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天然药物化学成分提取分离

方法

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化学成分提取分离方法
• 天然药物化学研究常从有效成分或生理活性成分的提取

、分离工作开始。在进行提取之前,应了解所用材料的
基源(如动、植物的学名)、产地、药用部位、采集时
间与方法等。
目的物为已知成分或已知化学结构类型,如从甘草中提
取甘草酸、麻黄中提取麻黄碱,或从植物中提取某类成
分如总生物碱或总酸性成分时,工作比较简单。一般宜
先查阅有关资料,搜集比较该种或该类成分的各种提取
方案,尤其是工业生产方法,在根据具体条件加以选用

从中草药或天然药物中寻找未知有效成分或有效部位时
,情况就比较复杂。只能根据预先确定的目标,在适当
的活性测试体系指导下,进行提取、分离并以相应的动
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一、有效成分的提取

溶剂提取法

水蒸气蒸馏法

升华法

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溶剂提取法

• 溶剂提取法系选择适当溶剂将中草药中的化学成分从药
材中提取出来。

• 天然药物中的化学成分在溶剂中的溶解度直接与溶剂性
质有关。溶剂可分为水、亲水性有机溶剂和亲脂性有机
溶剂。一些常见溶剂的脂性的强弱顺序如下:

• 石油醚 > 苯 > 氯仿 > 乙醚 > 乙酸乙酯 > 丙酮 > 乙醇 > 甲
醇 >水

• 天然药物化学成分可通过结构估计它们的极性。
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溶剂提取法

• 甙类的分子中结合有糖分子,羟基数目多,能表现强亲
水性,而甙元则属于亲脂性化合物,而生物碱盐,能够
离子化,加大了极性,就变成了亲水性化合物。鞣质是
多羟基衍生物,列为亲水性化合物。油脂、挥发油、蜡
、脂溶性色素都是强亲脂性成分。

• 萜类、甾体等脂环类及芳香类化合物因为极性较小,易
溶于氯仿、乙醚等亲脂性溶剂中;

• 糖苷、氨基酸等成分极性较大,易溶于水及含水醇中;
• 酸性、碱性及两性化合物,因为存在状态(分子或离子
形 式 ) 随 溶 液 而 异 , 故 溶 解 度 将 随 pH 而改变。

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溶剂提取法

• 只要中草药成分 的亲水性和 亲脂性与溶 剂
的此项性质相当 ,就会在其 中有较大的 溶
解度,即所谓“ 相似相溶” 的规律。这 是
选择适当溶剂自 中草药中提 取所需要成 分
的依据之一。

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水蒸气蒸馏法

• 水蒸气蒸馏法只适用于具有挥发性、能随
水蒸气蒸馏而不被破坏,与水不发生反应
,且难溶或不溶于水的成分的提取。天然
药物中的挥发油、某些小分子生物碱如麻
黄碱、烟碱、槟榔碱以及某些小分子的酚
性物质如牡丹酚等的提取可采用水蒸气蒸
馏法。
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升华法

• 某些固体物质如水杨酸、苯甲酸、樟脑等受
热在低于其熔点的温度下,不经过熔化就可
直接转化为蒸气,蒸气遇冷后又凝结成固体
称为升华。天然药物中有一些成分具有升华
性质,能利用升华法直接中药材中提取出来。
但天然药物成分一般可升华的很少。

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二、有效成分的分离与精制

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化学成分分离精制常用方法
原理

根据物质溶解度差别进行分离

根据物质在两相溶剂中的分配比不同进行

分离

根据物质的吸附性差别进行分离

根据物质分子大小差异进行分离

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㈠ 根据物质溶解度差别进行
分离
1 、利用温度不同引起溶解度的改变
2 、改变混合溶剂的极性
3 、调节溶液的 pH 值,改变分子的存在状态
4 、沉淀法
5 、盐析法

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1 、利用温 度不同引起溶解度的改

• 鉴定 中草 药化学 成分 ,研究 其化 学结构 ,必 须首先 将
中草 药成 分制备 成单 体纯品 。中 草药化 学成 分在常 温
下多 半是 固体的 物质 ,常具 有结 晶性的 通性 ,可以 根
据溶 解度 的不同 用结 晶法来 达到 分离精 制的 目的。

• 中草 药化 学成分 ,一 旦获得 结晶 ,就能 有效 地进一 步
精制 成为 单体纯 品。 纯化合 物的 结晶有 一定 的熔点 和
结晶 学的 特征, 有利 于鉴定 。因 此,求 得结 晶并制 备
成单 体纯 品,就 成为 鉴定中 草药 成分、 研究 其分子 结
构重 要的 一步。
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1 、利用温 度不同引起溶解度的改

• 结晶 法是 选用合 适的 溶剂, 将混 合物加 热溶 解,形 成
有效 成分 的饱和 溶液 ,趁热 过滤 除去不 溶的 杂质, 滤
液低 温放 置或蒸 去部 分溶剂 后再 低温放 置, 使有效 成
分大 部分 析出结 晶, 由于初 析出 的结晶 总会 带一些 杂
质, 因此 需要通 过反 复结晶 即所 谓重结 晶的 方法, 才
能得 到高 纯度的 晶体 。
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杂质的除去

• 结晶法所用的样品必须是已经用其它方
法提得比较纯的时候才能采用此法精制

• 结晶乃同类分子自相排列,如果杂质过
多,则阻碍分子的排列。如果粗提取部
分的纯度很差则很难得到结晶。
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杂质的除去

用溶剂溶出杂质,或只溶出所需要的成分。

用少量活性炭等进行脱色处理,以除去有色杂
质。

通过氧化铝、硅胶柱色谱处理(注意所需要的
成分也可能被吸附而损失)。

制备其晶态的衍生物(如游离生物碱可制备各
种生物碱盐类,羟基化合物可转变成乙酰化物,
碳基化合物可制备成苯腙衍生物结晶)。
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溶剂的选择

• 适宜的 溶剂 是在冷 时对 所需 要的成 分溶 解度较 小, 而热时
溶解度 较大 。溶剂 的沸 点亦 不宜太 高。 一般常 用甲 醇、丙
酮、氯 仿、 乙醇、 乙酸 乙酯 等。

• 有些化 合物 在一般 溶剂 中不 易形成 结晶 ,而在 某些 溶剂中
则易于 形成 结晶。 例如 葛根 素、逆 没食 子酸
( el lag ic aci d )在冰 醋酸 中易形 成结 晶, 大黄素 )在
吡啶中 易于 结晶, 萱草 毒素 在 DMF 中易得到 结晶 ,而穿 心
莲亚硫 酸氢 钠加成 物在 丙酮 一水中 较易 得到结 晶。 又如蝙
蝠葛碱 通常 为无定 形粉 未, 但能和 氯仿 或乙醚 形成 为加成
物结晶 。
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结晶溶液的制备

• 制备结 晶的 溶液为 过饱 和的 溶液。 一般 是应用 适量 的

溶剂在 加温 的情况 下, 将化 合物溶 解再 放置冷 处。 如
果在室 温中 可以析 出结 晶, 就不一 定放 置于冰 箱中 ,
以免伴 随结 晶析出 更多 的杂 质。
无定形 的粉 未状物 质, 远较 晶体物 质的 溶解度 大, 易
于形成 过饱 和溶液 。一 般经 过精制 的化 合物, 在蒸 去
溶剂抽 松为 无定形 粉未 ,加 入少量 溶剂 ,往往 立即 可
以溶解 ,稍 稍放置 即能 析出 结晶。 例如 长春花 总弱 碱
部分抽 松后 加入 1. 5 倍量的 甲醇 溶解, 放置 后很 快析
出长春 碱结 晶。又 如蝙 蝠葛 碱在乙 醚中 很难溶 解, 但
当其盐 的水 溶液用 氨液 碱化 ,并立 即用 乙醚萃 取, 所
得的乙 醚溶 液,放 置后 即可 析出蝙 蝠葛 碱的乙 醚加 成
物结晶 。
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结晶溶液的制备

