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Frederica Sampaio 2012/ 2013

MICROBIOLOGIA a cincia que estuda os organismos demasiado pequenos para serem observados a olho nu, ou seja, os microrganismos.

OBJETO DE ESTUDO: bactrias e arquees, vrus, fungos, algas unicelulares e protozorios.

A VIDA NA TERRA E A ATIVIDADE MICROBIANA

As bactrias absorvem o azoto do ar e ajudam algumas plantas a crescer;


As bactrias e os fungos degradam plantas e animais mortos, alguns poluentes qumicos e restos de alimentos; Alguns alimentos, medicamentos e produtos utilizados na indstria so produzidos pelos microrganismos.

IMPORTNCIA DA MICROBIOLOGIA

uma rea da Biologia que tem grande importncia seja como cincia bsica ou aplicada.

Bsica: estudos fisiolgicos, bioqumicos e moleculares (modelo comparativo para seres superiores). => Microbiologia Molecular

Aplicada: processos industriais, controlo de doenas, de pragas, produo de alimentos, etc.

REAS DE ESTUDO:
Odontologia: Estudo de microrganismos associados placa dental, crie dental e doenas periodontais. Estudos com abordagem preventiva.

Medicina e Enfermagem: Doenas infeciosas e infees hospitalares.


Nutrio: Doenas transmitidas por alimentos, Controlo de qualidade de alimentos, Produo de alimentos (queijos, bebidas). Biologia: Aspetos bsicos e biotecnolgicos. Produo de antibiticos, hormonas (insulina, GH), enzimas (lipases, celulases), insumos (cidos, lcool), Despoluio (Herbicidas - Pseudomonas, Petrleo), Bio-filme (Acinetobacter), etc. BIOTECNOLOGIA - Uso de microrganismos com finalidades industriais, como agentes de biodegradao, de limpeza ambiental, etc.

Se nos observssemos ao espelho observaramos cerca de 100 trilies de microrganismos: na pele, no cabelo, na boca, ao longo do intestino, nas mos Cada grama de fezes excretado contm cerca de 10 bilies de microrganismos!

Apresentam uma grande diversidade de tamanho, de forma, de complexidade, de habitat, etc., e so distribudos por seis grupos:
1 - as bactrias e arquees, 2 - os fungos, 3 os vrus, 4 - os protozorios. 5 - as algas unicelulares.

Tipos de microrganismos estudados pelos microbiologistas. (Adaptado de Tortora et al., Microbiology, 8 ed)

Bactrias Escherichia coli

O HIV representado em ilustrao artstica

O protozorio Trypanossoma cruzi visto ao microscpio

Viso microscpica da levedura Saccharomyces cerevisiae, usada como fermento biolgico no fabrico do po e responsvel pela fermentao alcolica na produo do vinho e da cerveja

1. BACTRIAS

- Reino Monera

- So seres unicelulares procariontes com dimenses mdias de 1 a 5 m (1 m = 10-6 m).

- Se presentes num alimento, podem multiplicar-se rapidamente desde que tenham disponibilidade de nutrientes e condies favorveis de humidade, de temperatura e de pH.

1.1. CLASSIFICAO DAS BACTRIAS

De acordo com a forma:

De acordo com estrutura e composio da parede celular:

- Distinguemse com base na resposta colorao de Gram.

- Bactrias Gram-negativas, perdem o cristal violeta quando tratadas com lcool, so ento coradas com o corante safranina e aparecem coradas de vermelho. - Bactrias Gram-positivas, retm o corante cristal violeta e aparecem coradas em violeta-escuro.

Parede celular de Bactrias Gramnegativas

A parede deste tipo de bactrias consiste numa fina camada de peptidoglicano, rodeada por uma membrana externa composta por lpidos, lipoprotenas e lipopolissacridos (LPS).

Importncia do lipopolissacrido (LPS)

As caractersticas da parede so:

o As Lipoprotenas de Braun ligam fortemente a membrana externa ao peptidoglicano;


o Os locais de adeso so locais de contacto direto entre a membrana plasmtica e a membrana externa, permitindo a sada e entrada diretamente nestes locais; o A membrana externa mais permevel que a plasmtica devido presena de porinas e protenas transportadoras; o As porinas formam canais atravs dos quais pequenas molculas so capazes de passar.

Parede celular de Bactrias Grampositivas:

A parede celular deste tipo de bactrias contm essencialmente peptidoglicano e cidos teiicos, que so polmeros de glicerol ou ribitol ligados por grupos fosfato, que podem ter acares ou D alanina ligados e conferem carga negativa superfcie celular, permitindo ligar caties divalentes.

