Reactii antigen-anticorp

Dr. Cristiana Cerasella Dragomirescu

Reactiile antigen anticorp “in vitro”
• I.Seroidentificare: Detectarea şi dozarea Ag (element necunoscut-tulpini microbiene izolate din diferite prelevate)cu ajutorul Ac specifici cunoscuţi. • II.Serodiagnostic: Detectarea şi titrarea Ac din serul bolnavilor (component necunoscut) faţă de un Ag specific cunoscut .

REACŢIILE ANTIGEN-ANTICORP in vitro (REACŢIILE SEROLOGICE)

• Reacţia Ag-Ac este determinată de interacţiunea specifică dintre epitopii Antigenului şi paratopii Anticorpilor. • În acest proces intervin patru tipuri de legături: - legături de hidrogen, - legături electrostatice, - forţele Van der Waals şi - legături hidrofobe. • Legătura Ag-Ac are trei caracteristici: este exotermică, specifică şi reversibilă.

de forţa ionică a mediului. de numărul de epitopi. Ea depinde de complementaritatea sterică dintre paratop şi epitop. . de pH. aglutinare. de temperatură. de valenţa Ac. etc.• Afinitatea unui Ac pentru un Ag specific caracterizează intensitatea forţelor de legătură a complexului Ag-Ac.). Ea depinde de constanta de asociere. • Aviditatea unui Ac pentru un Ag specific reprezintă rapiditatea apariţiei manifestării reacţiei Ag-Ac (precipitare.

. liză. Faza specifică: are loc interacţiunea dintre Ag şi Ac specific corespunzător. Decurge la temperatura de 37 C.fenomene determinate de anumite condiţii (valenţa Ac. fiziologică). se manifestă prin precipitare. aglutinare. vizibilă a uniunii Ag-Ac. etc). II. Este un fenomen rapid. Faza nespecifică. comun pentru toate reacţiile Ag-Ac. etc . în prezenţa unui electrolit (sol. invizibil.INTERACŢIUNEA ANTIGEN-ANTICORP I. dimensiunile Ag.

Teoria lui Marrack .

chemiluminiscent.FIA . 3.ELISA .enzimatic.Ac 1.fluorescent.CLA . Reactii de precipitare Reactii de aglutinare Reactii de seroneutralizare Reactia de fixare a complementului Reactii in care componentele sunt marcate .izotopic-RIA . 5. 4.Tipuri de reactii Ag. 2.

• Precipitarea complexelor moleculare rezultate din uniunea Ag-Ac este determinata de formarea unei retele tridimensionale de Ag reunite prin Ac. . Ea poate fi observata sau in mediu lichid. ce necesita cantitati importante de anticorpi. fiind sau calitativa. sau solid.Ac sa fie cel putin bivalent (Ac completi) . Condiţiile de formare a reţelei de precipitare: . sau cantitativa. ce permite precipitarea tuturor moleculelor de Ac cu Ag corespunzator.Ag sa fie multivalent (haptenele nu pot fi precipitate) • Precipitarea maxima corespunde cu zona de echivalenţă.În exces de Ag sau de Ac precipitatul nu se formează. • Acestea sunt reactii specifice dar putin sensibile.REACTIILE DE PRECIPITARE • Imunoprecipitarea se manifesta doar atunci cand Ag solubil este amestecat cu Ac corespunzator. unde Ac si Ag sunt in raport optimal de concentraţie.

PRECIPITAREA IN MEDIU LICHID Reactia de precipitare inelara • Utilizarea practica: identificarea petelor de sange. . depistarea falsificarilor produselor alimentare. depistarea antigenului polizaharidic al agentului antraxului in omogenat de organe (reactia Ascoli).

Reactia de precipitare in inel .

Web .toxina difterica) cu cantitati variabile de Ac la care titrul este cunoscut • Cantitatea maxima de precipitat se gaseste in tubul unde exista raportul de echivalenta.Titrarea toxinei difterice.reactia Ramon: • Se pun in contact. in amestec. Cunoscand titrul anticorpilor se poate afla titrul toxinei (1 Lf = 1 limes floculans= cantitatea de toxina care se combina cu o unitate de antitoxina = 1 UA= 1 unitate antitoxica ) • Ex : testul Kahn pentru sifilis. metoda Dean. in tuburi cantitati egale din componenta care trebuie titrata (Ag.

