucen la membrana plasmática y otras más tienen funciones importantes en los sentidos de la vista, el olfato y el gusto. Se piensa que las proteínas Ras, un grupo de proteínas de unión a GTP que actúan de modo un tanto similar a como lo hacen las proteínas G, son

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importantes en la traducción de señales necesarias para muchas actividades celulares. Los fibroblastos (un tipo de célula del tejido conectivo) requieren de la presencia de dos factores de crecimiento (factor de crecimiento derivado de las plaquetas) para la síntesis de ADN sin embargo, cuando los investigadores desactivaron proteínas Ras inyectando en los fibroblastos anticuerpos dirigidos contra ellas, el factor de crecimiento dejo de ser eficaz. Los resultados de estos experimentos y otros similares llevaron a concluir que la proteína Ras es importante en la traducción de señales en que participan factores de crecimiento con una clase de enzimas llamadas cinasas de serina. Los biólogos celulares han demostrado que cuando determinados ligamentos se unen a integrinas (proteínas transmembranosas que conectaban las células con la matriz extracelular) en la membrana plasmática, se activan vías de señalización de dentro hacia fuera, influyen en que tan selectivas son las integrinas respecto de las moléculas a las cuales se unen y que tan fuertemente se une a ellas.
III.1.2.

Principales enzimas ADENILATOCICLASA

III.1.2.1.

Se encuentra en la cara interna de la membrana plasmática. Es una enzima que cataliza la síntesis de adenosin monofosfato cíclico (AMPC), que es un segundo mensajero que se encuentra también dentro de la célula, a partir del ATP. Es un compuesto que se activa en el mecanismo de acción de una hormona hidrosoluble cuya secuencia es la siguiente:

La hormona hidrosoluble difunde desde la sangre, por el líquido intersticial

y se une a su receptor en la membrana plasmática de las células blanco. Esto activa otra proteína membranosa, la proteína G, que a su vez activa a la adenilato ciclasa.

La adenilato ciclasa convierte el ATP en adenosin monofosfato cíclico

(AMPC), en el citosol.

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El

AMPC o segundo mensajero activa una o más proteíncinasas

(enzimas), que pueden estar libres en el citosol o unidos a la membrana plasmática. Una única hormona unida al receptor supone la síntesis de muchas moléculas de AMPC. Se encuentran también las proteínas G inhibidoras, dependientes de receptores inhibidores, en este caso la señal interacciona con el Pi (fósforo inorgánico) y éste actúa sobre la proteína G, mecanismo semejante al anterior solo que en este caso con tendencia inhibitoria.

III.1.2.2.

FOSFODIERAS AS

Las fosfodiesterasas o nucleasas son enzima hidrolizas que catalizan la ruptura de los enlaces fosfodiester como por ejemplo los que se establecen en los ácidos nucleicos entre la pentosa de un nucleótido y el grupo fosfato de otro. Su acción regula la concentración dentro de las células del AMP cíclico y del GMP cíclico. Están descitas 5 isoenzimas. En la actualidad hay fármacos usados como inhibidores de las fosfodiesterasas. Estas enzimas se clasifican según el tipo de acido nucleico y el tipo de enlace hidrolizan. III.1.2.3. PROTEINCINASAS (PROTEIN KINASAS) Enzima de la clase tranferasa que cataliza la reacción:

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ATP + proteína =ATP + fosfoproteínas La reacción fosforiliza grupos de serina, treonina y tirosina en enzimas y otras proteínas. Proteincinasas específicas regulan enzimas que catalizan reacciones claves en procesos tales como la renovación del glicógeno, biosíntesis del colesterol y transformaciones de aminoácidos. Otras producen la caseína secretadas en la leche. La proteincinasa A, una enzima dependiente del AMP-c, fosforila las proteínas intracelulares a través de su activación y realiza una importante labor mediadora en diversas funciones fisiológicas cerebrales.
III.1.2.4.

CINASAS (kinasa)

Subclase de transferasas que comprende a las enzimas que catalizan la transferencia de un grupo de alta energía desde un donador, por lo general trifosfato de adenosina, hacia algún receptor, y de los nombres diversos según este último (por ejemplo: cinasa de la creatina, fructosinasa, galactosinasa, exocinasa, etc.).
III.1.2.5.

LA FOSFATASA ALCALINA (FAL)

Es una enzima hidrolasa responsable de eliminar grupos de fosfatos de varios tipos de moléculas como nucleótidos, proteínas y alcaloides. El proceso de eliminar el grupo fosfático se denomina desfosforilación. Como sugiere su nombre, las fosfatasas alcalinas son más efectivas en un entorno alcalino. La fosfatasa alcalina recibe el nombre de orto-fosfórico-monoéster hidrolasa. Estas enzimas proceden de la ruptura normal de las células sanguíneas y de otros tejidos, muchas de ellas no tienen un papel metabólico en el plasma excepto las enzimas relacionadas con la coagulación y con el sistema del complemento. Las fosfatasas alcalinas son enzimas que se encuentran presentes en casi todos los tejidos del organismo, siendo particularmente alta

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en huesos, hígado, placenta, intestinos y riñón. Tanto el aumento, así como su disminución en plasma tienen significado clínico. Las causas de un aumento de FAL:

Enfermedad

ósea

de

Paget,

obstrucciones

hepáticas,

hepatitis,

hepatoxicidad por medicamentos y osteomalacia. Las causas de una disminución de FAL:

Cretinismo y déficit de vitamina C

III.1.2.6. NADPH OXIDASA: Enzima flavoproteína que cataliza la reducción monovalente del oxígeno utilizando NADPH como fuente de Electrones para formar un anión superóxido (SUPERÓXIDOS). Enzima de la clase oxido-reductasa que cataliza la reacción: NADPH + O2 = NADPH+ + 2 O2− La reacción forma parte del aumento brusco y repentino del consumo de oxigeno de los fagocitos neutrófilos, eosinófilos y mononucleares .Produce aniones superóxidos como oxidantes en el sistema fagocítico microbicida. La enzima depende de distintos citocromos. Defectos en la producción de iones superóxidos por Enzimas como la NADPH Oxidasa dan lugar a Enfermedad Granulomatosa Crónica. III.2. ENZIMAS EN EL CITOPLASMA III.2.1. ENZIMAS DEL ESPACIO SOLUBLE. Enzimas glicolíticas: Glicólisis: La glucólisis o glicólisis (del griego glycos: azúcar y lysis: ruptura), es la vía metabólica encargada de oxidar o fermentar la glucosa y así obtener
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energía para la célula. Ésta consiste de 10 reacciones enzimáticas que convierten a la glucosa en dos moléculas de piruvato la cual es capaz de seguir otras vías metabólicas y así continuar entregando energía al organismo. Reacción global de la glucólisis

