RADICAIS LIVRES BONS, MAUS E NATURAIS

LINUS PAULING
1954 Prmio Nobel de Qumica.

Base das ligaes covalentes entre os tomos

(1901-1994) Dedicou-se ao estudo dos RADICAIS LIVRES: responsveis pelo aparecimento de doenas e pelo envelhecimento do organismo.

1970 Uso de megadoses de vitamina C. 1000 mg de vitamina C: reduziria 45% dos resfriados. Ingesto diria recomendada de 60mg. Linus :12000 mg/dia

As teorias de Pauling: Medicina Ortomolecular

Equilbrio qumico do organismo

Vitaminas , minerais e nutrientes

Existe inmeros grupos de pesquisa que estudam os radicais livres:

No Brasil: Associao dos radicais livres com doenas; Compostos naturais com propriedades antioxidantes; Sntese de compostos antioxidantes .

O QUE RADICAL LIVRE?

uma espcie qumica que possui um eltron desemparelhado, ou seja, ocupando um orbital atmico ou molecular sozinho.

Molcula altamente instvel e reativa, meia vida muito curta tenta estabilizar-se....

Retirando eltrons, de molculas estveis... Integrantes da estrutura celular...

Lipdios, Protenas e DNA

Representao dos orbitais mais externos

MOLCULA ESTVEL

RADICAL LIVRE

composto normal: ESTVEL

MOLCULA INSTVEL

Exemplo:Formao do radical livre superxido (O2-.), que

derivado do oxignio molecular. 1. O O2 composto por dois tomos de O:

2. Para formar o O2, os 2 eltrons solitrios do subnvel p de um O

fazem intercmbio com os 2 eltrons de outro O, formando um composto estvel com 12 eltrons na ltima camada (L).

3. Quando no metabolismo normal ocorrer uma reduo do . O2, forma o radical superxido (O2- ), considerado instvel por possuir nmero mpar (13) de eltrons na ltima camada L:

Produzidos:

-Quebra de ligaes covalentes. Nos sistemas biolgicos resultam de reaes de xidoreduo.

Todo radical livre de oxignio uma ESPCIE REATIVA DE OXIGNIO, mas nem toda espcie reativa de oxignio um radical livre de oxignio!!!

Cl Br N

Radical Superxido (O2-)

Radical mais comum e abundante da clula Primeira das espcies formadas pela reduo do oxignio por um nico eltron, pode agir como oxidante ou como redutor, dando origem a outras espcies reativas.

O2 + e- O2 Produzido pela cadeia de transporte de eltrons ou por ao de clulas fagocitrias (neutrfilos, moncitos, e macrfagos) para defesa bactericida. Altamente reativo, meia vida de milissegundos e, em razo disso, dificilmente atravessa as membranas, no pode se difundir para longe do stio de origem.

Perxido de hidrognio (H2O2)

Formado principalmente na matriz mitocondrial, durante o processo de reduo do oxignio, ou pela dismutao do radical superxido pela enzima SOD. 2 O2- + 2H+ H2O2 + O2 Metablito do oxignio extremamente deletrio, porque . participa da reao que produz o OH em presena de metais como o Ferro.

O H O muito difusvel dentro e entre as clulas in vivo

Experimento

H2O2 no reage diretamente com DNA

H2O2 permeia membranas celulares e gera radical OH. in situ em razo dos metais de transio ligados ao DNA Quelante impede ons metlicos participe reaes xido-reduo

Radical hidroxila (OH.)

Espcie mais reativa e mais letal, tem uma meia-vida extremamente curta (10-9), reagindo rapidamente com os alvos celulares + prximos lesar DNA, protenas, carboidratos e lipdios.

Pode inativar vrias protenas ao oxidar seus grupos sulfidrilas Modificaes de bases(-SH) a pontes purnicas e dissulfeto (-SS). pirimidnicas,

levando inativao ou mutao do DNA.

Reaes importantes p/ formao do

Radical hidroxila (OH.)

No h enzima que catalisa a sua remoo maior de lesar as clulas.

capacidade

Radical peroxila (LOO.) e radical alcoxila (LO.)

So formados durante a decomposio de perxidos orgnicos e reaes de carbono radicalar com oxignio

PEROXIDAO LIPDICA

METAIS

Quais so as fontes de EROs?

FONTES ENDGENAS
So produzidos em organismos AERBIOS tanto em situaes NORMAIS quanto PATOLGICAS. Respirao aerbia
Inflamao Peroxissomos

Citocromo P-450

Mitocndria
Mitocndrias 90% do oxignio molecular consumido pelos organismos aerbios

ATP produzido durante o metabolismo dos nutrientes

Estgio da respirao celular

Estgio 1: molculas combustveis so degradadas levando a formao de Acetil- CoA.

