METODOS DE CULTIVO .

CINETICA
DE CRECIMIENTO DE
MICROORGANISMOS

2. sin embargo el método de cultivo sumergido es el más apropiado para la industria. cuya duración depende de las condiciones de cultivo del material de siembra. se puede realizar desarrollar en medios sólidos de cultivo o en superficies de medios líquidos de capa delgada. Método de cultivo sumergido El método de cultivo sumergido puede ser: Periódico y contínuo. bioquímicos morfológicos.Métodos de cultivo • • • • • • • • • • • En la industria microbiológica para el cultivo de microorganismos se utilizan dos métodos: 1.Cultivo en superficie.Cultivo sumergido. Estos son procesos desde la obtención del material de siembra (pequeña cantidad de biomasa de microorganismos) hasta el desarrollo de una cantidad significativa de biomasa y productos del metabolismo. los índices de cultivo fisiológicos.. METODO PERIÓDICO O DISCONTÍNUO En el proceso periódico varía la velocidad de crecimiento.. El método superficial da grandes cantidades de productos en determinadas condiciones. Método en superficie El método de cultivo en superficie se utiliza sólo para cultivos aeróbicos . El desarrollo del cultivo por el método peródico de desarrollo empieza con la lag-fase. ..

Curva de crecimiento de los microorganismos .

. • VI Fase de muerte ( disminución de biomasa). • IV Fase de disminución de crecimiento celular. • III Fase exponencial.• I Fase de latencia (lag). • V Fase estacionaria. • II Fase de transición.

muertas a causa del hambre o intoxicación. Cuando existe exceso de fuentes nutritivas el crecimiento del cultivo se retarda debido a la acumulación de los productos del metabolismo. Las células del material de siembra deben pasar de un estado de latencia hacia un estado de desarrollo.o del detenimiento por cualquier causa del crecimiento de las células: vivas pero inhibidas. En medios más complejos que contienen algunas fuentes de carbono puede ocurrir (pueden ser consumidas poco a poco) el crecimiento de la cepa en forma retardada. Los productos tóxicos del metabolismo de los microorganismos son muy variados. Esta fase no puede ser larga. En esta fase se alcanza el mínimo de influencia de los factores limitantes e inhibidores. El crecimiento de las células va con la velocidad máxima posible genéticamente dada en la célula. La fase de disminución de crecimiento puede ser muy diferente. Esta puede totalmente inexistir en medios sintéticos simples cuando el crecimiento de pronto se detiene por la falta de un elemento nutritivo principalmente fuentes de carbono y energía. Después sigue la fase estacionaria . Los componentes del medio nutritivo se tienen en exceso. los productos del metabolismo todavía no se acumulan en demasía. .• • • • • Fase de latencia: Casi siempre ocurre una disminución de la concentración de los elementos nutritivos. variada y compleja. Luego sigue la fase exponencial que se caracteriza por la capacidad de desarrollo del cultivo. ya que durante el aumento de células se empieza a experimentar la insuficiencia de uno o varios elementos de las sustancias nutritivas o al mismo tiempo se experimenta el crecimiento de la influencia inhibidora en el medio de los productos del metabolismo.

por ejemplo en liberación de toxinas. Ciclo celular :es el proceso de desarrollo de un microorganismo aislado. podríamos considerar como muertos microorganismos que pueden reanudar su crecimiento si las condiciones son de nuevo favorables. Por otra parte. Concepto de muerte de un microorganismo: Desde el punto de vista microbiológico . un microorganismo muere cuando pierde de forma irreversible la capacidad de dividirse. A lo largo del ciclo celular se da la replicación del material genético. no hay crecimiento . . la formación de células hijas. un microorganismo puede estar muerto desde el punto de vista microbiológico y continuar desarrollando una actividad metabólica que se traduzca. hay que considerar que la capacidad de multiplicación (crecimiento) de un microorganismo puede verse transitoriamente afectada por lesiones o por las condiciones físicas o químicas del entorno. La duración de este ciclo coincide con el tiempo de generación ( t en que se duplica una célula del microorganismo. no se produce aumento en el número de microorganismos y por tanto. Se expresa en gr/ m3. En estos casos. Biomasa: masa total de un solo tipo o grupos de tipos de microorganismos en general. Sin embargo .• • • • • Fase de muerte: se produce una reducción del número de bacterias viables del cultivo. Crecimiento microbiano: aumento del número de células o microorganismos a lo largo del tiempo. Como consecuencia de esta pérdida.

