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Expresso de Genes Envolvidos na

Resistncia da Soja a
Meloidogyne javanica

Docente: Profa. MSc. Ana Paula Ferreira Leal

Discentes: Geraldo Gouveia, Daniel Gon, Carlos Henrique,
Hellen Magno
INTRODUO
A identificao de genes diferencialmente expressos
em soja (Glycine max) parasitada pelo nematoide
Meloidogyne javanica e que possam ser utilizados em
estratgias de melhoramento gentico e biotecnologia,
desejvel para o aprimoramento e a obteno de
cultivares resistentes.

Wendland et al. (2004) identificaram, por meio da
tcnica de microarranjos de DNA, genes que so
diferencialmente expressos em gentipos de soja
inoculados e no inoculados com M. javanica.


INTRODUO
chs que codifica uma enzima chave na biossntese dos
fenilpropanides (fitoalexinas);

xet, que codifica a enzima xiloglucana endotransglicosilase,
catalisadora da quebra intramolecular de polmeros de xiloglucanas;

hs1pro-1, responsvel pela resistncia da beterraba-aucareira ao
nematoide Heterodera schachtii,

gene sth-2, que codifica a enzima sulfotransferase hydroxisteroide
preferring 2, envolvida na reao de hipersensibilidade em plantas.

Segundo os autores, tais genes tiveram suas expresses induzidas
somente em plantas de soja resistentes e inoculadas com o
nematoide
OBJETIVO
O objetivo deste trabalho foi confirmar a
expresso diferencial em soja dos genes chs, xet,
hs1pro-1, sth-2, previamente identificados por
Wendland et al (2004), bem como determinar os
nveis de expresso dos mesmos por meio da
tcnica de PCR quantitativo em tempo real,
tcnica que apresenta maior sensibilidade e
preciso para quantificao de alteraes nos
nveis de expresso de genes individuais.

Material e Mtodos
Obteno do inculo (suspeno de J
2
);

Populao pura de M. javanica multiplicada;

Soja cv. Embrapa 20;

Coleta de razes com galhas;

Material e Mtodos
Triturada + hipoclorito 0,5%;

Cmera de ecloso 26C;

A cada 3 dias coleta;

Quantificao, 680 j
2
/m;
Material e Mtodos
Sementes dos parentais (PI 595099, BRS 133);

Trs linhagens resistentes ( JF 7056, JF 7002, JF
7027);

Trs susceptveis (266-S, 256-S, 259-S);

10 sementes por gentipo total 80;
Material e Mtodos
Transplantio e inoculao da metade com 680 j
2;

Retirada de todas as razes, lavadas e cortadas (1,
3 e 6 dias);

Armazenadas (-80C) at a extrao do RNA tot;

Procedeu-se a sntese de DNA (primers oligo dT);








Material e Mtodos
DNA das 3 pocas de coletas de razes;

Trs plantas de cada gentipo, uma por tempo de
coleta;

DNA juntado em bulk

Diferentes concentraes de DNA para todos os
pares de primers (chs F / R, xet F / R, hs1pro-1 F /
R,sth-2 F / R);










Material e Mtodos
Foi determinada a eficincia de cada sistema de
quantificao;

Reaes incubadas 50C/ 2 minutos e 95C/ 2
minutos;

Ciclagem com 45 ciclos, 95C/ 15 segundos;

Anelamento por 62C/ 30 segundos e extenso a
72C/ 30 segundos;












Material e Mtodos
Como calibrador, foi utilizada a amostra no
inoculada de cada gentipo.












Relao dos materiais usados para juno dos cDNAs para
avaliao dos nveis de expresso gnica por RT-qPCR
Sequncias dos primers foward e reverse utilizadas para
amplificao dos genes quantificados pela tcnica de RT-qPCR