Poate fi utilizată în analiza calitativă a unui amestec de Ag într-o soluţie. se vor forma linii de precipitare distincte. Dacă există mai multe sisteme Ag-Ac.PRECIPITAREA ÎN MEDIU SOLID (ÎN GEL) • În aceste reacţii Ag şi Ac difuzează unul spre altul prin geloză şi în zona de concentraţie optimă a acestor doi reactivi se produce precipitarea sub formă de linii alb-cenuşii. .

PRECIPITAREA ÎN MEDIU SOLID (ÎN GEL) • Imunodifuzia simplă radială (tehnica Mancini) • Imunodifuzie dublă (tehnica Ouchterlony) .

PRECIPITAREA ÎN MEDIU SOLID (ÎN GEL) • Imunodifuzie dublă (tehnica ELEK) .

Reactii de precipitare in mediu solid (gel) • Contraimunoelectroforeza (CIEF) . Lectura este posibila peste 90 minute.Este utilă la examinarea amestecurilor antigenice complexe. .Electroforeza proteica in gel .Imunelectroforeza = imunodifuzie dubla in camp electric .Electroimunodifuzia = difuzie simpla mediata de camp electric .

Reactii de aglutinare • In reactia de aglutinare atg sunt de natura corpusculara • Reactia de aglutinare consta in reactia atc cu atg de pe suprafata unor particule (bacterii. hematii. cristale de colesterol) • Reactia este mai sensibila decat cea de precipitare • Atc de tip IgM sunt mai aglutinanti decat cei de tip IgG. latex. .

trombocite. Frecvent sunt utilizate ca suport hematii formolate. . bacterii) -se utilizeaza in diagnosticul bacteriologic pt identificarea enterobacteriilor (E. Salmonella si Shigella) • Aglutinare “pasivă” sau “indirectă”. în care particula figurată (Ag corpuscular) este el însuşi purtător de determinante antigenice specifice (hematii. grupului streptococic . leucocite. coli.se utilizeaza in determinarea factorului reumatoid.Reactii de aglutinare • Aglutinare “activă” sau “directă”. CRP. particule de latex sau microcristale de colesterol. spermatozoizi. în care particula serveşte doar de suport pentru un determinant antigenic solubil fixat artificial pe suprafaţa sa.

in tuburi .pe lama .Reactii de aglutinare • Reactiile de aglutinare se pot efectua : .

Aglutinarea directa pe lama .

Reactia de aglutinare pe lama • Utilizata in diagnosticul tulpinilor de E. serotiparea pneumococilor. etc… . Salmonella. serogruparea meningococilor. Vibrio cholerae • Se utilizeaza seruri polivalente si apoi monovalente ce permit identificarea pana la nivel de specie. detectarea unor enterotoxine stafilococice. Shigella. detectarea unor fungi. coli. Haemophylus influenzae. • Reactia de aglutinare indirecta se utilizeaza pt det grupului streptococic.

confirmarea aglutinarii pe lama .determinarea atg de tip O la bacteriile care prezinta atg H sau K (care ar putea inhiba aglutinarea cu atg O).Reactia de aglutinare in tuburi • Se utilizeaza pt: . Reactia este pozitiva in cazul in care apar aglutinate (grunjoase in cazul atg O si floconoase in cazul atg H) .se efectueaza dilutii din serul standard care contine atc si se pun in contact cu cantitati egale din suspensia de atg. cultura se mentine 1-2 ore la 100 grade C .

reactia Huddleson in diagnosticul brucelozei si reactia Kudicks-Steuer in diagnosticul tifosului exantematic • In tuburi: . anti H si anti Vi (prin hemaglutinare pasiva) .Reactia de aglutinare in serodiagnostic utilizand atg standard • Pe lama: .reactia Wright utilizata in diagnosticul serologic al brucelozei si reactia Widal in diagnosticul febrei tifoide (utilizeaza seruri recoltate in dinamica) si se det atc anti O.

pe cale clasica declansata de complexele atcatg.cale lectinica activata de microorganisme .Reactia de fixare a complementului • Complementul = constituent important al apararii naturale cuprinde circa 30 de componente celulare sau plasmatice • Se poate activa: .cale alterna activata de bacterii. virusuri. CRP . virusuri. celule tumorale . celule apoptotice.

