Caractersticas generales del tejido epitelial. Dra.: Geraldina Paredes Bottoni Ponente: Jos Garay Llamccaya Tejidos Estudio, Tratado Es la ciencia que estudia todo lo referente a los tejidos orgnicos: su estructura microscpica, su desarrollo y sus funciones. La Histologa se identifica a veces con lo que se ha llamado anatoma microscpica.
A.-La tcnica a la parafina. B.-Histoqumica - citoqumica. C.-Inmunohistoqumica. D.-Autorradigrafa.
A.-Tcnica a La Parafina
La tcnica a la parafina siempre se utiliza para preparar cortes de tejidos. La tcnica incluye las siguientes fases
1.-Muestra de tejido. 2.-Fijacin. 3.-Deshidratacin. 4.-Aclaramiento. 5.-Inclusin. 6.-Corte. 7.-Tincin y montaje. 1.- MUESTRA DE TEJIDO El procedimiento consiste en la extraccin de un fragmento de tejido, ya sea de:
Necropsia.-Para histologa normal es necesario que se trate de un cadver fresco, que no haya sido atacado por ninguna lesin, por lo menos el rgano que se quiere estudiar. Biopsia.-son trozos de tejido que se obtienen de un sujeto con vida con el objeto de estudiarlos al microscopio y efectuar un diagnstico histopatolgico. Piezas (rganos) Operada.-los tejidos que han sido extrados de las intervenciones quirrgicas, generalmente tumores u rganos inflamados, tambin pueden darnos material de investigacin pero, como en el caso anterior, slo servirn para anatoma patolgica. Necropsia Biopsia con agujas Muestra de tejido de la corteza cerebral 2.-FIJACIN Despus de obtener la muestra de un tejido, esta debe ser colocada en una solucin fijadora, esto para evitarla degeneracin post mortem y los cambios que deforman la estructura de los tejidos y clulas, tambin para endurecer los tejidos blandos.
Por lo comn se utiliza el formaldehdo al 4% en solucin acuosa , amortiguada con un ph neutro (formol). Fijacin de la muestra Cualidades de un fijador Actuar con rapidez, matando y fijando a las clulas antes de que aparezcan los fenmenos agnicos o post-mortem (autlisis, desintegracin, etc.). Poseer alto poder de penetracin para asegurar la fijacin correcta hasta en las capas profundas de la pieza a fijar. Conservar, en lo posible, los detalles estructurales que presentaban in vivo. Tipos/clases de fijadores: a) Formol b) Alcohol etlico absoluto o de 96% c) cido smico al 1 2% d) Bicromato de potasio al 3-5%. 3.-Deshidratacin Las piezas al ser retiradas del fijador, o despus de haberlas lavado, estn embebidas en agua; impidiendo que sean penetradas por la parafina. Por lo tanto, en primer lugar, debemos deshidratar los tejidos sumergindolos en lquidos anhidros, vidos de agua. Para evitar alteraciones provocadas por una deshidratacin brusca, se aconseja proceder escalonadamente utilizando, preferentemente, alcohol etlico de graduacin creciente. Deshidratacin en alcoholes sucesivos. 4.-Aclaramiento. El alcohol no es un solvente de la parafina, de tal forma que es necesario sustituirlo por un xilol. Se pasa el bloque deshidratado a travs del xilol en cambios sucesivos, hasta sustituir el alcohol por el xilol. 5.-Inclusin A continuacin se sumerge el tejido en parafina fundida, generalmente a 60 C. A causa del calor el xilol o benzol se evaporan y el espacio anteriormente ocupada por ellos es ocupada ahora por la parafina. Inmediatamente despus se coloca en un molde rectangular con un poco de parafina fundida, para que se solidifique. 5.-Inclusin 6.-Cortes El bloque de parafina que contiene los tejidos incluidos son cortados por navaja de acero del micrtomo, obtenindose generalmente cortes de 5 a 8 micrmetros.