Estgio 2: O acetil CoA entra no ciclo do cido citrico onde oxidado enzimaticamente. A energia liberada das oxidaes conservada nos transportadores de eltrons reduzidos NADH e FADH2.

Estgio 3: As coenzimas so oxidadas e os eltrons conduzidos por uma cadeia transportadora de eltrons at o oxignio(aceptor final de eltrons ) que completamente reduzido a gua . Durante a passagem desses eltrons uma grande quantidade de energia liberada e conservada na forma de ATP,: Fosforilao oxidativa.
Manter processos vitais

Cadeia respiratria
Principal fonte fisiolgica de EROS. Do O2 consumido na CR 95 a 98% reduzido por 4e- a H2O, atravs de etapas subseqentes de redues parciais por um e-. 2 a 5% do O2 reduzido de forma incompleta por um s eltron, formando o radical superxido.

2 a 5%

95 a 98%

Cadeia respiratria

Provvel stio de formao do radical O2.devido ao vazamento de eltrons a nvel da coenzima Q, entre o complexo I e complexo III da CR.

A evidncias de formao de outras EROs: perxido de hidrognio e radical hidroxila.

Um adulto de 70 kg em repouso : 353 litros de oxignio/dia =14,7 mol de oxignio/dia 1% do oxignio for reduzido para superxido= 0,147 mol de superxido/dia, ou 1,7 kg em um ano.

Camundongos nocautes para SOD1sensvel aos oxidantes;

expresso

de

Cu,Zn-

Privados de Mn-SODmorrem 10 dias aps o nascimento

Dieta rica em calorias, Mitocndrias e radicais livres

A energia que a clula precisa para exercer as suas funes retirada dos nutrientes ingeridos Enquanto houver nutrientes disposio ela continua a trabalhar e produzir Radicais livres

Desgaste mitocondrial

Envelhecimento

ENVELHECIMENTO NORMAL consequncia do acmulo em biomolculas de leses promovidas pelos EROS durante o metabolismo normal.

OH.....

Citocromo P450
Responsvel pela detoxificao de drogas podem converter-se em intermedirios reativos que iniciam a peroxidao lipdica.

Catalisa reaes que geram O2.mediante mecanismos dependentes de NADPH.

Citocromo P450

Condies p/ formao de RL envolve ons de metais de transio, oxignio e reaes de transferncia de eltrons

Utiliza oxignio para hidroxilao de seus substratos aumentando sua polaridade, com o fim de torn-los mais solveis e ajudar na sua excreo. -

Fagocitose

Neutrfilos e macrfagos combatem os microorganismos invasores pela sntese de ERO.

Possuem a enzima NADPH oxidase, que reduz 100% do O ao radical O2.- que em presena de Fe2+ transformase no radical OH. Quando ativados por protenas especficas que sinalizam o organismo invasor:

Acelerao do consumo de O2 EXPLOSO RESPIRATRIA

Defesa contra invasores

Phox = phagocyte oxidase

FONTES EXGENAS

Herbicidas; Antibiticos; Poluentes do ar; Raios X, ; Raios UV; Cigarro; lcool; Alimentos

Radiao
A incidncia da radiao UV, raios X e gama produz o radical OH. nas clulas da pele. Papel importante na carcinognese EROs depletam os sistemas de defesa antioxidantes;

CIGARRO
Fumaa do cigarro mistura complexa (4000 compostos) Cada tragada produz cerca de 1014 EROs; Radicais superxido, hidroxila, perxido de nitrognio, oxignio singlete, xido ntrico, radical alcoxila, peroxila, peroxinitrito e dixido de nitrognio.

A produo contnua de EROs durante os processos metablicos levou ao desenvolvimento de muitos mecanismos de defesa antioxidante para limitar os nveis intracelulares e impedir a induo de danos.

Os seres humanos s conseguem tolerar o oxignio porque, no processo evolutivo, nossos ancestrais desenvolveram poderosos mecanismos que minimizam seus efeitos txicos.

Antioxidantes

Neutralizam as EROs gerados pelo metabolismo celular ou por fontes exgenas, impedindo o ataque sobre os lipdios, as protenas e o DNA, evitando a formao de leses e perda da integridade celular.

Os radicais livres se formam em condies fisiolgicas em propores controladas por mecanismos de defesa celular;

Em condies patolgicas a produo de RL pode aumentar substancialmente.