La vía principal de degradaciones del catabolismo tiene tres funciones principales: 1. La generación de moléculas de alta energía (ATP y NADH) como fuente de energía celular en procesos de respiración aeróbica (presencia de oxígeno) y anaeróbica (ausencia de oxígeno). 2. La generación de piruvato que pasará al Ciclo de krebs, como parte de la respiración aeróbica. 3. La producción de intermediarios de 6 y 3 carbonos que pueden ser ocupados por otros procesos celulares. III.2.1.1. Deshidrogenasa de lactato: Enzima tetrámero que se encuentra en corazón, hígado, músculo,

eritrocitos, plaquetas y nódulos linfáticos. Se sintetiza desde dos genes individuales distintos, que originan polipéptidos estructuralmente diferentes pero con la misma actividad catalítica.

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Corresponde a la categoría de las oxidorreductasas dado que cataliza una reacción redox, en la que el piruvato es reducido a lactato gracias a la oxidación de NADH a NAD+. Dado que la enzima también puede catalizar la oxidación de hidroxibutirato, ocasionalmente es conocida como Hidroxibutirato Deshidrogenasa (HBD). Participa en el metabolismo energético anaerobio, reduciendo el piruvato (procedente de la glucólisis) para regenerar el NAD+, que en presencia de glucosa es el sustrato limitante de la vía glucolítica. Hay cinco forma isoenzimáticas distintas codificadas por genes distintos. Su función es la de reducir reversiblemente el piruvato a lactato. Está relacionada con el infarto de miocardio, hemólisis y enfermedades del parénquima hepático. III.2.1.2. Malato Deshidrogenasa La enzima Malato deshidrogenasa cataliza la reacción de oxidación del (S)malato a oxaloacetato utilizando NAD+ como aceptor de electrones. S-malato + NAD+ oxaloacetato + NADH

Esta enzima también oxida otros ácidos 2-hidrocarboxílicos. La malato deshidrogenasa (MDH) participa en el ciclo del ácido cítrico y existe en todos los organismos aerobios. Mientras que los organismos procariotas tienen una sola forma de MDH, en las células eucariotas hay dos isozimas: una de ellas localizada en la matriz mitocondrial y otra en el citoplasma. Los hongos y las plantas también tienen una forma glioxisomal que es usada en la ruta del glioxilato. En los cloroplastos de las plantas hay una forma adicional de MDH dependiente del NADP, malato deshidrogenasa (NADP+), que es esencial para la fotosíntesis universal C3, ciclo de Calvin, y para la ruta C4 más especializada.
III.2.1.3.

Isocitrato Deshidrogenasa

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Enzima alostérica, de PM 380 kD, formada 8 subunidades. Requiere de Mn2+ y Mg2+. La enzima cataliza la descarboxilación oxidativa del isocitrato a α

-cetoglutarato. En un primer paso cataliza la oxidación del isocitrato a una cetona (oxalsuccinato), y posteriormente, la descarboxilación del carboxilato en posición b con respecto a la cetona. En esta reacción sale el primer CO2 del ciclo.

En los eucariotas existen al menos tres isozimas de la IDH: a) b) c) IDH1 - Isocitrato deshidrogenasa dependiente del NADP+ citoplasmática IDH2 - Isocitrato deshidrogenasa dependiente del NADP+ mitocondrial, IDH3 - Isocitrato deshidrogenasa dependiente del NAD+, en los

humanos formada por las subunidades alfa, beta y gamma.
III.2.1.4.

La Aconitasa

Posee en su centro activo un centro de (4Fe-4S) encargado de coordinar el OH del citrato, para facilitar su eliminación .Convierte al citrato en isocitrato a través de una reacción de isomerización. La aconitasa es una enzima que se

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llama enzima de tres puntos tiene tres sitios activos que se unen al CH, COO, y la Acetil CoA queda muy lejos ósea queda en una posición en que no podría formar el complejo enzima-sustrato y por lo tanto no se puede transformar. Entonces la enzima lo que hace es que va a quitar ese oxidrilo por un H y forma una molécula de HO pero la enzima se queda con ella y luego deja un doble enlace y se llama cis-aconiato. La aconitasa tiene fierro ferroso que es el que sostiene a la molécula de HO y también tiene como cofactor al glutatión. Llegamos al Isocitrato y tenemos la primera reacción oxidativa del ciclo. CITRATO ISOCITRATO

Aconitasa

III.3.
III.3.1.

ENZIMAS EN ORGANELOS Enzimas en Peroxisomas

Los peroxisomas son orgánulos citoplasmáticos muy comunes en forma de vesículas que contienen oxidasas y catalasas. Estas enzimas cumplen funciones de detoxificación celular. Como todos los orgánulos, los peroxisomas

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solo se encuentran en células eucariontes. Los peroxisomas son pequeñas vesículas provistas de membrana plasmática semipermeable, que contienen varias enzimas que producen o utilizan peróxido de hidrógeno (agua oxigenada, H2O2); se ha identificado más de 50 enzimas en los peroxisomas de diferentes tejidos. Se forman por gemación al desprenderse del retículo endoplasmático liso, aunque por sí mismos pueden abulatar cierta porción de su membrana produciendo nuevos peroxisomas sin derramar su contenido en el citoplasma. Dicha membrana protege la célula de los efectos dañinos del interior del peroxisoma. Las partículas de su interior suelen estar cristalizadas. Los peroxisomas tienen un papel esencial en el metabolismo lipídico, en especial en el acortamiento de los ácidos grasos de cadena muy larga, para su completa oxidación en las mitocondrias, y en la oxidación de la cadena lateral del colesterol, necesaria para la síntesis de ácidos biliares; también interviene en la síntesis de glicerolípidos, ésteres lipídicos del glicerol (plasmógenos) e isoprenoides; también contienen enzimas que oxidan aminoácidos, ácido úrico y otros sustratos utilizando oxígeno molecular con formación de agua oxigenada: RH2 + O2 → R + H2O2

El agua oxigenada es un producto tóxico, que se degrada rápidamente dentro del propio peroxisoma por la enzima oxidativa catalasa en agua y oxígeno usando como intermediarios de ciertas sustancias orgánicas (en la ecuación la variable R'). H2O2 + R'H2 → R' + 2H2O

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III.3.1.1.