Corte en micrtomo tipo Minot. Consideraremos cuatro tipos de micrtomo: el de deslizamiento el tipo Minot el de congelacin el cristato o critomo -Tipo deslizamiento: en este caso la pieza queda fija mientras la cuchilla se desliza por unas guas especiales merced a un soporte al que se sujeta la cuchilla con unos tornillos. Tipo Minot: en este caso la cuchilla queda fija y es la pieza la que se desliza sujeta a una platina, sta se desliza verticalmente cuando se hace girar una manivela. Permite obtener cortes seriados en forma de cinta. Tipo congelacin: se parece al de deslizamiento, pero la cuchilla o navaja, en lugar de deslizarse, gira sobre un eje. Por otra parte, el aparato se caracteriza por tener un sistema de congelacin colocado debajo de la platina que utiliza la expansin brusca del anhdrido carbnico contenido en un cilindro con el cual se comunica. - Cristato: consta de un micrtomo tipo Minot incluido en una cmara de congelacin.
7.-Tincin y montaje La laminilla se le pasa a travs del xilol parta eliminar la parafina, despus por alcohol para eliminar el xilol y finalmente por agua, el corte esta lista para la tincin. Despus de teir el corte se hace pasar por una serie de recipientes con alcohol hasta llegar al grado absoluto, despus por xilol; por ultimo se le monta en una gota o dos del medio de montaje disuelto en xilol. El montaje elimina la difraccin no deseada de la luz, con cuidado se pone el cubre objetos protector sobre el corte , para que cuando se evapore el xilol el medio de montaje quede ntimamente unido a la laminilla cubreobjetos y al porta objetos.
Montaje montaje elimina la difraccin no deseada de la luz, con cuidado se pone el cubre objetos protector sobre el corte , para que cuando se evapore el xilol el medio de montaje quede ntimamente unido a la laminilla cubreobjetos y al porta objetos.
Resumen 1 2 3 4 6 5 7 B.-Histoqumica- citoqumica El termino de histoqumica- citoqumica se utilizan para denominar los mtodos que permiten identificar y localizar diversas sustancias tanto en corte histolgico como en las clulas en cultivo. Para obtener este tipo de informacin se utiliza fundamentalmente reacciones qumicas especificas o bien en interacciones de afinidad alta entre diversas molculas.
Tcnicas histoqumicas para la deteccin de hidratos de carbono:
Tcnica de PAS. La reaccin de PAS (Acido Perydico - reactivo de Schiff) es una de las ms utilizadas para detectar polisacridos presentes en el glucgeno, en las secreciones mucosas, en las membranas basales. Los cortes se tratan primero con el cido perydico que reacciona con los azucares formando aldehdos. Luego se coloca el reactivo de Schiff que se une a los aldehdos formando un pigmento magenta insoluble.
Tcnica de azul alcin. El azul alcin tie de azul hidratos de carbono asociados a grupos sulfato o carboxilos. Se utiliza para detectar glicosaminoglicanos, glicoprotenas sulfatados o carboxilados. Estos compuestos son muy comunes en algunas secreciones glandulares y en la matriz extracelular. El siguiente cuadro contiene tres imgenes del epitelio cilndrico del intestino delgado obtenidas con MO a 1000x. La flecha negra seala la regin ocupada con los grnulos de secrecin ubicada en el polo apical de una clula glandular caliciforme. Tcnica de H-E. El polo apical aparece como vaco. Nada nos dice sobre la naturaleza qumica del producto de secrecin Tcnica de PAS con hematoxilina. Mediante esta tcnica comprobamos la presencia de hidratos de carbono en el material a secretar. la flecha azul seala la membrana basal. Tcnica de azul alcian con hematoxilina. Mediante esta tcnica comprobamos que el material secretorio contiene hidratos de carbono sulfatados o carboxilados. Deteccin de lpidos:
Los lpidos se disuelven en los solventes orgnicos (alcohol, xilol) utilizados para la inclusin en parafina, dejando espacios vacos en los preparados histolgicos. Sin embargo, pueden preservarse si se realizan cortes de congelacin con el cristato. Para MO los lpidos pueden detectarse utilizando colorantes INDIFERENTES que son ms solubles en los lpidos que en las soluciones donde se disuelven para hacer el colorante (ej. el Sudan y el rojo escarlata).
