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Regulación de la Expresión genética

Curso: Biología Celular y Molecular Oscar Nolasco Cárdenas MSc.
oscarnol@hotmail.com
Noviembre - 2013

Una célula puede cambiar la expresión de sus genes en respuesta a un estimulo externo En un organismo multicelular, las células se diferencian por el tipo de proteínas que sintetizan a pesar de contener el mismo DNA La expresión de los genes puede ser regulada en muchos pasos en la vía : DNA a RNA a Proteínas

Regulación de la cantidad de proteínas
 Transcripción del gen


  

Procesamiento del RNA
Recambio de RNA Traducción de mRNA Procesamiento, emsamble y recambio de la proteína

Regulación de la actividad proteica
  Alosterismo Modificación covalente

El inicio de la transcripción es el punto principal de regulación que es modulado por: REPRESORES ACTIVADORES

El activador puede ejercer una activación alosterica de la RNA polimerasa Proteínas que curvan el DNA pueden facilitar la interacción entre distantes proteínas reguladoras que se unen al DNA

• Durante los pasos de regulación de la transcripción los patrones de enlaces de hidrogeno y grupos aceptores son las características mas importante en el reconocimiento de genes por las proteínas regulatorias además de la secuencia de nucleótidos y la geometría de la doble hélice.

Las proteínas regulatorias, contienen un motivo estructural que puede leer las secuencias de DNA: El motivo hélice torsión hélice es uno de los motivos mas comunes que se encuentran en proteínas que se unen al DNA como son las proteínas homeoticas de Drosophila, represor lambda, represor triptófano y CAP

El motivo Dedos

de Zinc es un motivo que utiliza una o mas moléculas de Zinc El motivo Cierre de leucina Motivos de hoja B también pueden reconocer DNA

Regulación de la expresión genética: Transcripción del gen
Regulación negativa La unión de un represor inhibe la transcripción Regulación positiva La unión de un activador facilita la transcripción

Regulación de la expresión en procariotes: OPERONES
Un operón es un grupo (cluster) de genes funcionalmente relacionados que se encuentran coordinadamente regulados

Contiene: Genes Estructurales: codifican a enzimas Genes Regulatorios: codifican represores o activadores de la expresión Sitios de regulación: Promotores, operadores

CONTROL NEGATIVO

OPERON lac de E. coli

• Un nivel de 10 tetrameros de represor por celula asegura el enlace operador represor en un 96%. • La induccion reduce la afinidad del operador al represor. Solo el 3% de operadores se unen.

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Control positivo: Proteína activadora de catabolitos o proteína receptora de cAMP
Glucosa es el principal suministro de carbono para E coli La glucosa causa represión de otros operones que catalizan el metabolismo para otras fuentes de carbono como operon lac

En la ausencia de glucosa, los operones necesarios para el metabolismo de otras fuentes de carbono es inducida.
Es mediada por cAMP y CAP En presencia de glucosa, [cAMP] es cerca de 10-7 M En ausencia de glucosa, [cAMP] se incrementa cerca de 10-4 M

Proteína activador del catabolito CAP Es un dimero Se une a cAMP

cAMP-CAP se unen al DNA adyacente al promotor y estimulan la transcripción

Regulación del operon trp de E. coli

Organización del operon trp de E coli

El operon trp es regulado en parte por un apo-represor

El operon trp es también regulado por atenuación

El operon trp es también regulado por atenuación

Como funciona la atenuación de la transcripción La [trp] determina la [trp-trNA] La [trp] determina la traducción ribosomal adicionando triptofano al peptido Leader o peptido señal Si el trp es adicionado : El ribosoma se desplaza hasta el codon stop

El atenuador es una estructura secundaria que causa la terminación de la transcripción (OFF)
Si el trp no es adicionado  Se forma una diferente estructura en el RNA leader

Permitiendo la transcripción de los genes estructurales

Requerimientos para la atenuación del operon trp
Transcripción y traducción simultanea
Un segmento de RNA puede servir como un terminador debido a la estructura secundaria que forman sus bases apareadas

