You are on page 1of 53

UNIVERSIDAD DE SALAMANCA

Departamento de Fisiología y Farmacología
Laboratorio de Farmacognosia y Farmacología

Interacciones fármaco-receptor Curvas dosis-respuesta

F

+

R

Complejo F-R

FÁRMACO

RESPUESTA
“SITIO DE UNIÓN”

RECEPTORES FARMACOLÓGICOS

Enlaces electrostáticos, fuertes o débiles pero normalmente reversibles

Unión por enlaces covalentes son estables y esencialmente irreversibles

¿Cómo actúan los fármacos en el organismo?
FÁRMACO

inicia una serie de modificaciones bioquímicas y fisiológicas

RECEPTORES FARMACOLÓGICOS

RESPUESTA

El fármaco no origina mecanismos o reacciones nuevas, sino que se limita a estimular o inhibir los procesos propios de la célula
El conocimiento de la naturaleza de estos sitios de unión, y los mecanismos por los que esta unión origina una respuesta, es la base principal de la investigación en Farmacología

Receptor farmacológico = diana
Un componente macromolecular de una célula con la cuál interacciona un fármaco para producir una respuesta

ADN

Tubulina

Proteínas
1. Enzimas 2. Canales iónicos 3. Moléculas transportadoras 4. Receptores

Proteínas plasmáticas
RECEPTORES SILENCIOSOS = ACEPTORES

IUPHAR (Unión Internacional de Farmacología) RECEPTOR : macromolécula celular implicada en los procesos de transmisión de señal, con la que interactúan neurotransmisores, fármacos o mediadores para inducir una modificación funcional

Dinámica de activación de un receptor
Neurotransmisor Hormona
Receptor Célula endotelial Célula músculo liso Óxido nítrico

Transducción
Arteria contraída

(Acción)
modificaciones celulares y moleculares desencadenadas por la interacción entre ambas moléculas

Reconocimiento
asociación específica entre el ligando y su receptor:
Célula músculo liso contraída

Respuesta funcional
Vasodilatación

(Efecto)
consecuencia final del proceso

1933 F+R Complejo F-R Respuesta Asume que la respuesta de un tejido a un fármaco es debida a la ocupación de los receptores por las moléculas del fármaco a) La unión fármaco-receptor es reversible. b) Existe una relación lineal entre el número de receptores ocupados y la respuesta farmacológica. c) La respuesta máxima aparece con la ocupación de todos los receptores.Interacción fármaco-receptor Teoría ocupacional Clark . .

Interacción fármaco-receptor [F] + [R] En equilibrio: k1 k-1 [F-R] k-1/k1 = constante de disociacion (kd) [F] x [R] x k1 = [FR] x k-1 k1/k-1 = 1/kd = constante afinidad [F] [R] [F-R] = kd A menor kd el fármaco es más potente Afinidad: Es la capacidad del fármaco para unirse a un receptor específico y formar el complejo F-R. .

Interacción fármaco-receptor [F] + [R] [F] . [F] [F-R] = -------------kd + [F] El efecto farmacológico es proporcional a la concentración de complejos [F-R] . [R] [F-R] k1 k-1 [F-R]  Efecto = kd [RT] = [RL] + [F-R] [F]. ([RT] -[F-R]) [F-R] = kd [RT] .

5 0 [F] Log [F] .= ---------[RT] kd + [F] r 1 r 0.[RT] . [F] [F-R] = -------------kd + [F] [F-R] [F] -------.

3 Acetylcholine nmol/kg [RT] kd + [F] 2 10 50 10 Acetylcholine nmol/kg • Velocidad de cambio es rápida al principio y se hace progresivamente más pequeña cuando la dosis se incrementa • Cuando incrementos en la dosis no producen cambios en el efecto hemos obtenido el efecto máximo • Dificultad para el análisis matemático . [F] 20 [F-R] = -------------Control 10 kd + [F]L-NAME 30 0 -2 -1 0[F] 1 [F-R] 0.1 0.= --------.3 1 r = -------.31 3 Control L-NAME Escala aritmética 40 [RT] .1 0.% fall in blood pressure 50 % fall in blood pressure 40 30 20 10 0 0.

