Preparatul microscopic

permanent
Preparatul microscopic permanent
Reprezinta modalitatea de examinare a
unor celule , fragmente de tesut sau
organ , carora li s-au suprimat
procesele vitale prin fixare

- permite examinarea la microscopul

optic a principalelor caracteristici ale
celulelor si a modului lor de
organizare.
Preparatul microscopic permanent

Un preparat microscopic este alcatuit

din:
1. obiect de examinat subtire si
transparent
2. mediu de fixare transparent
3. lama si lamela
 Preparatul microscopic permanent
Scopul relizarii unui Este folosit in :
preparat microscopic - clinica
permanent este de a - laborator de
conserva structurile anatomie patologica
celulare si raporturile - medicina legala
dintre ele pe un timp - cercetare
nelimitat. - in scop didactic
 Etapele obtinerii preparatului
microscopic permanent
1. Recoltare
2. Fixare
3. Spalare
4. Includere
5. Sectionare
6. Colorare sau impregnare
7. Montare
8. Etichetare
1.RECOLTAREA
Este operatia prin care obiectul de
examinat este prelevat de la omul sau
animalul viu sau dupa sacrificarea
animalului sau de la cadavru.

Poate fi bioptica sau necroptica

Recoltarea bioptica

- se recolteaza de la om sau animalul viu

si se practica in scop diagnostic.
Se realizeaza prin :
1. raclare
2. punctie bioptica
3. aspiratie
4. interventie chirurgicala
Recoltarea necroptica
- dupa sacrificarea animalului si se
practica in laboratoare in scop de
cercetare sau didactic.
- recoltarea de la cadavrele umane se
practica in laboratoarele de amatomie
patologica si medicina legala in scopul
de a confrunta datele de anatomie
clinica si tanatogenetice.
 Recoltarea
Conditiile unei bune recoltari:
1. cat mai aproape de momentul decesului
pentru a evita procesele de autoliza.
2. dimensiunea piselor sa nu depaseasca 5 mm
3. calitatea instrumentelor – bine ascutite
pentru a evita zdrentuirea si pierderea
paralelismului dintre planuri
4. adecvat in functie de tipul organului ; se vor
evita modificarile de volum, forma si relief.
2. FIXAREA
- etapa decisiva in obtinerea unui
preparat microscopic permanent.
- un proces fizic sau chimic prin care
sunt oprite cat mai rapid procesele
vitale celulare pastrandu-se cu alterari
minime volumul , forma , relieful si
raporturile spatiale si moleculare .
FIXAREA
Prin fixare urmarim :
1. Conservarea tesuturilor
2. Prevenirea pierderii de constituenti
celulari
3. Cresterea diferentierii optice a
structurilor celulare
4. Marirea consistentei tesuturilor in scopul
de a facilita trecerea lor prin celelalte etape
ale tehnicii si mai ales pentru sectionare
FIXATORII
Clasificare
a. Dupa natura lor:
1. fizici
2. chimici
b. Dupa reactia pe care o au cu
proteinele solubile
1. coagulanti
2. necogulanti
FIXATORII
Fixatorii chimici:
1. simpli
2. amestecuri fixatoare
FIXATORII CHIMICI
Fixatori simpli mai des utilizati :
acetona , acid tricloracetic , formol ,
acidosmic , alcool metilic
Amestecuri fixatoare:
- introduse in practica datorita
afinitatii inegale pentru diversele
elemente structurale
Amestecuri fixatoare:
1. dupa compozitia chimica
a. apoase
b. alcoolice
2. Dupa scopul urmarit
a. Universale (topografice)
b. Citologice
Mecanismul fixarii
1. insolubilizarea prin precipitare a
unor constituenti celulari proteine ,
glucide , saruri minerale, lipide
2. formarea de compusi de aditie intre
fixator si unii constituenti celulari
3. coagularea proteinelor
 CALITATILE UNUI BUN FIXATOR

1. patrunde bine in tesuturi

2. stabilizeaza tesuturile pastrand
nealterate caracterul si distributia
constituentilor celulari
3. nu provoaca artefacte
4. nu deformeaza tesutul
5. nu dizolva constituenti
 CALITATILE UNUI BUN FIXATOR

6. distruge microorganismele
7. extrage enzimele autolitice inactivate
8. confera consistenta
9. produce diferentiere optica
10. nu-si modifica compozitia
11. ieftin , netoxic , neinflamabil , neiritant
TRATAMENTE
POSTFIXARE
1. decalcifierea
2. disocierea pieselor
3. mordansarea
4.INCLUDEREA
Este procedeul prin care se realizeaza
conditii optime care sa permita
sectionarea piselor in sectiuni subtiri de
ordinul µm , transparente si cu fete
plane astfel incat sa poata fii examinate
la microscop.
INCLUDEREA
Mase de incluziune :
1. Dupa modul de realizare al includerii :
a. Penetreaza celula
b. Ramane in spatiul intercelular
2.Dupa solubilitatea in apa
a. anhidre , ex. parafina , celoidina ,
paraplastul
b. apoase ,ex . gelatina , polietilenglicol
Incluziunea la parafina etape
premergatoare

a. deshidratare – alcool in
concentratii crescande incepand cu 50°
fiecare in 3 bai succesive.
Incluziunea la parafina etape
premergatoare

b. clarificare – indepartarea
alcoolului din piesa cu ajutorul unor
reactivi numiti clarificatori , miscibili
cu parafina , care fac ca piesa sa devina
translucida. Se efectueaza cu alcool
anilic sau cu hidrocarburi benzenice.
Incluziunea la parafina etape
premergatoare
c. impregnarea –patrundere a piesei cu
parafina topita si solidificarea in bloc
prin racire pentru a oferi o consistenta
omogena.

d. turnarea blocurilor – blocul inglobat

se monteaza pe un port-obiect
5. SECTIONAREA
Piesa inclusa sau inghetata se taie in felii
subtiri de ordinul micronilor cu ajutorul
unui aparat numit microtom.
5. SECTIONAREA
Sectionarea la microtomul ptr. parafina
presupune urmatorii timpi pregatitori:
1. modelarea blocului pentru sectionare
2. lipirea blocului pe portobiect
3. sectionarea propriu-zisa
4. etalarea si lipirea sectiunilor
 6. COLORAREA
- se urmareste cresterea contrastului intre
elementele tisulare sau celulare prin
modificarea indicilor de refractie ai
substratului morfologic cu ajutorul
colorantilor.

Tehnica de colorare depinde de natura

fixatorului si de tesutul pe care se aplica.
7.MONTAREA
- protejarea sectiunilor fragile de
eventualele deteriorari, conservarea
coloratiei si asigurarea unui mediu optic
omogen si transparent necesar examinarii
microscopice.

Se face intre lama si lamela in diferite medii

de montare initial fluide.
MONTAREA

Mediile de montare pot fii :

1. Apoase: glicerina, sirop Apathy
2. Anhidre: balsam de Canada, colofoniu
8. ETICHETAREA

Pe fiecare lama se noteaza

- tipul celular
- sursa de recoltare
- fixatorul
- metoda de colorare
- data efectuarii