Terapia Génica
Vectores virales y no virales

Terapia génica
• La TERAPIA GÉNICA es un tratamiento
genético que incluye la modificación genética directa de células para lograr un objetivo terapéutico

La terapia génica pretende curar enfermedades hereditarias (que, en la mayoría de los casos, se deben a genes defectuosos) mediante la introducción de genes sanos.

cardiovasculares (hipercolesterolemia y aterosclerosis). determinadas patologías infecciosas (hepatitis. .Es aplicable también al tratamiento de enfermedades actualmente incurables. sida). Más de 5000 enfermedades humanas se han atribuido a factores genéticos. enfermedades neurodegenerativas (enfermedades de Parkinson y de Alzheimer) o enfermedades crónicas (artritis reumatoide). como cánceres.

En terapia génica se utilizan dos grandes estrategias actualmente: • * Ex vivo. Este método se emplea en células que son accesibles para extracción inicial y que pueden inducirse para inyectarse y sobrevivir por un tiempo prolongado después de la restitución • Eje: células hematopoyéticas y células de la piel . Comprende transferencia de genes clonados al interior de la células desarrolladas en cultivo.

como sucede en la mucoviscidosis.  Eje: células cerebrales . Unica opcion en tejidos en los que no es posible cultivar celulas. Se trata de administrar el gen corrector al paciente en lugar de hacerlo a células en cultivo. Se emplea en células difícil de extraer e implantar nuevamente. * In vivo.

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Los virus son los vectores utilizados con más frecuencia para la terapia génica • Los vectores para transferencia génica empleados de manera mas regular son los virus de mamíferos por su gran eficiencia de transducción a células humanas .

Terapia génica (vectores) .

Vectores no virales .

purificado y luego administrado.DNA Desnudo La inyección directa de DNA puede llevarse pero solo tendrá el DNA limitado en algunas células.El gen clonado en un plásmido que puede ser amplificado en bacterias. . sin embargo. como “DNA desnudo” permanece siendo el sistema más simple. altamente ineficiente en el transporte del gen de la superficie de la célula al núcleo de la célula blanco. Este método de entrega de DNA es.

Electroporación Primeramente se obtienen las células a tratar a través de biopsia (comúnmente). . cultivo en el laboratorio y finalmente introducidas al organismo. se procede a su electroporación in vitro.

Biobalística • Los sistemas de transferencia balística de partículas o “gene guns” (pistolas de genes). . principalmente desarrollado para transferencia de DNA a células vegetales. demostrándose que es perfectamente aplicable a las células animales (tecnología que ha sido usada con éxito para transferir genes a plantas y peces). han sido evaluadas como un método de mejora de transferencia de DNA.

así que la piel y las heridas son blancos atractivos. .• El principio se basa en acelerar pequeñas partículas de oro o tungsteno sobra las que se adhiere la secuencia de DNA para la cual no hay un límite de tamaño siendo disparadas en el tejido por una “pistola” de presión de helio o a través de una descarga electrónica. El tejido blanco necesita estar expuesto.

Liposoma • En algunos casos. fáciles de producir y que no generan respuesta inmune. cuya ventaja es que permiten la transferencia de una gran cantidad de genes de un gran tamaño que son relativamente seguros. paquetes de lípidos que rodean al DNA y ayudan a llevarlo dentro de la célula. . las copias de DNA del gen pueden ser empaquetadas en liposomas.

. pueden sintetizarse con una carga neutral. negativa o positiva.“Lipoplex” • Estos lípidos que se acomplejan al DNA. Un complejo lípidos catiónicos de ácidos nucléicos se llamado lipoplex. la carga positiva o lípidos catiónicos han mostrado mayor eficiencia en la transferencia de genes ya que pueden acomplejarse a la carga negativa del DNA y mantener una carga positiva para facilitar la unión a la superficie negativa de la célula. Sin embargo.

Complejo Liposoma DNA .

Distrofina .

Vectores virales .

• Hay dos tipos de clasificaciones: Baltimore y la de ICTV (Comité Internacional de taxonomía de Virus) .¿¿Qué es un virus?? • Partículas compuestas en su mayoría por proteínas que tienen como único fin replicarse usando la maquinaria celular.

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Son los más utilizados. en comparación con los vectores no virales. .Vectores Virales • Los vectores virales aprovechan las estrategias desarrolladas evolutivamente por los virus para poder propagarse en las células infectadas. los adenovirus. debido a la eficiencia de la transferencia de genes. • Los retrovirus. los virus asociados a adenovirus (VAA) y los virus de herpes simplex.

Retrovirus • Un sistema retroviral para terapia genética necesita de dos componentes: el vector de expresión. El vector retroviral está desprovisto de genes virales. dejando espacio para llevar el gen terapéutico. el cual lleva el gen terapéutico y la célula empaquetadora. .

• Una de las preocupaciones en el desarrollo inicial de los vectores retrovirales fue la posibilidad de inserción del ADN retroviral cerca de genes que controlan la división celular (oncogenes). y así hacer que la célula se vuelva cancerosa. .

Adenovirus • Los adenovirus son virus de ADN de doble hebra. E1b. y de la córnea. . E2 y E3. esenciales para la replicación viral. gastrointestinal. que producen infecciones del tracto respiratorio. Para construir los vectores de adenovirus se han eliminado los genes de las proteínas tempranas E1a. y tienen tropismo por los epitelios respiratorio.

