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UNIVERSIDAD POLITCNICA

SALESIANA
BIOTECNOLOGA DE LOS
RECURSOSO NATURALES

BIORREMEDIACIN
PRINCIPIOS Y TCNICAS
1

DEFINICIN
La biorremediacin puede ser definida como el

uso de organismos vivos, componentes celulares


y enzimas libres, con el fin de realizar una
mineralizacin o una transformacin parcial, la
humificacin de los residuos o de agentes
contaminantes y una alteracin del estado redox
de metales.

BIORREMEDIACIN
El trmino biorremediacin fue acuado a

principios de la dcada de los '80. Los cientficos


observaron que era posible aplicar estrategias de
remediacin que fuesen biolgicas, basadas en
la capacidad de los microorganismos de realizar
procesos degradativos.

HISTORIA
La Biorremediacin es un proceso natural

desarrollado a lo largo de toda la historia


evolutiva de la Biosfera; como mecanismo de
autodepuracin y de recuperacin de nutrientes,
para mantener los ciclos biogeoqumicos,
responsables del equilibrio de los ecosistemas.
La biorremediacin surge como una rama de la
biotecnologa que busca resolver los problemas
de contaminacin mediante el diseo de
microorganismos capaces de degradar
compuestos que provocan desequilibrios en el
medio ambiente.

HISTORIA
Edad antigua.
Edad media.
La revolucin industrial.
1. Incremento de las fuerzas productivas.
2. Incremento de la poblacin.
3. Incremento del consumo.
4. Creacin de nuevos materiales y servicios.
5. Incremento de los residuos

HISTORIA
Economa de mercado
Globalizacin de la economa.
Problemas ambientales globales

BIORREMEDIACIN
Es similar a la biotecnologa, en general sus

tcnicas son especficas para casos particulares,


porque dependen directamente de las
condiciones del ecosistema a recuperar.
A veces, biorremediar un ambiente contaminado
puede requerir la elaboracin de un
microorganismo genticamente modificado que
sea eficiente slo para ese caso.

COMPONENTES
Contaminantes.
Metodologa de tratamiento.
Microorganismos capaces de biodegradar

xenobioticos.
Metodologas de anlisis
Normas de Bioseguridad de laboratorio.
Normas de Bioseguridad ambiental
Marco Legal

CONTAMINANTES
Lodos industriales.
Lodos y cortes de perforacin.
Lodos del tratamiento de residuos y aguas

residuales.
Pesticidas. rgano clorados y rgano fosforados.
Metales pesados.
Bifenilos Policlorados.
Suelos contaminados con hidrocarburos.
Aguas residuales
9

METODOLOGAS DE
TRATAMIENTO
Aerobias (ex situ, e in situ)
Bioventeo.
Bioaumentacin
Bioestimulacin
Landfarming
Compostaje
En Fase lquida
En Fase de lechada
En fase slida
Fermentacin

10

MICROORGANISMOS
1.
2.
3.

11

Bacterias
Hongos
Algas

BACTERIAS
Pseudomonas, corinebacterias y

micobacterias
Pseudomonas, Achromobacter,
Arthrobacter, Micrococcus, Nocardia,
Vibrio, Acinetobacter,
Brevibacterium,
Corynebacterium,
Flabobacterium,

BACTERIAS
Rhodococcus sp.
Stenotrophomonas maltophilia
Stenotrophomonas sp,
Pseudomonas sp,

14

Bacterias
Pseudomonas, corinebacterias y

micobacterias
Pseudomonas, Achromobacter,
Arthrobacter, Micrococcus, Nocardia,
Vibrio, Acinetobacter,
Brevibacterium,
Corynebacterium,
Flabobacterium,

15

BACTERIAS

CULTIVOS

17

Clasificacin bacteriana

18

VARIEDADES
MORFOLGICAS
Morfologa bacteriana

Esfricas

Bastonadas

Curvas

Micrococos

Bacterias

Vibriones

Sulfobacterias

Diplococos

Bacilos

Espirilos

Ferrobacterias

Sarcinas

Clostridioss

Espiroquetas

Estreptococos

Tetracocoss

19

Estafilococos

Filiformes

Rikettsias

TIPOS Y CRITERIOS DE
CLASIFICACIN BACTERIANA
Tipos de Clasificacin
artificial
natural
Numrica
filogentica: las relaciones se establecen en base

a criterios evolutivos.
Las Caractersticas consideradas son: Caracteres
fenotpicos, Caracteres bioqumicos, Criterios
antignicos y caracteres genticos ( relacin G+C
%, secuencias de ARNr, grado de hibridacin)
20

COLECCIONES DE
CULTIVOS TIPO
Todas las cepas/aislados y especies nuevas son

depositadas en una de estas colecciones, cuya


funcin es la de mantener y distribuir cultivos de
organismos vivos. Algunas son:
CECT: Coleccin Espaola de Cultivos Tipo
(Burjasot, Valencia).
ATCC: American Type Culture Collection.
DSM: Deutsche Sammlung von Mikroorganismen
und Zellkulturen GmbH.

21

BACTERIAS
FOTOSINTTICAS
Existen tres grupos de bacterias Gram-

fotosintticas:
1. Cianobacterias.
2. Bacterias rojas.
3. Bacterias verdes

22

BACTERIAS
FOTOSINTTICAS

23

Caracterstica

Cianobacterias

Bacterias rojas

Bacterias
verdes

Fotosntesis

Oxignica

Anaoxignica

Anaoxignica

Pigmentos

Sin plantas

Especficos

Especficos

Morfologa

Filamentosa y
unicelular

Unicelular

Bacilar y
filamentosa

Motilidad

Inmviles o por
deslizamiento

Por flagelos

Bac. Inmviles
Fil. deslizamiento

Fijacin de CO2

Ciclo de Calvin

Ciclo de Calvin

Ciclo reductor
ATC

Heterotrofia

Escasa

Amplia

Escasa

CIANOBACTERIAS
Gneros:
Sin heterocistes: Oscillatoria y Spirulina
Con heterocistes: Anabaena.

24

BACTERIAS ROJAS
Incluidas en el phylum Proteobacteria.
Unicelulares, mviles por flagelos.
Metablicamente
muy verstiles
Bacterias rojas del azufre: Chromatium
Bacterias rojas no del azufre: Rhodospirillum y
Rhodobacter.

25

BACTERIAS VERDES
Pequeo grupo de bacterias similares fisiolgica,
nutricional y ecolgicamente a las bacterias rojas.
Bacterias verdes del azufre
Phylum Chlorobi. Fotoauttrofos anaerobios.
Gen. Chlorobium.
Bacterias verdes no del azufre
Phylum Chloroflexi. Gn. Chloroflexus
(fotohetertrofo, pudiendo ser fotoauttrofo o
quimiohetertrofo de forma facultativa).

26

BACTERIAS
QUIMIOLITTROFAS
Organismos capaces de crecer en un medio

estrictamente mineral y en ausencia de luz,


obteniendo su ATP y poder reductor de la
respiracin de un substrato inorgnico y
utilizando el CO2 como fuente de carbono. Este
tipo de metabolismo es exclusivo de bacterias y
arqueas.
La mayora de las bacterias se incluyen entre las
Proteobacterias.

27

BACTERIAS
QUIMIOLITTROFAS
BACTERIAS NITRIFICANTES
Llevan a cabo la oxidacin biolgica de amoniaco

a nitrito y de ste a nitrato (nitrificacin). Se


subdividen en dos grupos metablicos:
NH4 + a NO2 - Nitrosomonas, Nitrosococcus
NO2 - a NO3 - Nitrobacter, Nitrococcus,
Nitrospira.

