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Inmovilización de enzimas

Inmovilización de enzimas

Se entiende por enzima inmovilizada (EI) aquella física/químicamente asociada a, o contenida en, un soporte/matriz no esencial para su actividad. La inmovilización permite la utilización de las enzimas en procesos continuos, lo que permite aumentar su productividad, ó bien para facilitar la separación del catalizador de sus productos, simplificando la etapa posterior de purificación.

Inmovilización de enzimas .

la factibilidad de su utilización en forma inmovilizada es poco probable. propiedades fisicoquímicas. Se torna evidente que si el costo de una enzima es muy bajo.Inmovilización de enzimas   La utilización de enzimas inmovilizadas o no dependerá de una evaluación económica de las alternativas. eficiencia de inmovilización y carga del soporte. donde se considerarán datos de cinética y estabilidad. . costo.

Inmovilización de enzimas .

Ejemplos de enzimas inmovilizadas .

química y biológica  Insolubilidad  Hidrofilicidad  Elevada razón área/volumen  Regenerabilidad  Bajo costo Por regla. . no todas estas propiedades están simultáneamente presentes en un determinado soporte: necesario evaluar todas las alternativas.Soportes Un soporte para inmovilización debe tener las siguientes propiedades:  Elevada resistencia mecánica.

porosidad) controlables .Soportes Los soportes orgánicos presentan:  Buena relación área/volumen  Muy flexibles en su configuración  Bajo costo en algunos casos (residuos orgánicos) Los soportes inorgánicos a su vez presentan:  Mayor resistencia  Mayor regenerabilidad  Propiedades físicas (ej.

Sistemas de inmovilización    Las enzimas normalmente se inmovilizan a través de algún tipo de interacción entre sus residuos aminoacídicos y el soporte. al comprometer los aminoácidos en el. Para minimizar este problema se inmoviliza por intermedio de las moléculas de carbohidratos (enzimas glicoproteicas) o por la utilización de espaciadores. o vecinos del. Esto puede producir perdidas considerables de actividad. . sitio activo.

Sistemas de inmovilización  Los métodos de inmovilización se pueden dividir en: .

Este método permite valores elevados de carga enzimática (hasta 1 gramo de enzima por gramo de soporte). en condiciones apropiadas de pH y fuerza iónica. efectos hidrofóbicos y de carga iónica . dejados en contacto por un determinado periodo y después lavado para remover la proteína no adsorbida.Adsorción    Este un método simple de inmovilización. en el que el soporte es mezclado con las enzimas.Sistemas de inmovilización . Las interacciones implicadas son resultantes de fuerzas de van der Waals.

.Adsorción   La selección del soporte pasa por su capacidad de retener la enzima.Sistemas de inmovilización . sin dejar desorber nuevamente al seno del liquido. vidrio y sílica porosa). además de materia inorgánica (bentonita. Como ejemplos de soporte tenemos materias orgánicas neutras (carbón activo y celulosa) y cargadas (quitina. intercambiadores aniónicos y catiónicos). actividad enzimática obtenida. posibilidad de regeneración y costo. alúmina.

Adsorción  Ejemplo: preparación de invertasa inmovilizada Soporte DEAE-Sephadex (intercambiador aniónico) CM-Sephadex (intercambiador catiónico) pH 2.5 0 100 75 pH 4.7 100 pH 7.0 100 34 .Sistemas de inmovilización .

la diazotación. .> -OH >> -NH3+  La reacciones químicas que se pueden utilizar incluyen la acilación.> -NH2 > -COO. Estos grupos son reactivos según la siguiente orden: -S. la disulfuración y la activación a través de sales de metales de transición. la alquilación.Sistemas de inmovilización – Enlace Covalente    La unión covalente se produce entre grupos funcionales del soporte y determinados grupos en los residuos aminoacídicos de la molécula enzimática.> -SH > -O.

Se puede combinar la adsorción con la formación de enlaces covalente. . hacer el entrecruzamiento entre las enzimas ó mezcladas con otras proteínas inertes. Este ultimo es ampliamente utilizado para. además de inmovilizar enzimas a soportes. con lo que se obtiene un aumento sustancial de la estabilidad del catalizador.Sistemas de inmovilización – Enlace Covalente    Ejemplo de químicos son la carbodiimida y el glutaraldeído. hasta se producir agregados insolubles de tamaño considerable.

Sistemas de inmovilización – Enlace Covalente  Como ejemplo tenemos la inmovilización de invertasa en quitina de camarón: .

lo suficientemente compacta para retener la enzima. la enzima es contenida entre las cadenas de una red polimérica.Sistemas de inmovilización – Inclusión en matrices   En este método. pero capaz de permitir el libre flujo de reactantes. . Esto tiene la implicación que solo es útil este tipo de inmovilización cuando se pretende procesar sustratos y productos de muy bajo peso molecular.

tener pobres propiedades mecánicas y severas restricciones difusionales. donde el alginato de calcio es ampliamente utilizado. . Otros ejemplos de matrices son los geles de poliacrilamida y el almidón.Sistemas de inmovilización – Inclusión en matrices    Este método es más adecuado para inmovilizar células. una baja estabilidad. Estos presentan las desventajas de: ser no regenerables.

tenemos las membranas de ultrafiltración y diálisis. Como ejemplo. dispersas en un solvente inmiscibles con agua.Sistemas de inmovilización – Retención por membranas    En este tipo de sistemas la enzimas permanece libre el solución. Otro método consiste en la microencapsulación. separada del medio de reacción por una membrana protectora que solo permite el libre paso de los reactantes (sustrato/producto). que produce una delgada película (nylon). . en la cual se produce una reacción de polimerización en la superficie de las gotas de solución enzimática. casi sin restricciones difusionales.

Principales características de los métodos de inmovilización: Características Adsorción Simples bajo variable si amplia Enlace covalente dificil elevado fuerte no selectiva Inclusión en matrices dificil moderado flaca si amplia Retención por Membranas Simples elevado fuerte no Muy amplia Preparación Costo Fuerza de ligación Liberación de enzima Aplicabilidad Problemas en la utilización Efectos de la matriz Restricciones difucionales elevados si no bajos si no elevados si si elevados no si Protección microbiana no no si si .

Parámetros de inmovilización   Hay dos parámetros a considerar en la inmovilización: el rendimiento de inmovilización y la capacidad de carga del soporte. El rendimiento de inmovilización (RI) es dada por:  Algunos autores usan: .

Parámetros de inmovilización  Ejemplo del rendimiento inmovilización (%) glucoamilasa: de de .

para aumentar la CC se tiene que sacrificar el EI y viceversa. es decir. EI y CC. . están frecuentemente en compromiso. lo que viene dada por:  Ambos los parámetros.Parámetros de inmovilización  La capacidad de carga (CC) del soporte se define como la actividad cargada expresada en el catalizador (EI) por unidad de peso seco del soporte (W).