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Seminário de Biotecnologia II

Docente: Florença Discentes: Ayslan, Fernanda, Laryssa, Rafaela

Ouro Preto, 2013

O QUE SÃO ANTICORPOS?

Anticorpos (Ac), ou gamaglobulinas;

imunoglobulinas

(Ig)

Glicoproteínas sintetizadas e excretadas por células plasmáticas derivadas dos linfócitos B, os plasmócitos. Estão presentes no plasma, tecidos e secreções que atacam proteínas estranhas ao corpo, chamadas de antígenos. Tem função de realizar a defesa do organismo (imunidade humoral).

Os anticorpos podem existir em diferentes formas conhecidas como isotipos ou classes.

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 

ESTRUTURA As imunoglobulinas são moléculas e possuem estrutura tridimensional. Qualquer imunoglobulina possui duas cadeias pesadas. Cada uma das cadeias pesadas está unida a uma cadeia leve por duas pontes de enxofre e as duas cadeias pesadas estão unidas entre si.

aproximadamente. visto que a sequência de aminoácidos é bastante conservada em todos os anticorpos de uma determinada classe de imunoglobulinas. E as cadeias pesadas 440 aminoácidos. A extremidade carboxiterminal de cada cadeia é referida como região constante. na qual a sequência de aminoácidos varia bastante entre anticorpos específicos para diferentes antígenos. na sua extremidade aminoterminal. Essas cadeias possuem. As regiões variáveis contêm regiões de variabilidade ainda maior (regiões hipervariáveis) que correspondem ao sítio de ligação ao antígeno.    . Cada cadeia leve tem. 220 aminoácidos. uma região variável.

Tipos de cadeias pesadas: (α. IgG. ε. IgE.δ. que correspondem às cinco classes de anticorpos (IgA. IgD. γ. µ).   . As cadeias leves podem ser classificadas em dois tipos: kappa (κ) ou lambda (λ). e IgM). Essa classificação é baseada na sequência de aminoácidos da região constante das cadeias pesadas.

PRODUÇÃO DE ANTICORPOS NA BIOTECNOLOGIA  A Biotecnologia = engenharia + ciências da vida. Através da manipulação dos seres vivos ou os seus componentes tem o objetivo de obter produtos úteis com aplicações no melhoramento de diversos problemas em diversas áreas. como no ambiente.  . na saúde e na produção de alimentos.

. os processos biotecnológicos têm um papel importante na imunologia. Um dos aspectos mais importantes da Biotecnologia é a sua contribuição para o diagnóstico e a terapêutica de doenças. mais especificamente na produção de anticorpos. Nestes casos. A utilização e o estudo dos linfócitos B conduziram à formação de dois tipos de anticorpos:     Os anticorpos policlonais. Os anticorpos monoclonais.

5) Recolha e purificação dos anticorpos monoclonais. . 4) Crescimento clonal dos hibridomas. 3) Fusão dos linfócitos B com mielomas. 2) Isolamento de linfócitos B a partir do baço. do qual se retira os linfócitos. A produção de anticorpos monoclonais realiza-se então em cinco etapas: 1) Imunização de um animal.

indicadoras de gravidez. para identificar microrganismos causadores de infecções. em que o uso de anticorpos monoclonais serve para detectar a presença de certas substâncias na urina.  .  Testes de gravidez. os anticorpos monoclonais poderão ser aplicados em diversas áreas da biomédica: Testes sorológicos. Após este processo.

Os anticorpos utilizados nestes tratamentos designam-se genericamente por imunotoxinas. como o câncer da mama. destruindo-as sem afetar as restantes células do organismo. São utilizados ainda no tratamento de alguns cânceres.  . e são capazes de reconhecer determinadas moléculas presentes em células cancerosas.

Sistemas microbianos: possuem uma capacidade limitada para realizar as modificações pós-traducionais de proteínas eucarióticas. Fermentação bacteriana: frequentemente resulta na produção de agregados insolúveis.PLANTAS PRODUTORAS DE ANTICORPOS VANTAGENS EM RELAÇÃO AOS SISTEMAS MICROBIANOS E ANIMAIS  As plantas transgênicas podem ser exploradas como uma alternativa atrativa e de custo reduzido em relação aos sistemas microbianos e animais para a produção de biomoléculas.   . e custos substanciais estão envolvidos em solubilizar e remontar estes agregados em proteínas nativas.

e o uso de animais transgênicos levanta muitas preocupações públicas e éticas.   . Plantas transgênicas são facilmente produzidas. estocadas como sementes. não requerendo recurso especializado ou meio de cultura elaborado. propagadas. e posteriormente. As culturas de células animais necessitam de meios de cultura caros. linhagens homozigotas podem ser rapidamente obtidas. As plantas são simples e baratas de cultivar.