Tejido adiposo. H-E 400X. A: espacio ocupado por los lpidos antes de procesar la muestra. Flecha, ncleo del adipocito Tejido adiposo procesado mediante congelacin. Los lpidos fueron teidos con Sudan rojo. 400X Inmunocitoqumica Es una rama de la histoqumica. Esta tcnica se basa en el hecho de que el organismo reacciona ante sustancias proteica extraas (antgenos), elaborando sustancias especificas ( los anticuerpos) que se combina con los antgenos y los inactivan. Corresponde a un grupo de tcnicas de inmunotincin que permiten demostrar una variedad de antgenos presentes en las clulas o tejidos utilizando anticuerpos marcados. Estas tcnicas se basan en la capacidad de los anticuerpos de unirse especficamente a los correspondientes antgenos. Esta reaccin es visible slo si el anticuerpo est marcado con una sustancia que absorbe o emite luz o produce coloracin.
Autorradiografa La autoradiografa es una tcnica de deteccin de molculas marcadas radiactivamente que emplea emulsiones fotogrficas sensibles a la partcula radiactiva o a la luz producida por una molcula intermediaria. La emulsin que contiene plata es sensible a la radiacin particulada (alfa, beta) o electromagntica (radiacin gamma, luz, ...), de forma que se precipita en forma de plata metlica. El revelado de la emulsin revelar en forma de precipitados oscuros la regin en la que se localizan las protenas radiactivas. Tipos de Coloracin Colorantes: reciben esta denominacin las sustancias que pueden conferir color a otros cuerpos.
Coloracin: es el proceso mediante el cual un cuerpo es teido por una sustancia colorante, sin perder el color cuando es lavado con el disolvente utilizado al preparar la solucin colorante. Clasificacin de los colorantes: Segn su origen se clasifican en:
2.-COLORANTES ARTIFICIALES O SINTTICOS (COLORES DE ANILINA): -cidos: sales cuya base es incolora y su cido es coloreado (eosina o eosinato de sodio). Son colorantes citoplasmticos. - Bsicos: sales cuya base es coloreada y el cido es incoloro (azul de metileno o clorhidrato de azul de metileno). Son colorantes nucleares. - Neutros: sales en las que tanto el cido como la base son coloreados. Tien el ncleo de un color y el citoplasma de otro. - Indiferentes: no forman sales. Tien aquellas sustancias que tienen un poder disolvente superior al del lquido que ha servido para preparar la solucin colorante (Sudn lll, rojo escarlata).
Por otro lado, las coloraciones pueden ser: - Ortocromticas: los tejidos adquieren un color igual al de la solucin colorante empleada. - Metacromticas: una sustancia o un componente celular se tie con un color diferente al del colorante empleado.
Colorantes ms utilizados en histologa humana:
HEMATOXILINA: -Es un colorante vegetal. - Para ser utilizada debe ser oxidada previamente. Los agentes oxidantes pueden ser: el aire (varios meses de exposicin) u oxidantes artificiales (xido de mercurio, permanganato de potasio, dicromato potsico, etc.) - Es un colorante directo, pero en la prctica se lo utiliza en forma de lacas hematoxilnicas (se utiliza alumbre de potasio o de sodio como mordiente para preparar la solucin colorante), comportndose en este caso como un colorante indirecto.