28

BACTERIAS
QUIMIOLITTROFAS
OXIDADORES DE AZUFRE
Denominadas bacterias incoloras del azufre. Dos

grandes clases:
Bacterias oxidadoras de H2S con formacin de
depsitos intracelulares de S V.g. : deslizantes
filamentosos, tales como Beggiatoa y Thiothrix.
Bacterias oxidadoras de H2S con formacin de
depsitos extracelulares de S. Pequeo tamao
celular V.g.: Thiobacillus, Thiomicrospira

29

BACTERIAS
QUIMIOLITTROFAS
BACTERIAS DEL HIERRO
Algunas bacterias oxidan Fe(II) a Fe(III) y pueden

formar precipitados pardo-rojizos de xidos o


hidrxidos del mismo. En la mayora de los casos
se trata de quimiohetertrofos que no obtienen
energa del proceso (Vg. bacterias con vaina tipo
Leptothrix).
Slo son verdaderos quimiolitoauttrofos T.
ferrooxidans y Leptospirillum ferrooxidans (Ph
cido, aguas de minas, biolixiviacin) y Gallionella
(aguas dulces, pH neutro).
30

BACTERIAS GRAMAEROBIAS
Metabolismo respiratorio aerobio (todas son

catalasa +). Si son mviles, lo son por flagelos.


Estas bacterias pueden oxidar prcticamente
cualquier tipo de substrato orgnico como fuente
de C y E. Clsicamente los gneros se
establecan en funcin de la morfologa celular y
la insercin de los flagelos. Hoy en da estn
distribuidas entre las alfa, beta y gamma
Proteobacterias.

31

BACTERIAS GRAMAEROBIAS
PSEUDOMONAS Y GRUPOS AFINES.
La antigua familia Pseudomonadaceae (inclua a

las bacterias Gram- quimiohetertrofas aerobias


que presentan flagelos con insercin polar) hoy
est distribuida entre:
Proteobacteria:
orden Burkholderiales
fam. Burkholderiaceae, gen. Burkholderia, v.g. B.
cepacia.
fam. Comamonadaceae, gen. Comamonas.
32

BACTERIAS GRAMAEROBIAS
En esta fam. se incluyen tambin las bacterias

con vaina filamentosas Sphaerotilus y Leptothrix.


Orden Rhodocyclales, gen. Zooglea, v.g. Z.
ramigera.
Proteobacteria:
Orden Pseudomonadales, fam.
Pseudomonadaceae, gen. Pseudomonas, v.g. P.
putida, P. aeruginosa.

33

BACTERIAS FIJADORAS DE
NITROGENO
RIZOBIOS (Orden RHIZOBIALES)
Bacterias quimiohetertrofas aerobias Gram- con

34

flagelacin subpolar o, por degeneracin,


peritrica. Gns. Rhizobium (V.g. R.
leguminosarum:, R. melitoti) y Bradyrhizobium.
Gn. Agrobacterium (V.g. A. tumefaciens).
AZOTOBACTERIAS (actualmente incluidas en la
Fam. Pseudomonadaceae)
Fijan N2 en condiciones de crecimiento aerobio y
vida libre. Frecuentes en suelos y aguas de
regiones templadas.
Gns.: Azotobacter , Azomonas.

BACTERIAS GRAM ANAEROBIAS FACULTATIVAS


Existe dos familias: Fam. Enterobacteriaceae.

Fam. Vibrionaceae. Las bacterias coliformes


como ndice de contaminacin fecal.
Enterobacteriaceae, est constituido por 40
gneros entre los que podemos citar:
Escherichia, Salmonella, Shigella, (bacterias
coliformes intestinales), Enterobacter, Serratia,
Proteus (de suelos y aguas) y Yersinia (patgeno
de animales).

35

BACTERIAS GRAM ANAEROBIAS FACULTATIVAS


Orden Vibrionales, fam. Vibrionaceae. Muy

similares a los anteriores pero con flagelacin


polar, forma curva y oxidada +. Acuticas.
Gneros: Vibrio, hotobacterium.
Algunas especies de Vibrio y Photobacterium son
bioluminiscentes, pudiendo ser utilizadas como
biosensores y en analtica para detectar
contaminacin en aguas.

36

BACTERIAS GRAMANAEROBIAS
I. BACTERIAS FERMENTADORAS
Anaerobias estrictas, metabolismo

exclusivamente fermentativo. Grupo filogentico


independiente (Phylum Bacteroidetes, gen.
Bacteroides; Phylum Fusobacteria, gen.
Fusobacterium).

37

BACTERIAS GRAMANAEROBIAS
II. BACTERIAS REDUCTORAS DEL AZUFRE /

SULFATORREDUCTORAS
Anaerobios estrictos. Obtienen su energa
mediante respiracin anaerobia (utilizan SO42- o
S0 como aceptor de e-). Incluidas en las
proteobacterias.
Hbitat: sedimentos anaerobios.
Gneros: Desulfovibrio, Desulfobacter SO42-.
Desulfuro monas S0
38

BACTERIAS GRAMPOSITIVAS
I: UNICELULARES FORMADORES DE

ENDOSPORAS
Aerobios: gen. Bacillus. La mayora de las
especies son saprfitas y se encuentran en el
suelo (mayoritarios), agua, aire y vegetacin,
siendo importantes agentes mineralizadores de
la materia orgnica.
B. subtilis, B. cereus , B. anthracis, B.
thuringiensis (insecticida biolgico contra orugas
y mosquitos), B. stearothermophilus (indicador
biolgico esterilizacin autoclave, compostaje.
39

BACTERIAS GRAMPOSITIVAS
Anaerobios: gen. Clostridium. Grandes, a veces

pleomorfos. Esporas deformantes (centrales o


terminales). Habitantes del suelo, incluyendo
algunas especies patgenas (exotoxina, sin
capacidad invasiva).
C. botulinum, C. tetani, C. perfringes, C.
pasteurianum (fija N2 atmosfrico), C. butiricum
y C. acetobutilycum.

40

BACTERIAS GRAM-POSITIVAS
II: UNICELULARES NO ESPORULANTES:

BACTERIAS DEL CIDO LCTICO


Fam I. Lactobacillaceae
Gen. Lactobacillus (bacilos regulares). V.g. L.
bulgaricus, L. lactis, L. brevis, L. salivarus
Fam. IV. Enterococcaceae
Gen. Enterococcus (E. faecalis)

41

BACTERIAS GRAM-POSITIVAS
Fam. V. Leoconostocaceae
Gen. Leuconostoc
Fam. VI. Streptococcaceae
Gens. Streptococcus (S. pneumoniae , S.

pyogenes); Lactococcus (L. lactis, L.


cremoris)

42

BACTERIAS GRAM-POSITIVAS
III: ACTINOMICETES
ACTINOBACTERIAS Y MICROCOCOS. Escaso o

43

nulo desarrollo miceliar. Son saprfitas del suelo


donde actan como importantes agentes
mineralizadores (Arthrobacter) o forman parte de la
biota normal (Micrococcus, Actinomyces).
CORINEBACTERIAS.
C. diphteriae, agente de la difteria. Mycobacterium:
M. tuberculosis y M. leprae son los agentes
causales de la tuberculosis y la lepra.
Nocardia. Micelio fragmentario. Saprfitas del
suelo donde degradan muchos compuestos.

