PROCESO BIOTECNOLOGICO.

TIPOS
DE SUBSTRATOS(MEDIOS DE
CULTIVO INDUSTRIALES).
PREPARACION Y TRATAMIENTO DE
SUBSTRATOS .ESTERILIZACION,
FILTRACION DE AIRE

BIOTECNOLOGIA
Uso integrado de la bioquímica, microbiología
y de la ingeniería química con el fin de
obtener productos útiles y aplicaciones
tecnológicas de los microorganismos, cultivos
celulares y otros sistemas biológicos.
Esta es la definición más adecuada a los
contenidos de la microbiología industrial y
alimentaria.

Biotecnología tradicional o
clásica (Industrial)
Es la rama de la biotecnología
que obtiene producción a gran
escala, con costes reducidos.
Sus principales productos son
alimentos o ingredientes
saborizantes, alcohol
industrial, antibióticos y ácido
cítrico. Se trata de producción
en toneladas .

Nueva biotecnología o
biotecnología fina
Se concentra en la fabricación
de productos al detalle.
Producción de tan solo
kilogramos al año, pero
son productos de un gran
valor añadido, como pueden
ser insulina, interferón,
enzimas,... Se requiere el
uso de técnicas más nuevas de
ingeniería genética y de la
fusión de células para obtener
organismos capaces de
generar los productos
deseados.

.PROCESO BIOTECNOLOGICO En la práctica biotecnológica para el cultivo de microorganismos aeróbicos se utilizan los métodos por cultivo en superficie y por cultivo sumergido. Por el método superficial los microorganismos se cultivan en medios (sólidos: afrecho. Los cultivos en este caso se desarrollan en todo el medio líquido nutritivo en biorreactores. El método por cultivo sumergido se utiliza para microorganismos aerobios y anaerobios. El crecimiento de los microorganismos por el método sumergido puede periódico o contínuo. humedecidos). salvado .

Estas se ponen de manifiesto : en la composición de los medios nutritivos utilizados . en los métodos de su preparación.Flujo general • • • • Una producción biotecnológica puede manifestarse en forma de etapas . consecutivas: Preparación del medio de cultivo ¦ Obtención del material de siembra (cepas) ¦ Desarrollo productivo del cultivo en condiciones superficiales o por cultivos sumergidos ¦ Extracción u obtención del Producto final Cada concreta producción biotecnológica. tiene sus particularidades distintas. . condiciones de cultivo de producción y en los métodos de extracción del producto final. Igualmente estas particularidades no cambian el esquema general del proceso biotecnológico .

Para un crecimiento y desarrollo normal de los microorganismos en el medio nutritivo deben de existir todos los elementos. necesarios para que el microorganismo forme sus células en crecimiento y sintetize completamente el producto final. son los medios de cultivo (substratos). de los cuales se forma la célula. . Para muchos microorganismos. para su crecimiento en uno u otro medio nutritivo necesita condiciones complementarias: • temperatura • -determinada concentración de iones de H (pH). vitaminas y otros. • -La relación existente necesaria entre diferentes iones. mutantes) necesitan otros factores de crecimiento que ellos no pueden sintetizar: aminoácidos. purinas. Para elegir el medio nutritivo se debe tomar en cuenta los diferentes compuestos nutritivos en forma balanceada.PRINCIPALES SUBSTRATOS • Uno de los principales factores . que influyen en el rápido crecimiento de los microorganismos y la síntesis máxima por ellos de diferentes sustancias activas biológicas. • Algunos microorganismos con signos de alteraciones hereditarias (auxótrofos. • -potencial oxido reductor del medio.

.

• .Extracto de malta. concretamente hexosas. disacáridos como la maltosa y la sacarosa. Es el extracto acuoso de la cebada malteada. Se trata de un sustrato excelente para muchos hongos. vitaminas y elementos traza. Además de una elevada cantidad de azúcares contienen sustancias nitrogenadas. e incluso trisacáridos como la maltotriosa. Son una de las fuentes más baratas de carbohidratos. . son los restos del refinado del azúcar.fuentes de C) • -Melazas. El extracto seco de malta contienen entre un 90 y un 92 % de carbohidratos. la localidad y el proceso usado en la industria azucarera. su composición varía en función de la materia prima usada para la obtención del azúcar. levaduras y actinomicetos. que son glucosa y fructosa. las condiciones climáticas. En cualquier caso. Subproducto de la industria azucarera.Medios de cultivo (carbohidratos.