Catalasa –Peroxidasa

En animales, el peróxido de hidrógeno sé destoxifica mediante las actividades de la catalasa y la glutatión peroxidasa. Aunque la catalasa no es esencial para algunos tipos de células en condiciones normales, tiene un importante papel en la adquisición de tolerancia al estrés oxidativo en la respuesta adaptativa de las células. La catalasa captura el H2O2 antes de que pueda escapar de la célula y lo convierte en oxígeno molecular. La catalasa es la enzima encargada de neutralizar el agua oxigenada, puede también neutralizar el peróxido de hidrogeno generado en mitocondrias, en el retículo endoplasmatico y en el citosol. La presencia de catalasa y peroxidasa son las que usan los peroxisomas en el hígado para descomponer las moléculas de alcohol en sustancias que puedan ser eliminadas del organismo.
III.3.1.2.

Oxidasas Flavinicas:

Oxidan sustratos formando agua oxigenada. El 25% de los ácidos grasos se degradan en los peroxisoma por un proceso de beta oxidación que va a dar lugar a la Acetil CoA. La diferencia con la mitocondria es que la primera reacción de oxidación en el peroxisoma produce agua oxigenada, pues es catalizada por una oxidasa flavínica. Las oxidas participan en reacciones metabólicas de oxidación utilizando el oxigeno molecular y produciendo peróxido de hidrogeno.

III.3.1.3.

Urato-Oxidasa

El urato oxidasa es una enzima homotetramérica que contiene cuatro sitios activos idénticos situados en la interfacia entre sus cuatro subunidades. Está compuesto de un número variable de aminoácidos (según la especie) siendo alrededor de 300 residuos de los mismos, con un peso molecular 33438 Dalton.

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El urato oxidasa es una enzima de la clase de las oxidoreductasas, que está presente en varios organismos tanto unicelulares como multicelulares, notándose sin embargo su ausencia en los seres humanos y algunos primates, presentándose activa en el catabolismo de la purina. Esta enzima cataliza la oxidación del ácido úrico a 5-hidroxiisourato, siendo el producto de la reacción inestable transformándose espontáneamente en alantoína. Ácido Úrico ++O2 + H2O → 5-hidroxiisourato + H O → alantoína +CO2 Ácido Úrico O2 + H2O → 5-hidroxiisourato + H2O2→ alantoína + CO2 2 2

III.3.1.4.

Superóxidos Dismutasa:

Enzima antioxidante natural del cuerpo que tiene la capacidad de neutralizar un destructivo radical libre, el anión superóxidos producidas en las reacciones de oxidación de las mitocondrias, retículo endoplasmatico y citosol. Es la primera línea de defensa contra los radicales libres en el cuerpo humano. III.3.1.5. Nucleasas Las nucleasas son enzimas que producen la rotura de los enlaces fosfodiester de la cadena polinucleotídica de los ácidos nucleicos. Los ácidos nucleicos son degradados en sus constituyentes por medio de las nucleasas especificas, primero en nucleótidos y luego en bases nitrogenadas. Las nucleasas se pueden emplear en el tratamiento de enfermedades producidas por virus, hongos, bacterias y algunos tipos de cáncer. Si el grupo catalítico está unido a un oligonucleótido anti sentido pueden producir la rotura del ARNm respectivo.
III.3.2.

lo cual impide la síntesis de la proteína codificada por el gen

Enzimas en Cloroplastos.

Los cloroplastos son orgánulos con forma de disco. Aparecen en mayor cantidad en las células de las hojas, lugar en el cual parece que pueden orientarse hacia la luz. Es posible que en una célula haya entre cuarenta y cincuenta cloroplastos, y en cada milímetro cuadrado de la superficie de la hoja hay 500.000 cloroplastos. Cada cloroplasto está recubierto por una membrana

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doble. El cloroplasto contiene en su interior una sustancia básica denominada estroma, la cual está atravesada por una red compleja de discos conectados entre sí, llamados lamelas. Muchas de las lamelas se encuentran apiladas como si fueran platillos; a estas pilas se les llama grana. Los cloroplastos desempeñan una función aún más esencial que la de las mitocondrias: en ellos ocurre la fotosíntesis; esta función consiste en utilizar la energía de la luz solar para activar la síntesis de moléculas de carbono pequeñas y ricas en energía, y va acompañado de liberación de oxígeno. Los cloroplastos producen tanto las moléculas nutritivas como el oxígeno que utilizan las mitocondrias. Principales enzimas Enzima Característica El complejo ATP sintetasa es una enzima situada en la membrana de los tilacoides de los cloroplastos , encargada de sintetizar ATP a partir de ADP y un grupo fosfato y la energía suministrada por un chorro de protones (H+). Responde a la síntesis de ATP de Mitchell. La síntesis de ATP gracias a esta enzima se denomina fosfoliración oxidativa del ADP. Esta enzima está compuesta de dos subunidades. Una anclada a la mitocondria o al tilacoide llamada FO (CFO en el caso de los tilacoides) y otras que sobresalen por la cara interna de la estructura llamada F1(CF1 en el caso de los tilacoides). Es un enzima que contiene como centro redox una molecula de FAD (Dinucleotido de nicotinamida y adenina) y, cuya función es catalizar la transferencia de electrones de forma secuencial desde dos moléculas de Ferrodoxina (transportador de un electrón) a una molecula de NADP+, con objeto de

• ATP – SINTETASA

• FERRODOXINA – NADP + REDUCTASAS A (FRN) FOTOSINTETICA

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almacenar

la

energía

luminosa

captada

durante la fotosíntesis en poder reductor en forma de NADPH. Rubisco es la forma abreviada con que normalmente se designa a la enzima cuyo nombre completo es ribulosa 1,5 difosfato carboxilasa oxigenasa. Esta enzima tiene un doble • RUBISCO comportamiento que justifica su nombre, catalizando dos procesos opuestos. Primero la fijación del CO2 a una forma orgánica, lo que justifica su clasificación como carboxilasa. Segundo la fotorrespiracion, en la que actúa como oxigenasa del mismo sustrato. Rubisco es la proteína mas abúndate de la atmosfera.