• El proceso de creación de adenovectores consiste en la incersión del transgén en un pequeño plásmido lanzadera. que dará como resultado el vector viral final para el uso terapéutico. El cassette es transferido al plásmido vector del adenovirus. La línea 293. es una línea celular modificada para que constantemente esté expresando proteínas para la formación del adenovirus. de manera que el cassette de los transgenes puede ser extirpado con enzimas de restricción. donde finalmente el vector y el cassette se unirán por una endonucleasa y posteriormente se inserta todo el material genético en una línea celular (llamada 293) para formar las partículas víricas. .

7 Kb . pues necesitan de la coinfección con adenovirus o virus de herpes simplex para iniciar el ciclo de replicación viral.Virus asociados a adenovirus (AAV) • Son naturalmente deficientes en replicación. • Genes Rep y Cap • Genoma de no más de 4.

región anterior a q13. dentro del DNA celular. mapean en q13.3.3 .• Único virus con una unión específica. cromosoma 19. • Distrofia Miotónica y Leucemia crónica de linfocitos B.

ICP4. con tropismo por las células del sistema nervioso. se eliminan secuencias que codifican para la replicación viral: ICPO. • Construcción parecida a adenovirus.Herpes Virus Simplex (HSV) • Los virus del Herpes Simplex son virus de ADN de doble hebra. ICP22 y ICP27. . • Genes de hasta 15 kb pueden ser transducidos por un vector de HSV.

Requieren de algunas proteínas para la formación de la partícula viral y la infección de la neurona a través de una célula empaquetadora. con las mínimas secuencias necesarias para la formación de la partícula viral. .• La segunda estrategia consiste en construir un "mini-HSV".

-Cáncer de pulmón. •Cáncer -Melanomas malignos.APLICACIONES TERAPIA GÈNICA •Correcciones de un déficit génico: -ADA (Amino DesAminasa) -Mucoviscidos.Inducción de angiogiogènesis •Enfermedades cardiovasculares •Otras: SIDA. -Hipercolesterolemia familiar . . -Tumores cerebro. -Otros.

La deficiencia de esta enzima provoca una forma de enfermedad de inmunodeficiencia combinada severa (SCID).ADA (adenosin deaminase) Resumen (NCBI . Varias mutaciones se han descrito para este gen y se han vinculado a las enfermedades humanas. mientras que los niveles elevados de esta enzima ha sido asociada con anemia hemolítica ongénita . [proporcionados por RefSeq] cromosoma: 20. Ubicación: 20q12-q13. en el que hay una disfunción de los linfocitos B y T.ENTREZ GEN) Este gen codifica una enzima que cataliza la hidrólisis de la adenosina en inosina.11 . con alteración de la inmunidad celular y disminución de la producción de inmunoglobulinas.

org/Upload/Articles/3/5/357. •Estrategias de activaciòn de las defensas inmunitarias naturales (IL-2) http://revista. • Estrategia del gen suicida (Knock-out).pdf .inmunologia.Cáncer.

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Estas células se originan en la cresta neural en el desarrollo embriológico y migran hacia la piel. los ojos. el sistema nervioso central y hacia otras partes del organismo durante la vida fetal. .Melanomas malignos Los Melanomas son tumores malignos que surgen a partir de células denominadas melanocitos.

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según informa la revista Public Library of Science Medicine. ha logrado con éxito ambos objetivos gracias a la combinación de una terapia genética y química.(13 Enero 2009 ). inyección B A Activación del sistema inmune Dos vías Masa tumoral A B Virus terapéuticos A Dendrita de médula ósea Proteína tipo citoquina B Gen suicida ganciclovir Respuesta inmune contra el cáncer HMGB1 Muerte . • Un equipo de investigadores del Cedars Sinai Medical Center de Los Ángeles.Tumor cerebral.

Adenovirus Retrovirus Retrovirus Retrovirus . hígado Cerebro TILs Melanoma Plásmidos Retrovirus. ENFERMEDADES HEREDITARIAS Enfermedad Enfisema pulmonar Fibrosis quística Gen suministrado a -1-antitripsina CFTR Tejido diana Tracto respiratorio Tracto respiratorio Vector Liposomas Adenovirus AAV Liposomas Retrovirus Retrovirus Hipercolesterolemia familiar Inmunodeficiencia combinada severa (SCID) ("niños burbuja") Receptor LMW de lipoproteínas Adenosin desaminasa Hepatocitos Linfocitos Células progenitoras hematopoyéticas II. ENFERMEDADES ADQUIRIDAS Enfermedad SIDA (infección por VIH) Gen suministrado Ribozimas ARN antisentido Anticuerpos Factor tumoral de angiogénesis Genes supresores de tumores HTK-ganciclovir Factor de necrosis tumoral Interferón (gamma) Tejido diana Linfocitos Vector Retrovirus Restenosis (Arterias periféricas) Cáncer Células endoteliales Pulmón.PROTOCOLOS DE TERAPIA GÉNICA APROBADOS POR EL RAC EN USA I.

pdf .uclm.es/profesorado/jjordan/pdf/review/12.http://www.

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