EPIFLUORESCENCIA

EL EQUIPO .

EL EQUIPO LED EPI .

MONTAJE DE LA LAMPARA .

DESCRIPCION DEL MICROSCOPIO .

Además. tales como los FITC. en un auditorio). Dapi y Rhodamine/Cy 3. tales como los FITC. El microscopioque adicionales dispone de una palanca que permite pasar de un uso de campo claro a uno de fluorescencia. y ofrece una sobresaliente relación precio/rendimiento. la excitación de fluorescencia mediante la iluminación ya está por LED resulta muy útil al no ser necesario contar con períodos de calentamiento o refrigeración.EL MICROSCOPIO  El microscopio Primo Star iLED ya está disponible con tres accesorios de fluorescencia adicionales que permiten el uso de distintos fluorocromos. duradera y de gran ahorro energético que ofrecen los El microscopio LED. El accesorio de fluorescencia del iLED cuenta de unos prácticos adaptadores oculares que con fluorescencia permiten efectuar labores de microscopia de fluorescencia aunque no se esté en un cuarto oscuro (por ejemplo. Primo Star iLED permiten el uso de distintos fluorocromos. Especialmente en el caso de la formación. gracias en gran medida a la fuente lumínica económica. ya no es necesario reajustar las lámparas de excitación. Este dispositivo es especialmente robusto y fácil de usar. en procedimientos habituales y en investigación básica. De este modo puede emplearse un microscopio de LED para aplicaciones de fluorescencia simple en la formación. a diferencia de lo que ocurre con la excitación producida mediante lámparas de vapor de disponible con mercurio. por lo que el usuario tres accesorios puede comenzar a trabajar en el mismo momento en que se enciende la fuente de iluminación. Dapi y .

FILTROS .

CIRCUITO DE LA LUZ .

Si un componente de este tipo es iluminado a su longitud de onda absorbente y visualizado a través de un filtro que sólo permita pasar la luz de longitud de onda igual a la de la luz emitida. La técnica de fluorescencia para microscopia con epiiluminadores (iluminador episcópico) está basada en la adaptación del iluminador vertical. Este tipo de microscopía se fundamenta en el uso de filtros. el componente aparece brillante sobre un fondo oscuro. La luz incide sobre la muestra a través de las lentes del objetivo. La luz emitida por la muestra (reflejada y fluorescente) atraviesa un segundo filtro que selecciona la longitud de onda de emisión del fluorocromo. creando así una excitación molecular que hace que dicho material re-emita la luz en una longitud de onda mayor a la longitud incidente. La intensidad y el color de la luz es una propiedad característica de la molécula fluorescente utilizada. El primer filtro selecciona la longitud de onda capaz de excitar al fluorocromo. que permiten el paso de la luz ultravioleta exentos de tensión molecular. El microscopio fluorescente para epifluorescencia. Así.La fluorescencia es  La fluorescencia es el fenómeno óptico que ocurre cuando la luz es absorbida por una sustancia cuando se encuentra expuesta a radiaciones ultravioletas. La tinción molecular se basa en la utilización de colorantes fluorescentes. . las moléculas fluorescentes absorben la luz de una determinada longitud de onda y emiten luz de otra longitud de onda más larga. rayos catódicos o rayos x-. antes de incidir sobre la muestra. los cuales son detectados gracias al microscopio de fluorescencia.

NARANJA DE ACRIDINA   El fluorocromo naranja de acridina se une al ácido nucleico ya sea en su forma nativa o desnaturalizada. el germen viable se inactivará poco tiempo después de la tinción. una gran cantidad de estudios han demostrado que la tinción de hemocultivos con naranja de acridina es tan sensible como el subcultivo ciego para la detección inicial de hemocultivos positivos. El naranja de acridina ha sido empleado como colorante vital. dependiendo del pH y de la concentración. el color de la fluorescencia puede variar. De todos modos. como el colorante se intercala en el ácido nucleico. El uso de naranja de acridina para detectar la presencia de bacterias en los hemocultivos ha sido ampliamente aceptado. . De hecho. que da una fluorescencia verde si el microorganismo está vivo y roja si está muerto. En algunas preparaciones de naranja de acridina.