ARQUEAS
En base a sus caractersticas fisiolgicas y

ecolgicas se subdividen en tres grupos:


1. Metangenas: ocupan ambientes anaerobios
y su nico modo de obtener E es mediante la
formacin de CH4
2. Halfilas extremas: viven en ambientes
hipersalinos
3. Termfilas S-dependientes: ocupan Hbitat
extremadamente calientes y, en ciertos casos,
tambin muy cidos.
44

ARQUEAS
METANOBACTERIAS
Methanobacteriales, v.g. Methanobacterium
Methanococcales, v.g. Methanococcus
Methanomicrobiales, v.g. Methanospirillum
Methanosarcinales, v.g. Methanosarcina,

Methanosaeta

45

ARQUEAS
ARQUEOBACTERIAS HALOFILAS EXTREMAS
Quimioorgantrofos, aerobios. Hbitat: salinas,

lagos naturales extremadamente salinos (250400 g/l sal, elevada intensidad lumnica, bajo
contenido en O2).
Orden Halobacteriales, fam. Halobacteriaceae,
gens. Halobacterium, Halococcus,
Natronobacterium.

46

ARQUEAS
ARQUEOBACTERIAS TERMOFILAS

DEPENDIENTES DEL AZUFRE.


Todas obtienen energa reduciendo u oxidando
azufre. Son quimiolitoauttrofas, mixtrofas o
hetertrofas.
Thermococcus.
Thermoproteus, Desulfurococcus.
Sulfolobus, Acidianus.

47

Bacterias Gram negativas


Bacillus cereus

48

Bacterias Gram positivas


Serratia marcescens.

49

Pared celular Gram


negativa

50

Pared celular Gram


positiva

51

Mecanismos de
asimilacin

52

Macro y micronutrientes
Elemento

53

% en peso seco

Fuente
Macronutrientes
Componentes orgnicos o CO2

Funcin
Constituyentes del material celular

Carbono

50

Oxgeno

20

H2O, componentes orgnicos, CO2, Constityentes del material celular y agua


celular, el O2 es el aceptor de electrones
y O2
de la respiracin aerbica.

Nitrgeno

14

NH3, NO3, componentes orgnicos, Constituyentes de los amino cidos,


cidos nuclicos, nucleotidos, y
N2
coenzymas

Hidrgeno

H2O, componentes orgnicos, H2

Constituyentes de compuestos
orgnicos, aua celular. Tambin
importantes en la generacin de energa
como protones..

Fsforo

Fosfato inorgnico (PO4)

Constituyentes de cidos nuclicos,


nucleoidos, fosfolpidos, LPS, cidos
teichoicos.

Sulfuro

Micronutrientes
SO4, H2S, So, compuestos orgnicos Constituyentes de cysteina, methionina,
glutathione y varias coenzymas
sulfurados.

Potasio

Sales de potasio

Como cationes inorgnicos celulares y


cofactor de ciertas enzymas.

Magnesio

0.5

Sales de magnesio

Catin celular inorgnico, cofactor de


ciertas reacciones enzymticas.

Calcio

0.5

Sales de calsio

Catin celular inorgnico, cofactor de


ciertas enzymas y componenete de
endosporas.

Hierro

0.2

Sales de hierro

Componente de cytochromos y otras


protenas ademps de cofactor de varias
reacciones enzymticas.

Elementos traza
Elemento

54

Ejemplo de funcin

Cobalt

Parte de la vitamina B12, que es usada


para transportar grupos metilo.

Zinc

Rol estructural en muchas enzymas,


incluido AND polimerasa.

Mo

Ciertas reacciones relacionadas con la


asimilacin de nitrgeno. Componente
de nitrato reductasa y nitrogenasa.

Cu

Rol cataltico en varias enzymas, que


reaccionan con el oxgeno, por ejemplo;
Citocromo oxidasa.

Mn

Requerida por numerosas enzymas en


sus centros catalticos. Ciertas enzymas
fotosintticas usan Mn, para
fragmentar al agua en oxgeno e
hidrgeno.

Ni

Enzymas ligadas al metabolismos del


monxido de carbono, metabolismo de
la rea y metanognesis.

Medio de cultivo para


Cyanobacterias
Componente

55

g/litro

Propsito

MgSO47H2O

0.075

Fuente de magnesio y azufre

CaCl22H2O

0.036

Fuente de calsio

NaCl

1.000

Fuente de sodio

K2HPO4

0.030

Fuente de potasio y fosfato

NaCO3

0.020

Fuente de carbono

Citrato de amonio frrico

0.006

Fuente de Hierro

Mezcla e micronutrientes

1 ml

Fuente de micronutrientes

Na2EDTA2H2O*

0.001

Agente quelante para prevenir la


mineralizacin durante la
esterilizacin.

cidos ctrico

0.006

Agente quelante para prevenir la


mineralizacin de los reactivos
durante la esterilizacin.

Mezcla de
microelementos

56

Componente

g/litro

H3BO3

2.86

MnCl24H2O

1.81

ZnSO47H2O

0.22

NaMoO42H2O

0.39

CuSO45H2O

0.079

Co(NO3)26H2O

0.049

Medio de aislamiento para


pseudomonas
Component

57

grams/liter

Purpose

Succinic acid

5.0

Carbon source. This source can not


be used by fermenting microbes

Na2HPO412H2O

6.0

Buffer to maintain pH, source of


phosphorous

KH2PO4

2.4

Buffer to maintain pH, source of


phosphorus and potassium

NH4Cl

1.0

Source of nitrogen

MgSO47 H2O

0.5

Source of magnesium and sulfur

CaCl26H2O

0.01

Source of calcium

FeCl36H2O

0.01

Source of iron

Agar

15.0

Solidifying agent

HONGOS
Penicillum
Aspergillum
Mucor
Candida,
Rhodotorula
Sporobolomyces
Phanerochaetes
Chrysosporium

HONGOS
Hongo ligninoltico Stereum hirsutum.

59

ALGAS
Ulva
Chlamidomonas
Nostoc
Anabaena

ANABAENA

NOSTOC

Plantas
Pasto elefante
Esterilla.
Junquillo
Totora
Kikuyo
Lenteja de agua
Nenfar
Lirio de agua

63

Plantas acuticas

64

Plantas de pantano

65

CAMPOS DE APLICACIN
Tratamiento de residuos industriales
Tratamiento de metales pesados
Minera
Tratamiento de suelos contaminados con

pesticidas e hidrocarburos.
Tratamiento de residuos agroindustriales.
Generacin de energa.
Tratamiento de aguas residuales urbanas

66

CAMPOS DE APLICACIN
Tratamiento de residuos industriales
Tratamiento de metales pesados
Minera
Tratamiento de suelos contaminados con

pesticidas e hidrocarburos.
Tratamiento de residuos agroindustriales.
Generacin de energa.
Tratamiento de aguas residuales urbanas

67

MTODOS EN MICROBIOLOGIA I. AISLAMIENTO Y


CULTIVO DE MICROORGANISMOS
PRINCIPIOS DE NUTRICIN MICROBIANA y

MEDIOS DE CULTIVO
Para crecer los microorganismos en el laboratorio
se emplean medios de cultivo. Estos deben de
poseer todas los nutrientes necesarios a las
concentraciones adecuadas para permitir el
crecimiento del microorganismo en cuestin. La
materia viva est compuesta por:
- C, O, N, H, P, S, K, Na, Ca, Mg (98%)
- Cl, Fe, Mn, Co, Cu, Mo y Zn,
68

MTODOS EN MICROBIOLOGIA I. AISLAMIENTO Y


CULTIVO DE MICROORGANISMOS
por lo que todos estos elementos deben estar

disponibles para el microorganismo. Repasar


forma de aportar los principales macronutrientes
(C, O, N, P, S).

69

Definiciones bsicas
Medio sinttico o definido: compuesto por

nutrientes qumicamente definidos.