III.3.3. Enzimas en la mitocondria Mitocondria, diminuta estructura celular de doble membrana responsable de la conversión de nutrientes en el compuesto rico en energía trifosfato de adenosina (ATP), que actúa como combustible celular. Por esta función que desempeñan, llamada respiración, se dice que las mitocondrias son el motor de la célula. Se encuentran mitocondrias en las células eucariotas (células con el núcleo delimitado por membrana). El número de mitocondrias de una célula depende de la función de ésta. Las células con demandas de energía particularmente elevadas, como las musculares, tienen muchas más mitocondrias que otras. Por su acusado parecido con las bacterias aeróbicas (es decir, que necesitan oxígeno), los científicos creen que las mitocondrias han evolucionado a partir de una relación simbiótica o de cooperación entre una bacteria aeróbica y una célula eucariota ancestral. La mayoría de las enzimas mitocondriales guardan relación con la producción de energía, con las reacciones oxidativas que proporcionan la fuerza de

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inducción necesaria para muchas funciones celulares. III.3.3.1. Enzimas en la membrana externa de la mitocondria La membrana externa posee enzimas capaces de modificar a los acidos grasos para que estos puedan atravesar la membrana interna e ingresar en la matriz mitocondrial donde son degradados. En la membrana externa encontramos pocas enzimas entre las que más destacan: • Reductasas de citocromos b5 • Amina oxidasa • Sintetaza de acil CoA • Aceltransferrasa de colina • Fosfotransferrasa de colina • Quinasa de adenilato • Hexoquinasa • Fosfolipasa A2 III.3.3.2. Enzimas en el espacio intramembranoso Dada la presencia de la porina en la membrana externa su contenido de solutos es similar al del citosol.

Las principales enzimas son: • Quinasa de adenilato • Quinasa de adenilato • Quinasa de nucleósido difosfatado • Quinasa de nucleósido monofosfatado • Reductasa de xilulosa

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III.3.3.3. Enzimas de la membrana interna La membrana interna contiene más proteínas, carece de poros y es altamente selectiva; contiene muchos complejos enzimáticos y sistemas de transporte transmembrana, que están implicados en la translocación de moléculas. Esta membrana forma invaginaciones o pliegues llamadas crestas mitocondriales, que aumentan mucho la superficie para el asentamiento de dichas enzimas. En la mayoría de los eucariontes, las crestas forman tabiques aplanados perpendiculares al eje de la mitocondria, pero en algunos protistas tienen forma tubular o discoidal. En la composición de la membrana interna hay una gran abundancia de proteínas (un 80%), que son además exclusivas de esta organela. Las principales enzimas son: • Dehidrogenasa de succinato • Dehidrogenasa de NADH • Sintasa de ATP • Dehidrogenasa de 3-hidroxibutarato • Palmitoiltransferasa de carnitina • Dehidrogenasa de glicerol-3-fosfato • Hexoquinasa • Oxidasa de citocromo c

III.3.3.4. Enzimas de la matriz mitocondrial En la matriz mitocondrial tienen lugar diversas rutas metabólicas clave para la vida, como el ciclo de Krebs y la beta-oxidación de los ácidos grasos; también se oxidan los aminoácidos y se localizan algunas reacciones de la síntesis de urea y grupos hemo. Molécula Enzima Tipo de Reactivos Productos/

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/ reacción I. Citrato II. cis-Aconitato III. Isocitrato IV. Oxalosuccinato V. α-cetoglutarato VI. Succinil-CoA VII. Succinato VIII. Fumarato IX. L-Malato X. Oxaloacetato 1. Aconitasa 2. Aconitasa 3.Isocitrato deshidrogenasa 4.Isocitrato deshidrogenasa deshidrogenasa 6.Succinil-CoA sintetasa 7.Succinato deshidrogenasa 8.Fumarato Hidratasa 9.Malato deshidrogenasa 10. Citrato sintasa Deshidratación Hidratación Oxidación Descarboxilaci ón NAD+ + CoA-SH GDP + Pi FAD H2O NAD+ NADH + H+ NADH + H+ + CO2 GTP + CoA-SH FADH2 ón oxidativa Hidrólisis Oxidación Adición (H2O) Oxidación Condensación H2O NAD+ NADH + H+ Coenzima Coenzima s H2O

5.α-cetoglutarato Descarboxilaci

III.3.4.Enzimas en Lisosomas Saco delimitado por una membrana que se encuentra en las células con núcleo (eucariotas) y contiene enzimas digestivas que degradan moléculas complejas. Los lisosomas abundan en las células encargadas de combatir las enfermedades, como los leucocitos, que destruyen invasores nocivos y restos celulares. El tamaño de los lisosomas es muy variable, pero suele oscilar entre 0,05 y 0,5 micrómetros de diámetro. Cada uno está rodeado por una membrana que protege la célula de las enzimas digestivas del lisosoma. Las proteínas de la

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membrana protegen la actividad de las enzimas manteniendo la acidez interna adecuada; también transportan los productos digeridos fuera del lisosoma. Las enzimas lisosómicas se fabrican en el retículo endoplasmático rugoso y se procesan en el aparato de Golgi. Se distribuyen englobadas en sacos llamados vesículas de transporte que se funden con tres tipos de estructuras envueltas por membranas: endosomas, fagosomas y autofagosomas. En todos los casos, las enzimas digestivas suministradas por los lisosomas digieren los objetos envueltos en membranas y los reducen a compuestos sencillos que se envían al citoplasma como nuevos materiales de construcción celular. Las alteraciones de las enzimas lisosómicas pueden causar enfermedades. Los niños nacidos con la enfermedad de Tay-Sachs carecen de una enzima que degrada un lípido complejo llamado gangliósido. Cuando se acumula en el organismo, daña el sistema nervioso central, provoca retraso mental y causa la muerte a los cinco años. La inflamación y el dolor asociados con la artritis reumatoide y la gota tienen relación con la fuga de enzimas lisosómicas. a) Enzimas proteolíticas: • Catepsinas B, D, G, L • Elastasa • Colagenasa b) Hidrólisis de esteres: • Deoxiribonucleasa II • Ribonucleasa II c) Hidrólisis de glucósidos: • Glucoronidasa • Acetil hexosaminidasa • Hialuronoglucosaminidasa

