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UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTAS GRADUAO EM BIOTECNOLOGIA DISCIPLINA DE BIOLOGIA MOLECULAR

MUTAO E MECANISMOS DE REPARO

NO ESTTICO

constantemente exposto a agentes naturais ou artificiais que provocam modificaes

MUTAES

Modificaes na informao gentica que resultam em clulas ou indivduos com alteraes fenotpicas

MUTANTE

todo organismo que exibe uma forma diferente da de seus ascendentes, a qual resultado da presena de uma mutao

MUTAO

Qualquer modificao sbita e hereditria no conjunto gnico de um organismo, que no explicvel pela recombinao gentica preexistente

genmica (adio ou perda de cromossomos); cromossmica (adio, perda ou mudana de local/orientao de segmentos cromossmicos);

gnica (alterao em um nico gene).

MUTAO

Fonte bsica para toda a variabilidade gentica, constituindo matria prima para a evoluo

CONSEQUNCIAS DAS MUTAES

Mutantes letais condicionais


anlise de processos biolgicos Mutaes letais em um ambiente (condio restritiva) e viveis em um segundo ambiente (condio permissiva).

Mutantes auxotrficos: so incapazes de sintetizar um metabolito essencial que pode ser sintetizado por outro indivduo do tipo selvagem. Esses mutantes crescem quando o metablito fornecido pelo meio. Mutantes sensveis temperatura: so viveis em uma temperatura especfica Mutantes sensveis ao repressor: so viveis quando um supressor est presente, mas no na ausncia dele.

MUTAES

Alteraes no DNA

germinativas

somticas

Mutaes espontneas

Mutaes induzidas agentes mutagnicos

Mutaes cromossmicas: mudanas na estrutura ou no nmero de cromossomos

Mutaes gnicas: mudanas em um ou poucos nucleotdeos

MUTAES GNICAS

QUANTO A ALTERAO CAUSADA NO GENE


Mutao pontual (um nucleotdio) Mutao sinnima Mutao no sinnima Mutao sem sentido (nosense) Mutao por deslocamento da fase de leitura Mutao por Insero Mutao por Deleo

MUTAES GNICAS

Mutaes Pontuais
CUA
Leu

UUC
Phe

GUA
Val

UUA
Leu

UUG
Leu

AUA
Ile

UUU
Phe

UCA UGA UAA


Ser Stop Stop

Inseres e Delees

Substituies de bases

envolvem a substituio de, normalmente, uma nica base

casos raros: vrias bases so substitudas

TRANSIO a substituio de uma purina por outra ou de uma pirimidina por outra;

TRANSVERSO a substituio de uma purina por uma pirimidina ou vice-versa.

MUTAO SILENCIOSA/SINNIMA Substituio resulta em um novo cdon que codifica o MESMO aminocido

MUTAO NO SINNIMA Substituio resulta em um novo cdon que codifica um aminocido DIFERENTE

MUTAO SEM SENTIDO (nonsense) Cdon que especifica um aminocido substitudo por um cdon de terminao

SNPs
Single Nucleotide Polymorphism

Polimorfismos de base nica

Frequncia de mais de 1% na populao

Sequenciamento do Genoma Humano

2 milhes de SNPs

G para C

comum

variante

C T

DNA SNP T para A

C A

mRNA

GAU

GUU

Cdon no RNA GAU para GUU


GAU GUU

Aspartato

Aminocido Aspartato para Valina

Valina

Mudana na protena

Mutaes tautomricas
Watson e Crick observaram o movimento de tomos de Hidrognio nas purinas e pirimidinas, resultando em formas menos estveis das bases. A pode parear com C e T pode parear com G

A-T A-T A-T A-T A*-C G-C A-T

Leses induzidas por agentes mutagnicos


Dmeros de Timina (exposio a luz UV)

Alquilao (G - 06 metilguanina - pareia com T) - nitrosaminas

Tranferncia de grupamentos metila ou etila para os stios reativos das


bases e dos fosfatos da cadeia de DNA

Adio de grupamentos qumicos volumosos molcula de DNA (Reao com carcingenos)

Leses induzidas por agentes mutagnicos

Alquilao (Guanina - 06 metilguanina)

Dmeros de Timina

Brometo de etdio

MUTAES NO HOMEM
AT por TA HbA- CIDO GLUTMICO HbS- VALINA

MECANISMOS DE REPARO DO DNA

Mecanismos de reparo
Reverso direta da leso no DNA Fotoreativao Reparo de bases alquiladas Reparo por exciso Exciso de bases Exciso de nucleotdeos Reparo de malpareamentos

Reparo ps-replicao Reparo por recombinao Reparo sujeito a erros

Reparo por fotorreativao


Remoo dos dmeros de pirimidina formao UV
Enzima fotoliase se liga ao dmero e pela absoro de luz converte o dmero em monmeros de pirimidina

Reparo por fotorreativao

Fotoliase

Reparo de bases alquiladas


O6-metilguaninametiltransferase

Remoo do grupamento metila e transferncia para a enzima


No h meios de recuperar a enzima metilada.

Reparo por exciso de bases


Desaminao da citosina em uracila

Uracil-DNA-glicosilase AP endonuclease DNA polimerase I DNA ligase

Reparo por exciso de nucleotdeos


Protenas UvrA, UvrB, UvrC e UvrD: identificam, separam e clivam a fita de DNA
DNA polimerase I DNA ligase

8 nt

4 nt

Reparo de bases malpareadas


sistema de correo de erro

MutS, MutL e MutH:


CLIVA FITA NO METILADA

DNA polimerase DNA ligase


GATC

Reparo ps-replicao
No remove a leso, mas possibilita a continuidade da replicao. Dois Sistemas:
Reparo por recombinao homloga Reparo sujeito a erros (error-prone)

Reparo por recombinao ps-replicao

Reparo sujeito a erros


Usado em condies extremas: perda de um par de bases Uma das 4 bases inserida no local lesado, mesmo no tendo a informao molde Mecanismo de mutao prprio

Resposta SOS
RecA ligada a DNA fita simples (lacuna dmero) degrada a protena repressora dos gene SOS (LexA) Genes SOS: grupo de aproximadamente 15 genes, incluindo uvrA-D, recA, umuC e D, SSB. Sua expresso aumenta no DNA lesado. Podem codificar genes envolvidos na sntese e reparao do DNA.

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MUTAO E MECANISMOS DE REPARO