• 制备结 晶溶 液,除 用单 一溶 剂外, 也常 采用混 合溶 剂

• 一般是 先将 化合物 溶于 易溶 的溶剂 中, 再在室 温下 滴
加适量 的难 溶的溶 剂, 直至 溶液微 呈浑 浊,并 将此 溶
液微微 加温 ,使溶 液完 全澄 清后放 置。

• β 一细辛 醚重结晶时 ,可 先溶 于乙醇 ,再 滴加适 量水
,即可 析出 很好的 结晶 。

• 虎杖中 提取 水溶性 的虎 杖甙 时,在 已精 制饱和 的水 溶
液上添 加一 层乙醚 放置 ,既 有利于 溶出 其共存 的脂 溶
性杂质 ,又 可降低 水的 极性 ,促使 虎杖 甙的结 晶化 。
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(4)

结晶纯度的判定

• 结晶的 纯度 可由化 合物 的晶 形、色 泽、 熔点和 熔距 、
薄层色 谱或 纸色谱 等作 初步 鉴定。

• 一个单 体纯 化合物 一般 都有 一定的 熔点 和较小 的熔 距
,同时 在薄 层色谱 或纸 色谱 中经数 种不 同展开 剂系 统
检定, 也为 一个斑 点者 ,一 般可以 认为 是一个 单体 化
合物。

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结晶纯度的判定

• 注意,有 的化合物在一 般层析条件 下,虽然只 呈现一个 斑点,
但并不一 定是单体成分 。例如鹿含 草中主成分 为高熊果 甙、异
高熊果甙 极难用一般方 法分离,经 反复结晶后 ,在纸层 及聚酞
胺薄层上 都只有一个斑 点,易误认 为单一成分 ,但测其 熔点在
115 ~ 125℃ ,熔距 很长。经 制备其甲醚后 ,再经纸层 层析检
定,可以 出现两个斑点 ,异高熊果 甙的比移值 大于高熊 果甙。

• HPLC 是近年 来可以用作 判断有效成 分纯度的一种 重要手段。
• 此外, GC 、 UV 光谱 等,均有助 于检识结 晶样品的纯 度。

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单晶的结构测定
• 单晶 X 射线 衍射
单晶 X 射线分
析是提 供晶 态下
分子三 维结 构,
确定分 子的 立体
结构( 构型 、构
象等) 的最 有效
方法。

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2 、改变 混合溶剂 的极 性
在溶液 中加入 另一 种溶剂 以改变 混合 溶剂的 极性 ,使
一部分 物质 沉淀析 出, 从而 实现分 离。

• 在药材 浓缩 水提取 液中 加入 数倍量 高浓 度乙醇 ,以 沉
淀除去 多糖 、蛋白 质等 水溶 性杂质 (水 / 醇法 );

• 在浓缩 乙醇 提取液 中加 入数 倍两量 水稀 释,放 置以 沉
淀除去 树 脂、叶 绿素 等水不 溶性 杂质( 醇 / 水法 )

• 在乙醇 浓缩 液中加 数倍 两乙 醚(醇 / 醚法)或 丙酮
(醇 / 丙酮 法) ,可使 皂苷 沉淀析 出,而 脂溶 性的树
脂等类 杂质 则留在 母液 中。
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3 、加酸碱调节 溶液的 pH 值
对酸性 、碱 性或两 性有 机化 合物来 说, 常可通 过加 入
酸、碱 以调 节溶液 的 pH 值,改 变分子 的存 在状态
(游离 型或 解离型 ), 从而 改变溶 解度 而实现 分离 。
• 内酯类 化合 物不溶 于水 ,但 遇碱开 环生 成羧酸 盐溶 于
水,再 加酸 酸化, 又重 新形 成内酯 环从 溶液中 析出 ,
从而与 其它 杂质分 离( 碱 / 酸法) ;
• 生物碱 一般 不溶于 水, 遇酸 生成生 物碱 盐而溶 于水 ,
再加碱 碱化 ,又重 新生 成游 离生物 碱( 酸 / 碱法)。
这些化 合物 可以利 用与 水不 相混溶 的有 机溶剂 进行 萃
取分离 。
• 可以分 为强 酸性、 弱酸 性和 酚性三 种, 它们分 别溶 于
碳酸氢 钠、 碳酸钠 和氢 氧化 钠,借 此可 进行分 离。
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4、

淀法

• 在中草 药提取 液中 加入某 些试 剂使产 生沉 淀,
以获得 有效成 分或 除去杂 质的 方法。

铅盐沉淀法

试剂沉淀法
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铅盐沉淀法

铅盐沉 淀法为 分离 某些中 草药成 分的 经典方 法之 一。

• 醋酸铅 及碱 式醋酸 铅, 能与 多种化 学成 分生成 难溶 的
铅盐或 络盐 沉淀, 故可 利用 这种性 质使 有效成 分与 杂
质分离 。

• 中性醋 酸铅 可与酸 性物 质或 某些酚 性物 质结合 成不 溶
性铅盐 。因 此,常 用以 沉淀 有机酸 、氨 基酸、 蛋白 质
、粘液 质、 鞣质、 树脂 、酸 性皂甙 、部 分黄酮 等。

• 与碱式 醋酸 铅产生 不溶 性铅 盐或络 合物 的范围 更广 。
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试剂沉淀法

• 在生物 碱盐 的溶液 中, 加入 某些生 物碱 沉淀试 剂( 见
生物碱 性质 下), 则生 物碱 生成不 溶性 复盐而 析出 。
水溶性 生物 碱难以 用萃 取法 提取分 出, 常加入 雷氏 铵
盐使生 成生 物碱雷 氏盐 沉淀 析出

• 用明胶 、蛋 白溶液 沉淀 鞣质 ;胆甾 醇也 常用以 沉淀 洋
地黄皂 甙等 。

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5 、盐 析法


盐析法 是在中 草药 的水提 液中、 加入 无机盐 至一 定浓
度,或 达到 饱和状 态, 可使 某些成 分在 水中的 溶解 度
降低沉 淀析 出,而 与水 溶性 大的杂 质分 离。
盐析用 的无 机盐有 氯化 钠、 硫酸钠 、硫 酸镁、 硫酸 铵
等。
三七的 水提 取液中 加硫 酸镁 至饱和 状态 ,三七 皂甙 乙
即可沉 淀析 出,自 黄藤 中提 取掌叶 防己 碱,自 三颗 针
中提取 小檗 碱在生 产上 都是 用氯化 钠或 硫酸铵 盐析 制
备。有 些成 分如原 白头 翁素 、麻黄 碱、 苦参碱 等水 溶
性较大 ,在 提取时 ,亦 往往 先在水 提取 液中加 入一 定
量的食 盐, 再用有 机溶 剂萃 取。
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根据物质在两相溶剂中的分
配比不同进行分离

• 分配系数( K )

两种相 互不 能任意 混溶 的溶剂

(如氯 仿与 水)如 置分 液漏 斗中充 分振 摇,放 置后 即
可分成 两相 。此时 如果 其中 含有溶 质, 则溶质 在两 相
溶剂中 的分 配比( K )在一定 温度 及压力 下为一 常数
,可以 下式 表示:
K=CU/CL

• K :分配 系数; CU :溶质 在上 相溶剂 中的 浓度 ;
CL :溶质 在下 相溶剂 中的浓 度。
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根据物质在两相溶剂中的分
配比不同进行分离

1 、液 - 液 萃 取 法
2 、逆流连续萃取法
3 、逆流分配法( CounterCurrent Distribution , CCD )
4 、液滴逆流色谱法( DCCC )
5 、高速逆流色谱法( HSCCC )
6 、气液分配色谱( GC 或 GLC )
7 、液 - 液 分 配 色 谱 ( LC 或 LLC )
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1 、液 - 液萃取法
• 利用混合 物中各成分在 两种互不相 溶的溶剂中 分配系数 的不同
而达到分 离的方法。

