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PROTOCOLOS DE LABORATORIO

PRACTICA DE LABORATORIO – BIOQUIMICA METABOLICA


GENERALIDADES

La práctica de laboratorio busca que el estudiante pueda muestrear: suelos, pastos,


forrajes, concentrados y sangre animal, en un sistema productivo, con el fin de utilizarlos
como insumos para el desarrollo de las prácticas de laboratorio.

Así mismo que cada estudiante pueda Aplicar técnicas analíticas instrumentales para
determinar en las muestras obtenidas en el sistema productivo;

- Actividad ureásica (AU)


- Actividad catalasa (AC)
- Materia orgánica (MO)
- Nitrógeno no proteico (NNP)
- Carbohidratos no estructurales (CNE)

Finalmente se desea generar la capacidad de analizar e interpretar los resultados


obtenidos en la práctica, a partir de la contrastación con valores reportados en literatura
científica y plasmar los conocimientos y conceptos adquiridos por medio de una
evaluación de la actividad al final de la jornada de laboratorio

TIEMPO DE DURACION
12 horas (4 horas para muestreo y 8 horas en el laboratorio)

FECHA DE REALIZACIÓN DE PRÁCTICA


De acuerdo a la programación establecida por cada CEAD

ORDEN DE LAS ACTIVIDADES A REALIZAR POR LOS ESTUDIANTES:

1. Inscríbase en el aplicativo de oferta integrada de laboratorios OIL de acuerdo a la


zona donde pueda realizar su practica

2. Descargue los siguientes documentos:


a. Guía de desarrollo del componente practico
b. Marco teórico
c. Protocolos de laboratorio

3. Lea detalladamente cada uno de esos documentos

4. Recoja las muestras de acuerdo a los protocolos del laboratorio

5. Asista a la práctica en el lugar, fecha y hora que programe el CEAD al que pertenece
6. Lleve bata blanca manga larga, bayetilla, marcador para vidrio ó cinta de
enmascarar

7. Lleve leído y estudiado el documento de marco teórico del laboratorio.

8. Recuerde que debe tener claros los conceptos del marco teórico ya que en el
laboratorio se hace Taller previo a los análisis y evaluación al final de los análisis.

9. Cada estudiante debe tener presente que debe entregar el Quizz Previo y la
Evaluación al final de cada jornada de laboratorio ya que son 2 puntajes vitales para
el laboratorio.
ELEMENTOS NECESARIOS PARA LA PRÁCTICA:
1. Protocolos guía de la actividad
2. Bata blanca
3. Cinta de enmascarar
4. Bayetilla roja
5. Muestras de origen biológico recolectadas y empacadas según la guía didáctica
6. Libreta de anotaciones
7. Lápiz, Esfero, Marcador Sharpie
8. Cámara fotográfica.
Importante = Leer muy bien el marco teórico de la práctica de laboratorio para
desarrollar el Quizz previo a la practica

SOBRE LA RECOLECCION DE LAS MUESTRAS


- Forraje o Muestras Vegetales
o Cortar aproximadamente 500 g de forraje o pasto de corte o cualquier material
vegetal de interés para su carrera (zootecnia, agronomía, Ingeniería
agroforestal)
o Picar el material a un tamaño entre 2 y 5 cm
o Meter en bolsa de papel (material similar a bolsa de pan)
- Suelo
o Tomar aproximadamente 500 g de muestra de capa orgánica (primera capa
hasta 10-15 cm de profundidad, capa más negra)
o Empacar idealmente en bolsa Ziploc (bolsa con cierre hermético) o sino en
bolsa de plástico muy bien sellada
- Alimento concentrado
o Tomar 250g de alimento concentrado (para ganado, equinos, cerdos, aves,
gatos o perros)
o Macerar por medio de un mortero o bien triturar con martillo u objeto similar
o Empacar idealmente en bolsa Ziploc (bolsa con cierre hermético) o sino en
bolsa de plástico muy bien sellada
- Leche
o Rotular de qué tipo de leche se trata
o Tomar muestra de leche de vaca o cabra o leche comercial
o Congelar en nevera tradicional
- Orina
o Rotular de qué tipo de orina se trata
o Tomar muestra de Orina de vaca o cabra o la especie disponible o bien de
orina propia
o Congelar en nevera tradicional
- Sangre
o De ser posible (contando con animales y un profesional o trabajador experto
en toma de muestra de sangre) tomar muestra de sangre en vacutainer
(previamente marcado) de tapa morada (con anticoagulante tipo EDTA)

o Congelar en nevera tradicional

MUESTRAS REQUERIDAS SEGÚN JORNADA

ANALISIS A REALIZAR MUESTRAS RECOMENDADAS


Ureasa Orina, Sangre, Suelo, Leche
Catalasa Suelo, Orina, Leche, Suelo
Materia Orgánica Suelo, Forraje, Muestras vegetales
Nitrógeno No Proteico Muestras vegetales, Forraje, Alimento
Concentrado
Carbohidratos No estructurales Muestras vegetales, Forraje, Alimento
Concentrado
PROCEDIMIENTOS EXPERIMENTALES Y PROTOCOLOS DE LA PRACTICA