Medio complejo o indefinido: contiene
ingredientes de composicin desconocida
(v.g.: extracto de levaduras).
Prototrofa: capacidad para sintetizar todos
los compuestos orgnicos que se necesitan a
partir de la principal fuente de carbono.
Auxotrofa: incapacidad de sintetizar algn
compuesto (v.g.: vitaminas).
70

FACTORES QUE INCIDEN


Concentracin de contaminantes
Disponibilidad de carbono y nutrirntes (NPK)
Temperatura
pH
Humedad
Conductividad
Aireacin
Estimulantes
Metales pesados
Estructura del residuo y del suelo
Tipo de residuo
71

Temperatura
Temperatura
Determina la velocidad de crecimiento y puede

tambin ser determinante sobre el tipo de


microorganismos que ocupan un ecosistema. La
velocidad de una reaccin qumica es
funcin de la temperatura, y sigue la Ley de
Arrhenius:
Log10 V= - AH + C

2.303RT

72

Efecto de la temperatura

73

Mnimos, ptimos y mximos


de temperatura
Bacterias

74

Habitat

Mnimo

ptimo

Mximo

Listeria monocytogenes

Animales, suelo, vegetacin,


agua

30-37

45

Vibrio marinus

Ocano abierto

15

30

Stenotrophomonas
maltophilia

Suelo

35

41

Thiobacillus novellus

Sitios donde existe sulfuro


reducido (muchos sitios)

25-30

42

Staphylococcus aureus

Piel

10

30-37

45

Escherichia coli

Intestinos

10

37

45

Clostridium perfringens

Suelo , alimentos

15

45

55

Streptococcus pyogenes

Membranas mucosas

20

37

40

Anoxybacillus flavithermus

Heiseres

30

60

72

Thermus aquaticus

Fuentes clidas

40

70-72

79

Methanococcus jannaschii

Fuentes hidro-termales

60

85

90

Sulfolobus acidocaldarius

Fuentes de sulfuro calientes y


reducidas

70

75-85

90

Pyrobacterium brockii

Fuentes hidrotermales

80

102-105

115

Methanopyrus kandleri

Fuentes hidrotermales

85

100

110

OXGENO
De acuerdo a su respuesta frente al O2 las

bacterias se clasifican como:


Aerobias: dependen del O2- . Microaerfilas:
prefieren concentraciones bajas (2% ).
Anaerobias facultativas: utilizan O2 si est
presente, pero pueden crecer en su ausencia
Anaerobias: no pueden utilizar O2 . Pueden
ser:
estrictas: el O2 es txico
aerodricas o aerotolerantes: toleran el O2.
75

Efecto del oxgeno

76

Relacin de los
microorganismos con el
oxgeno
Organismo

77

Habitat

Relacin de oxgeno

Sulfolobus acidocaldarius

Fuentes calientes de sulfuro

Strict aerobe

Acinetobacter calcoaceticus

Piel

Strict aerobe

Bifidobacterium bifidum

Intestinos humanos

Strict anaerobe

Methanosarcina barkeri

Agua fresca, sedimentos marinos,


digestores anaerbicos.

Strict anaerobe

Magnetospirillum
magnetotacticum

Agua fresca y marina

Microaerophile

Campylobacter jejuni

Superficies mucosas de animales y


aves

Microaerophile

Bacillus licheniformis

Ubiquitous

Facultative anaerobe

Enterobacter aerogenes

Intestinos de animales , que


consumen alimentos calientes, agua
fresca.

Facultative anaerobe

Vibrio fischeri

Agua marina, rganos luminosos de


varias especies marinas.

Facultative anaerobe

Lactobacillus acidophilus

Animalse y plantas que fermentan


alimentos.

Aerotolerant anaerobe

pH
Debe ser adecuado y mantenerse durante todo el

perodo de crecimiento. La fermentacin de


carbohidratos libera c. orgnicos al medio, con
la consiguiente acidificacin y detencin del
crecimiento. La utilizacin de protenas libera
NH4 + al medio produciendo su alcalinizacin.

78

Influencia del pH

79

Influencia del pH
Organismo

80

Habitat

Mnimo pH

ptimo pH

Mximo pH

Thiobacillus
thiooxidans

Areas ricas en sulfuro,


frecuentemente cidos

0.5

2.0-2.8

4.0-6.0

Sulfolobus
acidocaldarius

Fuentes de cidos sulfrico

1.0

2.0-3.0

5.0

Bacillus acidocaldarius

Fuentes calientes
acidificadas

2.0

4.0

6.0

Zymomonas lindneri

Ambientes con alta


concentracin de azcares

3.5

5.5-6.0

7.5

Lactobacillus
acidophilus

Animales, plantas, Roca


degradada

4.0-4.6

5.8-6.6

6.8

Staphylococcus aureus Superficie de animales,


cavidad nasal, piel.

4.2

7.0-7.5

9.3

Escherichia coli

Intestinos de animales

4.4

6.0-7.0

9.0

Clostridium
sporogenes

Suelos y sedimentos que son


anaerbicos.

5.0-5.8

6.0-7.6

8.5-9.0

Erwinia caratovora

Patgenos vegetales

5.6

7.1

9.3

Pseudomonas
aeruginosa

Cosmopolitas

5.6

6.6-7.0

8.0

Streptococcus
pneumoniae

Patgenos de animales

6.5

7.8

8.3

Nitrobacter spp.

Cosmopolitas

6.6

7.6-8.6

10.0

Concentracin de sales

81

Halo-tolerancia
Organismo

82

Habitat

Minimo de actividad
acuosa para el
crecimiento

Caulobacter

Agua fresca y
marina diluida

1.00

Pseudomonas

Ambientess con bajo


nivel salino

0.91

Salmonella/E. coli

Animales

0.91

Lactobacillus

Animales y plantsa

0.90

Bacillus

Suelo

0.90

Staphylococcus

Animales

0.85

Halobacterium

Lagos salados, mar


muerto

0.75

OTROS FACTORES
Potencial redox
Radiacin electromagntica
CO2
Presencia de agua lquida
Presin atmosfrica, hidrosttica y osmtica.

El desarrollo de los microorganismos (cmo de


cualquier ser vivo) se rige por dos principios:
Ley del Mnimo de Liebig (1840).
Ley de la Tolerancia de Shelford.
83

AISLAMIENTO
Para trabajar con un microorganismo en

condiciones definidas en el laboratorio es


necesario primero proceder a su aislamiento, es
decir a separarlo del resto de las poblaciones con
las que coexiste en la naturaleza.
Para el aislamiento se de organismos utilizan
medios slidos (agar. Ventajas) o lquidos.

84

MEDIOS SLIDOS
Siembra (extensin o vertido) en placa.
Separacin e inmovilizacin de organismos de

forma individualizada en un medio nutritivo


slido.
Cada individuo al multiplicarse origina una
colonia.
Mtodo: diluciones consecutivas de la muestra.

85

MEDIOS LQUIDOS
Solo utilizable para aislar la especie

predominante en un cultivo mixto. Mtodo de la


dilucin lmite.

86

MEDIOS SELECTIVOS
Medios que favorecen el crecimiento de un

microorganismo especfico. Se emplean cuando


el organismo que quiere aislarse se encuentra en
forma minoritaria. Pueden utilizarse para:
Enriquecer: medios lquidos que tienden a
seleccionar los organismos de tasa de
crecimiento ms elevada entre todos aquellos
que pueden hacerlo bajo las condiciones
impuestas

87

MEDIOS SELECTIVOS
Aislar directamente: medios slidos que permiten

aislar colonias. Suelen llevar un inhibidor que


impide el desarrollo de los dems
microorganismos.