Pueden ser metabolizados directamente por los organismos productores de amilasas. aminoácidos. Los grupos NH de las aminas. proteínas. lo que resulta en la formación de productos de condensación de color tostado. Uno de los problemas que presentan los sustratos ricos en azúcares es lo que se conoce como reacción de Maillard. restando así nutrientes.Almidón y dextrinas. pirimidinas y vitaminas. . que se da a bajo pH y elevadas concentraciones de azúcares reductores. La composición de aminoácidos varía en función del grano usado. aminoácidos y proteínas reaccionan con los grupos CHO de los azúcares reductores. El almidón ha adquirido importancia en la producción de etanol. • .• Las sustancias nitrogenadas en el extracto de malta incluyen péptidos. purinas. empeorando el aspecto del producto y que no pueden ser usados por los microorganismos. pero la prolina siempre constituye más de un 50%.

Melaza de caña de azúcar .

Extracto de malta .

Almidón de maíz .

Dextrina .

por lo que se deberá hidrolizarse en primer lugar.• . de los cuales el 80 % son hexosas y el resto pentosas. papel. Se trata de productos residuales que contienen azúcar de la industria del papel. acetona e isopropanol. . restos de mazorcas. butanol. • . ya sea química o enzimáticamente. Debido a su gran disponibilidad y bajo coste.que se usa en la producción de etanol.Celulosa. Proviene de la paja. la celulosa está siendo utilizada como sustrato de fermentación.Líquidos sulfíticos de las papeleras. dando el jarabe de glucosa . A menudo no puede ser utilizada directamente como fuente de carbono. Los líquidos sulfíticos de coníferas contiene entre el 2 y 3 % de azúcares.

Medios de cultivo (fuentes de carbono diferentes a los carbohidratos) • . de algodón o de palmera. Estos alcanos son residuos del refinado del petróleo y su uso como alternativa a los carbohidratos depende de su precio. Alcanos de 12 a 18 C son rápidamente metabolizados por muchos microorganismos. • .Etanol.Alcanos. como aceite de soja. . cuando se usa ya una fuente de carbohidratos como principal aporte de energía. • .Aceites vegetales. Son usados como ingredientes secundarios. Es el producto de la fermentación del almidón sacarificado o de la celulosa y puede ser usado como única fuente de carbono o como fuente complementaria para muchos organismos.

Se trata de un subproducto de la producción de almidón a partir del maíz. Se produce a partir de levaduras de panificación.Líquido de maceración del maíz. de manera que contendrá aminoácidos y péptidos. 2. queratina. Arg. induciendo su autólisis a 50 – 55º C o por plasmólisis en alta concentración de NaCl. pero son bastante caras para la producción industrial.Extracto de levaduras.. en muchos procesos industriales se usan los siguientes: ión amonio. • . Se trata de hidrolizados de proteínas. vitaminas solubles en agua y carbohidratos..Medios de cultivo (fuentes de N) En lo que respecta a los sustratos usados como fuentes de nitrógeno. Es un sustrato excelente para muchos microorganismos. urea o amoníaco gaseoso. Glu. Fenil Alanina. Todo esto aún retiene mucho nitrógeno. aunque pese a este su uso está muy extendido. . Las peptonas pueden tener dos orígenes: 1. El glucógeno y la triohalosa se hidrolizan a glucosa durante la producción del extracto. Contiene aminoácidos.Proteínas animales: Caseína. • . sales. péptidos. El extracto concentrado tiene un 4% de N y numerosos aminoácidos. Tre. como son: Ala. Val. Pueden ser usadas por muchos microorganismos. • . gelatina. Ile. semillas de algodón y girasol.Proteínas vegetales: Semillas de cacahuete.Peptonas. aun siendo subproductos de otras industrias. Met y Cis. harina de soja.

Extracto de levadura .

.

. Su dosificación es necesario regularla en relación con las concentraciones óptimas de las sustancias más importante en determinado cultivo. Como lo demuestra la práctica. sino de toda la composición del medio. • La influencia de las fuentes de N depende espontáneamente no sólo de la fuente de N.Sustancias minerales que contienen N • Frecuentemente se utilizan sales del ácido sulfúrico. por eso con la utilización de N en el medio se van a acumular aniones y aumentará la acidez del medio . el sulfato de amonio es el mejor para la biosíntesis de varios compuestos. La necesidad de los microorganismos en el medio de S y P es menor que el N. En las sustancias que contienen N amoniacal. Para evitar esto en el procesos de cultivo de los microorganismos en el medio se agrega carbonato de calcio o se lleva a titulación con soda. el ión amonio se encuentra en combinación con el anión de algún ácido por ejemplo: sulfúrico o fosfórico. Para cada cepa productora este valor será diferente. clorhídrico y nítirico. Un significativo valor tiene la relación de las cantidades de N y C existentes en el medio.

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO INDUSTRIALES .

.