• 萃取时如 果各成分的分 配系数相差 越大,分离 效率越高 。
• 水提取液 中的有效成分 是亲脂性的 物质,一般 多用亲脂 性有机
溶剂,如 苯、氯仿或乙 醚进行两相 萃取;有效 成分是偏 于亲水
性的物质 ,需用弱亲脂 性的溶剂, 例如乙酸乙 酯、丁醇 等。

• 提取黄酮 类成分多用乙 酸乙脂和水 的两相萃取 。提取亲 水性强
的皂甙则 多选用正丁醇 、异戊醇和 水作两相萃 取。

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液 - 液萃取法操作注意事项

先用小 试管猛 烈振 摇约 1 分钟 ,观 察萃取 后二 液层
分层现 象。 如果容 易产 生乳 化,大 量提 取时要 避免 猛
烈振摇 ,可 延长萃 取时 间。 如碰到 乳化 现象, 可将 乳
化层分 出, 再用新 溶剂 萃取 ;或将 乳化 层抽滤 ,或 将
乳化层 稍稍 加热; 或较 长时 间放置 并不 时旋转 ,令 其
自然分 层。 乳化现 象较 严重 时,可 以采 用二相 溶剂 逆
流连续 萃取 装置。

水提取 液的浓 度最 好在比 重 1. 1 ~ 1. 2 之间, 过
稀则溶 剂用 量太大 ,影 响操 作。
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2 、高速逆流色

(High-speed Countercurrent Chromatography , HSCCC)

• 大多数 色谱 法都需 要有 固相 载体某 种形 式的选 择性 吸

附作用 。在 应用固 相载 体色 谱分离 中, 往往会 存在 不
同程度 的不 可逆吸 附, 造成 被分离 样品 的损失 ,尤 其
在分离 微量 样品时 受到 限制 。
高速逆 流色 谱,是 近十 年迅 速发展 起来 的新型 液— 液
分配色 谱技 术。与 其它 液相 色谱分 离方 法相比 .它 不
使用固 相载 体作固 定相 ,被 分离物 质在 互不相 溶两 相
分配分 离, 克服了 固相 载体 带来的 样品 吸附、 损失 、
污染、 峰形 拖尾等 缺点 。且 花费溶 剂少 ,分辨 率高 ,
可进行 纯品 制备。 利用 HSCCC ,中草 药粗提 物的 分
离纯化 制备 可同步 完成 ,被 分离物 可定 量回收 。

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HSCCC 的工作原理

• 两种互 不相溶 的溶 剂在聚 四氟 乙烯管 内作 高
速行星 运转, 其中 一相溶 剂作 固定相 ,用 恒
流泵输 送载有 样品 的另一 相溶 剂穿过 固定 相
,两相 溶剂在 螺旋 管中实 现高 效的接 触、 混
合、分 配和传 递。 由于样 品中 各组分 在两 相
中的分 配能力 不同 ,导致 在聚 四氟乙 烯管 中
移动的 速度也 不同 ,从而 使样 品中各 组分 得
到分离 。
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⑵ HSCCC 的特点
1 、 应用范围广,适应性好

由于溶 剂系 统的

组成与 配比 可以是 无限 多, 因而 HSCCC 适用于 任何
极性范 围的 品的分 离, 特别适 用于 分离极 性大 的组
分以及 一些 生物大 分子 。

2 、 操作简便,容易掌握

对样品的 预处 理要

求低, 一般 的粗提 物即 可进 行 HSCCC 的制备分 离
或分析 。

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⑵ HSCCC 的特点
3 、回收率高

固定相为液体,无需固体作载体,

克服气、液相色谱使用固相载体带来的样品吸附、
损失、污染、峰形拖尾等缺点。

4 、重现性好

分离过程稳定、峰的保留相对标准

偏 差 小 于 2 %,

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⑵ HSCCC 的特点
5 、分离效率高,分离量较大

与一般 色谱 的分
离方式 不同 ,能实 现梯 度操 作和反 相操 作、亦 能进
行重复 进样 ,特别 适用 于制 备性分 离, 产品纯 度高
,制备 量大 ,溶剂 消耗 少。

• 较大的 制备 型 HSCCC ,柱容 积可达 530ml ,一 次
最多进 样可 达 20g 粗品; 较小的 分析 型的 HSCCC
柱容积 为 8mL ,进样 量为几 十微 克,最 大转 速可
达 4000r / min. 因此,被 广泛 地应用 于植 物化学
成分的 分离 制备研 究。
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⑵ HSCCC 的特点
• 根据以 上特 点, HSCCC 适合于 中药 成分的 分离 和
分析。 目前 高速逆 流色 谱仪 已成功 地开 发出 分析型
和 制备型 两大系 列。制 备或 半制备 HSCCC 的特点
是高流 速、 高浓度 ,不 但 适用于非 极性 化合物 的分
离,也 适用 于极性 化合 物的 分离 。在制 备分离 方面
, 可用于中 药粗 提物中 各组 分的分 离 ,也可 进一步
精制, 甚至 直接从 从粗 提物 —步纯 化到 纯品, 来 制
备中药 化学 成分标 准品 。
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⑵ HSCCC 的应 用
• HSCCC 的分离效率与气相色谱和高效液相色谱
等技术相比较,前者不适宜用它完成组成复杂的
混合物的全谱分离分析。而其对于样品的预处理
条件较放松及回收率高,制备量大,特别适用于
特定部位和特定组分的分离纯化与制备。

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HSCCC 的应 用

• 制备 中药化 学对照 品

中草 药化学对照 品应具有 高度均匀性 ,量值准确性 和良好稳
定性,其 纯度要求很高 。制备型 HPLC 曾是国外常 用的主要
手段。但 是其设备和载 体填料价格 很高.对样 品前期处 理要求
严格,存 在不可逆吸附 ,溶剂用量 大的缺点。 因此致力 于
HSCCC 分离、统化、 制备中草药 有效成分 对照品的研 究和产
业化,具 有现实意义。

• 从银杏叶 中制备异鼠李 素、山奈酚 、槲皮索、 白果内酯 和橙皮
甙;从大 黄制备大黄羟 基蒽醌甙元 ;从洋地黄 叶中制备 洋地黄
毒甙;从 虎杖中分离提 纯白藜芦醇 和白藜芦醇 甙等。
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3 、高效液相色谱 (HPLC)
• HPLC 是在 经典 液相色谱 基础 上引 入气相 色谱 的塔
板理论 ,并 采用了 高压 输液 泵、高 效固 定相和 高灵
敏度的 检测 器,具 有分 析速 度快、 分离 效率高 和操
作自动 化特 点的一 种色 谱技 术。

• HPLC 特别 适合 高沸点、 大分 子和 热稳定 性差 的化
合物的 分离 分析。 中药 的成 分非常 复杂 ,以往 常用
的薄层 色谱 等方法 因其 精密 度、准 确度 、灵敏 度、
重现性 差而 不能满 足中 药现 代化发 展的 需要。 高效
液相色 谱正 是以其 稳定 、可 靠、高 效的 特点成 为中
药研究 的最 重要的 分析 方法 。 常用 于 中药质量 的控
制、天 然药 物化学 成分 的分 离及分 析测 定等。
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3 、高效液相色谱 (HPLC)
• 检测器 是液 相色谱 的三 大关 键部件 (高 压输液 泵、
高效色 谱柱 和检测 器) 之一 。其发 展在 某种意 义上
决定着 HPL C 技术的 进步 。理想 的检测 器应 具有 以下
特点:
⑴ 灵敏度 高;

对温度 变化和 流量 波动不 敏感 ;
死体积 小,不 使峰 额外地 扩展 ;


对溶剂 无响应 ,能 用于梯 度洗 脱操 作
线性范 围宽;