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• Lisosima • Neuraminidasa d) Hidrólisis de lípidos: • Fosfolipasa A1 y A2 • Esterasa de colesterol FOSFATASA ACIDA La enzima fosfatasa ácida pertenece a la clase hidrolasa. Las fuentes principales de la fosfatasa ácida son la glándula prostática, plaquetas, el baso, los riñones y los glóbulos rojos. Estas fosfatasas tienen actividad óptima por debajo de un PH 7,0. La fosfatasa ácida prostática es de mayor interés clínico ya que puede encontrarse en concentraciones séricas elevadas de enzimas que produce en pacientes con carcinoma prostático con metástasis. La fosfatasa ácida es considerada un marcador lisosómico. Esta enzima se encuentra en polimorfo nucleares, neutrófilos, macrófagos, fibroblastos y linfocitos. También fue relacionada con procesos de lisis celular, queratinización, metabolismo de huesos, inflamación y en la síntesis y degradación de colágeno. III.3.5. Enzimas en Retículo Endoplasmático También llamado retículo endoplásmico, sistema de membranas que fabrica y transporta materiales dentro de las células con núcleo (células eucariotas). El RE está formado por túbulos ramificados limitados por membrana y sacos aplanados que se extienden por todo el citoplasma (contenido celular externo al núcleo) y se conectan con la doble membrana que envuelve al núcleo. Hay dos tipos de Retículo Endoplasmático: liso y rugoso. a) Enzimas en Retículo Endoplasmático Liso

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El RE liso (REL) desempeña varias funciones • Interviene en la síntesis de casi todos los lípidos que forman la membrana celular y las otras membranas que rodean las demás estructuras celulares, como las mitocondrias. Las células especializadas en el metabolismo de lípidos, como las hepáticas, suelen tener más RE liso. • Liberación de glucosa a partir de Glucosa 6-fosfato vía Glucosa 6fosfatasa. • El RE liso también interviene en la absorción y liberación de calcio para mediar en algunos tipos de actividad celular. En las células del músculo esquelético, por ejemplo, la liberación de calcio por parte del RE activa la contracción muscular. • Además el RE liso participa en los procesos de detoxificación celular, siendo el lugar donde son metabolizadas una gran cantidad de drogas como fenobarbital, alcaloides, hidrocarburos aromáticos. La detoxificación tiene lugar por una serie de enzimas oxigenasas entre las que se encuentra el citocromo P450 que dada su inespecificidad son capaces de detoxificar miles de compuestos hidrófobos transformándolos en hidrófilos, más fáciles de excretar.

Enzimas principales: ENZIMA CITOCROMO P -450 FUNCIÓN Realizan la desintoxicación en el hígado de diversos compuestos orgánicos. Estas enzimas se caracterizan por su falta de especificidad de sustrato y pueden oxidar miles de compuestos hidrófobos distintos y convertirlos en sustancias mas hidrofílicas y más fáciles de excretar. Los efectos no siempre son positivos. Por ejemplo, el compuesto relativamente inocuo venzo pireno que se forma cuando se requema la carne en una parrilla se convierte en un carcinogenopotente por efecto de las enzimas desintoxicantes del REL. Las enzimas del citocromoP-450

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GLUCOSA 6FOSFATASA

metabolizan muchos medicamentos prescritos y la variación genética en estas enzimas en los seres humanos explican la diferencia en la efectividad y acciones colaterales de muchos fármacos entre unas personas y otras. Cuando se requiere energía esta enzima convierte el glucógeno en glucosa 6-fosfato luego retiran el grupo Fosfato, lo que genera moléculas de glucosa en la sangre, que las lleva a los tejidos del cuerpo. Esta enzima activada por el Mg+2 se encuentra en la cara luminar del (RE) de los hepatocitos y células renales ésta enzima no se encuentra en el músculo ni en el cerebro por lo que la gluconeogénesis no se da en estos tejidos. La glucosa 6 fosfatasa es una enzima de membrana y está localizado en su centro activo dentro del retículo endoplasmatico (RE). La glucosa-6fosfato se transporta hacia el interior del RE por una proteína T1, allí eshidroglucosa más Pi por la glucosa – 6 - fosfatasa, y entonces la glucosa pasan de nuevo al citosol por las proteínas T3 la glucosa 6 – fosfatasa está estabilizada por una proteína asociada unida a Ca2 La relación catalizada por la glucosa 6 fosfatasa no requiere de síntesis de ATP si no que es una simple hidrólisis de un éster fosfato. Glucosa 6 fosfato + agua glucosa Pi - 138 K/ mol La deficiencia de la enzima glucosa 6 fosfatasa se denomina enfermedad de von Gienke o glucogenosis de tipo I.

b) Enzimas del Retículo Endoplasmático Rugoso Presentan ribosomas en su superficie externa adheridos a proteínas denominadas riboforinas. Se ubica cerca del núcleo, el retículo endoplasmático rugoso es el punto inicial de la vía biocinética: es el punto donde se sintetizan las proteínas, cadenas de carbohidratos y fosfolípidos que viajan por los compartimientos membranosos de la célula. Funciones: • Es responsable de la síntesis y segregación de proteínas no citosólicas.

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• Síntesis de proteínas en ribosomas unidos con la membrana o con ribosomas libres.

Síntesis de proteínas secretoras, lisosómicas o vacuolares vegetales en los ribosomas unidos a membranas. Procesamiento Endoplasmático. de proteínas recién sintetizadas en el Retículo

• Síntesis de proteínas integrales de membrana en los ribosomas unidos a la membrana. Principales enzimas en el Retículo Endoplasmático rugoso: Enzima Función Agrega los carbohidratos a las proteínas nacientes y junto con la peptidasa de señal son proteínas integrales de la membrana que están próximas a la translocación y actúan sobre las proteínas nacientes conforme entra la luz del retículo Endoplasmático, trasfiere unos monosacáridos específicos de un donador de azúcar apropiado a un aceptor de azúcar apropiado. La molécula donadora siempre es el azúcar de nucleótido y la receptora es el extremo creciente del carbohidrato. Retira la porción N-terminal de la mayoría de los polipeptidos nacientes que contiene el péptido de señal. Cataliza la conversión de la fructuosa 6fosfato en manosa 6 fosfato, una reacción crucial en la vía que hace que la manosa este disponible para incorporarla a los oligosacaridos. La afeccion puede tratarse con complementos orales de manosa. Al principio el tratamiento se probo que sufria de hemorragias

• OLIGOSACARIL TRANSFERRASAS

• PEPTIDASAS DE SEÑAL • ISOMERASAS DE FOSFOSFOMANOSA

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gastrointestinal intolerable, una de las complicaciones frecuentes de la enfermedad. Unos meses después de iniciar el complemento de manosa el niño lleva una vida normal. Cataliza la unión entre los enlaces de • ISOMERASA DE DISULFURO DE PROTEINA (PDI) disulfuro y los residuos de cisterna de las cadenas polipeptidicas. Los enlaces de disulfuro tienen una función esencial en el mantenimiento de la estabilidad de las proteínas.

