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Fijación y técnicas de preparación de extendidos citológicos

Introducción
Citología es parte de la biología que estudia las células y sus organelas, su desarrollo ha sido paralela al del microscopio. Desde hace muchos años ha sido de gran valor en el campo de la medicina para la detección del cáncer cervico-uterino y de otros sitios del cuerpo. Los laboratorios de citología deben estar dotados de varias áreas de trabajo: -Citología ginecológica -Citología de líquidos o derrames -Punción aspiración con aguja fina(PAAF)

Interpretación celular
Métodos de recolección
Fijación y fijadores Preservación de líquidos antes de ser procesados Preparación de material citológico para el examen

microscópico Tinción y montaje de la muestra celular

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. el paciente debe estar ingresado y el medico debe realizar la recolección adecuada. peritoneal. corporales como orina y esputo pueden ser recolectada por el mismo paciente siguiendo las recomendaciones médicas o del laboratorio  Para la recolección de los derrames como pleural. LCR y otros .Métodos de recolección  Citología ginecológica: Citología convencional es recolectada del cérvix por el personal médico o enfermería  Punción Aspiración con aguja  Citología de líquidos Fina pueden ser recolectadas por patólogos (as) con experiencia en este campo.

Citología cervico-vaginal .

Punción aspiración con aguja fina (PAAF=BAAF) .

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Derrames corporales .

Toracocentesis y paracentesis .

Fijación  La fijación inmediata de las muestras es necesaria para preservar los detalles celulares en los extendidos citológicos.  Si las muestras se dejan secar al aire antes de la fijación las células pueden sufrir distorsión en su arquitectura. .

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 Alcohol 95% en atomizador o citospray.  Para las PAAF se pueden utilizar:  Alcohol 95%  Formalina buferada al 10%  Secado al aire.éter.Fijadores  Para preservar muestras ginecológicas :  Alcohol al 95%. .  Metanol al 100%  Propanol 80%  Isopropanol 80%  Pre-fijador para muestras de líquidos corporales:  alcohol 50%.

Fijación inmediata .

Liq. Pleural fijado en alcohol 95% Liq. Pleural fijado en formalina al 10% .

Muestra de liq. Peritoneal fijada en alcohol al 95% .

2 %50ml Formol 37-40% 250ml Fijador de Carnoy -Etanol 95% 60 ml -Cloroformo 30 ml -Acido acético glacial 10 ml (en este fijador la muestra no debe permanecer más de 15 min) Vapor de formalina: este fijador hemolisa los glóbulo rojos y encoge las células Fijador ácido Pícrico -Acido pícrico 1. Solución de Bouin Solución acuosa de ácido pícrico 1.Fijadores especiales  Solución de formalina buferada neutral: Formalina 37-40%100ml Agua 900ml Fosfato de sodio monobásico ……….5 g. 4 g Fosfato de sodio bibásico…………… 6.3 g -Alcohol etílico 70% 1000ml Acido acético glacial 50ml .

 El tiempo entre la recolección de la muestra y la preparación antes de sufrir daño celular depende del PH. proteínas.Preservación de Líquidos antes de ser procesados  Preservar la morfología celular hasta que la muestra sea procesada es esencial para la correcta interpretación.  Los especimenes pueden ser sometidos al laboratorio sin preservación si se facilita la inmediata preparación de los extendidos. Ejemplo: Lavado Gástrico . actividad enzimática y la presencia o ausencia de bacterias.

.Preparación del material citológico para el examen microscópico Muestras líquidas como orina . derrames pleurales. del material obtenido se realiza los extendidos. decoloradas o con sangre. se deben someter al método de sedimentación en centrifuga por 5 min a 1500 o 2000rpm . aspirado bronquial o líquido de mucocele deben realizarse los extendidos citológicos directamente seleccionando partículas sólidas. peritoneales o LCR. Muestras con alto contenido mucoso como Esputo..

Método de sedimentación celular .

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Preparación del extendido citológico de esputo .

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. especialmente utilizado en muestra con poco contenido celular como LCR.Preparación con filtro de membrana o millipore  Los filtros de millipore son elaborados de celulosa aproximadamente de 140milimicras.

este método es útil para complementar diagnostico del citológico .Preparación de bloque celular  La técnica de bloque celular o inclusión en agar parafina se realiza a partir del sedimento celular decantando liquido sobrenadante y agregando agar líquido. .

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 Para este método se necesitan 3 soluciones especificas: Hematoxilina de Harris Orange 6 (OG6) Eosina Azur 36. tienen un valor práctico en la diferenciación celular tanto citoplasmática como nuclear y sus modificaciones. 50 ó 65 (EA-50) Cada una de estas soluciones deben de ser filtradas antes de utilizarla. .Tinción Papanicolaou  Tinción de rutina elaborada por el Dr. Georges Papanicolaou.

3 enjuague en alcohol al 95% 9. Enjuague y deshidratación en agua.25%. alcohol 50%.Pasos de tinción Pap 1. Deshidratación total en etanol absoluto 12. Enjuague en 3 alcoholes 95% 11. . 50% agua una sumersión en cada una 3. Tinción citoplasmática en EA 36. Tinción citoplasmática en Orange 6 1 ½ min 8. 70%. Re fijación en alcohol al 95% 10 min Hidratación en alcohol 80%. 6. Extracción diferencial en ácido clorhídrico al 0. Enjuague en agua 5. Tinción Nuclear en Hematoxilina de Harris 6 min 4. 70%. 80% y 95% 7. 10. 50 o 65 1 a 3 min. 2. Clarificación celular en Xilol .

Alcohol al 50%……100ml Biebrich Scarlet 0. Aclarar en xilol y montaje permanente . en solución de Shorr por 1 min.5 gr Orange G-6 0. Enjuagar en alcohol al 70%. 2. 5. 3.075gr Acido fosfotúngstico 0.0ml 1. 7.Tinciones especiales  Tinción para evaluación  Método de la tinción: hormonal: Tinción de Shorr 1. 95% y alcohol absoluto 3. 4. 6.5gr Acido acético 1.5gr Acido fosfomolíbdico 0..25gr Fast-Green 0. Teñir la Mx. 2.

se deposita esta muestra en la lamina. Tinción de Biebrich Scarlet-Fast-Green 2. Tinción de Orceina acética 3. de solución salina y se le agrega 1 gota de la mezcla de Rakoft. Tinción Cresil Violeta . 1.Otras tinciones Método de Rakoft:  Tinción para cromatina sexual:  Light Green 83ml  Solución acuosa de eosina al 1 % 17ml La muestra tomada de la pared vaginal se coloca en 2 cc..

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daños mecánicos.Montaje de la muestra procesada  Los medios de montajes crean un capa permanente entre la lámina y el cubreobjetos protegiéndola del medio ambiente. disecación celular. logrando así almacenarlas luego de haber sido visualizadas o diagnosticadas .  Se coloca una gota del medio de montaje sobre la muestra  Se diluye con Xilol y antes de que se seque colocar el cubre objeto tratando de que la muestra quede protegida .

y luego sumergir en alcohol al 95% . en solución acuosa de ácido acético al 2%  Extendidos citológicos cervicovaginal sin fijar se re hidrataran sumergiendo la laminilla en glicerina al 50% por 2 seg. ...Algunas recomendaciones  Muestras citológicas hemorrágicas antes de proceder a tinción deben de sumergirse por 5 seg.