. A esta temperatura no ocurre la descomposición de los componente termolábiles del medio.• Para la preparación de un medio nutritivo a nivel industrial primero se disuelve el azúcar o sales. El concentrado del medio de cultivo. luego se suspenden los componentes no solubles como las harinas o carbonato de calcio. que viene a ser la tercera parte del volumen necesario. Partículas grandes no disueltas pueden conservar microorganismos patógenos. La preparación de medios más concentrados dan lugar a la posibilidad de utilizar mezcladores de menor capacidad. para su disolución final y suspensión se calienta con vapor hasta 70-80 °C. La condición necesaria para una esterilización exitosa del medio de cultivo es la homogenización de sus componentes sólidos y su disolución. que posee un sistema de difusión para el ingreso de vapor . los que pueden infectar al medio de cultivo. La velocidad de disolución de las sustancias en el líquido es proporcional a la potencia del mezclador . Para la aceleración estos procesos se realizan en aparatos pequeños con agitadores y luego las soluciones se mezclan en un tanque con fondo plano. La materia prima que contienen almidón previamente se homogeniza con poca agua. Estos deben estar suministrados con tabiques corta-corrientes.

.

.

ESTERILIZACION DE MEDIOS DE CULTIVO INDUSTRIALES .

Esterilización periódica .

Esterilización contínua .

Esterilizador (sectores de mantenimiento y enfriamiento) .

Esterilizador tipo columna .

Variación de temperatura de un volumen de sustrato durante la esterilización .

En condiciones comunes los medios nutritivos se le mantiene a la temperatura de esterilización durante 30 a 40 minutos. entonces esta operación se puede realizar en el biorreactor. se ha establecido que la más adecuada y económica es mantener la temperatura a 121°C. . lo cual corresponde a la presión de vapor saturado de 100 KPa.• Si es necesario someter al medio a una esterilización cíclica. Para esto el medio y la maquinaria se esterilizan al mismo tiempo. El ciclo completo de calentamiento mantenimiento y enfriamiento para reactores grandes 63 m3 se realiza en varias horas. Se utiliza el calentamiento combinado con vapor saturado a través de una chaqueta o serpentín. Para la esterilización cíclica.

en estos casos es la temperatura de esterilización de 135°C y el tiempo de mantenimiento es de 5 a 15 min. El uso económico del vapor puede ser alcanzado añadiendo al sistema un nivel un grado de regeneración especial para calentar previamente el medio no esterilizado.. En esto las variaciones químicas que ocurren en el medio. En este sistema se puede alcanzar temperaturas más elevadas . Para los medios libres de partículas sólidas suspendidas el mantenimiento de la temperatura a un nivel de 150-160 °C garantiza una esterilización instantánea. por lo que se les puede no tomar en cuenta. Si es que en el medio existen partículas sólidas suspendidas entonces la temperatura óptima de esterilización debe ser menor ya que se requiere un tiempo adicional para que el calor penetre en el interior de estas partículas. Calentador 3 . .• El esterilizador contínuo está compuesto por secciones:. no son significativas. El más difundido. mantenimiento 4 y enfriador 5. En todos los casos de esterilización contínua el enfriamiento del medio se realiza en intercambiadores de calor del tipo tubo en tubo o por el sistema de placas ( flujo en sentido contrario) y el calentamiento mediante inyección de vapor saturado.

LIMPIEZA Y ESTERILIZACION DEL AIRE .

esterilización del aire .Esquema tecnológico de la limpieza.

Filtros .

.

Son complejos sistemas poco económicos y por la elevada estabilidad de las esporas y conidios a la temperatura elevada y a la radiación ionizada. la preparación y esterilización del medio nutritivo y la preparación de la maquinaria. permite alcanzar uniformidad de la suspensión microbiana. El aire entregado al fermentador. temperaturas elevadas y bajas. en la aireación del líquido de cultivo. radiación ionizada. Se utilizan métodos de limpieza gaseosa o el uso de antisépticos (fenol y mercurio contenidos en compuestos) .no solamente suministra al cultivo en crecimiento: de oxígeno sino que extrae productos gaseosos del metabolismo y el calor fisiológico que segregan los microorganismos en el proceso de desarrollo.• • La obtención de aire comprimido estéril que se entrega en la aireación. de temperaturas altas y bajas y de otros factores son poco útiles. aumenta la velocidad de la transmisión de masa y mezcla del medio nutritivo líquido.son operaciones que determinan los índices de calidad y cantidad del proceso de biosíntesis. por eso la formalización de la maquinaria y el régimen de trabajo dan lugar a exigencias elevadas. radiación ultravioleta. La limpieza y esterilización de aire se logra por varios métodos.999999% de partículas extrañas y de microorganismos de medidas hasta 1 micra. . Durante el desarrollo de los microorganismos en condiciones sumergidas es necesario alimentar en forma contínua de aire estéril a los fermentadores. debe estar limpio en 99. Ejemplos de la utilización industrial de antisépticos. En los procesos de síntesis microbiológica el aire. que ingresa para la aireación.

fermentador con ingreso de aire filtrado .Biorreactor .