HEMOGRAMA AUTOMATIZADO

HISTORIA

En los últimos 30 años se usaron distintos equipos que ovolucionaron desde los sistemas semiautomatizados de un solo canal hasta los de multiples canales. Capaces de evaluar hasta 20 parámetros hematológicos

AUTOMATIZADOS
Los contadores electronicos son más precisos que las técnicas manuales.  Se dispone de varios modelos de equipos.  Miden diversos parámetros hematológicos.  Analizan en forma comparativas las muestras, rápido y con poco error.

Muestras
Punción correcta Hemólisis Microcoágulos  Buen rotulado de muestras  Tubos de extracción Anticoagulantes:EDTA 1.5 mg/dl  Transporte y conservación

Errores mas comunes en muestras
Microcoágulos  Pérdida de plasma  Hemólisis  Exceso de EDTA  Mala conservación  Transporte irregular  Homogeinización inadecuada  Crioaglutinación

Etapa analítica  Controles de calidad  Personal calificado Conocimiento del funcionamiento de los instrumentos Conocimiento de las limitaciones de los equipos   .

Analizadores Hematológicos         Rapidez = 90-150 hemogramas/hora 18-25-38 parámetros hematológicos 10000 células examinadas 40-300 ul de muestra Carryover ausente 4 a 6 Reactivos utilizados En general con 2 tecnologías: Impedancia. VCS. Citoquímica. Radiofrecuencia. Histogramas . Láser/Citometría de flujo.Optica.

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TIPOS PRINCIPALES IMPEDANCIA DEL FLUJO ELECTRICO  DISPERCIÓN DE LUZ PARA CONTAR LAS CELULAS  .

Este se basa en la detección de los cambios en la resistencia eléctrica producidos por una partícula suspendida en un diluyente conductor a su paso por una abertura. .TECNOLOGIA UTILIZADA  Impedancia Eléctrica : Contaje total de hematíes (RBC) Contaje total de leucocitos (WIC) Contaje total de plaquetas (PLT) VCM y VPM. plaquetas y leucocitos. El sistema de impedancia eléctrica cuenta y detecta el tamaño de los eritrocitos.

Detección Resistencia Electrónica:  Ley de Ohm’s .

Resistencia Electronica (Impedancia)  Utiliza propiedades no conductivas de las células     las células sanguíneas pasan a traves del orificio de apertura desplazando su propio volumen El incremento de la resistencia entre electrodos resulta en un pulso eléctrico RBCs y Plaquetas se cuentan juntos y se separan por la altura de los pulsos El flujo hidrodinámico fuerza a las células a pasar en una fila única a traves de la zona de sensado. .

Generación del Histograma: .

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CITOMETRIA DE FLUJO CITOMETRIA DE FLUJO ES UNA TECNOLOGIA (PROCESO) QUE PERMITE LA MEDIDA SIMULTANEA DE MULTIPLES CARACTERISTICAS FISICAS DE UNA CELULA SINGULAR. ESTAS MEDIDAS SE REALIZA MIENTRAS LAS CELULAS PASAN EN FILA SIMPLE A UNA VELOCIDAD DE 500 A 4000 CELULAS POR SEGUNDO A TRAVES DE UN APARATO MEDIDOR EN UN FLUIDO .

QUE NOS DICE LA CITOMETRIA DE FLUJO DE LA CELULA  Tamaño  Granularidad o Complejidad interna  Intensidad Fluorescente .

LAS PROPIEDADES REFRACTARIAS DE LA LUZ DE UNA CELULA NOS DA INFORMACION ACERCA DEL TAMAÑO CELULAR Y GRANULARIDAD .

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CITOMETRO DE FLUJO SISTEMA COMBINADO DE:  FLUIDOS  OPTICA  ELECTRONICA .