3 Control L-NAME Escala logarítmica [RT] . [F] [F-R] = -------------kd + [F] 2 10 0 1 1 3 Acetylcholine nmol/kg [F-R] [F] r = -------.= --------[RT] kd + [F] • Transformación de una curva hiperbólica en sigmoidea • Parte central es una línea recta • Se comprime la escala de la dosis • Dosis proporcionales aparecen a intervalos iguales • Más fácil para el análisis matemático .% fall in blood pressure 50 40 30 20 10 0 -2 -1 0.1 0.

[RT] = 2 .[RT] . [F50] -------. [RT] .= -------------2 kd + [F50] (kd + [F50]) . y los antagonistas . [F50] kd + [F50) = 2 [F50] kd = [F50] A igual grado de ocupación todos los agonistas producen el mismo efecto Solo se distinguen dos tipos de fármacos: los agonistas. [F] [F-R] = -------------kd + [F] Cuando F-R = 50% F-R Entonces receptores ocupados = RT / 2 [RT] [RT] .

Fármacos agonistas • Fármaco que interacciona con el receptor y lo activa • Tiene afinidad y actividad Fármacos antagonistas • Fármaco que interacciona con el receptor pero NO lo activa • Tiene afinidad pero NO actividad .

0 -3.  Un fármaco más potente que otro no significa que clínicamente sea superior  La potencia baja es una desventaja sólamente si la dosis es tan grande que es un problema administrarla.0 -5.100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 Potencia Fármaco A Fármaco B Fármaco C Fármaco D -7.0 -9. .0 [F50]  Posición relativa de las curvas dosis-respuesta en el eje de abcisas  Tiene poca significancia clínica para un efecto terapéutico dado.

[F] [F-R] = -------------kd + [F] -10 -8 -6 -4 -2 0 Log (M) Actividad intrínseca () capacidad de los fármacos de generar un efecto tras interaccionar con un receptor EF =  [F-R]  [RT] . [F] EF = ---------------kd + [F] . [F] [EF] = ---------------kd + [F] Emax =  [RT] Emax .Interacción fármaco-receptor Teoría de Ariens (1964) [RT] .

[F50] E50 = ---------------kd + [F50] Emax Emax .= ---------------2 120 kd + [F50] 100 Respuesta (%) Emax (kd + [F50]) = 2 Emax . [F50] -----. [F] EF = ---------------kd + [F] E50 = Emax /2 Emax . [F50] kd + [F50] = 2 [F50] 80 60 40 20 0 kd = [F50] -9 -7 -5 -3 Log (M) .Interacción fármaco-receptor Emax .

Log kd = .Log [F50] Logaritmo negativo en base 10 de la concentración de un agonista que produce el 50% de la respuesta máxima -9 -7 -5 -3 Log (M) p[F50] pCE50 pD2 Cuanto mayor es pCE50 mayor es la potencia del agonista .Constante de disociación : concentración del agonista que produce el 50% de la respuesta máxima 120 kd = [F50] Respuesta (%) 100 80 60 40 20 0 .

7 Agonista parcial 0<<1  = 0.Interacción fármaco-receptor La actividad intrínseca se expresa en unidades arbitrarias.3 Antagonista  = 0 -5 (Log M) . mediante el cociente entre el efecto máximo que se obtiene y el efecto máximo con el que responde el sistema biológico agonista perfecto:  = Emax / EMAX 120 100 =1 Agonista total  = 1 Respuesta (%) 80 60 40 20 0 -9 -8 -7 -6  = 0.

Tienen afinidad pero NO actividad .Fármacos agonistas • Interaccionan con receptores y los activan. Tienen afinidad y actividad – Completo: un agonista con la máxima actividad intrínseca – Parcial: un agonista con menos de la máxima actividad intrínseca Fármacos antagonistas • Interaccionan con los receptores pero NO los modifican.

= ----------------.+ -----EF Emax .Interacción fármaco-receptor Emax . ---. [F] EF = ---------------kd + [F] 1 kd + [F] kd 1 1 --. [F] Emax [F] Emax y = a x +b Representación de Doble recíproco .= ------..

