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UC: Bioqumica da Doena e da Dependncia Qumica Licenciatura : Cincias Forenses e Criminais

Determinao de nveis de nitrito e nitrato em soro aps inalao de nitrito de isobutilo


Gandra, 31 de Maro 2014

Ana Martins, 21205 Domingos Martins, 20810 Ftima Soares, 18053

Introduo
O objetivo deste trabalho laboratorial a determinao de nveis de nitritos e de nitratos em soro aps inalao de nitrito de isobutilo. Poppers o termo vulgarmente empregado nas ruas para designar vrios nitritos de alquilos, tais como nitrito de bulito ou o nitrito de isobutilo. Substncias volteis, so utilizados como inaladores com finalidades recreativas, induzindo a um breve estado de euforia, afrodisaca e amplificador do prazer sexual. Ainda no h estudos que confirmem a dependncia fsica (vcio ou adio), nem de sndrome de abstinncia, porm, acredita-se causar dependncia psicolgica. A overdose pode causar asfixia, perda da conscincia, choque, PCR e consequentemente morte, todavia, pela via inalatria, o desfecho fatal acontecimento singular o que torna o uso entorpecente do nitrito de isobutilo um tanto arriscado. Os efeitos fisiolgicos so os resultados de sua transformao em nitratos, produzidos durante a degradao dos nitritos de alquilos no organismo. A absoro por via inalatria rpida e, aps distribuio, o metabolismo hidrolisa o nitrito em on nitrato. A excreo se d por via renal, 40% eliminando-se na forma intacta e o resto sob a forma de derivados hidrossolveis.

Introduo

Sendo o nitrito mais txico que o nitrato produz, principalmente, vasodilatao e relaxamento da musculatura lisa em geral e formao da m-hemoglobina, impedindo que esta, exera a funo normal de transportar Oxignio. ( O nitrato inalado reduzido a nitrito (NO2- ) ao chegar corrente sangunea oxida ferro a Fe2+ em Fe3+ da hemoglobina, produzindo mhemoglobina, por sua vez, esta, torna-se estvel sendo incapaz de transportar o O2 para a respirao celular, podendo levar a uma doena conhecida como a m-hemoblobinemia ou, doena do sangue azul. ) Quando os nveis de exposio ao nitrito so baixos, a formao de m-hemoglobina reversvel, quando so elevados, o sistema de reduo saturado, resultando num aumento de concentrao de m-hemoglobina no sangue, sendo este, um indicador til de envenenamento por nitritos de alquilo. Nveis de m-hemoglobina de 10% podem induzir cianose assintomtica e, com nveis entre os 20-30%, h o aparecimento de cianose com sinais de hipoxia, astenia, dispneia, cefaleia, taquicardia e inconscincia. Nveis >50%, podem ser fatais (BORONAT et al ., 1982 apud ANDRADE, 2004).

Protocolo /Materiais/Reagentes
O protocolo usado, foi-nos fornecido pela docente assim como, os reagentes e os materiais utilizados neste trabalho laboratorial.

Protocolo/Materiais/Reagentes
O protocolo aplicado, foi-nos fornecido pela docente assim como, os reagentes e os materiais utilizados. Foi-nos proposto ainda uma nova diluio do (PI) padro interno a 1500 g/ml. Ci= 1500g/ml Ci=30g/mL Cf=30g/ml Cf=10g/mL Vi= 20 mL Vi=333 Vf= 1000 mL Vf=1000mL (980+20=1000) (333+667=1000) 3x

Plasma (L) 450

Antipsictico (L) 50

Padro (ng/mL) 500

Clculos
Nitritos Conc (mol/L) 0.5 Abs - Abs do valor de 0 0.0035 Nitratos Conc (mol/L) 0.5 1.0 5.0 10 20 100 Abs - Abs do valor de 0 -0.005 0.0005 -0.002 0.036 0.381 0.7315

1.0
5.0 10 20 100
0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4

0.011
0.060 0.1205 0.3985 0.7685
y = 0,0076x + 0,065 R = 0,9971

0.8 0.7 0.6 0.5

y = 0.0076x - 0.0206 R = 0.9965

Series1 Linear (Series1)

0.4
0.3 0.2 0.1 0 0 50 100 150

Series1

0.3
0.2 0.1 0 0 50 100 150

Linear (Series1)