ANALISIS DE UREASA
MATERIALES Y EQUIPO REACTIVOS
Tubos de Ensayo Pipetas 5 y 10 mL Buffer Fosfato de Ureasa al 0,1%
con Gradilla pH = 7
Pinzas para bureta Baño de María Urea 0,25 M HCl 0.1N
Erlenmeyer 125 mL Beaker 400 mL HgCl2 al 1% Indicador de Tashiro
Bureta 25 mL Soporte Universal

EXTRACCIÓN Y CUANTIFICACIÓN
TITULACION

CALCULOS

AU Estándar (umol/min)

AU Muestra (umol/min)
DETERMINACION DE MATERIA ORGANICA
1. Precalentar horno a 115ºc
2. Tomar la muestra de Forraje, suelo, madera, alimento, granos o concentrado y
picarlo hasta alcanzar tamaños de partícula entre 10 y 15 mm.
3. Tomar muestra en un crisol e introducir a horno o estufa de aire forzado por 1
hora a 115ºc
4. Precalentar Mufla a 550ºc
5. Al sacar la muestra moler o picar nuevamente hasta alcanzar un tamaño de
partícula menor.
6. Pesar crisoles de mufla y registrar los pesos marcando los crisoles en la parte
inferior y lateral con marcador indeleble (también tener presente el lugar donde
queda ubicado el crisol antes de introducir a mufla) = Wc
7. Pesar 1g de muestra y almacenarlo en un crisol de Mufla = Wm
8. Introducir crisoles y tomar registro de su ubicación para posteriores cálculos
9. Dejar reposar crisoles durante 45 minutos a temperatura ambiente
10. Pesar crisol y muestra = Wcm

Para determinar el contenido de materia orgánica

(Wc+Wm) – Wcm
MO (%) = 1 - --------------------
(Wc+Wm)

En teoría, absolutamente todas las biomoléculas que se encuentran en una muestra


cualquiera del eje SPA al estar bajo las condiciones de la mufla (550ºc por 4 horas), se
desnaturalizan y el remanente (denominado cenizas, por obvias razones) es una
representación relativamente cercana al contenido de minerales de la muestra analizada.

En este sentido;

% Minerales = 100 - % MO
ANALISIS DE CARBOHIDRATOS NO ESTRUCTURALES

MATERIALES Y EQUIPO REACTIVOS


Balanza analítica Baño de María HCl 0,6N H2SO4 concentrado
Vaso de precipitados Agitador de vidrio NaOH 0,6N Fenol al 5%
Glucosa al 1%

PROCEDIMIENTO EXTRACCION – CUANTIFICACIÓN – LECTURA


ESPECTROFOTOMETRICA
CALCULOS

Para calcular el contenido de CNE (%) se debe Hallar el factor de dilución (Fd) y luego
aplicar la siguiente ecuación

Donde;

Am = Absorbancia de la solución Estándar


Ast = Absorbancia de la solución Estándar
Fd = Factor de dilución
Vf = Volumen del filtrado de muestra
Wm = Peso de Muestra
ANALISIS DE ACTIVIDAD CATALITICA

MATERIALES Y EQUIPO REACTIVOS


Soporte universal Bureta H2O destilada
Pipeta graduada Pinzas H2O2 0,04N
Probeta graduada Erlenmeyer H2SO4 2N
Beaker 400ml Tubos ensayo con Gradilla KMnO4 0,01N
Extracción y cuantificación
La respuesta se expresa en umoles / gr (o umol/ml en el caso de sangre o muestra
liquida)
NITROGENO NO PROTEICO
MATERIALES Y EQUIPO REACTIVOS
Vaso Precipitados Espectrofotómetro Ácido Tricloroacético ATA 10%
Pipeta graduada Pinzas Agua destilada
Probeta graduada Erlenmeyer Albumina
Beaker 400ml Tubos ensayo con Gradilla Reactivo de Biuret

EXTRACCION Y CUANTIFICACION

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