Variación de la biomasa (o número de células) de un cultivo a lo largo del tiempo .

D= velocidad de disolución del flujo del medio nutritivo en el cultivo (horas-1). se queda en el biorreactor en forma y número constante. e igualmente al microorganismo productor en un estado fisiológico determinado. Parte del volumen de líquido del cultivo continuamente fluye. . La velocidad de crecimiento de la biomasa en el biorreactor se expresa con la ecuación : Donde: • • • M= velocidad específica de crecimiento o tasa de crecimiento (horas -1). • . En condiciones estériles el método contínuo garantiza la conservación del cultivo en estado activo fisiológico en un tiempo prolongado. En el método contínuo. sale del biorreactor con la misma velocidad con que se suministra el medio de cultivo nutritivo al fermentador. para obtener el producto final durante todo el proceso de fermentación participa prácticamente toda la biomasa de microorganismos . En el cultivo contínuo aparece el sistema dinámico abierto. en el cual los microorganismos se reproducen continuamente con una velocidad que depende del flujo de las sustancias nutritivas y otras condiciones de alimentación.• • • CULTIVOS CONTINUOS La esencia del método consiste en mantener las condiciones del medio en forma constante. la cual da lugar a las condiciones óptimas de cultivo. x= concentración de biomasa gr/lt ( mgr/ ml) o número de células en un ml. y la cantidad de biomasa de microorganismos que mantienen el proceso contínuo.

• Si es que en el estado estacionario • entonces . Este caracteriza la velocidad de la corriente de sustancias nutritivas en la unidad de volumen. Esto indica que la concentración de células no cambia. ml (m3).01:0.25.• El valor es la velocidad de dilución. Además esto se da cuando D=0. • F=velocidad de la corriente del medio ml/hora (m3/hora) • V=volumen del biorreactor . • En condiciones de cultivos contínuos cuando el cultivo se encuentra en estado dinámico de equilibrio ( ) se diferencian los procesos: Turbidostático y Quimiostático. .

• A velocidades de D muy bajas. y limitado por el substrato ( ejm: fuentes de C. pequeños incrementos de la velocidad de dilución producen un cierto incremento de la densidad del cultivo debido a que se aportan más nutrientes al medio y el microorganismo no ve limitada su tasa de crecimiento según lo indicado en la ecuación de Monod. El valor D indica el número de volúmenes de reactor que pasan a través del reactor por unidad de tiempo. En el cultivo quimiostático la concentración constante de células en el medio se mantiene con ayuda de una concentración constante de compuestos químicos.vitaminas . Este valor es el recíproco del tiempo de residencia o tiempo que una unidad de substrato está dentro del reactor . Estos parámetros se relacionan de acuerdo a la ecuación anterior D =F/V. El medio de cultivo de un quimiostato contiene un nutriente esencial en una cantidad limitante (nutriente limitante) .N . Tanto la tasa de crecimiento como el nivel de población microbiana están relacionados en el valor de D. .etc).• Quimiostato • El tipo más frecuente de cultivo contínuo es el quimiostato en el que se introduce medio fresco a un flujo constante denominado velocidad de dilución (D) a la vez que se elimina cultivo viejo al mismo flujo.

