PRUEBAS BIOQUÍMICAS

PARA LA IDENTIFICACIÓN DE
Staphylococcus
Janet Salazar L
Bacterióloga
IUCMde A
1.catalasa:
Enzima catalasa, desdobla el peróxido de
hidrogeno en agua y oxigeno
**desprendimiento de burbujas
Catalasa positivo: catalasa negativo:
Staphylococcus Streptococcus
Micrococcus Enterococcus
Planococcus Aerococcus
Stomacoccus Planococcus

Diferencia los
gêneros:
Streptococcus (-) de
Micrococcus (+) y/o
Staphylococcus (+).
2. Coagulasa:
Enzima que estimula la conversion del fibrinogeno
en fibrina, comprueba la facultad de un MO de
coagular el plasma por accion de esta enzima
Coagulasa tubo: coagulasa libre: detectala
produccion de la enzima estafilocoagulasa
Coagulasa placa: detecta la produccion de una
proteina localizada en gran parte del Staphylococo
** recomendado plasma de
conejo con EDTA , no se debe
usar el plasma citratato por que
los Mos que pueden usar citrato
ej especies de Enterococcus
produciran resultados positivos
confundiendose con
staphylococcus
El plasma humano puede
contener anticuerpos
antiestafilococicos (material
vencido de bancos de sangre)
**Diagnostico Microbiologico de Koneman 2008 pag 614
La prueba de la
coagulasa es usada
específicamente
para diferenciar las
especies del genero
staphylococccus:
S. aureus Positiva
S. epidermidis Negativa
Placa:
Una prueba positiva, usualmente
ocurre entre 5-20 segundos.
La prueba negativa si la
aglutinación no ocurre dentro de 3-4
minutos.

Tubo:
interpretación
prueba positiva
coagulo completo
coagulo parcial, el coagulo no
abarca completamente la columna
del fluido.
prueba negativa:
no hay formación de coagulo, la
suspensión permanece homogénea


●Una prueba positiva, usualmente ocurre entre 5-20 segundos.
●La prueba negativa si la aglutinación no ocurre dentro de 3-4 minutos.


3. Oxidasa
Determinar la presencia de enzimas oxidasa
La reacción de la oxidasa se debe a la presencia
de un sistema citocromooxidasa que activa la
oxidación del citocromo que es reducido por el
oxígeno molecular que produce agua o peróxido
de hidrógeno según la especie bacteriana
●Diferenciar los Staphylococcus de
Micrococcus:
Staphylococcus catalasa + oxidasa-
Aerococcus
Stomacoccus

Micrococcus Catalasa + oxidasa+

Nota: los Staphylococcus mediante la prueba de
oxidasa y resistencia a la furazolidona
Prueba oxidasa
4. Prueba de resistencia a la Bacitracina:
Staphylococcus ( R) resistente a la bacitracina

Micrococcus y stomacoccus (S) sensibles a la
bacitracina
5. Prueba de resistencia a la furazolidona:

Micrococcus (r) a la FX ( halo 6-9 mm)
Staphylococcus (S) a FX halo >=15 mm
6. Prueba de la novobiocina

Staphylococcus saprophyticus:
(R )
Halo 6-12 mm

Otros Staphylococcus y S.
aureus: ( S)
Halo >=16 mm
7. manitol
●La degradacion del Manitol
(carbohidrato) hace cambiar
de color al indicador Rojo de
Fenol a amarillo indicando la
acidificacion del medio

Manitol ( +) S. aureus
Manitol (– )S. epidermidis






Crecimiento en Agar manitol sal
Izquierda bacteria manitol negativo y
derecha manitol positivo
8. Agar DNAsa
para determinar actividad de
desoxirribonucleasa el cual es visualizado
agregando HCL 0.1

los que degradan DNA se observara
transparencia alrededor de la siembra y los que
no degradan DNA no se observara
transparencia la siembra debe ser puntos de
inoculacion de aproximadamente 5mm de
diametro

Util para S. aureus: DNAsa : positiva

hay otros estafilococos que dan reacciones
positivas
9. urea
Medio utilizado para diferenciar
microorganismos en base a la
actividad ureásica
Se utiliza para estafilococos
Negativa/ positiva
Identificaci�n de las
especies de
Staphylococcus
coagulasa negativo
ESPECIE PYR Coag Urea Man Saca Bac
1
Poli
2
Novo
3
S. capitis - - - + + S S S
S. cohnii - - -/+d +/+d - V S R
S. epidermidis - - + - + S R S
S.hominis - - + -/+ +L S S SS
S. saccharolyticus - - NP - - S S S
S. saprophyticus - - + +/- + V S R
S.warneri - - + +/- + S S S
S. xylosus - - + +/+d + V S R
IDENTIFICACI�N DE LAS ESPECIES DE
STAPHYLOCOCCUS
COAGULASA NEGATIVO
Diferenciacion de cocos coagulasa negativo,
PYR negativo, Novobiocina resistente
Diferenciaci�n de cocos coagulasa
negativo, PYR negativo, Novobiocina
resistente
ESPECIE Ureasa Oxidasa Fos-Alc Acido trealosa
S. saprophyticus + - - +
S. cohnii subs cohnii - - - +
S. cohnii subs.urealyticum + - + +
S. sciuri subs.sciuri - + + +
S. hominis subs.novobiosepticus + - - -
S. aureus:

●Coco Gram positivo que se agrupa
en racimos
●Catalasa positivo
●Coagulasa positivo tanto en lamina como
en tubo
●Oxidasa negativo
●Fermenta el Manitol

Api Staph
Sistema estandarizado de
identificacion de los generos
Staphylococcus
Micrococcus
Kocuria

●incluye test bioquimicos
estandarizados y miniaturados y
una base de datos especifica
identificación
se obtiene a partir del perfil numérico

Determinación del perfil numérico:
En la hoja de resultados, los tests están separados
en grupos de 3 y se asigna para cada uno un valor
1, 2 ó 4. Sumando en el interior de cada grupo los
números
que corresponden a reacciones positivas, se
obtienen 7cifras que constituyen el perfil numérico.
identificación:
Se realiza a partir de la base de datos
* Con la ayuda del Catálogo Analítico:
- Localizar el perfil numérico en la lista de los
perfiles.
* Por medio del software de identificación apiweb
TM :
- Introducir manualmente por teclado el perfil
numérico de 7 cifras.
6 706 113 Staphylococcus epidermidis