88

CUANTIFICACIN DE
MICROORGANISMOS
Recuento de viables.
Se utiliza una tcnica similar al aislamiento en

placa: diluciones seriadas y siembra en placas


(30-300 bacterias/placa).
Recuento de totales.
Medida del nmero de clulas:
1. Directo mediante microscopio (cmaras de
recuento de Newbaver).
2. Contador electrnico de partculas (contador de
Coulter)
89

CUANTIFICACIN DE
MICROORGANISMOS
Medida de la masa celular.
Turbidimetra (densidad ptica). Se utiliza un

colormetro (Repasar la ley de Lamber- Beer:


A=ebC, o log Ii/It = k*C). Es el mtodo ms
utilizado.
Peso seco

90

Ecosistemas microbianos

91

Fuentes termales marinas

92

CINTICA MICROBIANA
CRECIMIENTO MICROBIANO
El crecimiento de clulas, microorganismos,

clulas vegetales y animales, puede mirarse


bajo dos aspectos o tipos de crecimiento
reproductivo.
a) Clulas individuales o poblacin de
clulas en crecimiento sincronizado para
estudio del ciclo de vida celular. Procesos en
laboratorio.
b) Divisin estocstica de la poblacin, o
divisin al azar.

CINTICA MICROBIANA
MEDICIN DEL CRECIMIENTO MICROBIANO .
El clculo del nmero de clulas que

existen en una suspensin se puede llevar


a cabo mediante el recuento celular
(microscopa, nmero de colonias), masa
celular (peso seco, medida del nitrgeno
celular, turbidimetra) o actividad celular
(grado de actividad bioqumica con relacin
al tamao de la poblacin). Todos estos
mtodos se clasifican en dos apartados:
mtodos directos y mtodos indirectos.

CINTICA MICROBIANA
Mtodos directos:
Recuento del nmero de clulas en

una cmara Thoma


Peso seco celular
Determinacin de nitrgeno o de
protenas totales
Determinacin de DNA

CINTICA MICROBIANA
Mtodos indirectos:
Recuento de colonias en placa
Recuento sobre filtro de membrana
Consumo de oxgeno
Liberacin de dixido de carbono
Concentracin de un enzima constitutivo
Decoloracin de un colorante
Incorporacin de precursores radiactivos
Medida de la turbidez

CINTICA MICROBIANA
El peso seco (contenido de slidos) de las clulas

bacterianas que se encuentran en una suspensin


se obtiene por el secado de un volumen en un
horno a 105C hasta peso constante. Esta tcnica
es til para grandes volmenes de muestra, debido
a que diferencias del orden de los miligramos
representan el peso de un gran nmero de
bacterias. La desventaja de este mtodo es que
componentes voltiles de la clula pueden perderse
por el secado y puede existir alguna degradacin.
Tambin la muestra seca puede recobrar humedad
durante el pesado, principalmente si el ambiente
tiene una humedad relativa alta.

CINTICA MICROBIANA
PESO ESPECFICO ANHIDRO:
0 =

Peso anhidro
Volumen Anhidro
PESO ESPECFICO A H% DE HUMEDAD
k =
Peso al H% de humedad
Volumen al H% de humedad
Cuando la humedad es del 12 %,se llama
peso especfico normal

CINTICA MICROBIANA
ABSORCIN:
Cuando un haz de luz paralelo (colimado) golpea una

partcula en suspensin, parte de la luz es reflejada, parte


es diseminada, parte es absorbida y parte es transmitida.
La nefelometra mide la luz dispersada por una solucin de
partculas. La turbidimetra mide la luz dispersada como un
decrecimiento de la luz transmitida a travs de la solucin.
Con relacin a la longitud de onda y al tamao de la
partcula pueden existir tres tipos de dispersin.
Los mtodos de dispersin de la luz son las tcnicas ms
utilizadas para monitorear el crecimiento de los cultivos
bacterianos. Son muy tiles y poderosos pero pueden llevar
a resultados errneos. Principalmente, dan informacin
sobre el peso seco (contenido macromolecular).

CINTICA MICROBIANA
Turbidimetra: La turbidimetra mide la reduccin

de la transmisin de luz debido a partculas de una


suspensin y cuantifica la luz residual transmitida.

Absorbancia en funcin del Peso Seco

CINTICA MICROBIANA
Absorbancia = K x Peso Seco

K: constante que vara con la longitud de


onda utilizada y representa la inversa del
peso seco del microorganismo que produce
un aumento de 10 veces en el valor de la
absorbancia(1/W0).
Peso seco: Concentracin celular
bacteriana expresada en unidades de peso
seco (g/ml-mg/ml).

CINTICA MICROBIANA
RECUENTO MICROSCPICO:
Es una tcnica comn, rpida y barata que utiliza

un equipamiento fcilmente disponible en un


laboratorio de microbiologa. Para estos recuentos
se utilizan generalmente cmaras de recuentos,
aunque tambin pueden realizarse a partir de
muestras filtradas en membranas y
transparentizadas o teidas con colorantes
fluorescentes (Naranja de acridina).
Las cmaras ms utilizadas son las de Hawksley y
la de Petroff-Hausser. La primera tiene la ventaja
que puede ser utilizada con objetivos de inmersin,
aunque la mayora de los recuentos se realizan con
objetivos secos.

CINTICA MICROBIANA
Cmara de recuento de Petroff-Hausser

CINTICA MICROBIANA
Recuento de microorganismos.

Tipo de cuadro

Area
[cm2]

Volumen
[ml]

Factor
[1/Volumen]

Cuadrado total

1.00 x 10-2

2.00 x 10-5

5.00 x 104

Cuadrado grande

4.00 x 10-4

8.00 x 10-7

1.25 x 106

Cuadrado pequeo

2.50 x 10-5

5.00 x 10-8

2.00 x 107

CINTICA MICROBIANA
CINTICA DE CRECIMIENTO DE UN CULTIVO

INTERMITENTE

CINTICA MICROBIANA
(1) La fase logartmica, en la que el
microorganismo se adapta a las nuevas condiciones
y pone en marcha su maquinaria metablica para
poder crecer activamente. La duracin de esta fase
es variable y en general es mayor cuanto ms
grande sea el cambio en las condiciones en las que
se encuentra el microorganismo.
(2) La fase exponencial.
(3) La fase estacionaria, en la que no hay aumento
neto de microorganismos, lo que no significa que no
se dividan algunos, sino que la aparicin de nuevos
individuos se compensa por la muerte de otros.
(4) La fase de muerte, en la que el nmero de
microorganismos vivos disminuye de forma
exponencial con una constante k que depende de
diferentes circunstancias.

CINTICA MICROBIANA
EFECTO DE LA CONCENTRACIN DE SUSTRATO .
la generacin del producto se mantiene

constante mientras la concentracin del


sustrato no sea limitante. Esto se definira como
[ES] =
[Et] [S]
[S] + (k2 + k -1) / k1
La velocidad inicial de la reaccin est
determinada por
v = k2 [ES]
Si definimos KM como (k2 + k -1) / k1 y Vmax
como k2 [Et], obtenemos que
v = Vmax [S] / KM + [S]
Esta es la ecuacin de Michaelis-Menten.

CINTICA MICROBIANA
Estos ltimos dos parmetros son

importantes, porque nos dan informacin


directa sobre cun bien el microorganismo
se une al sustrato (KM) y sobre cun bien el
microorganismo convierte el sustrato en
producto una vez se une (Vmax). De hecho,
KM es la constante de disociacin dinmica
del microorganismo con el sustrato, y Vmax
es la concentracin molar del
microorganismo por la constante cataltica
(Kcat).