III.3.6. Enzimas en el Aparato de Golgi La principal función del aparato de Golgi es la secreción de las proteínas producidas en los polisomas del RE rugoso, las cuales se incorporan por la cara ‘cis’ procedentes de las vesículas de transición. A continuación atraviesan la zona media y emigran a la cara ‘trans’; desde aquí pasan a las vesículas secretoras para ser eliminadas por un proceso de exocitosis al medio extracelular. En este proceso, las membranas de las vesículas se fusionan con la membrana plasmática, de tal forma que esta se regenera. Algunas vesículas secretoras que contienen enzimas hidrolíticas se

transforman en lisosomas. Además, en este orgánulo ocurre la glucosilación de proteínas y lípidos para producir glicoproteínas y glicoesfingolípidos. Los azúcares, oligosacáridos que ya se habían unido a proteínas y lípidos en el RE, son eliminados y sustituidos por otros nuevos en el aparato de Golgi. Algunos de los productos que se secretan intervienen en la formación de la pared celular de las células vegetales. Principales enzimas

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“DISTRIBUCIÓN DE ENZIMAS EN LOS COMPARTIMIENTOS CELULARES”

ENZIMA

FUNCIÓN EN EL APARATO DE GOLGI Participan en el proceso de glucosilación. Y dentro de estas está la transferasa de sialilo (que coloca un acido siálico en la posición terminal de la cadena en células animales. Se localiza en extremo trans de la pila de Golgi. Entre otras tenemos a: sialiltransferasa, galactosiltransferasa, N-acetilglucosaminiltransferasa,

galactosiI-N-acetilglucosamina transferasa, etc. (estas • GLUCOSIL últimas enzimas están involucradas en la transferencia ácido CMP-neuramínico (CMP-NANA), UDPgalactosa y UDP-acetilglucosamina a los oligosacáridos precursores, las cuales están altamente concentradas en la fracción de Golgi de hígado de rata) Una enzima residente de las cisternas mediales del aparato de Golgi. La enzima aparece en una vesícula y las cisternas. Se presume que la vesícula marcada • MANOSIDASA II transporta la enzima en sentido retrógrado para compensar el movimiento de avance de la enzima como resultado de la maduración de las cisternas. TRANSFERASAS de

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El Aparato de Golgi también presenta enzimas que se hallan en el Retículo endoplasmático, como NADH citocromo b5 reductasa, NADH citocromo c reductasa y 5-nucleotidasa. Además el Aparato de Golgi se encarga de ensamblar las enzimas que se van encontrar presentes en el lisosoma. GLUCOSIL TRANFERASAS Dentro de estas tenemos: Participan en el proceso de glucosilación Involucradas en la transferencia de Lipasa Fosfolipasa A1, A2 Fosfatasa ácida (varios tipos)
• GALACTOSIL-N

Fosfoproteína - fosfatasa Fosfodiesterasa Fosfolipasa e Antisulfatasa A y B Lisozima (Muramidasa) Neuraminidasa Glucosidasa Glucosidasa Galactosidasa Glucoronidasa Hialuronidasa Carboxipeptidasa Catepsina A

• Hidrolasas

que

actúan

sobre

compuestos glucósidos

• Hidrolasas que actúan sobre uniones peptídicas

Carboxipeptidasa ácida Dipeptidasa Catepsina Bl, B2, C, D, E Colagenasa

• Enzimas que actúan sobre uniones anhidrido - ácido en anhidridos que tienen fosforilo • Enzimas que actúan sobre las uniones P -N
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Pirofosfatasa Arilfosfatasa

Fosfamidasa

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III.3.7. Enzimas en el Glioxisoma Son organelos que se encuentran en las células eucariota, particularmente en los tejidos de almacenaje de lípidos de las semillas, y también en los hongos filamentosos. Los glioxisomas son peroxisomas especializados que convierten los lípidos en carbohidratos durante la germinación de las semillas. En los glioxisomas, los ácidos grasos se hidrolizan a acetil-CoA mediante las enzimas β-oxidación peroxisomiales. Además, contienen las enzimas clave del ciclo del glioxilato (isocitrato liasa y malato sintasa). Así realizan la ruptura de los ácidos grasos y producen los productos intermedios para la síntesis de azúcares por gluconeogénesis. Principales enzimas del Glioxisoma ENZIMA Isocitrato liasa. Malato sintasa. FUNCIÓN Enzima clave del ciclo del glioxilato. Enzima clave del ciclo del glioxilato.

III.4.
III.4.1.

ENZIMAS EN EL NÚCLEO Enzimas enlazadas a Cromatina Enzima • ARN Función ARN polimerasa II, localizada en el núcleoplasma Sintetiza precursores de ARN mensajero. Esta
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POLlMERASA II

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polimerasa es el tipo más estudiado, y se requieren factores de trascripción para que se una a los promotores del ADN. Produce ARN heterogéneo nuclear (ARN-hn) que tras el procesamiento da lugar a los ARN mensajeros proteínas. Las ARN polimerasas o transcriptasas, a diferencia de lo que ocurre con las ADN polimerasas, carecen de función "correctora de pruebas". Esta diferencia se debe en primer lugar a que los transcritos son cortos y la probabilidad de que uno de los ARN posea una alteración es baja, y en segundo lugar a que la vida media de los ARN es corta y pronto se vuelve a sintetizar otro ARN nuevo. Por consiguiente el que exista un ARN con una alteración no es grave ya que durará poco y será remplazado pronto por otro nuevo sin la alteración. Sin embargo, un error en la replicación del ADN puede transmitirse a todas las células que deriven por división de la célula afectada. (ARN-m) que se traducen a

• ARN POLlMERASA III

Las ARN polimerasas III sintetizan ARN de transferencia, ARN ribosómico de 5S y otros pequeños ARN encontrados en el núcleo celular y en el citoplasma. Las ARN polimerasas están constituidas de al menos 10 subunidades, ciertas de entre ellas son comunes a las 3 enzimas mencionadas. Las más grandes subunidades de cada polimerasa son homólogas entre ellas y entre sus sub-unidades a, b y b' al ARN polimerasa de la E.coli.