-0.1

Nitritos
X 0,5 1 5 10 50 100 27,7500 Xmdia Y 0,0035 0,011 0,06 0,1205 0,3985 0,7685 0,2270 Ymdia X-Xmdia Y-Ymdia (X-Xmdia)2 (Y-Ymdia)2 0,0500 0,0467 0,0279 0,0113 0,0294 0,29322225 0,4585 yy -27,2500 -0,2235 742,5625 -26,7500 -0,2160 715,5625 -22,7500 -0,1670 517,5625 -17,7500 -0,1065 315,0625 22,2500 72,2500 0,1715 0,5415 495,0625 5220,062 5 8005,875 0 xx (X-Xmdia) x (YYmdia) 6,0904 5,7780 3,7993 1,8904 3,8159 39,1234 60,4973 xy d2 0,0003 0,0002 0,0000 0,0008 0,0000 0,0000 0,0013 d2 X2 0,2500 1,0000 25,0000 100,0000 2500,000 0 10000,00 00 12626,25 00 X2

(x)^2

Sy

S2y

Sm

Sb

Sx

0,0076

0,0173 0,9986

48035,250 27722,250 0,0182 0 0

0,0003

0,0002

0,0093 2,5967 6,0000

A = .b.c (NOx) 0,1355= x 1 x 15,55 = 8,71410-3 L.g-1.cm-1

T de Student com 95%

t (n-2) 6-2 = 4 2,78


Declive = m t(n-2) Sm = 0,0076 2,78 x 0,0002 =0,0076 5,56104 Ordenada na origem = b t(n-2) Sb = 0,017 2,78 x 0,0093 = 0,017 2,58103 Concentrao Nitratos = X t(n-2) Sx = 15,55 2,78 x 2,5967 = 15,55 7,22 mol/L Intervalo de aplicabilidade da Lei de Beer: De 0,5 a 100 mol/L

NOx
X
0,5 1 5 10

Y
-0,005 0,0005 -0,002 0,036

X-Xmdia

Y-Ymdia (X-Xmdia)2

(Y-Ymdia)2
0,0382 0,0360 0,0370 0,0238

-27,2500 -0,1953 742,5625 -26,7500 -0,1898 715,5625 -22,7500 -0,1923 517,5625 -17,7500 -0,1543 315,0625

(X-Xmdia) x (YYmdia) 5,3228 5,0780 4,3756 2,7394

d2
0,0001 0,0002 0,0004 0,0004

X2
0,2500 1,0000 25,0000 100,0000 2500,000 0 10000,00 00 12626,25 00 X2

50
100 27,7500 Xmdia m

0,381
0,7315 0,1903 Ymdia b

22,2500
72,2500

0,1907
0,5412

495,0625

0,0364

4,2423
39,0993 60,8575 xy S2y 0,0004

0,0005
0,0001 0,0016 d2

5220,062 0,292861361 5 8005,875 0,4642 0 xx yy (x)^2

Sy 0,0200

Sm 0,0002

Sb

Sx

0,0076 -0,0206 0,9983 48035,2500

27722,250 0

0,0103 2,8446 6,0000

A = .b.c (NOx) 0,306= x 1 x 42,97 = 7,12110-3L.g-1.cm-1

T de Student com 95%

t (n-2) 6-2 = 4 2,78


Declive = m t(n-2) Sm =0,0076 2,78 x 0,0002 =0,0076 5,56104 Ordenada na origem = b t(n-2) Sb = -0,0206 2,78 x 0,0103 = - 0,0206 0,03 Concentrao NOx = X t(n-2) Sx = 42,97 2,78 x 2,8446 = 42,97 7,91 ng/ml Intervalo de aplicabilidade da Lei de Beer: De 0,5 a 10 mol/L.

Discusso e concluses
Foi realizado o mtodo de padro externo para se dosear a concentrao de nitritos e nitratos numa amostra de plasma um espectrofotmetro UV/Vis para ler a absorvncia das placas de 96 poos. Com a anlise dos padres foi possvel obter as concentraes destes e a partir disso construir uma curva de calibrao quer para os nitritos quer para os NOx. Atravs

da equao da recta, por interpolao grfica e com uma confiana de 95%, foi possvel
calcular a concentrao de nitritos na amostra de plasma, 15,55 7,22 mol/L, e a concentrao de NOx na amostra, que foi de 42,97 7,91 mol/L X. Aps obter a concentrao de NOx, por diferena de concentraes de NOx nitritos, obteve-se que a concentrao de nitratos no plasma de 27,42 mol/L.

Discusso e concluses
Foi ainda possvel, atravs da recta, o clculo do coeficiente de absortividade molar para nitritos e NOx, sendo que neste se obteve um valor de 8,71410-3 L.g1.cm-1

para os nitritos, e de 7,12110-3 L.g-1.cm-1 para os NOx. Como os valor de r2 esto dentro da faixa aceitvel, pode-se dizer que houve

concordncia entre os resultados obtidos. Isto leva tambm a que se verifique que h poucos erros associados aos valores da actividade experimental.

Referncias Bibliogrficas

Apontamentos fornecidos pelo docente http://www.scielosp.org/ http://es.wikipedia.org/ http://www.solovipent.com/ http://pt.slideshare.net/