La respuesta es una función desconocida de la ocupación de los receptores 2..Los fármacos pueden tener diferentes capacidades para iniciar una respuesta Eficacia (e) : capacidad de generar estímulos Se pueden obtener respuestas iguales por distintos fármacos con ocupaciones diferentes de receptores .El efecto máximo se puede producir con una ocupación pequeña de receptores.. [F] [F-R] = -------------kd + [F] Teoría de Stephenson (1956) 1.. 3.Interacción fármaco-receptor [RT] .

así como las respuestas máximas. agonistas parciales y antagonistas competitivos.=  ----------Emax kd + [F] • Elimina la necesidad de asumir que la respuesta máxima de un tejido requiera la ocupación total de los receptores por el agonista • Explica la actividad de agonistas.= ---------[RT] kd + [F] : función desconocida que establece la proporcionalidad entre el estímulo al receptor y la respuesta del tejido e [F-R] S = -------[RT] EF e [F] ---. • Explica los cambios en la localización de las curvas concentración-respuesta a lo largo del eje de las concentraciones (potencia). .Interacción fármaco-receptor Teoría de Stephenson (1956) EF R = ------.= (S) Emax [F-R] [F] -------.

RECEPTORES DE RESERVA . Respuesta (%) 80 60 40 20 0 En presencia de un antagonista irreversible (GD-121).Interacción fármaco-receptor Nickerson (1956) 120 100 Experimentos en tiras de ileon de cobaya Histamina produce contracción. -9 -7 -5 -3 Log (M) Las evidencias experimentales sugerían que  1% de receptores necesitaban estimularse por la histamina para conseguir la respuesta máxima. Concentraciones más altas del GD-121 reducían la respuesta máxima de histamina. las curvas se desplazaban hacia la derecha sin cambios en la pendiente ni en la respuesta máxima.

Permite respuesta máxima sin la ocupación total de los receptores.Interacción fármaco-receptor ¿PORQUÉ HAY RECEPTORES DE RESERVA? 1. En ese caso la mitad del efecto máximo CE50=Kd. Los receptores de reserva pueden unir (e internalizarse) ligando extra para prevenir una respuesta exagerada si hay demasiado ligando presente Respuesta Ocupación Teoría anteriores asumen que todos los receptores deberían estar ocupados para producir una respuesta máxima. . Incrementa la sensibilidad del sistema 2. el efecto máximo se consigue con una ocupación parcial de receptores. A veces.

ya que se pueden tener eficacias diferentes en distintos tejidos.=  ----------Emax kd + [F] Furchgott (1966) e  = -----[RT] Eficacia intrínseca () = capacidad de un fármaco para iniciar un estímulo de un receptor Con este cambio. EF -----.Interacción fármaco-receptor Stephenson (1956) EF e [F] ---. la capacidad de generar estímulos constituye un término estrictamente relacionado con el fármaco La eficacia (e) del modelo de Stephenson es un término dependiente del tejido y del fármaco.=  Emax  [RT] [F] -------------kd + [F] .

Explica cómo las diferencias en la función de transducción y la densidad de los receptores en diferentes tejidos pueden incidir en el mismo agonista .Interacción fármaco-receptor Respuesta Ocupación Log (Agonista) Distinguir entre ocupación de un receptor por un agonista y la activación de ese receptor. distinción no era considerada en los primeros trabajos sobre receptores.

Interacción fármaco-receptor MEDIDA DIRECTA DE LA UNIÓN F-R ENSAYOS DE UNIÓN DE RADIOLIGANDOS estudios de “binding” Requisitos • La unión del radioligando debe ser un proceso saturable • La afinidad del radioligando debe ser elevada • La unión debe ser reversible • Competencia de agonistas/antagonistas con el radioligando .

Utilizar un tejido adecuado para el experimento 3. Seleccionar un método de separación para separar la fracción unida de la libre 4.Interacción fármaco-receptor FACTORES A CONSIDERAR EN EL DISEÑO DE EXPERIMENTOS DE BINDING 1. Identificar un método para diferenciar la unión específica de la no específica 5. Condiciones apropiadas para el ensayo: a. Reactivos adicionales para el binding d. Buffers utilizado c. Identificar un ligando radioactivo apropiado para el experimento 2. pH del buffer b. Temperatura de la reacción de binding .