对所有 样品都 有响 应;
对样品 无破坏 性。
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3 、高效液相色谱 (HPLC)
• 检测器 的种 类繁多 ,至 今还 没有一 种检 测器可 以同
时满足 以上 几点要 求。 有紫 外—可 见分 光检测 器、
荧光检 测器 、示差 折光 检测 器、电 化学 检测器 、二
极管阵 列检 测器、 测定 大分 子绝对 分子 量的多 角度
激光光 散射 仪。另 外还 有蒸 发光检 测器 、化学 发光
检测器 、手 性检测 器 ( 旋光 检测 器、圆二 色检 测
器 ) 、分子 量检 测器、 放射 性检 测器、 热学性 质检
测器、 光电 导检测 器、 磁旋 光检测 器等 。

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常用的 HPLC 检测器

紫外 - 可见分光检测器

示差折光检测器

二极管阵列检测器

蒸发光检测器

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紫外检测器( UVD )

• 优点

UVD 结构简 单, 使用方 便, 售价 便宜、 高灵
敏度 和稳 定性。

• 局限性

UVD 检测的 物质 必须具 有吸 收紫 外光的 生色
团, 而相 应的流动 相在 检测 波长下 则应 当是无 紫外 吸
收的 。这 一特性大 大限 制了 其能检 测的 物质范 围和 一
些良 好溶 剂的使用 。

• 许多 成分 没有紫外 吸收 或为 紫外末 端吸 收,有 时可 用
低波 长紫 外检测器 ,但 梯度 洗脱时 出现 基线漂 移, 溶
剂峰 干扰 ,溶剂选 择受 其截 止波长 限制 。
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示差折光检测器 (RID)

• RID 是一种通 用的 检测器 ,它基 于色 谱柱流 出物 光
折射率 的变 化来连 续测 定样 品浓度 。

• 特点

稳定 、易 于操作 ,样 品不被 破坏和 具有 较好

的灵敏 度。

• 缺点

对工 作环 境要求 很苛 刻,要 求恒温 、恒 流速

,且无 法采 用梯度 洗脱 .其 检测灵 敏度 也不够 高。

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⑶ 光电二极管阵列检测器
(DAD)
• 原理

光源 经光 学反射 镜通 过流动 池,再 经分 光系
统、狭 缝照 射到一 组光 电二 极管上 ,由 数据收 集系
统实时 记录 下组分 的光 谱吸 收,得 到三 维的立 体谱
图。

• 用一组 光电 二极管 同时 检测 透过样 品的 所有波 长紫
外光, 而不 是某一 个或 几个 波长, 和普 通的紫 外—
可见分 光检 测器不 同的 是进 入流动 池的 光不再 是单
色光。 它具 有以下 优点 :

可得任 意波长 的色 谱图, 极为 方便 ;

可得任 意时间 的光 谱图, 相当 于与 紫外联 用;

提供组 分的定 性信 息。
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蒸发光检测器( ELSD )

• ESLD 是质量型 、高 灵敏度 的通 用液相 色谱 检测器 。
它检测 的三 个主要 过程 :

雾化

蒸发

检测

色谱柱 流出 物经过 针头式 的细 导管 进入
雾化器 ,与 气体混 合喷 成均 匀一致 的雾 滴;
雾滴经 过加 热的漂 移管, 流动 相被 蒸发
,溶质 形成 极细的 颗粒 ;
溶质颗 粒气 体在检 测池发 生散 射作 用,
经光电 倍增 管成电 信号 输出 。
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ESLD 的 点

适用范围广

原则上 对所有 的化合 物都 能测定 ,

不论化 合物 是否存 在生 色团 或电活 性基 团。

适用于梯度洗脱

高灵敏度

流动相 在样 品检测 前挥 去;

与示差检 测器 (RI) 及低波 长紫 外检

测相比 。

• 由于它 的这 些优点 ,它 有可 能像气 相色 谱中的 氢火
焰检测 器 (FID) 那样成为 液相 色谱的 高灵 敏度通 用
检测器 。
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ESLD 的应 用

没有紫外吸收或为紫外末端弱吸收的样

• EL SD 的响 应与 被测物的 质量 成正 比,而 不依 赖于被
测物的 光学 特性及 官能 团。 理论上 可用 于挥发 性低
于流动 相的 任何组 分的 检测 。 在天 然药 物化学 成分
中常见 的有 糖类、 皂甙 类( 皂甙无 紫外 吸收或 仅为
末端吸 收, 使得皂 甙测 定在 应用 HPLC-UV 法及选
择流动 相优 化分离 时均 存在 一定的 困难 。 ELSD 检
测则较 好地 解决了 这个 问题 。从目 前国 内文献 报道
来看, ELSD 的应 用亦 以分析 这类 成分及 甾类等 最
多。


流动相有紫外吸收干扰或梯度洗脱时基
线漂移影响测定的情况
用 ELSD 检测, 流动
相在漂 移管 便气化 蒸发 ,不 影响样 品检 测。

49

高效液相色谱 的应 用
• 中药化 学成分 分析
• 成分分 离制备
(1) 特别适 用于极 性较 大的成 分 ( 如皂苷 类 ) 分离;
(2) 先以分 析色谱 摸索 分离条 件;
(3) 样品一 定要用 流动 相溶解 ,再 以滤 膜过滤 。

50


根据物质的吸附性差别进行分

• 在天然有 机化合物分离 及精制工作 中,吸附现 象利用得 十分广
泛。其中 又以固 - 液吸附 用得最多 ,其分:

• 物理吸附 ( 表面吸附, physical adsorption) :
以 硅胶、氧化铝及活性炭为吸附剂

• 化学吸附( chemical adsorption )
• 半化学吸附( semichemical adsorption ):聚酰
胺层析

51

1 、物理吸附
• 液 - 固物理 吸附 色谱是 运用 较多 的一种 方法, 特别 适
用于很 多中 等分子 量的 样品 (分子 量小 于 1 , 000 的
低挥发 性样 品)的 分离 ,尤 其是脂 溶性 成分。 一般 不
适用于 高分 子量样 品如 蛋白 质、多 糖或 离子型 亲水 性
化合物 等的 分离。

• 吸附层 析的 分离效 果, 决定 于吸附 剂、 溶剂和 被分 离
化合物 的性 质这三 个因 素。
52


硅胶

氧化铝

活性炭

吸附剂

53

硅胶

层析用硅 胶为 一多孔 性物 质,分 子中 具有硅 氧
烷的交 链结 构,同 时在 颗粒 表面又 有很 多硅醇 基。 硅胶
吸附作 用的 强弱与 硅醇 基的 含量多 少有 关。硅 醇基 能够
通过氢 键的 形成而 吸附 水分 ,因此 硅胶 的吸附 力随 吸着
的水分 增加 而降低 。
硅胶是一 种酸 性吸附 剂, 适用于 中性 或酸性 成
分的层 析。 同时硅 胶又 是一 种弱酸 性阳 离子交 换剂 ,其
表面上 的硅 醇基能 释放 弱酸 性的氢 离子 ,当遇 到较 强的
碱性化 合物 ,则可 因离 子交 换反应 而吸 附碱性 化合 物。
54

氧化铝

• 氧化铝 带有 碱性, 对于 分离 一些碱 性中 草药成 分, 如
生物碱 类的 分离颇 为理 想。 但是氧 化铝 不宜用 于醛 、
酮、酸 、内 酯等类 型的 化合 物分离 。因 为碱性 氧化 铝
可与上 述成 分发生 次级 反应 ,如异 构化 、氧化 、消 除
反应等 。

• 用稀硝 酸或 稀盐酸 处理 氧化 铝,不 仅可 中和氧 化铝 中
含有的 碱性 杂质, 并可 使氧 化铝颗 粒表 面带有 NO 3 - 或
Cl - 的阴 离子 ,从而具 有离于交 换剂的 性质 ,适合 于
酸性成 分的 层析, 这种 氧化 铝称为 酸性 氧化铝 。