CINTICA MICROBIANA
RELACIONES MATEMTICAS:
En un cultivo esttico con crecimiento

exponencial el tiempo de generacin celular


es equivalente al tiempo de generacin del
cultivo y viene dado por 1/k. En un
quimiostato, el tiempo de generacin en
cultivo es la inversa del ritmo de crecimiento
instantneo de un cultivo, el cual se expresa
por la siguiente ecuacin diferencial:
dx = x

= 1 dx
dt

x dt

CINTICA MICROBIANA
Donde x es el nmero de clulas o la

concentracin del organismo (miligramos de


peso seco por mililitro) a un tiempo t, y es el
ritmo o velocidad de crecimiento instantneo.
Con la integracin de la ecuacin anterior
entre los lmites xo y xt, se obtienen la
siguiente ecuacin:
ln xt -ln xo = t
o, como se expresa generalmente la solucin,
Xf = x o e

CINTICA MICROBIANA
Puesto que xf es tambin igual a 2kt xo, la

relacin entre k y puede derivarse


combinando las dos ecuaciones:
Xo e t = 2kt xo
Suprimiendo los factores comunes, tomando
logaritmo natural y despejando , se obtiene:
= k(ln 2) = 0.693 k
As, se puede calcular , el ritmo de
crecimiento instantneo para un quimiostato,
multiplicando k por 0.693

TCNICAS EXISTENTES
Aerobias (ex situ, e in situ)
Bioventeo.
Bioaumentacin
Bioestimulacin
Landfarming
Compostaje
En Fase lquida
En Fase de lechada
En fase slida
Fermentacin
112

TIPOS DE BIORREMEDIACIN
Tratamiento anarobio. En ausencia de oxgeno,

produce gases indeseables como: metano,


amonaco, gas sulfhdrico, mercaptanos.
Tratamiento aerobio. En presencia de oxgeno,
produce gas carbnico, vapor de agua y
compuestos simples inertes.

TECNICAS
In situ. Son las aplicaciones en las que el suelo

contaminado
es
tratado,
o
bien,
los
contaminantes son removidos del suelo
contaminado, sin necesidad de excavar el sitio.
Es decir, se realizan en el mismo sito en donde
se encuentra la contaminacin.

TECNICAS
Ex situ.La realizacin de este tipo de tecnologas,

requiere de excavacin, dragado o cualquier otro


proceso para remover el suelo contaminado
antes de su tratamiento que puede realizarse en
el mismo sitio (on site) o fuera de l (off site).

TRATAMIENTO

VENTAJAS

DESVENTAJAS

BIOLGICO

Son efectivos en cuanto a costos


Son tecnologas ms benficas para el
ambiente
Los contaminantes generalmente son
destruidos.
Se requiere un mnimo o ningn
tratamiento posterior

Requieren mayores tiempos de


tratamiento
Es necesario verificar la toxicidad de
intermediarios y/o productos
No pueden emplearse si el tipo de
suelo
no
favorece
el
crecimiento
microbiano

FISICO-QUIMICO

Son efectivos en cuanto a costos


Pueden realizarse en periodos cortos

El equipo es accesible y no se
necesita de mucha energa ni ingeniera

Los residuos generados por tcnicas


de
separacin,
deben
tratarse
o
disponerse: aumento en costos y
necesidad de permisos

Los fluidos de extraccin pueden


aumentar
la
movilidad
de
los
contaminantes: necesidad de sistemas de
recuperacin

TRMICO

Permite tiempos rpidos de limpieza

Es el grupo de tratamientos ms
costoso

os costos aumentan en funcin del


empleo de energa y equipo
Intensivos en mano de obra y capital

RUTAS
Las

rutas de biodegradacin de los


contaminantes orgnicos, varan en funcin
de la estructura qumica del compuesto y de
las especies microbianas degradadoras. El
proceso
de
biorremediacin
incluye
reacciones de oxido-reduccin, procesos de
sorcin e intercambio inico, e incluso
reacciones de acomplejamiento y quelacin
que resultan en la inmovilizacin de metales

Tratamientos aerobios
Compostaje
Biopilas.
Bioventeo
Landfarming en plataforma cubierta
Landfarming en campo abierto.
Fitorremediacin
Piscinas
Reactores

COMPOSTAJE
Proceso biolgico controlado, por el cual

pueden tratarse suelos y sedimentos


contaminados con compuestos orgnicos
biodegradables, para obtener subproductos
inocuos estables. El material contaminado se
mezcla con agentes de volumen que son
sustancias orgnicas slidas biodegradables,
adicionadas para mejorar el balance de
nutrientes, as como para asegurar una mejor
aireacin y la generacin del calor durante el
proceso.

BIOPILAS
Son una forma de composteo en el cual,

adems de agentes de volumen, el sistema


se adiciona con agua y nutrientes, y se coloca
en reas de tratamiento (que incluyen alguna
forma de aireacin y sistemas para colectar
lixiviados). Las pilas de suelo generalmente
se cubren con plstico para controlar los
lixiviados, la evaporacin y la volatilizacin de
contaminantes, adems de favorecer su
calentamiento.

Limpieza de suelos con


hidrocarburos
SUELO

Retiro material
grueso

Lavado

Retiro del
suelo
contaminado

Lavado del suelo

Hidrocarburo

Destruccin
trmica

121

Rehabilitacin
de espacios
degradados

Bombeo de
agua

Tendido de
suelos tratados

Agua

Tratamiento

Adicin de
suelo frtil

Suelo Tratado

Landfarming

Forestacin

Diseo
paisajstico

BIOVENTEO
Estimula la biodegradacin natural de

cualquier compuesto biodegradable en


condiciones aerobias. El aire se suministra en
el sitio contaminado a travs de pozos de
extraccin, por movimiento forzado
(extraccin o inyeccin), con bajas
velocidades de flujo, con el fin de proveer
solamente el oxgeno necesario para sostener
la actividad de los microorganismos
degradadores

LANDFARMING
La superficie del suelo contaminado es

tratado en el mismo sitio por medio del arado.


El suelo contaminado se mezcla con agentes
de volumen y nutrientes, y se remueve
peridicamente para favorecer su aireacin.
Las condiciones del suelo (pH, temperatura,
aireacin) se controlan para optimizar la
velocidad de degradacin y generalmente se
incorporan cubiertas u otros mtodos para el
control de lixiviados.

Landfarming
SUELOS Y LODOS
ESTABILIZADOS

Muestreo

Adicin de
nutrientes

NPK y micro
elementos

Orgnicos

124

Adiccin de
microorganismos

Aireacin y
humectacin

M/o
autctonos

Por volteo
manual
semanal

Hongos

Bacterias

Control de
parmetros

Normativa
ambiental

Disposicin final

FITORREMEDIACIN
Proceso que utiliza plantas para remover,

transferir, estabilizar, concentrar y/o destruir


contaminantes (orgnicos e inorgnicos) en
suelos, lodos y sedimentos, y puede aplicarse
tanto in situ como ex situ. Los mecanismos de
fitorremediacin incluyen la rizodegradacin,
la fito-extraccin, la fitodegradacin y la
fitoestabilizacin.

BIORREACTORES
Para tratar suelos heterogneos y poco

permeables, o cuando es necesario disminuir


el tiempo de tratamiento, ya que es posible
combinar controlada y eficientemente,
procesos qumicos, fsicos y biolgicos, que
mejoren y aceleren la biodegradacin. En el
biorreactor de lodos, la degradacin ocurre en
fase acuosa, por m/o suspendidos o
impregnados en la fase slida.

Landfarming en plataforma

1.
2.

Sistema aerobico de tratamiento biolgico de


residuos, que puede emplear dos procesos:
Bioestimulacin
Bioaumentacin

BIOESTIMULACIN
Implica la circulacin de soluciones acuosas (que

contengan nutrientes y/u oxgeno) a travs del


suelo o sustrato contaminado, para estimular la
actividad de los microorganismos autctonos, y
mejorar as la biodegradacin de contaminantes
orgnicos o bien, la inmovilizacin de
contaminantes inorgnicos in situ

BIOAUMENTACIN
Consiste en la adicin de microorganismos

vivos, que tengan la capacidad para degradar


el contaminante en cuestin, para promover
su biodegradacin o su biotransformacin. El
tamao del inculo a utilizar, depende del
tamao de la zona contaminada, de la
dispersin de los contaminantes y de la
velocidad de crecimiento de los
microorganismos degradadores.