1.2. ESTRUTURA DAS BACTRIAS

Componentes celulares:

Componentes exteriores parede celular

1.3. EXIGNCIAS NUTRITIVAS

Nutrio microbiana

Fornecimento de nutrientes Sntese de macromolculas

1.3. EXIGNCIAS NUTRITIVAS


ENERGIA

1.3. EXIGNCIAS NUTRITIVAS

GUA Essencial para os microrganismos para a absoro de nutrientes dissolvidos e eliminao de resduos. Tem disponibilidade varivel no ambiente.

Concentrao de solutos internos (bombeamento de ies para o interior celular ou pela sntese de solutos orgnicos).

CARBONO todos os organismos requerem alguma forma de carbono 3 maiores classes de nutrientes orgnicos: lpidos, hidratos de carbono (glcidos) e protenas: fornecem energia para o crescimento e servem como unidade bsica para biossntese.

heterotrficos utilizam compostos orgnicos como fonte de carbono. autotrficos utilizam o CO2 como fonte de carbono para a sntese de alimento.

AZOTO (nitrognio) Todos os organismos necessitam de azoto de alguma forma. parte essencial dos aminocidos (aa) das protenas e dos cidos nucleicos. As bactrias so mais versteis para os nveis de azoto do que os eucariontes.

Podem utilizar o N2 ( por fixao biolgica), nitratos, nitritos e/ ou sais de amnia. Em geral surgem como compostos de nitrognio orgnico: aa e peptdeos

POTSSIO, MAGNSIO, CLCIO E FERRO

O potssio (K) e o magnsio (Mg) funcionam como cofatores enzimticos.


O clcio (Ca) contribui para a estabilizao da parede celular e formao de endsporos. O ferro (Fe) faz parte dos citocromos e de protenas de transporte eletres.

ENXOFRE, HIDROGNIO E FSFORO


So essenciais para todos os organismos.

O enxofre (S) necessrio na biossntese de cistena, cistina, metionina e de vitaminas (tiamina e biotina).
O fsforo (P) essencial para a sntese de cidos nucleicos e ATP. Sais inorgnicos (sulfatos e fosfatos) podem ser utilizados para suprir as falhas. Estes elementos encontram-se tambm presentes em fontes proteicas (aa), DNA e RNA

alguns destes elementos so encontrados na gua

MICRONUTRIENTES OU ELEMENTOS TRAO:

Exemplos: Cobalto (Co), cobre (Cu), nquel (Ni), molibdnio (Mo), mangansio (Mn), selnio (Se), zinco (Zn), crmio (Cr).
So necessrios em concentrao muito baixa (g/L). So geralmente cofatores de enzimas. Geralmente no necessrio adicionar ao meio de cultura pois encontram-se presentes na gua. Se se utiliza gua desmineralizada, ento deve adicionar-se elementos trao soluo.

1.4. REPRODUO NAS BACTRIAS


Assexuada a forma mais comum. - Ocorre por bipartio ou cissiparidade - Ocorre a duplicao do DNA bacteriano e uma posterior diviso em duas clulas exatamente iguais. - As bactrias multiplicam-se por este processo muito rapidamente quando dispem de condies favorveis (duplica em 20 minutos). - A separao dos cromossomas irmos conta com a participao dos mesossomas, pregas internas da membrana plasmtica nas quais existem tambm as enzimas participantes da maior parte da respirao celular.

1.4. REPRODUO NAS BACTRIAS


Sexuada por conjugao, quando as condies do meio so adversas. - processo de transferncia de fragmentos de DNA de uma bactria doadora, macho, para outra recetora, fmea. - Depois de transferido, o DNA da bactria doadora recombina-se com o da recetora, produzindo cromossomas com novas misturas de genes, e uma bactria geneticamente diferente das progenitoras. - Os novos cromossomas recombinados sero transmitidos s clulas-filhas quando a nova bactria se dividir. - A conjugao ocorre atravs de tubos proteicos microscpicos, pili, que as bactrias "macho" possuem na sua superfcie.

2 FUNGOS
Grupo muito diversificado. Os vinhos, queijos, cogumelos, a podrido dos frutos ou a doena vulgarmente chamada "p-de-atleta" tm os fungos como fator comum. Os fungos esto presentes em quase todos os nichos ecolgicos, so um grupo muito numeroso. Independentemente da sua forma e do seu tamanho, os fungos so seres eucariontes. Alguns so unicelulares, como as leveduras, mas a maioria multicelular.