55

活性炭

• 是一 种非 极性吸 附剂 。
• 活性 炭主 要用于 分离 水溶性 成分 ,如氨 基酸 、糖类 及
某些 甙。 活性炭 为吸 附作用 ,在 水溶液 中最 强,在 有
机溶 剂中 则较低 弱。 故水的 洗脱 能力最 弱, 而有机 溶
剂则 较强 。例如 以醇 - 水进行洗 脱时, 则随 乙醇浓 度
的递 增而 洗脱力 增加 。

• 活性 炭对 芳香族 化合 物的吸 附力 大于脂 肪族 化合物 ,
对大 分子 化合物 的吸 附 力大 于小 分子化 合物 。利用 这
些吸 附性 的差别 ,可 将水溶 性芳 香族物 质与 脂肪族 物
质分 开, 单糖与 多糖 分开, 氨基 酸与多 肽分 开。
56

吸附剂 的特点
• 硅胶和 氧化 铝为极 性吸 附剂 ,有以 下特 点:

对极性 物质具 有较 强的亲 和能 力。 故同为 溶质 ,极
性强者 将被 优先吸 附。

溶剂极 性越弱 ,则 吸附剂 对溶 质将 表现出 越强 的吸
附能力 。溶 剂极性 增强 ,则 吸附剂 对溶 质的吸 附能 力
即随之 减弱 。

溶质即 使被硅 胶、 氧化铝 吸附 ,但 一旦加 入极 性较
强的溶 剂时 ,又可 被后 者置 换洗脱 下来 。

57

吸附剂 的特点
• 活性炭 因为 是非极 性吸 附剂 ,故与 硅胶 、氧化 铝相 反
,对非 极性 物质具 有较 强的 亲和能 力, 在水中 对该 类
物质表 现出 强的吸 附能 力。

• 溶剂极 性降 低,则 活性 炭对 该类物 质的 吸附能 力也 随
之降低 。故 从活性 炭上 洗脱 被吸附 物质 时,洗 脱溶 剂
的洗脱 能力 将随溶 剂极 性的 减弱而 增强 。

58

溶剂

• 洗脱剂 的选 择,须 根据 被分 离物质 与所 选用的 吸附 剂
性质这 两者 结合起 来加 以考 虑。在 用极 性吸附 剂进 行
层析时 ,当 被分离 物质 为弱 极性物 质, 一般选 用弱 极
性溶剂 为洗 脱剂; 被分 离物 质为强 极性 成分, 则须 选
用极性 溶剂 为洗脱 剂。 如果 对某一 极性 物质用 吸附 性
较弱的 吸附 剂(如 以硅 藻土 或滑石 粉代 替硅胶 ), 则
洗脱剂 的极 性亦须 相应 降低 。
59

被分离物质的性质

• 被分离 的物 质与吸 附剂 ,洗 脱剂共 同构 成吸附 层析 中
的三个 要素 ,彼此 紧密 相连 。在指 定的 吸附剂 与洗 脱
剂的条 件下 ,各个 成分 的分 离情况 ,直 接与被 分离 物
质的结 构与 性质有 关。 对极 性吸附 剂而 言,成 分的 极
性大, 吸附 性强。

60

化合物的极性及其强弱判断

官能团 的极性 强弱

化合物 的极性 则由 分子中 所含 官能团 的种

类、数 目及排 列方 式等综 合因 素所决 定。

61

官能团的极性强弱
官能 团

极性

R-COOH

Ar-OH
R-OH
R-NH2,R-NH-R’,R-N-R`2
R-CO-NR2
R-CHO
R-CO-R’
R-CO-OR’
R-O-R’

62

化合物的极性

• 化合物 的极 性则由 分子 中所 含官能 团的 种类、 数目 及
排列方 式等 综合因 素所 决定 。

• 极性基 团的 数目愈 多, 化合 物的极 性越 大,被 吸附 的
性能就 会更 大些, 在同 系物 中碳原 子数 目少些 ,被 吸
附也会 强些 。总之 ,只 要两 个成分 在结 构上存 在差 别
,就有 可能 分离, 关键 在于 条件的 选择 。

63

化合物的极性

• 被分离物 质极性很小为 不含氧的萜 烯,或虽含 氧但非极 性基团
,则需选 用吸附性较强 的吸附剂, 并用弱极性 溶剂如石 油醚或
苯进行洗 脱。但多数中 药成分的极 性较大,则 需要选择 吸附性
能较弱的 吸附剂(一般 Ⅲ~Ⅳ级) 。

• 采用的洗 脱剂极性应由 小到大梯度 递增,或可 应用薄层 层析以
判断被分 离物在某种溶 剂系统中的 分离情况。 此外,能 否获得
满意的分 离,还与选择 的溶剂梯度 有很大关系 。

• 多组分的 混合物,象植 物油脂系由 烷烃、烯烃 、甾醇酯 类、甘
油三酸醋 和脂肪酸等组 份。当以硅 胶为吸附剂 时,使油 脂被吸
附后选用 一系列混合溶 剂进行洗脱 ,油脂中各 单一成分 即可按
其极性大 小的不同依次 被洗脱。

64

2 、吸附簿 色
• 薄层层 析是 一种简 便、 快速 、微量 的层 析方法 。一 般
将吸附 剂撒 布到平 面如 玻璃 片上, 形成 一薄层 进行 层
析时, 即称 薄层层 析。

• 针对某 些性 质特殊 的化 合物 的分离 与检 出,有 时需 采
用一些 特殊 薄层。

65

特殊薄
① 荧光薄层
② 络合薄层
③ 酸碱薄层和 PH 缓冲薄层

66

① 荧光薄层
• 有些化 合物 本身无 色, 在紫 外灯下 也不 显荧光 ,又 无
适当的 显色 剂时, 则可 在吸 附剂中 加入 荧光物 质制 成
荧光薄 层进 行层析 。展 层后 置于紫 外光 下照射 ,薄 层
板本身 显荧 光,而 样品 斑点 处不显 荧光 ,即可 检出 样
品的层 析位 置。

• 常用的 荧光 物质多 为无 机物 。其一 是在 25 4n m 紫外 光
激发下 显出 荧光的 ,如 锰激 化的硅 酸锌 。另一 种为 在
36 5nm 紫外光 激发下 发出 荧光的 ,如 银激 化的硫化 锌
、硫化 镐。

67

络合薄层

• 常用的 有硝 酸银薄 层, 用来 分离碳 原子 数相等 而其 中
C 一 C 双键数 目不等 的一 系列化 合物 ,如 不饱和 醇、
酸等。 其主 要机理 是由 于 C-C 键能与 硝酸 银形成 络合
物,而 饱和 的 C-C 键则不 与硝 酸银络 合。 因此 在硝酸
银薄层 上, 化合物 可由 于饱 和程度 不同 而获得 分离 。
层析时 饱和 化合物 由于 吸附 最弱而 Rf 最高,含 一个
双键的 较含 两个双 键的 Rf 值高 ,含 一个三 键的 较含
一个双 键的 Rf 值高 。

• 在一个 双键 化合物 中, 顺式 的与硝 酸银 络合较 反式 的
易于进 行。 因此, 还可 用来 分离顺 反异 构体。
68

酸碱薄层和 pH 缓冲薄层

• 为了改 变吸 附剂原 来的 酸碱 性,可 在铺 制薄层 时采 用
稀酸或 稀碱 以代替 水调 制薄 层。例 如硅 胶带微 酸性 ,
有时对 碱性 物质如 生物 碱的 分离不 好, 如不能 展层 或
拖尾, 则可 在铺薄 层时 ,用 稀碱溶 液 0.1 ~
0 . 5NNa0H 溶液制 成碱 性硅胶 薄层 。例 如猪屎 豆碱
在以硅 胶为 吸附剂 时, 以氯 仿 - 丙酮 - 甲醇
( 8 2 1 )为展 开剂 Rf < 0.1 ,采用 碱性硅 胶薄 层用
上述相 同展 开剂, Rf 值增至 0.4 左右。 说明猪 屎豆 碱
为 -- 碱性生物 碱。

