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“Cuantificación de clotiazepam en plasma humano, con cromatografía gaseosa acoplada a un espectrómetro de masa”

Sung-Hoon Ahn, Han-Joo Maeng, Tae-Sung Koo, Dae-Duk Kim, Chang-Koo Shim, Suk-Jae Chung∗

Department of Pharmaceutics, College of Pharmacy, Seoul National University, San 56-1, Shinlim-dong, Kwanak-gu, Seoul 151-742, South Korea Received 3 November 2005; accepted 21 February 2006 Available online 6 March 2006 JOURNAL OF CHROMATOGRAPHY B
Análisis industrial cromatográfico 2011 Costantino, Andrea Rosana

Clotiazepam:

FARMACOCINETICA: Vía oral: Se absorbe rápidamente (T max. 0.5-15hs). El grado de unión a proteínas plasmáticas es del 99%. Se metaboliza en el hígado, dando lugar entre otros metabolitos activos a hidroxiclotiazepam y desmetilclotiazepam. Es eliminado mayoritariamente en la orina en la forma de metabolitos glucuronoconjugados. Su semivida de eliminación

Primeros Métodos: • • • • • CG-ECD CG-NPD CG-MS CG-MS/MS HPLC .

y su aplicación en estudios farmacocinéticos.OBJETIVO: Desarrollar y validar un método para determinar clotiazepam en plasma humano usando CG-MS. .

La aceptabilidad se corresponde directamente con los criterios para validar. MAYO 2001)” Validar es documentar mediante el uso de investigaciones de laboratorio especificas que las características del funcionamiento del método son adecuadas y fiables para el análisis. envio. . recepción y almacenamiento de especímenes •Preparación de muestra •Aparatos •Métodos •Parámetros:  Especificidad/ Selectividad  Precisión  Exactitud  Linealidad  Limite de cuantificación  Estabilidad de solución patrón y la sustancia a analizar en la matriz biológica bajo las condiciones de análisis y durante todo el proceso de almacenamiento incluidos los procesos de congelación y descongelación que puede sufrir.“ORIENTACION PARA LA INDUSTRIA: METODOS BIOANALITICOS DE VALIDACION (FDA. Da recomendaciones generales para validar un método: •Protocolo •Obtención.

100 o 200 ng/ml) . 20. 10. 50.RESULTADOS Y DISCUSION: • • Estándar: Clotiazepam Estándar interno: Diazepam PREPARACION DE SOLUCIONES ESTANDAR: Solución patrón: 1 mg/ml Solución estándar de trabajo de clotiazepam Solución estándar de trabajo de estándar interno Alícuota 20µl + Blanco de plasma humano 5µg/ml Muestras estándar de Clotiazepam en plasma (5.

Sólido-Sólido 2. De anlito en muestra Corrección por pérdida: RSD = σ total Contenido del analito Extracción: 1. Liquido-Liquido 4. De anlito encontrada Conc. Con fluidos supercríticos 3.Tratamiento o Pre-tratamiento de muestra: Medida cuantitativa de las pérdidas % de Recuperación= 100 x Conc. En fase solida (FSE) .

TECNICAS DE SPE CON FASES SOLIDAS EN CARTUCHOS .Extracción en Fase Sólida: • Ventajas:        Mas completa recuperación del analito en menos tiempo Mas eficiente separación de interferentes Menos consumo de solventes Colección mas fácil de los analitos Manualmente mas conveniente Permite la fácil remoción del material particulado Mas fácil de automatizar • Desventajas:  Variabilidad entre cartuchos SPE  Adsorción irreversible de algunos analitos al material de los cartuchos.

• USOS DE SPE: - - Remoción de interferentes que se superponen con los analitos de interés en ensayos subsecuentes Remoción de contaminantes “asesinos” de columnas Concentración y “enriquecimiento” de analitos Desalación • OTROS USOS: Intercambio de un solvente por otro Derivatización “in situ” Almacenamiento y transporte de muestra .

PASOS DE SPE: .

RANGO DE T°: -60 A 325/350°C • FE: HP-5MS 5% fenil metil polisiloxano • FM: gas carrier: Helio .INSTRUMENTACION: CG: HP 6890 MS:5973 • COLUMNA: FSOT WCOT: .25 µm .25 mm di .30MTS .0.0.

5min .• INYECTOR: split/splitless: Modo Split Relación de split = Flujo del venteo + Flujo en la columna Flujo en la columna • 2 RAMPAS DE T°: T° inicial: 150°C 30°C/min hta 210°C 8°C/min hta 270°C por 0.

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todos eluyen. cálculos rápidos No es critico el volumen de inyección Baja dependencia con parámetros cromatográficos - DESVENTAJAS:    Suposiciones (Respuesta uniforme del detector. todos son detectados) Cuantifica todos los componentes Todas las áreas deben ser correctas - METODOS     Normalización Adición de estándar Estándar externo Estándar interno .ANALISIS CUANTITATIVO: • ALTURA: • AREA: VENTAJAS:     No se requiere calibración Simple.

ESTÁNDAR INTERNO: • VENTAJAS:  Se agregan compuestos conocidos al estándar y muestra  El volumen de inyección no es critico  Calibro los picos de interés  Corrige la respuesta del detector • DEVENTAJAS:  Comprar estándar interno  Encontrar uno que funcione y ande bien para mi muestra  Debo agregar un componente a mi muestra .

Factores de Respuesta: Ejemplos: Método del estándar interno: Curva de Calibración Empleo de un solo estándar: Factor de respuesta relativo .

• LINEALIDAD: Fue evaluado para muestras estándar de plasma 5-200ng/ml .

4 – 107.• PRECISION Y EXACTITUD: Precisión: < 13.5% Exactitud: 92.9 % .

• ESPECIFICIDAD: .

CON EXTRACCION: MUESTRAS ESTANDAR DE CLOTIAZEPAM EN PLASMA (5 . I. 50 Y 200 NG/ML) + S. 50 Y 200 NG/ML) + S. . I.• SENSIBILIDAD: LQC: 5ng/ml (S/R: 5/1) Precisión: <20 % Exactitud : 80-120% • RECUPERACIÓN: - SIN EXTRACCION: ESTANDAR DE CLOTIAZEPAM EN METANOL (5 .

Parámetros fueron: 92.7-99. alta). fue examinada en distintas condiciones. todas fueron comparadas con las muestras frescas. en las 3 concentraciones (baja. media. I.6% iguales a los del control .• ESTABILIDAD: La estabilidad del clotiazepam y S.

• FARMACOCINETICA: .

CONCLUSION: CG-MS fue desarrollado para la determinación de clotiazepam en plasma humano. Teniendo en cuenta los parámetros farmacológicos obtenidos permite que pueda usarse para estudios de farmacocinética de clotiazepam en seres humanos. reproducibilidad y especificidad. Este método tuvo adecuada sensibilidad. .

MUCHAS GRACIAS!!!! .