ESTRESSE OXIDATIVO

Estresse oxidativo = Estado de Desequilbrio = Doena

Pode resultar de uma situao em que ocorre uma diminuio nos nveis das defesas antioxidantes, uma elevada produo de EROs ou uma combinao de ambos os fatores;
EROs: O2- , H2O2 , OH-

Antioxidantes

Esse quadro de estresse oxidativo pode causar danos a todas as estruturas celulares, incluindo DNA, lipdios e protenas;

Distrbios do equilbrio entre a formao e a remoo das espcies reativas so importantes na patognese de muitas doenas, como por exemplo, no cncer, diabetes, Alzheimer, Parkinson, hipertenso.

Biomarcadores de estresse oxidativo

PEROXIDAO LIPDICA
Cadeia de reaes, que resulta deteriorao oxidativa de cidos graxos poliinsaturados das membranas biolgicas.

importante alvo para o ataque de EROs:

HO, O2-, NO2, RO, ROO , ons Cu e Fe
.

46

H metilnicos bisallicos que so mais suscetveis abstrao por agentes oxidantes

Uma vez determinado o carbono de um lipdio oxidado, esta oxidao se propaga por toda a membrana por reaes em cascata, degradando os lipdeos em outras molculas.

Reao em cadeia: INICIAO, PROPAGAO E TERMINAO

Radical de lipdeo

Radical peroxila

Hidroperxido de lipdeo

Processo promove grave alterao da membrana celular, causando perda da fluidez, alterao da funo secretora e dos gradientes inicos transmembrana; Alm disso, tem sido observada perda da seletividade na troca inica, com liberao do contedo de organelas, levando formao de produtos citotxicos (MDA) e at a morte celular;

Peroxidao Lipdica

Oxidao dos lipdios pode ser avaliada pelo MDA (Malondialdedo) - produto de quebra de hidroperxidos de lipdeos)

Ensaio referido como substncias reativas ao cido tiobarbitrico (TBARS). A sua condensao com o cido tiobarbitrico (TBA) forma produtos, que podem ser determinados por absoro no visvel (532 nm) ou por fluorescncia ( exc= 515 nm e em = 553 nm).

TBARS

Medida peroxidao

cidos graxos Membranas Alimentos

Vantagens:
o

Plasma/Soro adicionado o TBA reage com MDA em meio cido e alta temperatura, cromgeno rseo, medido espectrofotometricamente (532nm).

Protenas

Macromolcula mais abundante Catalisadores Transportam e armazenam outras molculas (O2) Fornecem apoio mecnico e proteo imunitria

Controlam o crescimento e a diferenciao celular

Protena Carbonil

Teste geral do dano oxidativo das protenas

Vrias ROS atacam resduos de aminocidos das protenas Histidina, arginina, lisina e prolina

Produzir produtos com grupos carbonil (destroi a estrutura da protena)

Protena Carbonil

Mtodo baseado na reao do DTNB c/ o grupo carbonila

Espectrofotmetro a 370nm Nmol/g de protena

Quantificar Protena total

DNA

Radical hidroxila (OH.) ataca diferentes stios do DNA .

Os radicais hidroxila atacam todas as posies do acar da desoxirribose levando a quebras em uma ou nas duas fitas do DNA.

Causa modificaes e ruptura das ligaes entre as bases nitrogenadas, resultando em mutaes, levando senescncia. celular

Mtodo de avaliar dano no DNA

Devido ao seu baixo custo e versatilidade o Ensaio Cometa

tornou-se a tcnica mais utilizada

na anlise danos no DNA

Amplamente

usado

em

Gentica Toxicolgica, Nutrio, Pesquisa e Potencial Uso no

Tratamento do Cncer.

Como realizado?

Eletroforese de clulas isoladas As clulas, englobadas em gel e espalhadas sobre uma lmina, so submetidas a uma corrente eltrica como uma fora proporcionando a migrao dos segmentos de DNA livres resultantes de quebras, para fora do ncleo.

DOENAS RELACIONADAS COM OS RADICAIS LIVRES

Perxidos lipdicos

Danos nas protenas

Concentraes de nitrotirosina normalizadas : plasmticas foram

Antes da cirurgia 1.5 0.4 nmol N-Tyr/mol Tyr 1 ms 2.8 0.6 nmol N-Tyr/mol Tyr 6 months 1.0 0.3 nmol N-Tyr/mol Tyr

24 months 0.7 0.3 nmol N-Tyr/mol Tyr

INFARTO DO MIOCRDIO
TBARS Protena carbonil

Bagatini e cols. 2007

Peroxidao Lipdica
Diabetes

Cncer do tero

Protena Carbonil- LEUCEMIA

HIPERCOLESTEROLEMIA
TBARS

Duarte e cols. 2007

Diabetes experimental X Resveratrol

Schmatz e cols. 2008

ACIDENTE VASCULAR CEREBRAL

TBARS Protena carbonil

Corra e cols. 2007