COMPONENTES
Plataforma
Encapsulantes
Materia orgnica (nutrientes)
Residuos.
Material de relleno.
Personal.
Manual de bioseguridad para las operaciones.

Encapsulantes

1.
2.
3.
4.

Materiales que permiten atrapar


contaminantes presentes en los residuos
industriales tales como: metales pesados,
hidrocarburos, materia orgnica.
Biosoil
Zeolitas
Carbn activado.
Cascarilla de arroz

Materia orgnica

1.
2.
3.
4.
5.

Residuos orgnicos tales como:


Citricos (frutas en general)
Hortalizas.
Estircol de ganado.
Restos de forrajes.
Restos de jardinera

COMPONENTES
Plataforma
Encapsulantes
Materia orgnica (nutrientes)
Residuos.
Material de relleno.
Personal.
Manual de bioseguridad para las operaciones.

Residuos
Suelos contaminados con hidrocarburos.
Lodos y residuos industriales.
Lodos del tratamiento de aguas.
Aceites y derivados de hidrocarburos.
Residuos de actividades agropecuarias.
Residuos qumicos
Herbicidas y pesticidas.

Material de relleno(esponjante)
Cascarilla de arrz.
Viruta
Aserrin.
Musgo/lquenes
Restos de coco y palmiste

Tratamiento de lodos y suelo


Lodos y suelo

Estabilizacin

Adicin de
BIOSOIL

Deshidratacin

Camas
metlicas

Adicin de
aserrn

Adicin
cascarilla

136

Plataforma

Plataforma

Lixiviados

Tendido

Zona de
tratamiento

Terreno

Tratamiento
de aguas

Biodegradacin

Landfarming

Piscina

Impermeabilizacin

AGUAS
RESIDUALES

Tratamie
nto de
aguas

Decantadores

Lechos en
lnea

Lechos en
paralelo

Lechos de lijado

Filtracin

Biodegradacin
Anaerobia

Lechos de pulido
Aerobia
Filtracin

Muestreo

137

Biodegradacin

Normativa
ambiental

Disposicin final

Residuos de Lcteos
Gloria

Grasas

Lodos del
tratamiento de
aguas
Estabilizacin

Tendido en
plataforma

Adicin de
materia
orgnica

Adicin de
material
vegetal

Adicin de
pool de
microorganismos

Humectacin
y aireacin

Microaspersin
NPK
orgnico

Cascarilla

Bacterias

Ctricos

Aserrn

Hongos

verduras

138

Desechos
orgnicos

Vagaso

Riego por
goteo
Volteo
manual
semanal

Tratamiento
biolgico de
grasas

Derrame Exxon- Valdez

139

EXPERIENCIAS PRCTICAS
Tratamiento de Fluidos, cortes y ripios de

perforacin.
Tratamiento de
hidrocarburos.
Tratamiento de
Tratamiento de
camales.
Tratamiento de

140

suelos contaminados con


residuos industriales
aguas negras urbanas y de
residuos agroindustriales

PROCESO TPICO
Visita de campo
Muestreo
Identificacin y aislameinto de

microorganismos.
Pruebas de biodegradabilidad.
Preparacin del pool bacteriano
Reproduccin masiva de m/o.
Trabajos de biorremediacin

141

Operaciones de
preparacin

142

Suelos en tratamiento

143

SUELOS CONTAMINADOS CON


HIDROCARBUROS
Sistema in situ
Sistema ex situ
Tratamiento anaerobio
Tratamiento aerobio.
1. Landfarming en plataforma.
2. Landfarming en piscinas

144

DESCRIPCIN
Estabilizacin de residuos
Deshidratacin
Maduracin
Tendido y adicin de materia orgnica

en fermentacin.
Mezclado
Control de parmetros
Muestro
Recirculacin de lixiviados
145

PROCESO
Visita de campo
Muestreo
Identificacin y aislamiento de

microorganismos.
Pruebas de biodegradacin.
Preparacin del pool bacteriano
Reproduccin masiva de m/o.
Trabajos de biorremediacin

PROCESOS
Estabilizacin de residuos
Deshidratacin
Maduracin
Tendido y adicin de materia orgnica en

fermentacin.
Mezclado
Control de parmetros
Muestro
Recirculacin de lixiviados

Estabilizacin de residuos
Los residuos se estabilizan con ayuda de

sustratos especializados, que permiten su


manejo seguro, que evitan su diseminacin en el
entorno.
Los sustratos ms utilizados son: Biosoil,
guaspan, Humisol, y otros.

DESHIDRATACIN
Los residuos hmedos, una vez estabilizados se

someten a deshidratacin en plataformas


impermeabilizadas, camas metlicas.
El excedente de humedad es recogido y
almacenado en fosos para su tratamiento en el
sistema de aguas residuales.

MADURACIN
Los residuos estabilizados y deshidratados, se

dejan en reposo o maduracin por un tiempo


aproximados de dos a tres semanas, para que
los microorganismos presentes en el sistema, se
adapten, y se inicien procesos naturales de
oxidacin y reduccin, necesarios para el
tratamiento biolgico.

TENDIDO DE RESIDUOS

1.
2.

Los residuos estabilizados se disponen en


la plataforma de tratamiento, en forma
uniforme. Se adicionan dos componentes:
Materiales esponjantes, en relacin 2-1
Materia orgnica (fuente de nutrientes y
microorganismos), segn las ecuaciones de
balance de masas.

MEZCLA
Al adicionar el material esponjante, se logra la

creacin de poros, que contribuyen a la aireacin


de los residuos y facilitan la biodegradacin
aerbica.
La mezcla debe ser lo ms homognea posible

ADICIN DE MATERIA
ORGNICA

1.
2.
3.

La materia orgnica se adiciona triturada lo


ms finamente posible (2-1). Para mejorar
su eficiencia debe estar en proceso de
degradacin natural. La materia orgnica
aporta:
Nutrientes,
Microorganismos (hongos, bacterias,
invertebrados).
Micro elementos, como: Mn, Ca, B, Mg, Cu,
Fe,etc.

INICIO DEL TRATAMIENTO


Una vez mezclados los nutrientes con los

residuos, se inicia el tratamiento de los residuos,


por accin de los microorganismos presentes en
los residuos, material esponjante, materia
orgnica.

PARMETROS DEL PROCESO


Concentracin de contaminantes
Disponibilidad de carbono y nutrientes (NPK)
Temperatura
pH
Humedad
Conductividad
Aireacin

PARMETROS DEL PROCESO


Metales pesados
Estructura del residuo y del suelo

Concentracin de contaminantes
Si la concentracin de contaminantes

hidrocarburferos, supera los 50000 TPHs, es


necesario, partir la muestra de residuos en dos y
adicionar igual volumen de material esponjante y
materia orgnica. De esta forma facilitamos la
activacin bacteriana, que se inhibe bajo altas
concentraciones de contaminantes.

Nutrientes
La relacin C, N, P, K debe ser 3-1-1. Fuentes de

potasio son los residuos de crucferas, tales


como la col, brcoli, etc.
Fuente de nitrgeno, son las protenas vegetales
de la materia orgnica, o tambin enmiendas
qumicos como el nitrato de potasio o rea.

Nutrientes
La fuente de fsforo, es el estircol de ganado o

la gallinaza; aunque tambin se puede emplear


P2O5 o un abono fosforado.
La fuente de carbono son todos los almidones y
celulosa de la materia vegetal incluido los
residuos a tratar.
La fuente de azufre, es el hidrocarburo.

