ASPECTOS GENÉTICOS DE LOS ÁCIDOS NUCLEICOS

Las biomoléculas y el proceso de vida
• Cuales son los componentes celulares? • Que es el DNA? Para que sirve? • Que es el RNA? Para que sirve? • Que son las proteínas? Para que sirven? • Como se sintetizan los componentes celulares que no son DNA, RNA o proteínas?

Dogma central de la Biología Molecular

Replicación 2. Transcripción 3. Traducción .1 2 3 1.

Expresión de genes .

Ácidos Nucleicos .

Expresión de genes involucra varios pasos .

Estructura del DNA Rosalind Franklin y la difracción De rayos X Genética Unidad 5 Química y replicación Watson y Crick 8 .

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Estructura del DNA Genética Unidad 5 Química y replicación 10 .

 Una pentosa  Un fosfato Base Fosfato Azúcar Nucleosidos   Una base nitrogenada Una pentosa .Nucleótidos  Una base nitrogenada.

Nucleotidos y Ácidos Nucleícos .

como una proteína o RNA .Nucleótidos y Ácidos Nucleicos Gen Un segmento de una molécula de DNA que contiene la información requerida para la síntesis de un producto biológico funcional.

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Nucleótidos y Ácidos Nucleicos Cromosomas Estructuras compuestas de un complejo de DNA (material genético) RNA y proteínas. .

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Iniciación 2.Terminación • DNA • RNA • Proteínas • Replicación o duplicación • Transcripción • Traducción Donde se sintetizan cada una deestas moléculas? .Pasos comunes en la síntesis de DNA. RNA y proteínas 1.Elongación o extensión 3.

Duplicación del DNA • DNA de doble cadena • Complejo enzimático – Iniciación: • Origen de replicación • Separación de cadenas – Elongación: • Replisoma – Terminación • Separación de cadenas duplicadas .

– Síntesis – Reparación • Mt y Ct .Las DNA polimerasas sintetizan DNA • Síntesis (semiconservativa) y reparación • Varias DNA pol en procariotes y eucariotes • DNA pol bacteriana.

La síntesis enzimática es direccional • Direccion 5’ -3’ • Requiere de un primer • Requiere el 3’-OH de la ribosa libre • dNTP o NTP son precursores • Enzima polimerasa • Mg+2 o Mn+2 como cofactor • Procesividad y fidelidad .

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Transcripción “Proceso por el cual un sistema enzimático convierte la información genética de un segmento de DNA en una hebra de RNA con una secuencia de bases complementaria a una de las de DNA” .

RNA mensajero (mRNA): codifica la secuencia de aminoácidos de uno o mas polipéptidos y es especificado por uno o varios genes.Transcripción Tipos de RNA 1. . 2. 3. RNA Ribosomal (rRNA): son constituyentes de los ribosomas y participan en la síntesis de proteínas. RNA de Transferencia (tRNA): reconoce la información del mRNA y transfiere los aminoácidos correctos a una cadena polipéptida en formación durante la síntesis de proteína.

RNA Polimerasa .

proceso por el cual se sintetizan las proteínas a partir de la secuencia nucleótida del mRNA • Ribosomas. lugar de síntesis de proteínas. . • Aminoacil-tRNA sintetasas.Traducción • Traducción.

Traducción Hipótesis del Adaptador de Crick´s Codón Triplete de nucleótidos que codifica para un aminoácido específico .

Traducción “Diccionario” de Palabras Codigo de Aminoácidos en mRNAs .

Estructura General de un tRNA .

Etapa I Activación de Aminoácidos .

Traducción .

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ADN (DNA) material genético • Almacén de información genética • Composición distintiva para cada organismo • Estructura: – Doble – Antiparalela – complementaria • Formas estructurales –A –B –Z .

poco después en otras células – Una fracción ácida y otra básica – Purificó parcialmente los ácidos nucleicos – Estudió sus propiedades y estructura covalente – Generó la sospecha de que la nucleína estaba asociada a la herencia de la célula .Ácidos nucleicos: Almacén de información genética • 1868 Federico Miescher – Realizó el primer experimento sistemático usando núcleos de células – Aisló una sustancia rica en fósforo (nucleína) de leucocitos.

• 1944 Oswald T. Avery, Colin Mcleod y M. McCarty:
– Encontraron que el DNA extraído de una cepa virulenta de S. pneumoniae transformó genéticamente a otra cepa no virulenta – El ácido nucléico de la cepa virulenta contenía el mensaje genético para la virulencia – No tuvo buena aceptación científica pues también podría ser por las nucleoproteínas?