Interacción fármaco-receptor Elección del radioligando Tipo de isótopo Afinidad • El radioligando debería ser químicamente estable en el medio y durante la reacción de binding • El radioligando debería ser puro El radioligando debería tener alta afinidad por el receptor La especificidad del radioligando debería ser bastante alta para detectar receptores en el tejido estudiado. Esto normalmente quiere decir una radioactividad específica de 30 Ci/mmol o mayor El radioligando debería tener un alto grado de selectividad por el receptor que se estudia Especificidad Selectividad .

Receptores solubles que están presentes en tejidos o receptores de membranas que se han solubilizado . cerebro) para estudios de binding en autorradiografía 5. Cortes histológicos de órganos (p.Interacción fármaco-receptor Preparación del tejido 1. Membranas celulares de tejidos de órganos que han sido lavadas varias veces para eliminar cualquier ligando endógeno 3. Células intactas de cultivos celulares 4. Membranas celulares aisladas de células de cultivos 2.e.

.Experimentos de saturación: determinación de Bmax y Kd 3.Interacción fármaco-receptor TIPOS DE ENSAYOS 1.Experimentos de competición: determinación de Ki 4..Experimentos de cinética .Determinación de la unión específica y no específica 2...

1.Unión específica y no específica Incubación del tejido con concentraciones crecientes del fármaco radiactivo UNIÓN TOTAL Repetir el experimento en presencia de una concentración saturante de ligando no radiactivo: UNIÓN NO ESPECÍFICA ..

Determinación de la unión específica y no específica UNIÓN ESPECÍFICA = UNIÓN TOTAL .UNIÓN NO ESPECÍFICA .

Experimentos de saturación Sirven para el cálculo de la densidad de receptores (Bmax) y la constante de disociación (Kd) Bmax significa todos los receptores que están ocupados por el radioligando Es la unión total.2. Kd es la concentración de radioligando necesaria para unirse al 50% de los receptores ..

.2. [F] [F-R] = ------------Kd [B] = [F-R] Radioligando unido (pM) =cantidad unida [Bmax] = RT = nº total de sitios de unión (pmol/mg proteína) [Bmax-B].Experimentos de saturación [RL]. [F] [B] = ------------------Kd Radioligando libre (M) .

= -----.[B] + --------[F] Kd Kd .+ --------[F] Kd Kd Ecuación para la representación de Scatchard [B] -1 Bmax ----.= -----. [F] [B] = ---------------Kd [B] -B Bmax ----.Interacción fármaco-receptor [Bmax-B].

Curvas de saturación La unión también se mide en presencia de la misma concentración de radioligando más concentraciones crecientes de ligando no marcado .-Experimentos de competición (inhibición) Miden la capacidad de una sustancia no marcada para competir con el radioligando Sirven para el cálculo de la constante de inhibición (Ki) La unión se mide en presencia de una concentración muy alta de radioligando para ocupar todos los receptores.3.

permiten determinar la Kd. para utilizarlo como tiempo de incubación en los experimentos de saturación y competición. .La determinación de K+1..Determinar el tiempo al cual se alcanza el estado de equilibrio.Experimentos cinéticos de asociación y disociación La concentración de receptores se mantiene constante y la fijación se determina en función del tiempo Radioligando unido (cpm) Estado de equilibrio Tiempo (minutos) Estos experimentos permiten: . .4. Junto con la K-1 estimada en los estudios de disociación.

• Tienen afinidad pero NO actividad • Dos tipos – Competitivos – No competitivos .Interacción fármaco-receptor Fármacos antagonistas • Interaccionan con los receptores pero NO los modifican.

Interacción fármaco-receptor Antagonismo Competitivo • Compite con el agonista por el receptor • Remontable aumentando la concentración del agonista • Desplaza las curvas concentración respuesta del agonista hacia la derecha • Reduce la afinidad del agonista. incrementa 1/Ke (constante de disociación 110 90 % Contracción 70 50 30 10 -10 -10 -9 -8 -7 -6 -5 -4 -3 -2 -1 ACh ACh +A 10-8 ACh +A 10-7 ACh +A 3x10-7 Acetilcolina (Log M) ..

Interacción fármaco-receptor ANTAGONISMO COMPETITIVO Reversible NA NA + Propranolol NA NA + Fenoxibenzamina Irreversible Fenoxibenzamina .