•Células en suspensión Fluídos •Flujo en una fila unitaria Óptica •Un volumen iluminado donde las células dispersan luz y emiten fluorescencia •Esta es recogida. filtrada y Electrónica WHO – Diagnostics and Laboratory Technology •Convertida en valores digitales que son guardados en una computadora .

Fluidos  La muestra líquida se inyecta en un núcleo central y las células pasan en fila mediante un pequeño orificio (50-300 µm): Flujo laminar Introducir un volumen grande en un un volumen pequeño de tal forma que este se oriente a lo largo de un eje que se denomina:Centro Hidrodinámico  WHO – Diagnostics and Laboratory Technology .

la muestra fluye por el centro sin mezclarse con la camisa de fluido • A esto se le llama Flujo Laminar WHO – Diagnostics and Laboratory Technology . esto se logra inyectando la muestra en una camisa de fluido cuando este pasa a través de un pequeño orificio de 50-300 μm • Cuando las condiciones de la camisa de líquido son correctas.FLUIDOS • Se requiere células en suspensión que fluyan en una sola fila a través de un volumen iluminado • En la mayoría de los instrumentos.

Óptica Se necesita una fuente de luz enfocada sobre el punto donde la muestra ha sido dirigida (volumen de iluminación) • • Tipos de fuente de luz • Lasers • Lámparas de arco WHO – Diagnostics and Laboratory Technology .

 WHO – Diagnostics and Laboratory Technology .LASER Pueden proveer luz de una sola longitud de onda (línea Laser)  Puede proveer desde milivatios hasta vatios de luz  Pueden ser baratos. unidades enfriadas por agua  Provee luz coherente. unidades enfriadas por aire o costosas.

FLUJO CELULAR FLUORESCENCIA 2 LUZ DE LASER FLUORESCENCIA 1 CELULAS .

Método de Conteo Celular por Dispersión de la Luz La snagre diluida pasa a través de un detector de flujo celular colocado en el trayecto de un rayo luminoso de foco cercano (láser).  Cada célula provoca un cambio en el rayo y que genera un impulso eléctrico que se registra.  .

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 Medida a 0º sirve para medir el tamaño celular Medida a 10º mide la complejidad celular    Medida a 90º mide la superficie celular y la estructura interna ( granularidad ) Medida a 90ºD mide determinados tipos de granularidad celular .

nos revelan su composición interna .RADIOFRECUENCIA (Conductividad ) La conductividad de las ondas de radio a través de las células.

Linfocitos.TECNOLOGIA VCS  La tecnología VCS es el mecanismo por la cual los analizadores de hematología COULTER realizan la diferenciación de los diferentes tipos de leucocitos en 5 tipos: Neutrófilos. Monocitos. Eosinófilos y Basófilos .

Conductividad y Scatter) .TECNOLOGIA VCS  La muestra (sangre) es mezclada con el rectivo. lo cual produce una rápida lisis de los eritrocitos y reduce los restos celulares sin alterar los leucocitos. Posterior a esta reacción se agrega el preservante de los leucocitos a fin de que resistan en su estado casi nativo las mediciones subsecuentes (Volumen.

• El MCHC es calculado del valor de Hemoglobina y el Hematocrito .R. • El volumen del paquete celular es calculado del MCV multiplicado por el conteo de células rojas • El MCH es calculado del valor de la Hemoglobina y el conteo de G.• El MCV es calculado sobre las bases de la sumatoria de la altura de los pulsos de las células rojas y dividido por el conteo de G.R.

Se determina comparando el volumen total o acumulado de GR al volumen total de sangre en los 11. Hematocrito : se mide en % y representa la proporción total de GR en la sangre.1.7ul de la dilución 1:500 . El hematocrito es medido electrónicamente : “ el pulso que es generado cuando los GR pasan a través de la abertura es proporcional a su volumen “. Tiene menor presición 2. no se mide directamente con los citómetros de flujo y se calcula a partir del VCM y en número de GR.

que pueden o no pueden ser corregidos por cálculos matemáticos  . los resultados son más exactos.Canal de eritrocitos  Al usar la corriente directa. causando pulsos que no son indicativos del verdadero tamaño de las células Estos pulsos anormales pueden producir conteos falsos. si las células pasan por el centro de la apertura  Sin el enfoque hidrodinámico las células tienen la tendencia a pasar por otros ángulos.

