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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO DEPARTAMENTO DE QUIMICA

SECCION DE ANALISIS QUIMICO INSTRUMENTAL

“METODOS Y CURVAS DE CALIBRADO

EN ANALISIS INSTRUMENTAL”

MsC Alfredo Cruz Monzón
Trujillo – Perú

etc). %emisión. que viene a un grafico que representa la zona donde la señal analítica es directamente proporcional a la concentración.METODOS DE CALIBRADO En muchos análisis químicos por vía instrumental es común medir la respuesta analítica de un instrumento (absorbancia. área. ante cantidades conocidas de analito (patrones o estándares). relación conocida como Ley de Beer – Lamberg. Es también común representar dicha relación mediante las llamadas “Curvas de Calibración”. .

Omega. .etc). la veracidad. los cuales iden la respuesta del instrumento a las impurezas o especies interferentes de los reactivos.(casa comercial reconocida. Las disoluciones que contienen todos los reactivos y disolventes usados se llaman disoluciones en blanco o simplemente blanco . Aldrich. Disoluciones Standard: Aquella que contiene una cantidad conocida de analito por preparación directa en un laboratorio de ensayos químicos. por ejemplo Merck. precisión y exactitud con que se han preparado las disoluciones estándar. Sigma. Las disoluciones patrón sirven justamente para evaluar a través de un instrumento (adecuado y cualificado).Disoluciones Patrón: Aquella que contiene una cantidad perfectamente conocida de un analito particular .

Preparar muestras conocidas de analito que cubran el intervalo adecuado de concentraciones que cumplan con la ley de Beer. 3. Determinar la pendiente y ordenada en el origen con sus respectivas incertidumbres (en trabajos detallados cada estándar de lee mínimo 5 veces). 5.CONSTRUCCION DE CURVAS DE E CALIBRADO 1. que se encuentran comprendidos en la zona lineal. 4. 6. Trazar un grafico con las respuestas del instrumento frente a la concentración del analito determinado. Determinar la mejor recta que ajusta dichos datos (incluyendo el blanco). la cual tiene la forma: Respuesta Método Analítico = A + B X Y = A + BX . 2. Obtener la ecuación de regresión lineal que ajusta dichos datos. para corregir la respuesta del mismo a la presencia de algún contaminante. Calibrar el instrumento a cero con el blanco.

por cuando cabe la posibilidad que exista desviaciones tanto positivas como negativas de la ley de Beer. es el intervalo en el cual hay una respuesta del instrumento al analito aun cuando no sea lineal. el cual no debe sobrepasar el 1% para poder afirmar que los valores son estadísticamente similares.El intervalo lineal de un método analítico. Antes de la construcción de la curva de calibrado se hace necesario realizar el estudio estadístico de descarte de datos. Se debe medir entonces solamente en el intervalo lineal. . es el intervalo de concentraciones del analito en que la respuesta es proporcional a su concentración. El intervalo dinámico. y en caso de haber valores fuera del mismo se deben realizar las convenientes diluciones de muestra. No es fiable extrapolar la curva de calibrado para leer un valor que esta fuera de él. o en su defecto el calculo de %Coeficiente de Variación.

entonces se obtiene una absorbancia de 0.000 0. de un residuo sólido.111 Si se toman 5.067 0.00 0.METODO DE CURVA DE ESTANDARES EXTERNOS Ejemplo: Se requiere cuantificar el grado de contaminación por nitritos (NO2-).043 0.20 0. Se usaron en la metodología fiolas de 50 mL para preparar las s sgtes disoluciones estándar: Estándar 1 2 3 4 5 6 ppm NO20.60 0. Determinar las ppm en la muestra solida analizada .80 1.088 0.022 0.40 0.024.00 Absorbancia 0.1244 g de una muestra solida y se extrae los nitritos hacia una fiola de 100 mL y de allí se colocan 5 mL de muestra y se le trabaja exactamente como los estándares (aforando finalmente a la marca con agua destilada).

0003 R² = 0.02 Concentración Nitritos (ppm NO2-) .06 0.2 0.4 0.12 0.1 y = 0.111x .2 -0.Determinacion de Nitritos por Espectrofotometria Molecular 0.8 1 1.02 0 0 0.6 0.04 0.08 Absorbancia 0.0.9998 0.

a cada una de las fiolas. 4. Depositar en una serie de fiolas una mismo volumen de muestra “Vx” 2. Añadir volúmenes crecientes de una disolución estándar (de concentración “Cs”). . siendo la mas habitual. Se puede aplicar de diferentes formas. Leer en el instrumento correspondiente la cual emitirá la señal analitica “S”. 3. Aforar a la marca con los reactivos y disolvente (“Vt”).METODO DE ADICION DE ESTANDARD Es especialmente útil en el análisis de muestras complejas. la sgte: 1. con lo cual las medidas se van haciendo en la muestra original y después de cada adición de estándar sobre la muestra. 5. en donde es considerable el efecto de la matriz. Es posible también hacer adiciones sucesivas de la disolución estándar a un mismo volumen fijo de muestra.

Cs = concentración del analito en la solución estándar. S = señal analitica del instrumento Si la respuesta del instrumento respecto al volumen de estándar añadido (Vs). es lineal. entonces: S α Cx) Vs Cs + Vx Cx Vt S = K ( Vs Cs + Vx Vt S = K Vs Cs + K Vx Cx CS) Vs Vt Vt S = K VX CX + (K Vt Vt Al comparar con la ecuacion: Y = A + BX . tomada.Resumiendo: Vx = volumen de muestra (alicuota). Cx = concentración del analito en la muestra problema Vs = volumen de estandar añadido.