3 VRUS Diferem significativamente microrganismos pois no independente. dos outros tipos de possuem metabolismo

So constitudos por uma espcie de cpsula proteica que encerra o seu material gentico (ADN ou ARN). No material gentico encontram-se instrues para a replicao do vrus que s ocorre no interior de clulas hospedeiras vivas. Os vrus podem provocar vrias doenas como, por exemplo, a Gripe, a Hepatite e a Sida.

Alguns tipos de vrus: a)Vrus da Hepatite, b) Vrus da VIH, c) Rotavrus d) Vrus da gripe

(Imagem obtida ao microscpio eletrnico)

No se multiplicam em gua ou em alimentos. Assim, a contaminao ocorre no local da produo, por contacto de alimentos com guas e efluentes poludos ou durante a manipulao, preparao e distribuio por manipuladores infetados.

4 ALGAS UNICELULARES

5 PROTOZORIOS
Existem quase 30.000 espcies de protozorios microrganismos unicelulares eucariontes que vivem sobretudo em ambientes aquticos. Apresentam uma estrutura bastante complexa: todas as funes vitais como a alimentao, a excreo, a reproduo e a respirao tm lugar numa nica clula. Podem ser parasitas mas a maior parte apresenta vida livre.

A partir do sangue destes animais, Koch re-isolou mesma bactria. Ele repetiu o experimento, sempre re-isolando a bactria dos animais experimentalmente infectados at que tivesse certeza que tinha encontrado o agente da doena. Koch tornou-se famoso e conseguiu seu prprio instituto de pesquisas. Os cientistas do grupo de Koch e os do grupo de Pasteur, desenvolveram as tcnicas bsicas de microbiologia, ainda hoje em uso, tais como: tcnicas de esterilizao de material e meios de cultura utilizao de culturas microbianas puras o uso de placas de Petri, agulhas de inoculao, o uso de gar para a gelificao de meios de cultura, tcnicas de colorao de bactrias

Koch tambm descobriu os agentes etiolgicos da clera e da tuberculose, as bactrias Vibrio cholerae e Mycobacterium tuberculosis (bacilo de Koch), respectivamente A teoria do Germe (Koch + Pasteur) Em 1877, Koch formulou um conjunto de quatro postulados os quais afirmava deveriam ser adotados para que se aceitasse uma relao entre um microrganismo em particular e uma doena Postulados de Koch: a bactria deve ser encontrada em todas as pessoas com a doena; a bactria ou seus produtos devem ser encontrados nas partes do corpo afetados pela doena. a bactria deve ser isolada de leses de uma pessoa infectada e mantida em culturas puras. a cultura pura quando inoculada em voluntrio humano susceptvel ou animal experimental deve produzir os sintomas da doena. a mesma bactria deve ser re-isolada em cultura pura dos indivduos intencionalmente infectados..

Postulados primeiras abordagens que forneceram bases cientficas para o estudo das doenas infecciosas. Entretanto, apresentam limitaes: 1. Os postulados de Koch implicam que a virulncia uma caracterstica exclusiva das bactrias e independente do hospedeiro. Na realidade, a susceptibilidade do hospedeiro to ou mais importante que as caractersticas de virulncia da bactria. 2. O segundo postulado enfatiza a obteno de culturas puras do patgeno. H algumas doenas cujo agente causativo no pode ser cultivado em meios de laboratrio ou cujo meio adequando no , ainda, disponvel.

Em 1881, o mdico alemo Walther Hesse juntou-se ao grupo de Koch para estudar questes relacionadas sade pblica e ao metabolismo bacteriano tendo como assistente sua esposa Fanny Angelina Eilshemius Hesse. A gelatina ento utilizada para gelificar meios de cultura ou era consumida pelos prprios microrganismos ou derretia-se em dias quentes, prejudicando os experimentos que requeriam meios de cultura slidos. Angelina contou a seu marido que usava uma gelatina chamada de gargar para conservar seus doces slidos em dias quentes. O gar-gar tem sido usado como agente gelificante na culinria asitica h sculos. Hesse passou a utilizar com sucesso o gar-gar para fazer meios de cultura slidos e essa prtica permanece nos dias de hoje.

O gar-gar, atualmente denominado simplesmente de gar, um polissacardeo complexo e indigervel pelo menos pela grande maioria dos microrganismos, o que tornou universal seu uso em microbiologia para o crescimento de microrganismos em meio slido. Atualmente, o gar empregado em microbiologia produzido pela indstria especializada na manufatura de meios de cultura e disponvel em vrios graus de pureza. No preparo de meios de cultura slido, o gar , via de regra, adicionado na concentrao de 15 gramas por litro de meio lquido. As caractersticas gerais do gar so: - no-txico (para a maioria dos microrganismos e humanos), - derrete somente a 100C, mas solidifica-se a cerca de 45C (dependendo da concentrao), - mantm-se estvel mesmo sob temperaturas de esterilizao (120C) e fisiologicamente inerte (muito poucas bactrias expressam enzimas capazes de digeri-lo).

