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3.

- Resolución gráfica de ecuaciones cinéticas: Método de King y Altman Método esquemático para la resolución de ecuaciones con mecanismo cinético complejo

El método gráfico, de K&A, consiste en la construcción, en primer lugar, de un polígono de tantos vértices como especies químicas puede presentar la enzima.
Para el sistema más simple:

E + S <==> ES <==> EP <==> E + P
En el estado estacionario la concentración total del enzima será igual a la suma de todas las especies químicas de esta

E

Eo  EXi

ES

EP

Se utiliza para todos los sistemas: Con más de un Substrato y Producto

.E ES EP E P k6 k2 ES S k1 k5 k3 k4 EP * A continuación se construyen tantos polígonos abiertos como lados tiene el polígono. dejando un lado abierto en cada uno de ellos.

E k2 ES E k2 EP E k5 ES k3 k4 P k6 ES S k1 k3 k4 S k1 k5 P k6 EP EP .

es igual a la suma de los términos que afectan a la especie. se cumple que la razón entre una determinada especie química [EXi] y la concentración total de enzima [Eo]. partido por la suma de todos los términos que afectan a todas las especies. [Exi]/[Eo].  de los términos que afectan a la especie EXi [EXi]/[Eo] = ---------------------------------------------------------------------- de los términos que afectan a todas las especies químicas ¿Cómo calculamos el numerador y el denominador? * Los términos que afectan a una especie se calculan en cada polígono abierto recorriendo el camino para llegar a la especie .* Por otro lado. multiplicando las constantes de velocidad y las concentraciones de S y P. . si hubiera lugar.

E k2 S k1 k3 k4 k2 E S k1 k5 P k6 ES EP E k5 ES EP P k6 ES k3 k4 EP [E] (k2k4) + (k2k5) + k3k5) .

E k2 S k1 k3 k4 k2 E S k1 k5 P k6 ES EP E k5 ES EP P k6 ES k3 k4 EP [ES] (k1k4S) + (k1k5S) + (k4k6P) .

E k2 S k1 k3 k4 k2 E S k1 k5 P k6 ES EP E k5 ES EP P k6 ES k3 k4 EP [EP] (k1k3S) + (k2k6P) + (k3k6P) .

FORMAS DE LA ENZIMA TÉRMINOS [E] [ES] [EP] (k2k4) (k2k5) (k3k5) (k1k4S) (k1k5S) (k4k6P) (k1k3S) (k2k6P) (k3k6P) EXi   EXi Eo  E   ES  EP .

Como vt viene dado por: vt = k1[E][S] .Sustituyendo los valores de [E] y [ES] tendremos: .k2[ES] . (k2k4 + k2k5 +k3k5) [E] = [Eo] --------------------------------------------------------------------------(k2k4 + k2k5 +k3k5) + (k1k4S) + (k1k5S) + (k4k6P) +(k1k3S + k2k6P + k3k6P) (k1k4S + k1k5S + k4k6P) [ES] = [Eo] ------------------------------------------------------------------------- (k2k4 + k2k5 +k3k5) + (k1k4S) + (k1k5S) + (k4k6P) +(k1k3S + k2k6P + k3k6P) (k1k3S + k2k6P + k3k6P) [EP] = [Eo] ------------------------------------------------------------------------(k2k4 + k2k5 +k3k5) + (k1k4S) + (k1k5S) + (k4k6P) +(k1k3S + k2k6P + k3k6P) .Así pues.

k2k4k6P) --------------------------------------------------------------] t vt = [Eo] [-- .k1k2k4S . obtenemos: (k1k2k4S + k1k2k5S +k1k3k5S .(k2k4 + k2k5 +k3k5) ----------.k1k2k5S .[S] k2[Eo] ------------------------------ (k1k4S + k1k5S + k4k6P) - t t vt = k1[Eo] ------------- Donde: t = (k2k4 + k2k5 +k3k5) + (k1k4S) + (k1k5S) + (k4k6P) +(k1k3S + k2k6P + k3k6P) y operando.

Si en t ordenamos las contantes y sacamos factor común. podemos escribir: t = (k2k4 + k2k5 +k3k5) + k1(k3k4k5) (S) + k6(k2k3k4) (P) Cte.-Simplificando (k1k3k5) (S) (k2k4k6) (P) = [Eo] [-----------------. CoefS CoefP .-------------------] t t vt ..

y operando adecuadamente.Usando estas simplificaciones. e introduciendo otras. * Expresión de la ecuación de velocidad total en presencia de P y S VmS KmP[S] – VmP KmS[P] vt = ---------------------------------------------KmS KmP + KmP[S] + KmS[P] Misma ecuación que la obtenida en mediante la resolución de sistemas de ecuaciones diferenciales en el estado estacionario .

. Vmp.se obtiene una expresión de velocidad total en función de las constantes cinéticas Vms.Resumen • El análisis cinético de M-M está referido a velocidades iniciales En el interior celular in vivo el producto de la reacción está siempre presente. Kms Kmp y de las concentraciones de P y S. habrá que tener en cuenta la velocidad total no las velocidades iniciales Velocidad total es la suma de las velocidades unidireccionales Las ecuaciones referidas a las velocidades totales solamente se resuelven en el estado estacionario: Variación de las concentraciones de las diferentes especies químicas en las que se encuentre la enzima respecto al tiempo es cero Resolución de las ecuaciones de velocidad total se realizada con diferente aproximaciones: Estado estacionario. cuando la velocidad total es cero es decir en condiciones de equilibrio relaciona la constante de equilibrio con las constantes cinéticas de la enzima (estudiadas de acuerdo con las condiciones de M-M). Resolución gráfica propuesta por King y Altman método sencillo permite la resolución de planteamientos enzimáticos complejos VmaxS KmP(S) .VmaxP KmS(P) vt = ------------------------------------------------KmS KmP + KmP(S) + KmS(P) Relación de Haldane.