• 1952, Alfred Hershey y Marhta Chase
– Usaron 32P y 35S para demostrar la función del DNA de un bacteriófago – Demostraron que era el DNA (P) y no la proteína (S) el componente que contiene la información genética

Composición distintiva para cada organismo
• 1940 E. Chargaff y sus colaboradores
– Encontraron que el DNA está constituido por 4 bases

• Reglas de Chargaff
– La relación entre estas bases es distinta para cada organismo – La composición del ADN varia de una especie a otra – Distintos tejidos ( de una misma especie) tienen una misma composición de bases

independiente de la especie: AT GC A+G  T+C Estas reglas fueron la clave para el establecimiento de la estructura tridimensional .Reglas de Chargaff (continuación) – La composición del ADN ( en una especie determinada) no cambia con la edad. estado nutricional ó el medio ambiente – En todos los ADN.

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• A principios de 1950’s – El patrón de difracción de Rayos X demuestra que el DNA es una hélice – Dos periodicidades sobre el eje: una de 3.4 Å y otra de 34 Å – El problema es establecer el modelo 3D! .

Formulación de un modelo tridimensional por Watson y Crick • Dos hélices alrededor de un mismo eje • Cadena doblada en sentido derecho. con sus anillos planos colocados muy cerca uno de otro (hidrofóbicos) • Apareamiento entre A=T y G≡C cumplía con las reglas de Chargaff • La relación espacial entre cadenas genera dos muescas – Mayor – Menor – Soportadas por puentes de hidrógeno y fuerzas hidrofóbicas . la espina dorsal de desoxiribosas (hidrofílicas) y las cargas negativas de los fosfatos hacia fuera de la hélice doble • Las bases nitrogenadas acomodadas en el centro de la doble hélice.

5 nucleotidos) – Solo se podía cumplir si las cadenas eran complementarias .Formulación de un modelo tridimensional por Watson y Crick (continuación) • Las cadenas son paralelas o antiparalelas? Antiparalela era el modelo más convincente! – 5´→ 3’ – 3´← 5’ • Las cadenas son complementarias dentro de la doble hélice • Para ajustar a las periodicidades manipularon su modelo.34 nm (entre cada par de bases) – Cada 3.6 nm (10. repeticiones por cada vuelta: – Cada 0.

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Triple o cuádruple hélice .

Replicación y síntesis de ácidos nucleicos • Mecánismo de duplicación determinado por la especificidad en el apareamiento de las bases nucleotidicas A  T ó T A GC ó CG Secuencia de bases en cada cadena hija duplicada es complementaria a la secuencia de bases de la cadena parental Los monomeros de nucleotidos son unidos uno a uno al final de la cadena en crecimiento en dirección 5’ → 3’ por enzimas llamadas polimerasas • • .

Experimento de Meselson y Stahl (1957) Modelos encontrados .

Replicación conservativa durante la cual se produciría un ADN completamente nuevo durante la replicación.1. .

Replicación semiconservativa. Se originan dos moléculas de ADN: Una compuesta de una hebra de ADN original y de una hebra complementaria nueva. Las hebras existentes sirven de molde complementario a las nuevas. .2.

. Replicación dispersiva implicaría la ruptura de las hebras de origen durante la replicación que.3. de alguna manera se reordenarían en una molécula con una mezcla de fragmentos nuevos y viejos en cada hebra de ADN.

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coli) Proteína DNA pol III DNA pol I DNA B Primasa Tropoisomerasa Helicasa Función Sintetiza DNA Degrada iniciador y edita ó cubre los espacios “Kornberg” Desenrrollar el DNA (empieza) Síntesis de RNA iniciador Desenrrolla en sentido contrario las cadenas Elimina la torción de moléculas .Proteínas de replicación de DNA (en E.

continuación Proteína Primosoma Proteína rep SSB DNA girasa DNA ligasa Función Complejo enzimático que sintetiza el RNA iniciador Desenrrolla la doble hélice Estabiliza DNA de cadena sencilla Introduce estructura terciaria en sentido negativo Liga los extremos del DNA .

900 400 Pol B 120.000 10 V max (nucleotidos/ seg) Exonucleasa 3’ Exonucleasa 5’ 16/120 2-5 250-1000 Fenotipo mutante b + + UVsMMSs + - Ninguno +a + DNA ts a: Actividad en la subunidad de haloenzima pol III b: UVsMMSs sensible a la luz UV. de moléculas/célula Polimerasa I Polimerasa II Polimerasa III Pol A 109. (Da) No. sensible a metanosulfato DNA ts: sensible a temperatura en replicación de DNA .DNA polimerasa de E.000 100 Pol C 900. coli Características Gene estructural Mr.