69

薄层层 析法应 用

化学成分的预试

化学成分的鉴定

探索柱层分离的条件

70

化学成分的预试

• 用薄层 层析 法进行 中草 药化 学成分 预试 ,可依 据各 类
成分性 质及 熟知的 条件 ,有 针对性 地进 行。由 于在 薄
层上展 层后 ,可将 一些 杂质 分离, 选择 性高, 可使 预
试结果 更为 可靠。

71

化学成分的鉴定

• 以薄层 层析 法进中 草药 化学 成分鉴 定, 最好要 有标 准
样品进 行共 薄层层 析。 如用 数种溶 剂展 层后, 标准 品
和鉴定 品的 Rf 值、斑 点形 状颜色 都完 全相 同,则 可
作初步 结论 是同一 化合 物。 但一般 需进 行化学 反应 或
红外光 谱等 一种仪 器分 析方 法加以 核对 。

72

探索柱层分离的条件

• 在进行 柱层 分离时 ,首 先考 虑选用 何种 吸附剂 与洗 脱
剂。在 洗脱 过程中 各个 成分 将按何 种顺 序被洗 脱, 每
一洗脱 液中 是否为 单一 成分 或混合 体, 均可由 薄层 的
分离得 到判 断与检 验。 通过 薄层的 预分 离,还 可以 了
解多组 分样 品的组 成与 相对 含量。 如在 薄层上 摸索 到
比较满 意的 分离条 件, 即可 将此条 件用 于干柱 层析 。
73

3 、制备薄层色谱( PTLC )
• 一种是 流动 相靠毛 细管 作用 力流经 固定 相(传 统的 制
备型薄 层薄 层色谱 ), 另一 些方法 是流 动相靠 外力 强
制流动 ,如 离心薄 层色 谱和 加压薄 层色 谱。

74

3 、制备薄层色谱( PTLC )


 吸附剂 硅胶 是最常 用的吸 附剂 。上样 量与 吸附
剂的厚 度有 关。
上样 上 样是 进行 PTLC 分离 的一 个最关 键的 步骤。
上样前 先用样品溶 于少 量溶 剂,低 挥发 性溶剂 可引
起点样 带变宽,因 此最 好选 用挥发 性溶 剂(如 己烷
、二氯 甲烷、乙酸 乙酯 等) 。样品 浓度 应在 5%10% 左右。点 样带 应尽可 能狭窄 ,以 获得更 好的 分
离效果 。点样可用 手工 进行 或自动 点样 仪。
展开剂 的选择及展 开 在 进行 PTLC 之前应用 分析
型 TLC 预试验 来确定 展开 剂。
被分离 物质的回收
75

3 、吸附柱色谱 (柱层 析)

吸附剂的用量

一般为样 品量 的 30 ~ 60 倍。 样品 极性较小 、难
以分离 者, 吸附剂 用量 可适 当提高 到样 品量的 100
~ 200 倍。据 此可 选择适 当规 格的 色谱管 ,实验 室
中常用 色谱 管的规 格如 下所 示,其 高度 与直径 比
( h/d )约为( 15∶1 )~( 20 : 1 )。

• 柱色谱 用的 硅胶及 氧化 铝通 常以 100 ~ 200 目或
200 ~ 300 目为宜 ,或 甚至直 接采 用薄 层色谱 用规
格,其 分离 效果可 以大 大提 高。
76

4 、吸附柱色谱

洗脱剂的选择,以 TLC 摸索洗

脱条件
装柱,湿法装柱(以起始洗脱
剂拌匀装柱)或干法装柱
77

4 、吸附柱色谱
( 3 )样品的预处理

• 能直接 溶于 洗脱剂 的样 品用 适量洗 脱剂 溶解样 品, 尽
可能少 ,以 利样品 在吸 附剂 柱上形 成狭 窄的原 始谱 带

• 不能溶 解于 洗脱剂 的样 品, 则将用 能使 之溶解 的溶 剂
溶解后 ,再 用少量 吸附 剂拌 匀,并 减压 抽干溶 剂或 在
60℃ 下加热挥 尽溶 剂,置 真空 干燥器 中减 压干燥 或
直接减 压抽 干、研 粉后 再小 心铺在 吸附 剂柱上 。

78

4 、吸附柱色谱
( 4 )洗脱用溶剂的极性宜逐步增加,跳跃不能
太大。

• 实践中 多用 混合溶 剂, 并通 过巧妙 调节 比例以 改变 极性
,达到 梯度 洗脱分 离物 质的 目的。 一般 混合溶 剂中 强极
性溶剂 的影 响比较 突出 ,故 不可随 意将 极性差 别很 大的
两种溶 剂组 合在一 起使 用。 实验室 中最 常应用 的混 合溶
剂组合 如下 :
79

吸附柱色谱常用混合洗脱溶剂
己烷 - 苯

苯 - 乙醚
苯 - 乙酸乙酯

氯仿 - 乙醚
氯仿 - 乙酸乙 酯

氯仿 - 甲醇
丙酮 - 水

甲醇 - 水

80

4 、吸附柱色谱
( 5 )为避 免发 生化学 吸附 ,酸性 物质 宜用硅
胶、碱 性物质 则宜 用氧化 铝进 行分离 。

• 硅胶、 氧化 铝用适 当方 法处 理成中 性时 ,情况 会有 所
缓解。 通常 在分离 酸性 (或 碱性) 物质 时,洗 脱溶 剂
中分别 加入 适量醋 酸( 或氨 、吡啶 、二 乙胺) ,常 可
收到防 止拖 尾、促 进分 离的 效果。

81

5 、聚

吸附色

• 聚酰胺 ( po li ami de )吸附属 于氢 键吸附 ,是 一种用
途十分 广泛 的分离 方法 ,极 性物质 与非 极性物 质均 可
适用, 但特 别适合 分离 酚类 、醌类 、黄 酮类化 合物 。

82

( 1 )聚

的吸附原理

• 系通过 分子 中的酰 胺羰 基与 酚类、 黄酮 类化合 物的 酚
羟基, 或酰 胺键上 的游 离胺 基与醌 类、 脂肪羧 酸上 的
羰基形 成氢 键缔合 而产 生吸 附。至 于吸 附强弱 则取 决
于各种 化合 物与之 形成 氢键 的能力 。

83

⑵ 聚

的吸附原理

• 在含水 溶剂中 大致 有以下 规律 :

形成氢 键的基 团数 目越多 ,则 吸附能 力越

强。

成键位 置对吸 附力 也有影 响。 易形成 分子

内氢键 者,其 在聚 酰胺上 的吸 附即相 应减 弱。

分子中 芳香化 程度 高者, 则吸 附性增 强;

反之, 则减弱 。
84

⑵ 聚

的吸附原理

• 吸附因 为是 在溶液 中进 行, 故溶剂 也会 参加吸 附剂 表

面的争 夺, 或通过 改变 聚酰 胺对溶 质的 氢键结 合能 力
而影响 吸附 过程。
聚酰胺 与酚 类或醌 类等 化合 物形成 氢键 缔合的 能力 在
水中最 强, 在含水 醇中 则随 醇浓度 的增 高而相 应减 弱
,在高 浓度 醇或其 它有 机溶 剂中则 几乎 不缔合 。故 在
聚酰胺 柱色 谱分离 时, 通常 用水装 柱, 样品也 尽可 能
作成水 溶液 上柱以 利聚 酰胺 对溶质 的充 分吸附 ,随 后
用不同 浓度 的含水 醇洗 脱, 并不断 提高 醇的浓 度, 逐
步增强 从柱 上洗脱 物质 的能 力。
85