El valor de Cx (concentración del analito en la muestra). 10 . Si se les reduce a cada una de ellas para finalmente hacer reaccionar el Fe2+ con fenantrolina.En donde los valores de “A” y “B”. se puede obtener simplemente relacionando: A = B De donde: Cx = ( K Vx Cx )/Vt (K Cs ) / Vt A * Cs B * Vx = Vx Cx Cs Ejemplo: En 05 fiolas de 50 mL se depositan exactamente 10 mL de una muestra de agua mineral. Si el fotómetro reporta los sgtes valores . y se les adicionan secuencialmente 0 . 15 y 20 mL de una disolución patrón que contiene 11.1 ppm Fe3+. se pueden determinar de la acuación de ña recta ajustada por los mínimos cuadrados. 5 . entonces se desarrolla el color rojo característico.

00 20.9998 Absorbancia 0.00 10.621 0.6 0.2 1 y = 0.009 Calcular las ppm Fe total presente en la muestra analizada.2412 R² = 0. Determinacion de Fe por Espectrofotometria .0382x + 0.00 15.2 0 5 10 15 20 25 Volumen de estandar añadido (mL) .Estándar Vs (mL S.240 0.Adicion de Estándar 1.4 0.2 0 -10 -5 -0.437 0.809 1.8 0.00 Absorbancia 0. Patron) 1 2 3 4 5 0.00 5.

nos queda: Cx = __S1 Cs Vs___ ( S2 – S1) Vx . para lo cual se hará solamente una única adición de estándar (Vs) a una de las 02 muestras. Donde: S1 = K Vx Cx / Vt S2 = K (Vx Cx + Vs Cs ) / Vt Dividiendo y despejando Cx (concentración desconocida). (por cuestiones de ahorro de tiempo y volumen de muestra) . S2 = señal analítica de la muestra y el estándar añadido. el uso de sólo 02 fiolas.Es posible también. con lo cual: S1 = señal analítica de la muestra diluida.

y se lleva a lectura en un equipo de Absorción Atómica (AAS). con lo cual se obtienen absorbancias de 0.Ejemplo: Se tienen 02 fiolas de 50 mL en los cuales se depositan exactamente 25 mL de una muestra de agua residual filtrada y clarificada. . Se adiciona a una de ellas 2 mL de una disolución patrón de 2. Determinar las ppm Cu.50 ppm Cu. presente en la muestra problema. Se aforan ambas fiolas hasta la marca con una solución de HNO3 al 1%.40 respectivamente.80 y 1.

varía algo cada vez que se utilizan por razones que son difíciles de controlar. por cuanto se pierde la misma fracción de ambos en cualquier operación. Son especialmente útiles cuando la cantidad de muestra analizada (o la respuesta del instrumento). . Verificando su constancia de variación. Consiste en añadir una cantidad medida de patrón interno a la muestra problema. Asimismo es de gran utilidad cuando pueden darse perdidas de muestra durante los pasos de preparación previo al análisis. para posteriormente y medir la relación (patrón interno/analito).METODO DEL PATRON INTERNO Un patrón interno es una cantidad conocida de un compuesto que es diferente al analito de interés pero que se añade a las muestras (o estándares). y luego se mide la respuesta relativa del detector a las 2 especies. problema. Para usar un patrón interno se prepara primero la mezcla conocida tanto del patrón interno como del analito.

.00 5 10.La señal de respuesta a graficar en el eje “Y”.00 5.11 0.4 95 En una fiola identica se colocan 20 mL de muestra y una cantidad de Li suficiente para que al aforar a la marca tenga tambien 1000 ppm Li. mientras que en el eje “X” se ubican siempre las concentraciones del aalito en los estandares: Ejemplo: Se tienen 05 estándares cuyas concentraciones en Sodio son: 0.00 Emision Na+ 0. 5.50 1. a la vez que son de 1000 ppm Li. (Fiolas de 100 mL) Al leer en un equipo de AES (emision atomica).50 73.50 .10 0.00 80.00 Muestra 4.4 para el sodio y una intensidad de 95 para el Litio.00 91.00 128. no es la del analito.90 Emision Li 86. Calcular las ppm Na en la muestra problema.52 1. 10 ppp Na.00 .10 . 0. sino el cociente (señal analito/señal patron interno).80 5.00 9. se obtuvieron los sgtes datos expeerimentales: Estándar 1 2 3 4 ppm Na+ 0. 1.00 . Al leerla se obtiene una intensidad de emision de 4.

Estándar 1 2 3 4 5 Muestra ppm Na+ 0.00 73.50 4.52 1.00 5.90 9.06484 0.00 128.13014 0.4 Emision Li 86.00 10.00 95 (Emis Na+/Emis Li) 0.10 0.0065 0.11 0.00128 0.00 80.80 5.04632 Para Graficar: .00 91.50 1.00 Emision Na+ 0.01406 0.

00 8.00 2.00 10.013x + 0.0003 R² = 0.12 (Emision Na+/Emision Li) y = 0.04 0.00 6.02 0 0.06 0.1 0.Patron Interno 0.08 0.Determinacion de Sodio por Emision Atomica .9999 0.00 4.14 0.00 Concentración Sodio (ppm Na+) .00 12.