 O crescimento pode parar ou podem ser contaminados por micoplasma.) Para isso. oriundo de um camundongo imunizado com o antígeno de interesse.  A maioria dos anticorpos. que conserva a capacidade de divisão exacerbada do mieloma juntamente com a informação para a síntese do anticorpo específico desejado. . A célula híbrida formada é um hibridoma. ou são produzidos em cultura por células especializadas(hibridoma. são produzidos em animais e isolados a partir do soro ou fluído ascítico.  Pessoal técnico e laboratório altamente especializado.  Meio de cultura caro.  Dificuldade de cultivo do hibridoma. faz-se necessária a fusão de uma célula de mieloma de camundongo com um linfócito B normal.

os anticorpos são os que apresentam maior variedade de aplicação. Esses anticorpos monoclonais são utilizados para: Reagentes farmacêuticos  Diagnósticos  Modificações de características da própria planta   .APLICAÇÕES DOS ANTICORPOS PRODUZIDOS EM PLANTAS  Dos compostos bioativos produzidos.

  Exemplo: Imunoglobulina multimérica complexa SIgA:  Mais efetiva que IgG contra bactérias por ligar-se polivalentemente ao antígeno. A produção desses anticorpos a partir das plantas é possível graças a similaridade entre as maquinarias das células animais e vegetais para produzir cadeias leves e pesadas. Esses anticorpos possuem beneficio na aplicação tópica das mucosas. formando anticorpo completo e funcional. local passível de infecção. como medida profilática contra vírus. . fungos e bactérias.

cólera).  Doenças sexualmente transmissiveis.  . houve a produção de plantas que expressassem todas as unidades levando a produção da SIgA corretamente montada e funcional (mostrando a flexibilidade dos vegetais na montagem de moléculas complexas)  A grande disponibilidade de IgA secretória leva a oportunidades para terapias do sistema imune das mucosas: Intestinal (E. SIgA = 2 IgA unidas por um pequeno peptideo J e complexada com um peptideo maior (componente secreto)  Cada componente foi expresso individualmente em uma planta de fumo. coli. após sucessivos cruzamentos das plantas transgênicas e seus filiais.  Respiratória (influenza).

Modulação das vias metabólicas para produzir características nutricionais e de desenvolvimento. Biorremediação. onde ocorreria a expressão de um anticorpo recombinante de células vegetais e o uso dessa planta para o sequestro ( especifico de 1 poluente) de poluentes no ambiente.APLICAÇÕES DOS ANTICORPOS PRODUZIDOS EM PLANTAS  Modificações causadas na própria planta:    Resistencia a doenças. .

Kits de diagnóstico.APLICAÇÕES DOS ANTICORPOS PRODUZIDOS EM PLANTAS  Os anticorpos após a purificação podem ainda:   Preparação de colunas de afinidade. . Clinico  Detecção de poluentes ambientais  De forma rápida e menos onerosa.

DIOXINAS Perigosos Poluentes Ambientais .

INTRODUÇÃO Há uma extensiva poluição de nossos ambientes por pesticidas orgânicos e outros químicos industriais.  Áreas afetadas incluem lagos.  . rios. água potável. etc. solo.

 . a incineração de químicos contendo halógenos. A fabricação de pesticidas. a fabricação de papel e plásticos. Dentre estes poluentes ambientais destacam-se as dioxinas. entre outros processos de produção de clorinas. podem resultar na produção não intencional de compostos químicos que são potenciais poluentes ambientais.

que incluem o 2. um dos mais potentes agentes tóxicos. São contaminantes do ecossistema.  . As dioxinas são hidrocarbonetos aromáticos clorados. mesmo em baixas doses. são altamente teratogênicos e carcinogênicos. que.8 tetraclorodibenzopdioxina (TCDD).3.7.

causando efeitos tóxicos que incluem: anorexia. teratogenicidade e morte  .  úlceras gástricas. acumulando-se em níveis altíssimos nos corpos das espécies que estão no topo da cadeia alimentar. mas é atraída por óleos e gorduras. A dioxina não é solúvel no ar ou na água.  atrofia do timo e supressão imune  Toxicidade reprodutiva e do desenvolvimento. hepatoporfiria  lesões vasculares. severa perda de peso  hepatotoxicidade.