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Los complejos enzimáticos de las polimerasas eucariontes son separables en columnas de intercambio iónico y sus actividades catalíticas de polimerización son distinguibles unas de otras por su sensibilidad relativa a la droga alfa amanitina. Así se tiene que el tipo enzimático más sensible es la ARN polimerasa II (que transcribe ARN mensajeros) y la enzima menos sensible, o relativamente resistente, es la ARN polimerasa I (que transcribe ARN ribosomal). La ARN polimerasa III presenta una sensibilidad intermedia a la droga. Una enzima que cata liza la hidrólisis de nucleósidos trifosfatos a nucleósidos difosfatos. También nucleótidos difosfatos • TRIFOSFATASA DE NUCLEOSIDO y puede catalizar El la hidrólisis de trifosfatos, FAD. difosfatos, nucleósido tiamina trifosfato

fosfohidrolasas I y II son subtipos de la enzima y se encuentran principalmente en virus. También cumple otra función, tal como

transportar Ca2+a través de la membrana. Estas enzimas pueden ser dependientes de Ca2+, Mg2+, aniones, H+, o ADN. • ADN POLIMERASA La ADN polimerasa es una enzima que cataliza la síntesis de ADN a partir de desoxirribonucleótidos y de una molécula de ADN plantilla o molde que es la que será "copiada". Tras la acción de la ADN polimerasa I y una vez que se han eliminado y añadido alrededor de unas 10 bases, interviene la enzima ADN ligasa, que une los extremo libres del fragmento recién formado con el resto de la cadena, recuperando así el ADN su estructura normal. Esta enzima interviene en dos procesos: Por un lado, en la duplicación del ADN en forma

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de cromatina para dar a cada célula hija una copia del ADN original en el proceso de la mitosis. En este caso, la enzima copia la cadena de nucleótidos de forma complementaria (A por T, C por G). Por otro lado, en el proceso de transcripción del ADN, copiando el ADN de de una de las cadenas de nucleótidos, pero esta vez, la copia se realiza en forma de ARN, también de forma complementaria (A por U, C por G). La propiedad de las ADN polimerasas para replicar hebras de ADN se utiliza para la reacción en cadena de la polimerasa, conocida como PCR por sus siglas en inglés, para obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN particular, amplificándolo para propósitos de investigación. En cada horquilla de replicación, la ADN polimerasa y otras enzimas sintetizan dos nuevas cadenas de ADN que son complementarias respecto a las 2 cadenas originales. Durante este proceso, la ADN polimerasa reconoce una base nucleotídica no apareada de la cadena original y la combina con un nucleótido libre que tiene la base complementaria correcta. Luego, la ADN polimerasa cataliza la formación de nuevos enlaces covalentes que ligan el fosfato del nucleótido libre entrante con el azúcar del nucleótido previamente. III.4.2. Enzimas enlazadas al Nucleolo Enzima METILASAS DEL RNA Función Es una enzima que cataliza la metilación de bases o ribosa en las moléculas de ARN. Otros tipos de metilasas: • DAM La metilasa dam pone un metilo sobre el nitrógeno 6 (m6N) del adénine en la

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secuencia GATC. El ADN listo a partir de células dam + contendrá Gm6ATC y no será cortando por enzimas bloqueadas por este modo de metilación (Mbo I y Bam HI). • DCM Las metilasas dcm ponen un metilo sobre el carbono 5 del citosina (m5C) en la secuencia CCAGG o CCTGG. El ADN listo a partir de células dcm + contendrá Cm5(A/T)GG y no será cortando por enzimas bloqueadas por este modelo de metilación (Bst OI). La función de la quinasa en la célula Las quinasas incluyen en un gran número de enzimas que regulan la actividad de otras proteínas y, más indirectamente, las actividades de las células. Todas las quinasas añaden grupos de fosfato a otras moléculas, a menudo otras proteínas, en la célula. La fosforilación de las proteínas, la adición de un grupo de fosfato a una cadena del aminoácido, es una acción regulatoria muy importante. Por la razón de que cada grupo de fosfato lleva consigo dos cargas negativas, la adición de un fosfato puede alterar la forma de la proteína. La forma alterada de una proteína es a menudo relacionada con la actividad alterada de la proteína. La habilidad de cambiar la conformación de una proteína entre dos formas diferentes permite un control regulatorio sobre la actividad de la proteína. La fosforilación (la adición de un grupo de fosfato a una proteína) por las quinasas es un proceso reversible, y las proteínas pueden ser desfosforiladas (removimiento de un grupo de fosfato) por enzimas que se conocen proteína-fosfatasa. Estos dos grupos de enzimas a menudo trabajan juntas para "apagar" y "encender" las señales celulares. Las quinasas juegan un papel muy importante en varios procesos de señalización

QUINASA DE PROTEÍNAS

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intracelular, incluyendo aquellos que controlan el crecimiento y la división celular. Las quinasas y el cáncer El crecimiento celular y los procesos del ciclo celular se encuentran activados constitutivamente en las células cancerosas. Las funciones normales ejercidas por las quinasas y las fosfatasas ya no sirven. Una característica clave de las células cancerosas es su habilidad de reproducirse en la ausencia de señales externas tales como los factores de crecimiento. En el proceso normal, los factores de crecimiento que son emitidos por otras células se ligan a los receptores en la superficie celular, estimulando a que la célula se divida. Las células cancerosas encienden estos procesos en la ausencia de un factor de crecimiento. Esto puede ocurrir por una mutación en un gen de una quinasa o de una fosfatasa. En un ejemplo, la leucemia crónica mieloide, una translocación cromosomal en particular (llamado el cromosoma Philadelphia) ha sido identificada que crea una quinasa nueva que se encuentra "encendida" todo el tiempo. Los procesos que esta quinasa controla permanecen, efectivamente, siempre activos. Esto resulta en la proliferación de células cancerosas. GHGKGHJJ Ha sido implicada en diferentes facetas de la función celular. En mamíferos, es una de las principales fosfatasas de serina/treonina y modula muchas proteínas involucradas en transducción de señales, incluyendo moléculas de superficie que funcionan como receptores, PQ citosólicas y factores de transcripción. Además, modifica proteínas de importancia en la regulación del ciclo celular y en la transformación, crecimiento y

QUINASA DE PROTEÍNAS

FOSFATASA DE LA FOSFOPROTEINA

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división celular. Las ribonucleasas (RNasas), pertenecientes a la superfamilia Ribonucleasa A, son enzimas que participan en varios procesos fisiológicos, que van desde el procesamiento alternativo del RNA hasta la angiogénesis. Estas enzimas son expresadas por diferentes tejidos y exhiben especificidades variables contra diferentes sustratos de RNA. El potencial terapéutico de las RNasas se ha sugerido en procesos oncogénicos; adicionalmente, se ha descrito que tienen actividad antiviral directa y el potencial de activar células del sistema inmune innato induciendo su maduración y la producción de citoquinas proinflamatorias. Nuestro grupo de investigación ha realizado estudios que señalan la capacidad de cuatro RNasas recombinantes: EDN, -4EDN, RNasa A y angiogenina de inhibir la replicación del virus de la inmunodeficiencia humana tipo 1 en linfocitos T de sangre periférica activados. En este artículo se revisará la clasificación de las ribonucleasas que constituyen la superfamilia RNasa A y se describirá, en forma detallada, lo que se conoce de la función biológica, acción antiviral y mecanismo de acción de las RNasas a las que se les ha reportado actividad antiviral.