. .  • Diferencias entre organismos: – Localización intracelular – Propiedades cinéticas – Respuestas a inhibidores .DNA polimerasa de eucariotes • 4 polimerasas diferentes .

Subunidad cat (KDa) 120-180 Procesividad Moderada 1 30-50 Baja 4 idénticas 50 Alta Exonucleasa asociada Sensibilidad a: calor Agentes sulfihídrilos 2’-3’ ddNTPs Arabinosil-CTP Afidicolina No a Baja Alta Baja Alta Si No Alta Baja Alta Baja No No Alta Alta Baja Alta No . de subunidades 4-8 Mr.Propiedades de las DNA polimerasas de eucariotes    Compartimento celular Acción biológica Núcleo Replicación del DNA nuclear Núcleo Reparación del DNA Mitocondria Replicación del DNA mitocondrial No.

Parámetros cuantitativos de la duplicación del DNA en diferentes células .

• La replicación ocurre con una alta fidelidad y en momentos específicos del ciclo celular – División celular • La fidelidad en el copiado (síntesis) se debe a las actividades enzimáticas de las polimerasas (encargadas de la polimerización y edición de la síntesis) • La detección y remoción de errores en las cadenas es realizada por las mismas polimerasas (actividad de exonucleasa y edición) y por sistemas específicos de reparación • La replicación es semiconservadora. cada cadena sirve de molde (templete) para una nueva cadena .

cada cadena sirve de molde (templete) para una nueva cadena • La reacción de síntesis se inicia en un lugar especifico sitio de origen – Único en procariotes – Múltiples en eucariotes • La dirección de la replicación siempre es en sentido 5’ → 3’ .• La reacción de síntesis es semiconservadora.

Semiconservadora 3.000 en eucariotes 2.000-100. Velocidad  850-1000 pb / horquilla en procariotes  200 pb / horquilla en eucariotes .Requisitos para la síntesis de ADN 1. Servirán de molde. Síntesis en dirección 5’ → 3’ antiparalela simunltaea 5. Separación de cadenas. Formación de la orquilla de replicación 4. Origen de la replicación o sitio de inicio  1 en baterias  10.

Sitios de terminación . Iniciador de ARN 8. Continua en una cadena y discontinua en otra 7. Los cuatro nucleótidos 10. Reacción general: (dNMP)n + dNTP …… Mg + + → (dNMP) n +1 + Ppi cadena de ADN cadena alargada 11. Aproximadamente 20 proteínas (enzimas entre otras) 9.continuación 6.

Aumenta la exactitud 102 a 103 • Edición y reparación . Eliminación del nucleótido incorrecto inmediatamente después de la síntesis.Fidelidad de la duplicación del DNA • Error total: uno por cada 109 a 1010 • Error normal durante la polimerización 1 nt/104-105 • Actividad de exonucleasa 3’ → 5’.

Transformación genética • La transferencia de genes hasta el momento se subdivide en varias categorías: a) Transferencia de ADN mediante bacterias y virus b) Fusión celular somática y sexual c) Transferencia de genes y células mediante microcélulas y microcápsulas d) Transplante de tejidos e) Células embrionarias f) Terapia génica .

Transformación bacteriana .

Transferencia de ADN mediante bacterias y virus • Agrobacterium tumefaciens ocasiona la enfermedad “agalla de la corola” en diversas plantas. .

• La bacteria infecta a la planta y transfiere su ADN a la planta. este se integra en el genoma causando tumores y cambios metabólicos .

• El plásmido Ti se utiliza como vector para el entrecruzamiento en plantas o la introducción de genes novedosos .

frijol de soya y canola (19941997) . papa. algodón.• Gracias a Agrobacterium se ha logrado obtener diversos cultivos transgénicos que resisten a los insectos principalmente Tomate.

Fusión celular .

Células embrionarias • Son un tipo especial de células indiferenciadas que tienen la capacidad de dividirse indefinidamente sin perder sus propiedades y llegar a producir células especializadas .

• Las posibles aplicaciones del estudio de las células madre es impresionante! .

• Actualmente. falta muchas preguntas por responder: Qué mecanismos existen para que una célula madre se especialice? Qué mecanismo sería necesario para que una célula somática se vuelva pluripotente? .

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