Se utilizeaza in diag sifilisului reactia Bordet Wasserman. . Sistemul indicator este format din hematii de berbec si atc anti hematii de oaie.Reactia de fixare a complementului Reactie al carei rezultat nu poate fi vizualizat fara un sistem indicator.

.

.

.

= in serul de cercetat nu exista atc si in aceste tuburi apare hemoliza .Reactia de fixare a complementului • R + = in tuburile cu serul de cercetat nu apare hemoliza (hematiile se depun in buton) • R .

testarea toxinogenezei tulpinilor de C.Reactia de seroneutralizare .In aceasta reactie atg are o anumita proprietate biologica (toxica sau enzimatica) care poate fi blocata prin cuplarea cu anticorpii specifici. ● Diagnosticul microbiologic direct : identificarea Clostridium perfringens metoda placilor seroneutralizante. spirochete) . diphtheriae toxinotipia in suspiciunea unei infectii cu Clostridium botulinum ● Diagnosticul serologic Testul ASLO determinarea atc anti streptolizina O ●Reacţia de imobilizare Unii anticorpi anti-bacterieni pot provoca imobilizarea bacteriilor mobile (vibrioni.

Reactia ASLO -Se realizeaza in tuburi in care se dilueaza serul de testat. -Titrul de anticorpi antistreptolizina O este dat de ultimul tub in care lipseste hemoliza -Pt Romania se accepta ca titru normal 200-250 unitati ASLO Reactie pozitiva prezenta atc = absenta hemolizei Reactie negativa absenta atc = prezenta hemolizei .

IDR Schick testarea susceptibilitatii fata de difterie . 3. Terapia sau profilaxia specifica (imunoterapia pasiva) consta in administrarea de: . Vaccinul DTP) 2. iar daca in serul pacientului exista atc anti toxina acestia vor neutraliza atg inoculat si la locul injectarii nu va aparea reactie.imunoglobuline specifice heterologe (ser de cal) .Atg se inoculeaza intradermic.imunoglobuline specifice omologe obtinute de la persoane imunizate .IDR Dick testarea susceptibilitatii fata de scarlatina . in treimea medie a antebratului.Reactia de seroneutralizare 1. Vaccinarea in scopul obtinerii unei protectii prin seroneutralizare ( ex. Evaluarea eficacitatii vaccinurilor .

Reactii in care componentele sunt marcate Componentele reactiei pot fi marcate: -Fluorescent (FIA) -Enzimatic (ELISA) .Izotopic (RIA) -Chemiluminiscent (CLA) Reactia de imunofluorescenta Reactie pozitiva Reactie negativa .

După o spălare minuţioasă a godeurilor se adaugă Ac marcaţi cu enzima. ex.Reacţia Imuno-Enzimatică (RIE. dar care se colorează sub acţiunea enzimei. Utilizată doar în sero-identificarea Ag.RIE directă (metoda sandwich). În godeurile din placa de polistiren în care sunt fixaţi Ac cunoscuţi se toarnă soluţia de Ag necunoscut. Se incubează 1h. care se fixează pe epitopii liberi ai Ag polivalent. După incubare de 30 min-1h se spală iarăşi godeurile. ELISA -Enzyme Linked Immunosorbent Assays). . apa oxigenata si orthofenilendiamina). Prezenţa complexului Ac-Ag-Ac-marcat se depistează cu ajutorul substratului cromogen (substanţă iniţial incoloră. .

.

.

ELISA .

R+ : atg din proba formeaza complexe imune cu atc din serul standard iar la adaugarea atg marcat acesta nu va fi folosit in reactie = nivel de radioactivitate scazuta .: absenta atg din proba faciliteaza legarea atg marcat de atc din serul standard = nivel de radioactivitate ridicat .RIA Radio Immuno Assey .R.Este o reactie de competitie intre doua antigene: un atg marcat cu un izotop radioactiv si unul nemarcat (atg de testat) .

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful