ACTIVACION DE LT

CLASE 9

• Una vez que los linfocitos reconocen mediante sus TCR las estructuras específicas a través de las interacciones moleculares adecuadas, se inicia el proceso de activación. • Este proceso implica una serie de eventos en cadena que se inician en la membran celular, prosiguen en el citoplasma y terminan en el núcleo.

Activacion de LT
• La activación de los LT se inicia cuando el TCR reconoce a un péptido transportado por la molécula HLA. La unión entre el TCR y el péptido, junto a la molécula HLA, tanto de clase I como II, es específica. El proceso de reconocimiento varía si el TCR está formado por el heterodímero alfa/beta o si es del tipo gamma/delta. • Para que la activación se inicie adecuadamente, se requiere además de la participación de TCR, de otras moléculas presentes en la membrana de los LT. • Una vez activados los LT, éstos producirán prioritariamente citocinas o factores citotóxicos, según se trate de linfocitos Th o Tc. De esta manera estos linfocitos intervienen en la respuesta inmune en la que están implicados.

Interacción Intercelular .

no es suficiente para la activación eficaz de los LT. • Para que esta respuesta se lleve a cabo se requiere la participación de una serie de moléculas conocidas globalmente como accesorias.Interacción Intercelular • La unión del Ag con el TCR. • Se forma así lo que se denomina sinapsis entre LT y CPA . y cuya función es la de contribuir al desarrollo de una respuesta inmune efectiva. facilitando la interacción entre las distintas células.

. CD45 entre otras.Interacción Intercelular De estas moléculas destacan: Las moléculas CD4 y CD8. Las moléculas CD28 y CTLA-4 y sus ligandos. Otras moléculas como CD2.

Estas moléculas facilitan la unión intercelular y además potencian la transmisión de señales al interior celular. Ambas moléculas pertenecen a la superfamilia de las inmunoglobulinas el CD4 está formado por una sola cadena: El CD4 se expresa en la mayoría de los LTH el CD8 lo está por dos cadenas. el CD8 se expresa en LT con función citotóxica.Interacción Intercelular • • • • • Moléculas CD4 y CD8. Son glicoproteínas cuyos ligandos naturales son las moléculas MHC clase I y I I. alfa y beta. .

Esta posibilidad de la presencia diferencial de CD28 o CTL-4 define que el LT se active o se inhiba.Moléculas CD28 y CTLA-4 • La molécula CD28 es de especial importancia. . a diferencia del CD28. • Una variante de esta molécula es el CTL-4 que. también participa transmitiendo señales de activación del LT. CD86). lo que tiene gran trascendencia regulando el proceso de la activación de los LT. incrementa la estabilidad de las interacciones intercelulares de linfocitos. además de su papel en el proceso de adhesión. • El CD28 se expresa en todos los LTCD4+ y aproximadamente en el 50% de los LTCD8+ y sus ligandos naturales pertenecen a la familia B7 (B7-1. a diferencia del CD28. • El CD28. B7-2. se expresa sólo de modo transitorio después de la activación de las LТ у confiere una señal inhibidora al linfocito. CD80.

Interacción Intercelular .

Su ligando natural es el CD58 ( LFA3) y se expresan en la superficie de todas las células con función presentadora de antígenos. .Molécula CD2 La molécula CD2 es una glicoproteína de adhesión que contribuye a la unión del LT a la CPA.

. es una de las glicoproteínas más abundantemente expresadas en la superficie de linfocitos y en general en las células hematopoyéticas. Pertenece a la familia de proteínas con varios miembros y con múltiples alelos. pudiéndose detectar hasta un millón de moléculas por célula y cuyo ligando no se conoce con precisión.con actividad fosfatasa (PTP). La parte citoplasmática de esta molécula es muy extensa y en acción fosfatasa puede eliminar grupos fosfato a las tirosin kinasas LcT y Fyn.CD45 El CD45. como son el CD45Ra y el CD45RB.

que participan en los procesos de crecimiento. • En la activación de esta cadena de segundos mensajeros intervienen señales procedentes tanto del TCR/CD3 como de las moléculas accesorias. • Éstos son capaces de regular la transcripción específica de un amplio número de genes. al igual que los LB y NK. división y diferenciación celular.Transmisión de señales en LT • Los LT. poseen mecanismos a través de los cuales los estímulos externos son procesados y enviados al núcleo a través de una serie de mediadores bioquímicos intracelulares conocidos como segundos mensajeros. de moléculas que participan en la interacción celular y receptores de citocinas presentes en la membrana de los linfocitos .

Transmisión de señales en LT .

dependiendo de su actividad fosfotransferasa. . • Una propiedad general de los linfocitos es la de necesitar dos tipos de señales distintas para inducir su activación y proliferación. que se manifiesta fosforilando proteínas en aminoácidos serina y treonina (serina/treonina cinasas) o bien en aminoácidos tirosina (tirosina cinasas). • Existen dos tipos de cinasas. • Igualmente hay dos tipos de fosfatasas que defosforilan específicamente proteínas fosforiladas bien en serina/treonina o en tirosina.Transmisión de señales en LT • Un mecanismo fundamental en la regulación de la actividad y la función de estos mensajeros son los ciclos de fosforilación y defosforilación a los que están sometidos mediante cinasas y fosfatasas.

Transmisión de señales en LT • La 1a señal la proporciona la unión del complejo péptido-MHC al TCR (y a los correceptores CD4 y CD8). tales como CD2. • Estas señales coestimuladoras son necesarias para la activación del linfocito. LFA-1. esta señal está potenciada por la participación de moléculas de adhesión. . CD26 y otras. ya que en su ausencia la señal mediada por el TCR puede conducir al linfocito a la muerte celular o a un estado de anergia (en la que el linfocito no responde a nuevas estimulaciones). que complementan las señales de activación inducidas por el TCR permitiendo una activación celular completa. • La 2a señal es suministrada por moléculas coestimuladoras del tipo CD28.

Estas poseen en sus dominios intracitoplasmáticos unas regiones denominadas ITAM (Immunoreceptor Tyrosine based Activation Motifs) que se fosforilan por la acción de las tirosina cinasas c-lck y c-fyn. todo ello es posible porque la tirosina cinasa c-lck se encuentra localizada precisamente en la parte intracelular de la membrana plasmática unida a la bicapa lipídica. donde puede fosforilar en tirosina a sus regiones ITAM.Mediadores intracitoplasmáticos de la activación celular • El primer evento bioquímico que ocurre en los LT después de la interacción HLApéptido-TCR. principalmente de las cadenas zeta no polimórficas del CD3. Así mismo. es la fosforilación en tirosina. • Ello se debe a que existe una estrecha asociación física del CD4 y del CD8 con el TCR/CD3. de tal manera que cuando se produce la unión TCR-péptido-HLA. por un proceso de miristilación de su región aminoterminal. hace que la c-lck asociada a estas moléculas se aproxime a la porción citoplásmica de las proteínas del complejo CD3. .

que pertenecen a la familia de enzimas proteincinasas. Después de la activación de estos adaptadores se producirá la fosforilación en tirosina de la enzima fosfolipasa C gamma (PLC-gamma) que es crucial en todo el proceso de la cascada de transmisión de señales. • El ZAP-70 actúa fosforilizando sobre ciertos adaptadores. se convierten en sitios específicos de acoplamiento donde se une a la proteína citoplásmica ZAP-70. ejerce un papel crítico en la cascada de señalización intracelular fosforizando nuevos substratos. Entre estos adaptadores se encuentran el estabilizador de células T activadas (LAT) y la proteína específica de leucocito que contiene SH2 (SLP-76). que se encuentra tanto en LT como NK.Mediadores intracitoplasmáticos de la activación celular • Una vez que los ITAM son fosforilados en sus residuos tirosina. Asi el ZAP-70. . con lo cual prosigue la cascada de transmisión de señal de activación.

Mediadores intracitoplasmáticos de la activación celular • Como consecuencia. . que es una serina/treonina cinasa. la PLC-gamma se activa e induce la hidrólisis de su substrato específico. el fosfatidilinositol bifosfato (PIP2). Asi es como se inician las dos vías de transducción de suma importancia que es la iniciada por el IP3 y la otra la iniciada por el DAG. este aumento de la concentración de estos iones en el espacio libre intracelular actúa estimulando la enzima calmodulina. facilita la liberación del calcio intracelular de sus compartimentos. Luego se induce la formación de calcineurina que después activará el factor de transcripción activador de células T (NF-AT). • Vía mediada por calcio. Cuando el IP3 se une a un receptor específico (IP3R) localizado en el retículo endoplásmico. y que son conocidas como vía mediada por calcio y vía mediada por la proteincinasa C (PKC) respectivamente. generándose los metabolitos inositol trifosfato (IP3) y diacilglicerol (DAG) .

Otra vía importante de activación es en la que interviene el Ras. donde en presencia de fosfolípidos (fundamentalmente fosfatidilserina) ejerce su función de cinasa de proteínas en aminoácidos serina y treonina. • Vía mediada por AP-RAS.Mediadores intracitoplasmáticos de la activación celular • Vía mediada por la proteína cinasa C. en condiciones de reposo celular. . que hace que Raf se active y actúe como una cinasa de MAPc que interviene en la regulación por fosforilación del factor de transcripción activador de proteína (AP1). El DAG formado activa la PKC que terminará activando el factor de transcripción de células B (NF-kB). Las PKCs. se encuentra localizada en el citosol donde es inactiva. pero una vez que recibe el estímulo del DAG conjuntamente con iones Ca++ (dependiendo del isotipo enzimático) se transloca a la membrana celular.

• Entre estos factores de transcripción destacan: • El factor nuclear de la cadena K de células B • El factor activador de proteína 1 • El factor nuclear de células T . se activan ciertos factores que tienen como función la de activar la transcripción. de un gran número de genes implicados en la respuesta inmune. conocidos como factores de transcripción.FACTORES DE TRANSCRIPCIÓN EN LT Como consecuencia del desarrollo de la cascada de los mensajeros citoplasmáticos analizados más arriba.

p65.FACTOR NUCLEAR DE LA CADENA K DE CÉLULAS B • El factor nuclear de la cadena Kappa de células B (NF-κB). bloqueándose así su llegada al núcleo. Estas proteínas pueden estar formando distintos complejos entre ellos siendo los más comunes: p50/p50 y p50/p65. incluyendo los LT. p52. Será sólo después de la activación de la PKC cuando el IkB terminará degradándose y como consecuencia se liberan los componentes del NF-kB. se encuentra retenido en el citoplasma por moléculas llamadas inhibidores de NF-κB o IκB. fue caracterizado por 1a vez como un factor específico de LB. RelB y c-rel. que pueden ahora pasar del citoplasma al núcleo en donde ejerce su función . • El complejo p50/p65. (pero ahora sabemos que se encuentra en muchos otros tipos celulares). • Este factor está formado por 5 componentes que presentan una alta homología entre sí y que son las proteínas p50.

protooncogenes c-myc y otros. . ciertas moléculas de adhesión.Mediadores intracitoplasmáticos de la activación celular Este factor puede participar en la transcripción de la IL-2 y de su receptor y también en un amplio número de genes de LT tales como los de MHC.

JunB y JunD) y Fos (c Fos. es un factor de transcripción exclusivamente nuclear que se activa por fosforilación mediada por cinasas que se translocan al núcleo e inducen en este factor una modificación postranslacional que le hace activo. • Este factor está formado por proteínas ubicuas pertenecientes a las familias de genes de expresión temprana Jun (c -Jun.Factor activador de proteína 1 • El factor activador protein 1 (AP-1). a diferencia del NF-KB. FosB. v-Jun. incluyendo el de IL-2. Fra1 y Fra2) capaces de regular la transcripción de un alto número de genes. .

• En gran parte el NF-AT necesita de la cooperación de AP-1 para activar los genes donde actúa. se encuentran en su estado fosforilado en el citoplasma y pasa al núcleo cuando se desfosforila. • En este proceso interviene directamente la calcineurina que.Factor nuclear de LT activadas • La familia de factores nucleares de células T activadas (NF-AT). aparece cuando sobre la calmodulina se une el ion Ca++ como consecuencia de su movilización tras la activación del TCR. . a su vez.

. y a antígenos y a células alogénicas.Inmunopatología • Se han observado alteraciones de muchas de la cinasas que intervienen en la activación de los LT. • Entre ellas ZAP-70 que se asocia a valores muy bajos o ausentes de LT CD8+ en sangre periférica y sus linfocitos no proliferan en respuesta a lectinas. a anticuerpos monoclonales anti-CD3.

que a continuación estudiaremos en primer lugar el proceso de maduración de estos linfocitos y después la serie de eventos conducentes a la activación. productoras de Acs y células memoria. de tal manera que cuando se produce la unión mIg-Ag se inicia el proceso de activación de los mismos. • Para que los LB respondan tienen que haber sufrido un proceso madurativo que en el adulto ocurre en la médula ósea de tal manera. . • Posteriormente proliferan y diferencian a células plasmáticas.Activación de L B • Los LB utilizan como receptor las Ig de membrana (mIgs). proliferación y diferenciación de los mismos. listas para una pronta activación en caso de la entrada de nuevo del mismo Ag.

durante el cual se reordenan los genes de las cadenas pesadas y ligeras de las Igs. se produce a partir de progenitores linfoides derivados de las células hematopoyéticas primordiales (HSC). que pueden ser lesivos para el organismo en el futuro. También durante este proceso se produce la selección del repertorio de LB no autorreactivos y la eliminación de aquellos clones que reconocen antígenos propios. • Este proceso madurativo es independiente del estímulo antigénico. que se convertirán en LB maduros capaces de producir Igs.Proceso madurativo de LB • El proceso madurativo de los LB. .

Proceso madurativo de LB .

Proceso madurativo de LB • El proceso madurativo de los LB. . • Este proceso madurativo es independiente del estímulo antigénico. También durante este proceso se produce la selección del repertorio de LB no autorreactivos y la eliminación de aquellos clones que reconcoen antígenos propios. que se convertirán en LB maduros capaces de producir Igs. que pueden ser lesivos para el organimo en el futuro. se produce a partir de progenitores linfoides derivados de las células hematopoyéticas primordiales (HSC). durante el cual se reordenan los genes de las cadenas pesadas y ligeras de las Igs.

y producir cadenas ligeras. que asociándose a la cadena pesada mu se forma la IgM de manera completa.Etapas del proceso madurativo B • El siguiente estadío madurativo corresponde a los LB inmaduros. asociándose con sus cadenas ligeras. • Después se formarán los LB maduros que se caracterizan por expresar las cadenas pesadas mu y delta que. bien de las cadenas ligeras Kappa o lambda. que poseen la misma región V y consecuentemente la misma especificidad por el Ag. que se caracterizan por reordenar completamente los genes. . hacen que estas células coexpresan en su membrana IgM e IgD.

Etapas del proceso madurativo B .

• La interacción entre célula estromal y LB se lleva a cabo con la participación de las moléculas VLA4 y su ligando VCAM-1. presentes en LB y estromales. el factor de células madre o SCF .Etapas del Proceso madurativo de LB • Estos procesos madurativos de los LB inmaduros en la médula requieren de la presencia de células estromales que interactúan con los linfocitos inmaduros y a los que ayudan a través de la IL7 que producen y que facilita el proceso madurativo de los linfocitos. presente en los linfocitos y que interactúa con otra molécula presente en las células estromales. respectivamente y la molécula c-Kit.

según la cual el Ag exógeno se une (selecciona) a los LB. constituyendo el punto esencial de la teoría de la selección clonal. aparecen hipermutaciones somáticas que son responsables de las múltiples posibilidades de generación de un repertorio casi infinito de Acs. que entre en el organismo pueda tener oportunidad de encontrar LB que lo reconozcan. . 109. se denomina repertorio primario. que cada LB exprese una única región VH y VL. es decir.Generación del repertorio de Acs • los genes V de las Ig se distribuyen clonalmente. Basado en ello. calculándose que. cuyas Igm sean específicas (complementarias) para él. cada grupo de linfocitos ( clon) posee una única especificidad antigénica distinta de la expresada por los otros LB. • El conjunto de especificidades de Ac distribuidas entre los LB recientemente formados y que no han tenido contacto todavía con el Ag. Después. Ello garantiza que cualquier Ag exógeno de los múltiples (potencialmente millones) presentes de forma natural o artificialmente creados por el hombre. pueda ser de aprox. y como consecuncia de los estimulos antigénicos y diferenciación de los linfocitos.

Por ello las LB inmaduras que interaccionen con Ags son eliminados por un proceso denominado apoptosis. . inflamaciones destructivas en los tejidos propios. los autoanticuerpos generados producirían. proceos por el cual mueren los linfocitos debido a una fragmentación de su DNA. • De no ser así. a) generar una enorme diversidad de receptores que reconozcan diferentes antígenos y b) seleccionar de todas estas especificidades generadas al azar las no dañinas para el propio organismo.Eliminación de LB autorreactivos en la médula • El desarrollo del SI necesita compaginar 2 fenómenos casi contradictorios.

Proceso madurativo de LB .

que son de importancia capital en la transducción de señales activadoras al interior de la célula tras la unión del Ag a las mIg. • Los residuos de tirosina de las colas citoplasmáticas de los componentes del BCR pueden fosforilarse por enzimas proteín-tirosíncinasas (PTK). fyn y blk entre otras (Figura. . pueden reconocer al Ag por su receptor BCR y transmitirse las señales en la ayuda de otras moléculas.Reconocimiento del Ag y activación de LB • Los LB maduros. Activación BCR). presentes también en la membra celular . Entre esas PTK se encuentran las moléculas lyn. Ig-alfa e Ig-beta que poseen residuos tirosina.

De ellas. el CD19 y el CD81. el CD19 posee gran número de tirosinas en el tallo citoplasmático y la CD21 tiene la posibilidad de unirse a C3d que es un producto del catabolismo del complemento e importante en el proceso de identificación de células y bacterias que se requieren destruir del receptor del Ag de las células B (BCR) .Reconocimiento del Ag y activación de LB • Además existe también lo que se conoce como correceptor de células B. • Estas moléculas son el CD21 (CR2). que actúa asociado con las moléculas anteriores formando un gran complejo de activación.

BCR completo .

Selección Clonal .

• A este proceso se conoce como activación B. que facilitarían una 2ª señal necesaria para una óptima activación de los mismos. dependiente de LT • Para la activación de la mayoria de los LB se requiere además del reconocimiento de un determinado Ag por el complejo BCR (primera señal). En ciertas cinrcunstancias tambien los LB pueden activarse en ausencia de LT. la presencia de LT. Esto ocurre ante Ags con epitopos muy repetitivos y en este caso sa habla activación B. al igual que los LT. dependiente de LT. independiente de linfocitos T. .Activación B. Hoy se sabe que los LB. precisan de al menos dos señales para su activación.

Activación B. dependiente de LT .

Así. para una buena activación de los primeros. • Tambien es de gran importancia que las moléculas CD40L se unan a CD40 presentes en linfocitos T y B respectivamente para que estos últimos puedan activarse y diferenciarse de manera adecuada . esta señal por sí sola no es suficiente para una activación completa de los LB. • Para ello también se requiere la adecuada interacción entre ambos tipos de linfocitos. los LB expresan las moléculas de activación CD80 y CD86 que interactúan con la molécula CD28 de LT. T y B. mediante moléculas conocidas como accesorias. Para ello es necesaria al menos una 2a señal proveniente de los LT y que es mediada por ciertas citocinas que propiciarían la proliferación y diferenciación de las LB. dependiente de LT • La primera señal es dada por el complejo BCR de los LB tras su unión al Ag con lo que se pone en marcha la cascada de segundos mensajeros en estos linfocitos.Activación B. • Sin embargo.

que inducen activación y diferenciación de linfocitos B sin interaccionar con el BCR y • b) ciertos Ags formados por estructuras repetitivas.de manera adecuada . independiente de LT. conocida como activación B. dando lugar a la activación de LB sin necesidad de la interacción con los LT. como es el LPS. que son reconocidos simultáneamente por muchos complejos BCR.Activación independiente de LT • Se sabe que hay Ags que en ausencia de LT pueden producir una respuesta de LB. normalmente hidratos de carbono. Este tipo de Ags se denominan antígenos T independientes y pueden ser de dos tipos: • a) Ciertos antígenos de paredes bacterianas.