⑵ 聚

的吸附原理

• 甲酰胺 、二 甲基甲 酰胺 及尿 素水溶 液因 分子中 均有 酰
胺基, 作为 第三者 可以 同时 与聚酰 胺及 酚类等 化合 物
形成氢 键缔 合,故 有很 强的 洗脱能 力。 此外, 水溶 液
中加入 碱或 酸均可 破坏 聚酰 胺与溶 质之 间的氢 键缔 合
,也有 较强 的洗脱 能力 ,可 用于聚 酰胺 的精制 及再 生
处理。 常用 的聚酰 胺再 生剂 有 10% 醋酸、 3% 氨水
及 5% 氢氧化钠 水溶 液等。

86

⑵ 聚

的吸附原理

• 各种溶 剂在 聚酰胺 柱上 的洗 脱能力 由弱 至强, 可大 致
排列成 下列 顺序:

• 水 〈 甲 醇 〈 丙 酮 〈 氢 氧化 钠水溶 液 〈 甲 酰
胺 〈 二 甲基 甲酰胺 〈

尿 素水溶 液

87

聚酰胺 色谱 的应 用

• 聚酰胺 对一 般酚类 、黄 酮类 化合物 的吸 附是可 逆的
(鞣质 除外 ),分 离效 果好 ,加以 吸附 容量又 大, 故
聚酰胺 色谱 特别适 合于 该类 化合物 的制 备分离 。

• 对生物 碱、 萜类、 甾体 、糖 类、氨 基酸 等其它 极性 与
非极性 化合 物的分 离也 有广 泛的用 途。

• 因为对 鞣质 的吸附 特强 ,近 乎不可 逆, 故用于 植物 粗
提取物 的脱 鞣质处 理特 别适 宜。

• 聚酰胺 色谱 也有薄 层色 谱和 柱色谱 两种 方式。
88

6 、大孔吸附 脂
• 大孔吸 附树脂 是一 种具有 多孔 立体结 构人 工
合成的 聚合物 吸附 剂,具 有较 好的吸 附性 能。
它的吸 附作用 是通 过表面 吸附 、表面 电性 或
形成氢 键。

• 大孔树 脂吸附 分离 技术是 采用 特殊的 吸附 剂
,选择 地吸附 其中 的有效 成分 ,去除 无效 成
分的一 种提取 精制 的新工 艺。
89

大孔吸附树 脂的性质

• 大孔 吸附 树脂多为 白色 的球 状颗粒 .粒 度多为 20—
60 目,通 常分为 非极 性和极 性两大 类, 根据极 性大
小还 可分 为弱极性 、中 等极 性和强 极性 。

• 常用 的为 苯乙烯型 和丙 烯腈 型,在 树脂 合成时 根据 需
要引 入极 性基团则 成为 极性 树脂从 而增 强吸附 能力 。

• 大孔 吸附 树脂的理 化性 质稳 定,不 溶于 酸、碱 及有 机
溶剂 。对 有机物的 选择 性较 好,不 受无 机盐类 及强 离
子低 分子 化合物存 在的 影响 。

90

⑵ 大孔吸附树 脂的分离 原理
• 吸附性
• 筛选原理

范德华引 力或 生成氢 键的 结果。
本身多 孔性 结构所 决定 。

• 由于 吸附 和筛选原 理, 有机 化合物 根据 吸附力 的不 同
及分 子量 的大小, 在大 孔吸 附脂上 经一 定的溶 剂洗 脱
而分 开。

91

⑵ 大孔吸附树 脂的分离 原理

有机物与无机物的分离

• 一般 的吸 附树脂对 溶液 中的 无机离 子没 有任何 吸附 能
力, 在吸 附混合物 时, 有机 物被树 脂吸 附,无 机离 子
则随 水流 出,因而 很容 易将 二者分 离。 在中药 成分 的
提取 中, 此特征可 使提 取物 中的重 金属 和灼烧 灰分 降
至要 求的 范围内。

92

⑵ 大孔吸附树 脂的分离 原理

解离物与非解离物的分离

• 吸附 树脂 对有机解 离物 与非 解离物 的吸 附能力 有很 大
差异 。因 此,可将 二者 分离 。如有 机酸 在高 pH 值成
盐, 很难 被吸附, 因此 在碱 性条件 下可 把有机 酸分 离
出来 。生 物碱在酸 性介 质中 可以成 盐, 因而能 通过 调
节 pH 值进行 分离。

93

⑵ 大孔吸附树 脂的分离 原理

一般有机物与强水溶性物质的分离

• 一般 有机 物,包括 大多 数中 药有效 成分 ,是指 有一 定
的水 溶性 ,但溶解 度不 大的 物质, 这些 物质容 易被 树
脂吸 附。 强水溶性 物质 如低 级醇类 、低 级胺类 、糖 及
多糖 、多 数氨基酸 、肽 类、 蛋白质 等, 难被普 通吸 附
树脂 吸附 。用普通 树脂 可很 容易地 将此 两类物 质分 离

94

( 3 )大孔吸附树脂分离条件的
确立
1 、树脂的选择

首先, 要根据 被分 离化合 物的分 子体 积的大 小通
过预 实验 确定适当 孔径 的树 脂。

• 其次 ,要 根据分子 中是 否含 有酚羟 基、 羧基或 碱性 氮
原子 来确 定树脂的 型号 和分 离条件 。

95

⑷ 大孔吸附树脂分离条件的
确立
2 、洗脱液的选择

• 对非 极性 大孔吸附 树脂 ,洗 脱剂极 性越 小,洗 脱能 力
越强 。对 中等极性 大孔 树脂 和极性 较大 的化合 物来 说
,则 用极 性较大的 洗脱 剂为 佳。

• 根据 吸附 力强弱选 用不 同的 洗脱剂 及浓 度。为 达到 满
意的 效果 ,可通过 几种 洗脱 剂浓度 的比 较来确 定最 佳
洗脱 浓度 。 实际工 作中 甲醇、 乙醇 、丙 酮应用 较多 。

96

⑸ 大孔吸附树 脂在中药 生产
中应 用的优 点
1 、缩小剂量,提高制剂的内在质量

• 大孔吸 附树脂 处理 可减少 提取 物中的 杂质 ,
提高效 成分的 含量 ,使制 剂剂 量减小 ,有 利
于制成 现代剂 型的 中药制 剂, 并便于 质量 控
制。

97

⑸ 大孔吸附树 脂在中药 生产
中应 用的优 点
2 、减小产品的吸湿性

传统 的提 取方法 所提

的中 成药 大部分具 有较 强的 吸潮性 ,是 中药生 产及 储
藏中 长期 存在的问 题。 而经 大孔吸 附树 脂处理 可有 效
去除 吸潮 成分,增 强产 品的 稳定性 。

3 、有效去除重金属

既保证 了患 者的用 药安

全, 同时 也解决了 中药 重金 属超标 的难 题,为 中药 进
入国 际市 场创造了 条件 。
98

⑹ 大孔吸附树脂在中药生产中的
应用

活性成分的提取分离

如皂 甙(人 参

总皂甙 、蒺藜 总皂 昔)、 黄酮 (葛根 总黄 酮
、山楂 总黄酮 、淫 羊藿总 黄酮 )、内 酯、 生
物碱等 化合物 ;

99

⑹ 大孔吸附树脂在中药生产中的
应用

质量标准制定

• 除去 干扰 成分,如 金向 群等 在用薄 层扫 描法测 定益 寿
永真 口服 液中人参 皂甙 Rg1 的含量时 ,用 YPR—II
型大 孔吸 附树脂对 样品 进行 处理, 70 %乙醇 的洗 脱
液即 为含 人参皂甙 Rg1 的流分 ,由于 去除 了人参 皂
甙 Rg1 的色谱 位置 的干扰 成分 ,可 进行薄 层扫 描来
确定 人参 皂苛 Rg1 的含量 ,为 复方中 的人 参皂 甙
Rg1 的含量 测定 提供了 一个 简便 可行的 方法。
100