• En una situación de equilibrio . . la velocidad de dilución D se iguala a la de tasa de crecimiento de los microorganismos. A valores más altos de D no todo el nutriente es consumido por los microorganismos del cultivo por lo que S en el efluente aumenta. • A valores bajos de D la concentración de nutriente limitante (S) en el efluente es baja porque es consumido casi completamente por los microorganismos del cultivo. En este cultivo se ajusta la velocidad de dilución de tal forma que la densidad óptica del cultivo se mantiene constante. de tal manera que la concentración de células permanece constante.• La velocidad de crecimiento aumenta ( la tasa de crecimiento aumenta y el tiempo disminuye) cuando la energía aportada por los nutrientes entrantes supera la energía de mantenimiento de los microorganismos del cultivo. • Turbidostato • En el cultivo turbidostático la velocidad de la corriente del medio se regula así. que alcanzan unas poblaciones de gran tamaño creciendo a una tasa baja porque se encuentran en condiciones de limitación de nutrientes . la situación fisiológica del organismo. de esa forma. de forma que el control de la tasa de dilución ( control del flujo F ) permite regular la tasa de crecimiento y.

cuando µ=D el tamaño de la población se mantendrá estable (equilibrio) y si µ<D la población disminuirá como consecuencia de la dilución de las bacterias (se lava el biorreactor) .Relación comparativa de los valores de D y µ A valores de D>µmax el microorganismo no es capaz de crecer lo suficiente como para evitar ser eliminado del cultivo por el rebosadero y . por consiguiente S alcanza un valor máximo ( el nutriente limitante no es consumido en el cultivo y la concentración del substrato en el efluente es igual a la del substrato en el medio inicial ) y la tasa de crecimiento de microorganismos (µ) dentro del cultivo se hace nula ( el cultivo desaparece). La evolución de la biomasa de un quimiostato se ajusta a la ecuación siguiente: dX/dt=X(µ -D) Por consiguiente . si µ>D hay un incremento positivo de la población en el quimiostato (se acumula biomasa en el biorreactor) .

Despejando el valor de Sr en función de los demás se obtiene la ecuación siguiente: Sr=DKs/(µmax-D) Que permite calcular como varía la concentración del nutriente limitante en el efluente en función de la tasa de dilución D. de equilibrio la ecuación de Monod es: D=µmax [Sr/(Ks + Sr)] Donde : Sr=concentración de nutriente limitante en el efluente del cultivo contínuo.Ecuación de Monod para el estado de equilibrio D=µ Para el estado estacionario . .

Si llamamos SR a la concentración de nutriente limitante que entra en el fermentador y Sr la concentración de este nutriente en el efluente. .Cantidad de biomasa producida. podemos calcular la producción de biomasa en el fermentador con las siguientes ecuaciones: X=Ys(SR-Sr) X=Ys {SR-[DKs/(µmax-D)]} Estas ecuaciones nos permiten modular la cantidad de biomasa producida o la cantidad de substrato consumido regulando la tasa de dilución del fermentador. considerando que substrato consumido en el fermentador es ( SR-Sr) es transformado en biomasa durante el estado estacionario (X) con un rendimiento Ys .

En un proceso contínuo homogéneo .Cantidad de producto. . etc). En un proceso contínuo µ=D. de la actividad del cultivo y de la velocidad de dilución D. Para la obtención del producto metabolito es necesario establecer el factor limitante y los factores que limitan el crecimiento del cultivo ( temperatura. inhibidores. De esto se concluye . que la cantidad de producto depende de la concentración de biomasa. donde µ=D. pH.

X. Xo. So. X1.densidad de biomasa que sale.concentración de sustrato en el medio efluente.biorreactor de mezcla total.densidad de biomasa dentro del biorreactor .densidad de biomasa que ingresa. S-concentración de sustrato dentro del biorreactor.Procesos de cultivo contínuo • • • • • • • • • a – biorreactor tubular de desalojo total b. S1.concentración de sustrato en el medio que ingresa.

b-serie de 2 fermentadores B-biorreactor con reingreso de biomasa. G-biorreactor con equipo de filtración.Variantes del cultivo quimiostático • • • • a. a b B G .

• En el método contínuo es más adecuado y económico. ni en la lag-fase.• Según este método de cultivo solamente se puede obtener un estado estable de equilibrio a una velocidad de crecimiento máxima de la biomasa. ni en su llenado . El cultivo siempre se encuentra en una actividad máxima. no se gasta tiempo en la preparación del biorreactor. .