RIBONUCLEASAS

IV.

CONCLUSIONES

 Prácticamente todas las reacciones químicas dentro de las células son

catalizadas por las enzima.

 Las enzimas incrementan la velocidad de las reacciones uniendo

sustratos en la posición adecuada, alterando la conformación de los

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sustratos para aproximarlos al estado de transición y participando directamente en las reacciones químicas.

 Las enzimas son muy importante a que serían la clave de todos los procesos vitales y fisiológicos que rigen los fenómenos de la vida.

 Todas las actividades de las enzimas son reguladas para cubrir las necesidades esenciales de la célula.

 La actividad enzimática puede ser controlada a través de la unión de moléculas pequeñas, de interacción con otras proteínas y de modificaciones covalentes.

 Las coenzimas trabajan junto con las enzimas para transportar grupo bioquímicos entre sustratos.

V.

ANEXO

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ENZIMAS Y MANIPULACIÓN GENÉTICA La investigación genética necesita la manipulación de ADN para poder construir teorías sobre los mecanismos que suceden en las células in vivo y elucidar la estructura del genoma y su organización (intrones, exones, elementos de regulación), también para poder desarrollar técnicas nuevas de curación y terapia mediante la caracterización de los genes terapéuticamente interesantes, y para la fabricación de plantas y animales de las características deseadas, con un mayor rendimiento agrícola y ganadero. Es importante mantener siempre en el pensamiento que la manipulación genética sirve un fin muy determinado, que a veces se difumina cuando se entra en profundidades técnicas. Técnicas básicas: Hay que tener en cuenta que toda la manipulación genética implica un aislamiento del medio celular, por lo que las condiciones de experimentación son todas in vitro, y no tienen nada que ver con el metabolismo de las ácidos nucleicos. Con esta premisa en mente, los resultados que se pudieran obtener mediante estas técnicas siempre deberán ser contrastados y verificados antes de extrapolarlos a la situación de un organismo vivo. Estas técnicas utilizan las enzimas presentes en las células como herramientas para poder cortar, empalmar, duplicar, amplificar y recombinar los fragmentos de ADN con los que se trabaja; en suma, las enzimas efectúan las mismas funciones que en el medio fisiológico, pero libres de todo factor de regulación, para hacer su actividad más predecible y permitir una manipulación al antojo del experimentador. Ésta es la principal diferencia entre los sistemas in vivo e in vitro.

Métodos enzimáticos.

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Las técnicas de manipulación enzimática de los ácidos nucleicos son mucho más finas y específicas que las anteriores, por lo que se puede hablar de disección génica. Las enzimas, llamadas nucleasas, se extraen de diversos organismos, generalmente microscópicos, y hay de todos los tipos: endo- y exonucleasas, ADN o ARNasas, específicas de secuencia o no, específicas de hebra sencilla o de doble hebra, y todas las combinaciones entre ellas. En la siguiente lista se detallan algunas de las más utilizadas. ADNasa I. Es una endonucleasa de E. coli que corta ADNds y ADNss, sin especificidad de secuencia, pero preferentemente detrás de pirimidinas. El corte al azar sobre ADNds se realiza en distintos sitios en cada hebra si el medio tiene Mg2+, pero si el catión es Mn2+ los dos cortes están generalmente en el mismo sitio. El uso indiscriminado (al azar) de esta enzima permite determinar zonas de actividad de la cromatina mediante la mayor abundancia de cortes, lo que significaría que el ADN está más expuesto al corte. Exonucleasa III. Otra enzima de E. coli que elimina nucleótidos uno por uno desde los extremos 3'-OH. Actúa sobre todos los tipos de ADNds que tengan esos extremos (lineal y circular con una muesca), y en los ADNds se utiliza para fabricar extremos cohesivos (extremos de una molécula de ADNds en los que una de las hebras sobresale un poco sobre la otra). ADN polimerasa I. Es la reina de la fiesta por excelencia. Se obtiene de E. coli y fue una de las primeras en estudiarse y caracterizarse. Como todas las ADN polimerasas conocidas, tiene tres actividades diferenciadas: ADN polimerasa 5'-3' (necesita empezar por un extremo 3'-OH libre), exonucleasa 5'-3' (para eliminar cebadores in vivo), y ADN exonucleasa 3'-5' (Actividad correctora de errores). La actividad exo5'-3' se utiliza para sustituir una hebra en un ADNds con una

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muesca (producida por la ADNasa I) por otra exactamente igual, pero marcada, en lo que se llama marcaje por desplazamiento de la mella. Sin embargo, esta actividad es tan potente que puede significar un problema, al eliminar cualquier hebra con un extremo 5'-fosfato, por lo que se ha diseñado una ADN polimerasa especial, llamada ADN polimerasa Klenow (que sólo consta de la subunidad con ese mismo nombre, el núcleo), en la que falta la actividad exonucleasa 5'-3'. Estas ADN polimerasa especiales no pueden hacer traslado de la mella, sino sólo rellenar huecos o eliminar extremos cohesivos al alargar el extremo más corto sobre el más largo (rellenar los huecos generados con Bal31). Otra función de esta polimerasa es la técnica de polimerización con iniciación al azar (random priming), en la que un oligo pequeño (4 ó 6 nt) se une más o menos inespecíficamente a un fragmento de ADN desnaturalizado (la unión inespecífica se obtiene suavizando las condiciones de hibridación). El oligo presenta el extremo 3'-OH necesario para comenzar la síntesis, que ha de hacerse a un pH ligeramente ácido (6,6) para minimizar el efecto de la actividad correctora de errores, que evitaría la polimerización sobre el oligo, al no aparear exactamente éste con el ADN molde.

VI.

BIBLIOGRAFÍA
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