Una estructura secundaria alternativa en el RNA no permite la transcripción
No se requiere de una proteína adicional como por ejemplo un represor

Estructuras alternativas en el RNA lider

La actividad del ribosoma determina la estructura secundaria del RNA lider de trp
Alta concentración triptófano, provoca terminación de transcripción de la la

Baja concentración de triptófano, mantiene la transcripción

Muchos operones de biosintesis son regulados por atenuación
Operones de sintesis de aminoacidos: His, phe, leu, thr
En cada caso un corto RNA leader y un polipeptido preceden a los genes estructurales. El peptido leader es rico en el aminoácido producto de la via de sintesis

Alternativos factores sigmas pueden dirigir la expresión de set de promotores

Estados de los genes de eucariotes
Inactivo: Cromatina inaccesible o condensada heterocromatina

Cromatina accesible, pero con presencia de proteínas represoras o falta de activadores de la iniciación
Cromatina accesible, la transcripción se ha iniciado pero la polimerasa no puede elongar el transcripto Activo: Cromatina accesible eucromatina, transcripción basal, requiere secuencia promotor TATA Cromatina accesible, transcripción activada, requiere enhancer o activador hebra arriba (posición anterior a la posición de inicio de la transcripción: upstream de transcripción)

Regulación en genes eucariotes
I. Nucleosomas y sus modificadores II. Mas reguladores y regiones reguladoras mas extensas: Exacerbadores (Enhancers) Elementos aislantes o limtantes (Insulator)

Enhancers
Causan el incremento de la expresión del gen Actuan independiente de la posición y la orientación con respecto al gen Pueden actuar: Incrementando el porcentaje de iniciación en el promotor

Los enhancer se presentan en una variedad de posiciones respecto a los genes

• Los activadores son reclutados por los modificadores de nucleosomas que ayudan a la maquinaria transcripcional unirse al promotor o iniciar la transcripción

• Los activadores reclutan la maquinaria transcripcional al gen • Factores necesarios para la elongacion

• Represión transcripcional:
– HDAC – Silenciadores

• Señales de transduccion y el control de la regulación transcripcional

Silenciadores
Secuencias que causan la disminución de la expresión del gen Similar al enhancer pero con efecto opuesto sobre la expresión del gen Represión del gen – estructura de cromatina inactiva (heterocromatina)

Mecanismo de silenciamiento

La heterocromatina es nucleada en una secuencia especifica y la estructura de inactivación se propaga a lo largo de la fibra de DNA Los genes en esa región son inactivados Algunos promotores activos pueden inhibir la expansión. Algunos aislantes (insulator) dominios independientes de transcripción pueden proteger una región de transcripción activa La inactivación de genes en esa vecindad causa el efecto de posición abigarrado Position effect variegation PEV en el cual células genéticas idénticas tienen diferente fenotipo. En Drosophila regiones del ojo carecen de color debido a que el gen white (requerido para el pigmneto rojo) fue inactivado por estar adyacente a la heterocromatina en algunas células, mientras en otras células permanece activo.

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El efecto del silenciamiento telomerico en levaduras es análogo, los genes translocados a una posición telomerica muestras una variable perdida de su actividad . En este caso la unión de Rap 1 (represor activator protein1) inicia el evento de nucleación que resulta en el reclutamiento de proteínas de heterocromatina. Adicional a los telomeros , otros dos sitios son nucleados en levadura, HML y HMR son copias de MAT (locus de Yeast mating type) donde se observa una nucleación de heterocromnatina vía proteínas.

• La metilación en el DNA esta asociada al silenciamiento en genes de células animales fenómeno llamado imprinting

Un gen de eucariote
Sitio de inicio 5’ UTR de transcripción Región no traducida Intrones

3’ UTR Región no traducida

5’
Promotor/ Región de Control

Exon 1 Int. 1

Exon 2 Int. 2 Exon 3

3’
Secuencia Terminador

Exones
RNA Transcripto
Exon 1 Int. 1 Exon 2 Int. 2 Exon 3

5’

3’

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