大孔吸附

脂的

• 市售大 孔吸 附树脂 一般 含有 未聚合 的单 体、致 孔剂
(多为 长碳 链的脂 肪醇 类) 、分散 剂和 防腐剂 等杂 质
,使用 前必 须经过 处理 。

• 处理方 法是 :采用 乙醇 湿法 装柱, 随用 乙醇在 柱上 作
流动清 洗, 并不时 检查 流出 的乙醇 ,直 至流出 的乙 醇
液与水 混合 不呈现 白色 乳浊 现象即 可, 然后用 大量 蒸
馏水洗 去乙 醇。
101

大孔吸附树 脂柱色谱

• 样品一 般用 水溶液 上柱 。洗 脱时根 据吸 附作用 强弱 不
同选用 不同 浓度的 甲醇 、乙 醇等含 水溶 剂,直 至纯 的
甲醇、 乙醇 ,乃至 丙酮 、乙 酸乙酯 等。 对非极 性大 孔
吸附树 脂, 洗脱溶 剂极 性越 小,洗 脱能 力越强 。对 于
中等极 性的 大孔吸 附树 脂和 极性较 大的 化合物 来说 ,
则以用 极性 较大的 溶剂 为宜 。
102


根据物质分子大小差异进行分

• 天然有机化合物分子大小各异,中药的化学
成分非常复杂,通常含有无机盐、生物碱、
氨基酸和有机酸、酚类、酮类、皂昔、甾族
和萜类化合物以及蛋白质、多糖、粘液质、
鞣质、淀粉、纤维素、无机盐等。相对分子
质量的分布很宽,从几十到几百万道尔顿。
故可据此进行分离。表 1 列出了部分中药所
含主要成分的相对分子质量范围。
103

部分中药主要成分的相对分子质

104


根据物质分子大小差异进行分

• 一般来讲,高相对分子质量物质主要是胶体和纤维
素等非药效成分或药效较低的成分,药物有效部位
的相对分子质量一般较小,仅有几百到几千道尔顿

105

㈣ 根据物质分子大小差异进行
分离
1 、凝胶过滤法
2 、透析法
3 、超滤法
4 、超速离心法
106

1 、凝胶 法( gel
filtration )
• 也叫凝胶渗透色谱法( gel permeation
chromatography )、分子筛过滤( molecular sieve
filtration )、排阻色谱 (exclusion
chromatography )。

• 利用分子筛分离物质的一种方法。
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⑴ 凝胶过滤法分离原理
• 葡聚糖凝胶在水中膨胀成球形颗粒,具有三维空间
的网状结构。由于凝胶网孔半径的限制,大分子将
不能渗入凝胶颗粒内部(即被排阻在凝胶粒子外
部),故在颗粒间隙移动,并随溶剂一起从柱底先
行流出;小分子因可自由渗入并扩散到凝胶颗粒内
部,故通过色谱柱阻阻力增大、流速边缓,将较晚
流出。

• 样品混合物中各个成分因分子大小各异,渗入至凝
胶颗粒内部的程度也不尽相同,故在经历一段时间
流动并达到动态平衡后,即按分子由大到小顺序先
后流出并得到分离。

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凝胶的种类与性质

葡聚糖凝胶( Sephadex )

羟丙基葡聚糖凝胶( Sephadex LH-20 )

丙烯酰胺凝胶( Bio-Gel P )

琼脂糖凝胶( Sepharose Bio-Gel A )

羧甲基交联葡聚糖凝胶( SP-Sephadex )

苯胺乙基交 联 葡聚糖凝胶( QAe-Sephadex )

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葡聚糖凝胶

• 由平均分子量一定的葡聚糖及交联剂交联聚合而成

• 凝胶颗粒网孔大小取决于交联剂的用量及反应条件。
交联剂用量越多,即交联度越高,则网孔越紧密,
孔径越小,吸水膨胀越小;交联度越低,则网孔越
稀疏,孔径越大,吸水膨胀也越大。

• 商品型号即按交联度大小分类,并以吸水量多少表
示 。 以 Sephadex G-25 为例, G 为凝胶( Gel ),后
附数字 = 吸水量 ×10 ,故 G-25 示 该 葡 聚 糖 凝 胶 吸 水
量为 2.5ml/g 。

• Sephadex G 型只适用于在水中应用,不同规格适合

110

羟丙基葡聚糖凝胶

• 为 Sephadex G 经羟丙基化处理后得到的产物。其分
子中的葡萄糖部分与羟丙基以醚键形式结合。

• 与 Sephadex G 比较, Sephadex HL-20 分子中 -OH 基
总数虽无改变,但碳原子所占比例却相对增加。因
此 与 Sephadex G 仅具亲水性不同,不仅可在水中应
用,也可在极性有机溶剂或它们与水组成的混合溶
剂中膨润使用。

• Sephadex LH-20 除保留有 Sephadex G-25 原有的分子筛
特性,可按分子量大小分离物质外,在由极性与非
极性溶剂组成的混合溶剂中常常起到反相分配色谱
的效果,适用于不同类型有机化合物的分离。
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2 、超

• 超滤法是现代分离技术领域中先进的技术之
一。可以在原生物体系环境下实现物质分离
,高效浓缩富积产物,有效去除杂质。

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超滤 法分离 的原理

• 超滤是一种以压力为驱动力,利用超滤膜的筛分作
用,根据相对分子质量的不同来进行分离的膜技术

• 超滤膜的孔径通常在 1~300nm 之间,选用不同孔径
的超滤膜,可以将相对分子质量在几百到几十万之
间的物质进行分离。

• 待分离组分的大小一般要相差 10 倍以上。
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超滤 膜的选择

截留分子量的选择

• 膜的孔径或截留分子量的选择虽然主要是根据被分
离物的相对分子质量。

• 由于超滤膜具有一定的孔径分布,加之中药提取液
的粘度较大,所含高分子胶体物质较多,膜污染现
象较严重。因此,膜膜的孔径或截留分子量应稍大
一些。
114

超滤 膜的选择

2 、膜材质的选择

• 膜表面是液体和膜相互作用的界面,溶质和
膜之间有静电相互作用或电荷转移反应,膜
表面的极性、溶液的 pH 值等均会影响膜的分
离效率。

• 中药成分中胶质等粘性物质的含量很高,膜
的污染现象较为严重。因此,最好采用抗污
性较好的膜材料,如聚丙烯腈、磺化聚砜膜
等。

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法的特点

选择性高,分离效率高

可根据有效成分

与杂质的分子量差异,选择一定孔径的滤膜进行分
离,既可富集有效成分,同时可去除杂质。

减少工序,缩短生产周期(不需加热浓

缩),节约原料 ( 尤其是乙醇 ) ,降低成本。

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法的特点

物质不发生相变,常温操作

有效成分不

被破坏,能保持原配方的成分,且提高了有效成分
的含量,特别适用于热敏性物质的分离、纯化、浓
缩与富集。

去杂质效果好

能显著提高注射剂和口服液

的澄明度,改善贮存稳定性。

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除热原效果好

除菌效果好

法的特点

超滤后可得到无菌澄清的药液

,代替加热灭菌,避免了有些药液因受热而产生沉
淀,并可同时除去部分色素。

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超滤膜分离技术应用

膜分离做为一种高效、节能、无污染的新型分离
技术,在日本已应用到 “汉方药 ”的生产中;国内
同仁堂的药酒生产也采用了该技术。此外,还用
于某些中药注射剂的研究开发和生产。

超滤膜分离技术在医药领域的应用曾被列为国家
“八五 ”重点科技项目。

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超滤膜分离技术应用

中药有效部位和有效成分的分离纯化

黄碱、黄芩甙、甜菊甙、金银花中绿原酸和异绿
原酸、银杏黄酮等。

浓缩,提高药效成分浓度,减少剂量;

制备中药注射剂、制备中药口服液等;

④ 有机溶剂回收

将萃取或其他分离过程所使用

的有机溶剂能够循环利用,节约资源,保护环境。
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