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CITOMETRIA DE FLUJO

La citometra de flujo es un mtodo analtico que permite la medicin rpida de ciertas caractersticas fsicas y qumicas de clulas o partculas microscpicas en suspensin que producen una seal de forma individual al interferir con una fuente de luz

NIVELES DE ANALISIS
MOLECULAR
(esferas fluorescentes)

SUBCELULAR
Viriones individuales

CELULAR
Bacterias

SUPRACELULAR
Hibridomas

Protenas extracelulares

Secuencias de Liposomas ADN o ARN libres Complejos inmunes circulantes Cromosomas aislados Orgnulos aislados Ncleos aislados

Hongos unicelulares Clulas humanas y animales Protoplastos vegetales

Fusiones celulares

NUCLEARES

Ploida de ADN Regulacin del ciclo celular Accin de hormonas

PARAMETROS DE ANALISIS A NIVEL CELULAR

CITOPLASMATICO

Metabolismo celular Transduccin de seales Lesin celular

DE SUPERFICIE

Caracterizacin poblacin celular Interacciones clula-clula Resistencia a frmacos

EXTRACELULARES

Activacin celular Interacciones clula-clula Diferenciacin celular

COMO FUNCIONA EL CITOMETRO DE FLUJO?

Qu es un fluorocromo?
HO 488 nm CO2H O 530 nm

Luz Incidente

Molcula de Fluorescena

Luz Fluorescente Emitida

El fluorocromo absorbe la luz del lser El fluorocromo emite un rayo luminoso de diferente longitud de onda

PRINCIPALES FLUOROCROMOS UTILIZADOS EN CITOMETRA DE FLUJO

DATOS OBTENIDOS
1. PARAMETROS ESTRUCTURALES El tamao relativo (Forward scatter-FSC) La granularidad o complejidad citoplasmtica. (Side scatter-SSC) 2. CD (antigenos de superficie): La intensidad de fluorescencia (Identidad) Linaje Recuento Activacin 4. ALTERACION EN EL INMUNOFENOTIPO Inmunoproliferacion/inmunodeficiencia 5. ALTERACION EN EL GENOTIPO Cambios en contenido DNA Cambio en la expresion de genes

PRESENTACION DE LOS DATOS Histograma Grfico de Puntos (Dot Plot)

Grfico de Contorno (Countour Plot)


Grfico de Densidad (Density Plot)

REGISTRO PRIMARIO

IMAGEN DE:Rodrigo Blanco Salado, Alfredo Corell

IMAGEN DE:Rodrigo Blanco Salado, Alfredo Corell

DISPERCION NORMAL

Granulocitos

Detritos

Monocitos
Linfocitos

Countour Plot

Density Plot

IMAGEN DE:Rodrigo Blanco Salado, Alfredo Corell

APLICACIONES CLINICAS
INMUNOFENOTIPIFICACIONi
o LEUCEMIAS Y LINFOMAS o ENFERMEDAD MINIMA RESIDUAL o SUBPOBLACIONES LINFOIDES (INMUNODEFICIENCIAS) o RAZON LtCD4/CD8(VIH-SIDA)
o o o o

CANCERi
CONTENIDO DE DNA (ploidia DNA) FASES DEL CICLO CELULAR PROTEINAS DEL CICLO CELULAR ONCOGENES (p53 y otros)

PLAQUETASi
o GLICOPROTEINAS (TROMBASTENIA DE GLANZMANN) o FISIOLOGIA PLAQUETARIA o Igs ASOCIADAS A PLAQUETAS (PURPURA TROMBOCITOPENIA INMUNE)

TRANSPLANTES
o CELULAS PROGENITORAS(CD34, CD117) o CROSS MATCH

ESTUDIOS FUNCIONALES

Citocinas Intracelulares Fagocitosis Estallido respiratorio pH intracelular Potencial de membrana

DETECCION DE CITOQUINAS SOLUBLES

En base a partculas cubiertas con Ig anticitocinas

CUANTIFICACION DE MOLECULAS

Recuento absoluto de clulas CD 64 en granulocitos(infeccion)

VENTAJAS EN HEMATOLOGIA
Anlisis multiparamtrico Acceso mnimamente invasivo a parmetros celulares Analiza grandes cantidades en poco tiempo. 4000 cel/seg. Resolucin de heterogeneidad celular Aprox: 500-

Seleccin fenotpica de subpoblaciones


Seleccin manual de marcadores: Permite separar subpoblaciones celulares. (Clasificacin de patologas).

INMUNOFENOTIPIFICACION DE LEUCEMIAS Los distintos tipos de leucemias son un grupo heterogneo de patologas resultantes de una proliferacin descontrolada de una o ms tipos celulares hematopoyeticos tanto en mdula sea como sangre perifrica

RETENCION DE ANTIGENOS
Clulas malignas frecuentemente conservan antgenos asociados con la clula normal a partir de la cual fueron derivados. Ejm:

MADURACION DE LINEA LINFOIDE


CD10 CD34 CD8 HLA-DR TIMOCITO CD1 CD8 CD2 CD71 CD3 CD38 CD4 TCR

LINFOCITO PRE B CD10 CD19 CD34 CD38

NK MADURO CD2 CD8+/CD16 CD56 CD57

LINFOCITO B CD19 CD20 CD22 IgM

LINFOCITO T COOPERADOR CD4 CD28 CD5 CD3 TCR

LINFOCITO T CITOTOXICO CD8 CD3 CD28 CD5

BIBLIOGRAFIA
1. BARRERA RAMREZ LOURDES MARA, DRAGO SERRANO MA. ELISA, PREZ RAMOS JULIA, SAINZ ESPUES TERESITA DEL ROSARIO, ZAMORA ANA CECILIA, GMEZ ARROYO FABIOLA et al . CITOMETRA DE FLUJO: VNCULO ENTRE LA INVESTIGACIN BSICA Y LA APLICACIN CLNICA. Rev. Inst. Nal. Enf. Resp. Mex. [revista en la Internet]. 2004 Mar [citado 2012 Mar 12] ; 17(1): 42-55. Disponible en: http://www.scielo.org.mx/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S018775852004000100007&lng=es

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