Interacción fármaco-receptor ANTAGONISMO COMPETITIVO Reversible Irreversible % Respuesta % Respuesta B =0 B =10 B =100 B=0 B=10 B=100 Log (A) Log (A) .

Interacción fármaco-receptor Antagonismo no competitivo • El fármaco se une al receptor y permanece unido • Es irreversible • Cuanto más receptores se ocupan (esencialmente se inactivan) el agonista es incapaz de alcanzar el efecto máximo • No modifica la afinidad del agonista .

Interacción fármaco-receptor ANTAGONISMO NO COMPETITIVO B =0 % Respuesta B =10  Emax = Kd B =100 Log (A) .

[A-R] .[R-B] [A] x ([RT] .= 1 + ------[RT] [RT] [kA] (1 + ------.[R-A] .[B-R]) x k1A = [A-R] x k-1A [R-B] [R-A] -------.Cálculo de la potencia de un antagonista [A] + [R] k1A [A-R] [B] + [R] k1B [B-R] k-1A En equilibrio: k-1B [RT] = [R] + [R-A] + [R-B] [A] x [R] x k1A = [R-A] x k-1A [B] x [R] x k1B = [R-B] x k-1B [R] = [RT] .) [A] .

+---------------[A] kA [A’] kA (1+ [B]/kB) [A] [B] -----.= ----------------------------[RT] [A] + kA (1+ [B]/kB) [R-A] [A’] -------.Interacción fármaco-receptor kB [R-A] kA kB ------.= 1 + -------[A’] kB .= ------.(1 + ------.= ------.+----.) -1 [B] [RT] [A] [B] [R-A] [A] -------.) (1 + ---.= ------------[RT] [A] + kA [R-A] [A] -------.= -----.(1+ [B]/kB) [A] kA [A] [A] [A’] [A’] ----.= ------------------------[A] + kA [A’] + kA (1+ [B]/kB) [A’] kA ----.= -------------------------------[RT] [A’] + kA (1+ [B]/kB) Gaddum Schild (1947) simplificó la ecuación de Gaddum de la siguiente manera: [A] [A’] -----------.

CÁLCULO DEL pA2 [A] [B] -----.log KB log B = log KB -9 -8 -7 -6 -5 Log B pA2 = .-1 = -----[A’] kB log ([A’]/[A] -1) = log B.Log B Representando en abscisas log B y en ordenadas log ([A']/[A] -1).= 1 + -------[A’] kB Representación de Schild [A] [B] -----. . se obtiene una línea recta de pendiente 1 y la intersección con el eje de abscisas es = log KB por tanto podemos determinar la constante de afinidad (1/KB) del antagonista competitivo.

log KB La medida práctica del antagonismo no competitivo se efectúa determinando el pD'2 que es el logaritmo cambiado de signo de la concentración molar del antagonista que reduce al 50% el efecto del agonista.5 -1 -7 -6 -5 -4 B =100 Log (A) -1.Interacción fármaco-receptor CÁLCULO DEL pD’2 PARA ANTAGONISTAS % Respuesta 0. .5 NO COMPETITIVOS B =0 B =10 log (X-1) 0 -8 -0.5 -2 Papaverina (Log M) pD’2 =-Log B log ([Emax]/[E'max] -1) = log B.

Interacción fármaco-receptor Curvas Dosis-respuesta • Graduales – respuesta medida en una escala continua • Cuantales – respuesta del todo o nada – Relaciona dosis y frecuencia de respuesta en una población de individuos – A menudo derivadas de frecuencia de distribución de dosis requerida para producir un efecto específico .

Interacción fármaco-receptor Curvas dosis-respuesta cuantal (respuestas de sí/no) Curvas dosis-frecuencia .

Interacción fármaco-receptor Cuantificación de la seguridad Índice Terapéutico = Porcentaje de respuesta 100 DL50 DE50 sueño muerte sueño 100 muerte 50 50 0 DE50 DL50 0 DE50 DL50 .

0 (algunos fármacos para el cáncer ) a: >1000 (penicilina) Fármacos que actúan sobre el mismo receptor o sistema enzimático a menudo tienen el mismo IT .Interacción fármaco-receptor Cuantificación de la seguridad Índice Terapéutico = DL50 DE50 Cuanto más alto es el IT mejor es el fármaco El IT varia de: 1.