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Integrantes

:

Gutiérrez Ostos Eunice
Ledesma Angeles Nallely
Quezada Rodríguez Elsa Herminia
Rodríguez Rodríguez Angelica
 Los ácidos nucleicos son
sustancias que como su
nombre lo indica, fueron
aisladas en el núcleo celular,
pero sean encontrado ácidos
nucleicos en citoplasma así
como en mitocondrias y en
cloroplastos.
El Aislamiento del ADN es el principio
de muchos métodos de:
 Ingeniería genética


 Medicina forense
 Bioinformática
 Nanotecnología de ADN
 Historia y antropología


Transformación
Secuenciación
Mapeo físico
Mutagénesis
Homogenización
Lisis celular
Disociación
Extracción
Precipitación
Redisolución
 Donde se intenta realizar un
proceso que retrase la
separación.
Una mezcla uniforme de las
sustancias con similares fases.
La lisis celular es la rotura de la
membrana celular
MÉTODOS FÍSICOS
MÉTODOS QUÍMICOS

 •Tratamiento con alcalis
 •Tratamiento con lisozima + EDTA
 •Empleo de detergentes


 •Sonicación
 •Choque osmótico
 •Congelación/descongelación
 •Homogeneización con abrasivos
 •Cizalla liquida
 •Cizalla solida

La proteólisis es la
degradación de proteínas ya
sea mediante enzimas
específicas, llamadas
proteasas , o por medio de
digestión intramolecular , que
catalizan la ruptura de sólo
una o de pocas uniones
peptídicas.
 Se utilizan enzimas proteolíticas como la pronasa, la cual es activa
contra un amplio espectro de proteínas naturales. La pronasa se
debe auto digerir a 37C por lo menos una hora antes de utilizarla
Una vez concluida la digestión con
proteasa, se realiza una digestión
de Rnasa para eliminar la
presencia de RNA.
Se eliminan las proteínas de la muestra
utilizando solventes orgánicos como el
fenol.
El fenol utilizado en la extracción de las
proteínas debe ser bidestilado o ultra puro
, y se utiliza a una relación 1:1 volumen
por volumen con la muestra que se
pretende limpiar.
Generalmente se
recomienda realizar 1
extracción con fenol seguida
de 1 extracción de
fenol:cloroformo (1:1), y por
lo ultimo una ultima
extracción con cloroformo
para limpiar toda traza de
fenol.
 Para poder concentrar el ADN después de
la eliminación de las proteínas, se utiliza
una serie de sales entre las que se
encuentra el acetato de sodio, acetato de
potasio acetato de amonio y cloruro de litio
entre las mas usadas .
Una vez que el ADN ha estado en
contacto con los cationes seleccionados
se precipita con 2 volumenes de etanol
absoluto o 1 volumen de isopropanol
bajo las siguientes condiciones :mayor a
2 h a 20 centígrados de 15 a 30 min a
menos 70 centígrados, o 10 o 15 min en
hielo seco con etanol.
 Se re suspende en un Tapon que puede ser de
tris-EDTA

El EDTA ayuda al agotamiento de iones que se
utiliza comúnmente para inactivar enzimas
dependientes de metal que podrían dañar el
ADN o las proteínas