Canal de eritrocitos Las células son rodeadas por una capa de fluido la cual guía a las células una por una a través del centro de la apertura Cada célula es contada y medida individualmente Un segundo flujo de fluido en la parte posterior de la apertura asegura que las células no recirculen por la apertura .

.¿Qué significa RDW? “RDW – Ancho de la distribución de la curva de los eritrocitos ”  Dos fórmulas matemáticas usadas para describir la variación de tamaño de los eritrocitos (Anisocitosis).

RDW-CV  Definición: Es el coeficiente de variación alrededor de la media (X) correspondiente a la curva de distribución del volumen de los glóbulos rojos .

14%   Historia: Desarrollada por el Dr. con el propósito de facilitar el diagnóstico de la anemia por la deficiencia de hierro Utilizado por los médicos para distinguir las anemias . Bessman al final de los años 70.RDW-CV  Valores Normales = 12% .

Por consiguiente los resultados parecen normales Al revisar el frotis de sangre bajo el microscopio se descubre una variación del tamaño de glóbulos rojos diferente al indicado por el RDW-CV%  .RDW-CV  El dividir una desviación estándar por el MCV tiende a normalizar falsamente el CV%.

A esta altura es donde se encuentra la mayor variación de tamaños de las células  .) del ancho de la curva de los glóbulos rojos (RBC) Tomada 20% arriba de la línea base El ancho es medido al 20% de la altura relativa.RDW-SD  Definición: Medida directa (en fl.

9 fl 3+ (variación máxima ó considerable) >75 fl .9 fl 2+ (ó variación moderada) 65 fl a 74.RDW-SD  Un ejemplo de los rangos utilizados por un laboratorio son los siguientes:    1+ (ó variación mínima) 55 fl a 64.

RDW-SD Histograma de Eritrocitos Altura relativa La curva más ancha Representa a la población Con mayor anisocitosis 20% Tamaño de los Eritrocitos en fl .

se realiza por el método modificado de la cianmetahemoglobina.TECNOLOGIA UTILIZADA  Colorimetría La medición directa de hemoglobina (HGB). . a 540 nm. utilizando como fuente lumínica un diodo emisor de baja energía.

21 .3000 SX .Sismex SF .

COULTER .

la fórmula diferencial por flujo óptico. Los leucocitos. Utiliza la medición por impedancia y dispersión de luz láser. La hemoglobina por espectrofotometría. En cada ciclo la muestra es aspirada. . hematíes y plaquetas se miden por impedancia eléctrica. diluida y mezclada y se realizan las mediciones de cada parámetro. Algunos parámetros son medidos directamente y algunos son calculados.CELL DYN 3500      El equipo autoanalizador realiza la medición de 22 parámetros hematológicos de la sangre.

SISTEMA MODULAR TOTALMENTE AUTOMATIZADO CELL DYN 4000. CON EL LAMINADOR SMS – 5H2901 .

Además. A través del uso de un láser de un Ion de Argón. el CD4000 es único manteniendo el descubrimiento fluorescente NRBCs.CELL DYN 4000    El Cell-Dyn 4000 es el primer analizados hematológico automatizado para ofrecer el análisis de anticuerpos monoclonales. el análisis de plaqueta óptico y el linealidad de WBC extendido . reticulocítos y viabilidad de WBC.

CELL DYN 4000 La citometría de flujo fluorescente.  .  la medida de la impedancia del flujo. reticulocítos con la razón de inmadurez y el factor de viabilidad celular blanco.  el ADN-ARN marcado.  Los datos automáticamente generados incluyen la nuclealidad en la cuenta de la célula de serie roja.

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