2. COMO SE MULTIPLICAM OS MICRORGANISMOS A maior parte dos microrganismos multiplica-se por fisso binria ou por gemulao, ou seja, uma clula d origem a duas ao fim de um certo tempo (tempo de duplicao). O tempo de duplicao varia de microrganismo para microrganismo e de acordo com as condies do ambiente em que se encontra. Em condies muito favorveis, alguns microrganismos podem duplicar em 20 minutos: cada clula forma uma nova clula, de 20 em 20 minutos.

Se se conhecerem os factores que favorecem e/ou inibem o seu desenvolvimento, possvel controlar o seu crescimento em alimentos.

Cada microrganismo tem condies especficas de temperatura, de humidade, de pH, de atmosfera gasosa envolvente e de nutrientes para atingir o seu desenvolvimento ptimo, ou seja, condies para as quais a sua duplicao ocorre a uma maior velocidade.

3. FACTORES QUE AFECTAM O CRESCIMENTO MICROBIANO 3.1 - A temperatura

A maioria dos microrganismos patognicos apresenta um crescimento mximo temperatura do corpo humano. O crescimento bacteriano possvel a temperaturas inferiores a 0C e superiores a 100 C.

A maior parte das bactrias encontradas em alimentos conseguem crescer entre os 5C e os 50C (existem algumas excepes).

No entanto, a sua temperatura de crescimento ptima (temperatura qual a velocidade de crescimento mxima) situa-se entre os 30 e os 40 C. As baixas temperaturas crescem muito lentamente (por exemplo no frigorfico, 4C) ou ficam inactivas (por

3.2 - A gua A gua indispensvel para o crescimento dos microrganismos. Em determinadas situaes, embora presente em grandes quantidades, a gua encontra-se ligada a certos compostos, por exemplo o acar ou o sal, o que inviabiliza o crescimento de microrganismos.

3.3 - O pH O pH uma medida da acidez ou alcalinidade de uma soluo.

A maioria das bactrias cresce melhor em ambientes prximos da neutralidade (pH 6,0 - 8,0). Poucas bactrias so capazes de crescer em pH cido (pH 4,0).

3.4 - Concentrao de gases atmosfricos O oxignio (O2) representa cerca de 21% da composio da atmosfera terrestre e o gs que mais condiciona o desenvolvimento de microrganismos em alimentos. De acordo com a necessidade de O2, os microrganismos so divididos em 4 grupos:

Aerbios Requerem oxignio para o seu crescimento (21% de O2). Alguns podem crescer mais lentamente quando o O2 limitado. Se os microrganismos crescem em meio lquido podem rapidamente utilizar o O2 dissolvido na camada superficial do meio. Facultativos Crescem na presena de O2 ou podem tambm crescer em anaerobiose (sem oxignio). Anaerbios So aqueles que no apresentam actividade metablica na presena de O. Contudo alguns, por exemplo, Clostridium perfringens podem tolerar baixas concentraes de oxignio. 3.5. Crescimento de microrganismos em laboratri

3.5. Crescimento de microrganismos em laboratrio Em laboratrio necessrio recorrer a meios de cultura para cultivar (fazer crescer) diversos microrganismos. O meio de cultura uma soluo que contm os nutrientes necessrios para o crescimento de microrganismos no laboratrio. Alguns microrganismos crescem sem dificuldade em qualquer meio de cultura, outros necessitam de meios especiais e existem ainda aqueles que no so capazes de crescer em nenhum dos meios desenvolvidos at ao momento. Os meios de cultura podem apresentar-se nos estados lquido ou slido.

No caso dos meios lquidos, medida que os microrganismos se vo multiplicando aumenta a turvao do meio. Sabendo a turvao, por medio em aparelhos especiais (espectrofotmetros), possvel estimar o nmero de microrganismos.

No caso dos meios lquidos, medida que os microrganismos se vo multiplicando aumenta a turvao do meio. Sabendo a turvao, por medio em aparelhos especiais (espectrofotmetros), possvel estimar o nmero de microrganismos.

multiplicando, vo-se formando aglomerados de microrganismos, que quando atingem um nmero suficientemente elevado se tornam visveis a olho nu). O nmero de microrganismos estimado com base no princpio de que um microrganismo vai dar origem a uma colnia.