Estudios sobre naranja  Fazii y col. de tal forma que al incorporar la fluoresceína. Fazii y col. se produce un efecto de coloración diferencial. desestabiliza la membrana externa de las bacterias Gram negativas. el decolorante. alcohol etílico-acetona para decolorar y fluoresceína de sodio que origina el sistema rojo/verde. basada en el uso de naranja de acridina que interactúa con componentes de la pared celular. tal vez. Según los autores. (10) emplearon la coloración diferencial de fluorescencia en hemocultivos y muestras de orina. (9) y Ciancaglini y col. obteniendo elevada sensibilidad en la detección de bacterias Gram positivas y Gram negativas. (9) idearon un método de coloración de fluorescencia para la diferenciación entre bacterias Gram positivas y Gram negativas. . removiendo parcialmente el naranja de acridina. donde las bacterias Gram positivas se tiñen de amarillo fluorescente y las Gram negativas de verde fluorescente.

N. presentado un máximo de excitación a 502 nm y una emisión a 525 nm (en el verde). . Interacciona con el ADN y el ARN por intercalación dentro de la molécula o por atracción electrostática. este colorante tiñe de verde a las células en fase de división activa (mucho ADN).N'-tetrametilacridina según IUPAC) es un colorante catiónico selectivo para los ácidos nucléicos y útil para realizar determinaciones sobre el ciclo celular. Cuando asociado al ADN.NARANJA DE ACRIDINA  Naranja de acridina (o N. Por lo tanto. y de naranja a las que están en reposo multiplicativo (mucho ARN y proteínas). respectivamente. la excitación máxima deriva a 460 nm (en el azul) y la emisión máxima a 650 nm (en el rojo). Cuando está asociado al ARN.N'. el naranja de acridina es espectralmente similar a la fluoresceína.

el germen viable se inactivará poco tiempo después de la tinción. En algunas preparaciones de naranja de acridina. El naranja de acridina ha sido empleado como colorante vital. el color de la fluorescencia puede variar. que da una fluorescencia verde si el microorganismo está vivo y roja si está muerto. . De todos modos.NARANJA DE ACRIDINA  El fluorocromo naranja de acridina se une al ácido nucleico ya sea en su forma nativa o desnaturalizada. dependiendo del pH y de la concentración. como el colorante se intercala en el ácido nucleico.

FOTOGRAFIAS CON NARANJA .

FOTOS DE LEVADURAS Y HONGOS .

05 g de naranja de acridina y llevar a 50 ml.Método para vinos con naranja de acridina          Preparación del reactivo: Pesar 0. Retirar la membrana del vino con una pinza. colocar un portaobjetos sobre la misma y volver a colocar otra gota de aceite de inmersión.6 micrones de poliamida. veremos que la membrana se transparenta.22 micrones de poro estéril..45 micrones y se mantiene estéril. Agregar sobre la membrana aceite de inmersión de alta calidad. y se filtra por 0.  . Técnica: Tomar 40 ml de vino si es de línea y 10 ml de vino si es de vasija e instalar en el extremo de la jeringa un portafiltro de 13 mm con una membrana de poro de 0. con agua destilada que estuvo en ebullición 10 minutos. La lectura se realiza en zigzag tomando la lectura de 10 campos. Luego hacemos pasar 1-2 ml de isopropanol para arrastrar el exceso de colorante. filtra la muestra Con otra jeringa de 5 ml tomar 3 ml del naranja de acridina e instalar un filtro de 13 mm con una membrana de 0. Asegurar una correcta inmersión de la lente del objetivo. En la salida de este filtro instalamos el filtro donde filtramos el vino y ejercemos presión en la jeringa para que pase el colorante a través de los dos filtros con sumo cuidado. comenzando por el extremo inferior y luego observar el centro. secarla con sumo cuidado y rápido y una vez ocurrido esto colocar sobre un portaobjetos.

RESULTADOS INTERPRETACION    Resultados: En vasija < 400 levaduras y < 600 bacterias por litros y en botella es de < 100 levaduras y < 200 bacterias Las levaduras verdes y bacterias se tiñen de color naranja brillante sobre un fondo negro .

MUCHAS GRACIAS POR SU ATENCION ALEJANDRO CANGI MAG SRL .