EOSINA: - Es un colorante artificial (se trata de derivados hidroxixantnicos halogenados con tres grupos arilo). - Presenta autofluorescencia espontnea. - Se la emplea tanto en soluciones acuosas como alcohlicas. LAMINA BASAL
Es una fina capa de matriz extracelular que separa el tejido epitelial y muchos tipos de clulas, como las fibras musculares o las clulas adiposas, del tejido conjuntivo. Suele confundirse con la membrana basal, pero en realidad forma parte de ella junto a la lmina reticular. Cuando aparece rodeando fibras musculares o adipositos se la denomina lmina externa. La lmina basal slo es observable con detalle a microscopio electrnico y est compuesta por una matriz electrodensa de entre 50 y 100 nm que consta a su vez de lmina lcida y lmina densa. La lmina lcida: fija la membrana plasmtica a la lmina basal. Posee glicoprotenas como la laminina y la fibronectina y proteoglicanos como el separan sulfato. La lmina densa: ms electrodensa presenta unos delgados y pequeos filamentos de colgeno tipo IV.
Funcin: Sostn del epitelio. Filtracin molecular pasiva, deja pasar determinadas molculas, lo que adquiere especial importancia en los riones. Comparte tejidos y filtro celular. Los linfocitos s pueden atravesarla pero es capaz de retener la metstasis de tumores invasores. Adhesin celular. Influye sobre la diferenciacin de las clulas y sobre la reparacin de tejidos desde sus clulas madre.
Las flechas sealan la membrana basal. Bajo algunos epitelios la membrana basal (B) adquiere un gran desarrollo Caractersticas generales de los tejidos epiteliales
En los tejidos epiteliales, las clulas estn estrechamente unidas entre s formando lminas. La matriz extracelular es escasa y se ubica por debajo de las de clulas epiteliales. Ella forma una delgada capa llamada lmina basal.
Asociacin del citoesqueleto de cada clula, con la lmina basal y con el citoesqueleto de las clulas adyacentes. Las clulas soportan las tensiones mecnicas, por medio de resistentes filamentos proteicos que se entrecruzan, en el citoplasma de cada clula epitelial, formando el citoesqueleto. Para transmitir la tensin mecnica de una clula a las siguientes, estos filamentos estn unidos a protenas transmembrana ubicadas en sitios especializados de la membrana celular. Estas protenas se asocian, en el espacio intercelular, ya sea con protenas similares de la membrana de las clulas adyacentes, o con protenas propias de la lmina basal subyacente.
Los tejidos epiteliales limitan tanto las cavidades internas como las superficies libres del cuerpo. La presencia de uniones especializadas entre sus clulas permite a los epitelios formar barreras para el movimiento de agua, solutos o clulas, desde un compartimiento corporal a otro. Un epitelio separa el lumen intestinal de los tejidos subyacentes; y un epitelio separa a la pared intestinal de la cavidad abdominal
Polaridad Clula polo basal Polo apical Lamina basal Porcin libre de la clula polaridad Las diferentes partes de estas clulas presentan funcin distintas. La membrana plasmtica de las clulas epiteliales suelen tener una composicin molecular diferente en sus polos. Renovacin 1. Son estructuras dinmicas, cuyas clulas se renuevan continuamente actividad mittica. 2. Las tasas de renovacin es variable: Rpida tejido epitelial intestinal ( se sustituye por completo c/semana). Lenta: hgado y pncreas. 3. En los T.E. estratificado y T.E seudoestratificado la mitosis tiene lugar en la capa basal de estos, donde se localiza las clulas que originan estos epitelios. Especializacin de la superficie de la clula epitelial La superficie de las clulas epiteliales est muy desarrollada para cumplir funciones especializadas: La principal adaptacin es el aumentar la superficie, que en diferente tipos celulares se logra mediante microvellosidades, pliegues basolaterales y la placa de membrana. La necesidad de mover sustancias por la superficie se logra gracias a las proyecciones mviles de la clula denominada cilios ( participan en el transporte).