. devido à contaminação por dioxina em dois carregamentos brasileiros destinados à Europa. usado como matériaprima na produção de alimentação animal.CASOS:  BRASIL: Houve o relato de que a Alemanha. Holanda e Bélgica proibiram a entrada naqueles países de farelo de casca de laranja.

o maior nível já encontrado em cinzas liberadas por incineradores. JAPÃO: um nível recorde de dioxinas foi detectado nas cinzas eliminadas pelo incinerador de lixos do Hospital Kasori.    . A quantidade de agentes químicos cancerígenos encontrados totalizaram 19 mil picogramas/grama. na cidade de Chiba.

 .100 produtos alimentícios foram retirados das prateleiras por suspeita de contaminação por dioxina (Folha de São Paulo de 9/6/99). BÉLGICA: mais de 1.

há necessidade de se adotar um procedimento que seja específico para os congêneres mais tóxicos da dioxina e que seja relativamente simples e rápido na detecção do sítio de contaminação. . dados os prejuízos que esses compostos causam ao ecossistema e à saúde humana e animal. Portanto.

Portanto.TÉCNICAS ANALÍTICAS:   Cromatografia gasosa Espectroscopia de massa São de alto custo. equipamentos especializados. quantificação e retirada desses poluentes do ambiente. para a rápida aplicação no sítio de contaminação. bastante sensíveis.   . pessoal altamente treinado e não são disponíveis para a aplicação in situ. é NECESSARIO o desenvolvimento de procedimentos alternativos que possam ser específicos. e requerem laboratórios dedicados. adaptáveis para a análise de múltiplas amostras e simples de serem manipulados.

 . Pode-se constatar que a produção em larga escala de anticorpos contra dioxina é altamente desejável. a partir das plantas transgênicas. parecem ser estratégias bastante promissoras na tentativa de eliminar do ambiente esse perigoso poluente. bem como o potencial uso dessas próprias plantas em um sistema de biorremediação. Os imunoensaios preenchem esses critérios e fornecem provas efetivas na detecção de compostos importantes. visto que o uso de kits de detecção produzidos com esses anticorpos purificados.

em plantas de fumo. . uma estratégia de clonagem envolvendo os cDNAs para as cadeias leve e pesada do anticorpo IgG1a que reconhece o TCDD.EXPRESSÃO DE ANTICORPOS ANTIDIOXINAS EM PLANTAS DE FUMO  Com o objetivo de expressar o anticorpo anti-dioxina completo. desenvolveu-se.

foi possível o conhecimento das seqüências das regiões variáveis de ambos os cDNAs.  . foram as introduções destes em plantas de fumo.  Em seguida. sob o controle do promotor constitutivo 35S do vírus do mosaico da couve-flor.Após experimentos usando clones como DD1 e DD3 .  Foram realizados mais experimentos. as construções resultantes. após a seleção dos fragmentos.

 Por fim as plantas foram levadas para vasos com terra. . temperatura e umidade. mantidos em casa de vegetação em condições adequadas de luz. até o momento da colheita das folhas para as análises moleculares e a extração de proteínas.

e a detecção do anticorpo nas plantas transgênicas cotransformadas. revelou claramente a presença da IgG anti-dioxina em quatro plantas testadas . através da análise imunológica por slot blot.. A análise do DNA genômico por Southern blot confirmou a presença dos genes esperados.

 Nos extratos da planta controle não houve reação.  Esse imunoensaio mostrou que as plantas transgênicas de fumo foram capazes de produzir o anticorpo anti-dioxina.A revelação foi feita por quimioluminescência. mostrando a ausência do anticorpo.  .

 O anticorpo anti-dioxina produzido pelas plantas de fumo poderia então. ser utilizado na fabricação de um imunoensaio para a detecção da contaminação por dioxina. seria biorremediação das áreas poluídas pela dioxina.  Uma outra intrigante possibilidade para o uso dessas plantas transgênicas. após sua purificação. .

CURIOSIDADES .

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H.org/wiki/Imunoglobulina (acessado em 18/06/13)  http://www.aspx (Acessado em 18/013)  http://pt. Saunders Company.net/news/2005/03/23/10/Portuguese. A. Lichitman. edited by W.. 457 p.1994.. A.receptabiopharma.wikipedia. Cellular and Molecular Immunology.K.newsmedical.com.J.B.S.  http://www.2nd edition.br/site/anticorpo s-monoclonais/ (acessado em 18/06/13)  .nº 23 novembro/dezembro 2001  Abbas.REFERÊNCIAS: Biotecnologia Ciência & Desenvolvimento . Pober.