Temperatura
El rango de temperatura ptimo para la

biorremediacin vara entre 37 a 50 C.


Esto no significa que no haya actividad
bacteriana por debajo y por encima de este
rango, solo que la velocidad de la
degradacin disminuye sustancialmente.
Se controla mediante medicin, humectacin
y volteo manual.

pH
La biorremediacin transcurre de mejor

forma, en un medio moderadamente cido,


que vara entre 4,5 a 6,5.
Si el pH se hace alcalino, esto es ms de 7,
se debe adicionar residuos de ctricos, que
contienen cido ctrico. Un alternativa es
adicional un cido orgnico en solucin,
como: Actico, lctico u oxlico.

Humedad
La humedad ptima del sistema de tratamiento

debe variar entre 50-60%, la misma que se mide


mediante un hidrmetro o mediante una retorta.
Valores inferiores o superiores reducen la
actividad bacteriana, prolongan los tiempos de
tratamiento, encarecen el proceso.

Conductividad
Esto es, la resistencia elctrica del sustrato

mediada en S/cm, no debe superar los 2000,


para que el proceso de biorremediacin no se
detenga. Esto ocurre cuando en el sistema se
incorporan grandes cantidades de sales
inorgnicas (cuando se usan abonos qumicos
como fuente de nutrientes).

Aireacin
La aireacin es importante para garantizar el

transcurso aerbico de la biorremediacin. Se


realiza mediante volteo manual o mecanizado de
los residuos en tratamiento, con una frecuencia
de tres veces por semana.

Metales pesados

1.
2.
3.

Los residuos hidrocarburferos contienen


metales pesados que inhiben el crecimiento
bacteriano, razn por la que estos deben
ser aislados del sistema, mediante
encapsulamiento, con ayuda de tamices
moleculares como:
Zeolitas
Carbn activado.
Cascarilla de arroz.

Cintica bacteriana
El control del crecimiento bacteriano, es vital

para garantizar el progreso de la degradacin


de los contaminantes y su transformacin en
sustancias inocuas.
Los parmetros de cintica bacteriana que
controlar son: Tasa de crecimiento, tasa de
Biodegradacin, tiempo de vida media,
balance de nutrientes.

Estructura del sustrato


Durante todo el proceso se debe controlar la

porosidad del sustrato, evitando su compactacin


y consecuente generacin de condiciones
anaerbicas.

NORMAS DE SEGURIDAD

1.
2.
3.
4.
5.

Uso de equipos de proteccin personal, como:


Guantes,
Mascarilla,
Delantal impermeable,
Botas de caucho,
Gorro

NORMAS DE SEGURIDAD
No comer ni beber durante las operaciones.
Lavado de manos y de las botas, antes de salir

del rea de tratamiento.


Ventilar el rea de tratamiento.
Mantener el espacio inmediato limpio.
Desinfectar los equipos y herramientas utilizados
en los trabajos diarios.

NORMAS DE SEGURIDAD
Uso de gafas o pantallas faciales. Cuando el

sistema de tratamiento incluye bioaumentacin.


Restringir al acceso, solo a personal capacitado.
Aplicar normativas de seguridad biolgica.
Control inmunolgico del personal.

ESTUDIO DE CASO
BIORREMEDIACIN DE LODOS
INDUSTRIALES CAMPAMENTO
BASE DE WEATHERFORD

171

Residuos industriales
Residuos que se caracterizan por su

elevado contenido de sustancias


inorgnicas u orgnicas de elevada
resistencia a la biodegradacin y alta
toxicidad para los ecosistemas.
Este es el tipo de residuos que se trataron
en la empresa Weatherford, que en el
presente curso utilizamos como modelos de
Gestin Integral de Residuos Industriales.

Estudio de caso
Gestin Integral de residuos industriales,

Campamento Base de Weatherford


(General Pipe), El Coca.
Weatherford es una compaa de servicios
petroleros dedicada al mantenimiento,
limpieza, venta y reparacin de tuberas y
herramientas de perforacin, con ms de
18 aos en el mercado nacional,
acantonada en la Provincia de Orellana,
junto al aeropuerto de la ciudad de El Coca.

Antecedentes
En el 2005, el departamento de QHSE de

Weatherfor, en fiel cumplimiento a las


disposiciones emanadas de las polticas
ambientales de Weatherfor Internacional,
inici un ambicioso programa de Gestin
Integral de los Residuos Industriales
generados en las actividades operativas del
Campamento Base

Antecedentes
Con la asistencia tcnica de la Compaa

Oilenergy, se implement un sistema de


tratamiento de aguas industriales y un
sistema de gestin de residuos aceitosos
mediante Landfarming.
Realiz el Estudio de Impacto Ambiental de
sus operaciones a solicitud del I. Municipio
de El Coca.

Antecedentes
Realiz modificaciones operativas, para

reducir la generacin de residuos.


Emprendi un programa de capacitacin
ambiental y profesionalizacin de su
personal.
Introdujo desengrasantes biodegradables,
para las operaciones de lavado de tuberas.

Campamento base

TALLERES

Trampas

Separacin de
fases
In Situ

Diseo
del
sistema
de
Gestin
de
Residuos
Industria
les

Trampas

ACEITE
Floculacin

Floculacin

AGUA

FILTRACIN
Sistema Mvil
LODOS

LODOS

ALMACENAMIENTO

Estabilizacin
Ex Situ

Almacenamiento
Ex Situ

Muestreo
Almacenamiento
Cuneta

Relleno

Landfarming

Combustin

Inyeccin

TALLERES

Guaipes

Aceite- diesel

xidos

Otros

Recoleccin
Almacenaje

Biorremediacin

Almacenaje
Cisterna
de
almacenamiento

Incineracin

Cenizas

Incineracin

Cementera

Reciclado
Compactacin

Transporte

Vaccum

Reinyeccin

Oleoducto

Disposicin
final

Relleno

Manejo
de
residuos

Landfarming en
Plataforma
Fue el sistema elegido para el tratamiento

de residuos de hidrocarburos y otros


residuos industriales generados en el
Campamento Base.
Al efecto se adecu el rea, anteriormente
utilizada como zona de almacenamiento de
residuos, por mas de 8 aos.
Se construyeron camas de maduracin y
posteriormente la plataforma de
landfarming.

Residuos a
tratar

Landfarming
SUELOS Y LODOS
ESTABILIZADOS

Muestreo

Adicin de
nutrientes

NPK y micro elementos

Orgnicos

Adiccin de
microorganismos

Aireacin y
humectacin

M/o autctonos

Por volteo manual

Hongos

Bacterias

Control de
parmetros

Normativa
ambiental

Disposicin final

Camas de
maduraci
n

DESCRIPCIN
Estabilizacin de residuos
Deshidratacin
Maduracin
Tendido y adicin de materia orgnica en

fermentacin.
Mezclado
Control de parmetros
Muestro
Recirculacin de lixiviados

Estabilizacin de residuos

Camas de
maduraci
n

Adicin de materia
orgnica

Mezclado

Platafor
ma de
tratamie
nto

Vista de plataforma

Jardineras
para
disposici
n de
residuos
tratados

Jardn frente al casino

Frutos cultivados en
residuos tratados

Produccin hortcola

Tratamiento de aguas
residuales

Inicialmente se implement un sistema

mvil de tratamiento qumico de aguas


residuales.
Posteriormente se construy una planta de
tratamiento de aguas en los espacios
donde anteriormente se almacenaban los
residuos aceitosos y las aguas de lavado de
tubera.
Se propuso un esquema de tratamiento,
cuyos componentes se detallan en el
diagrama de flujo.

Tratamiento de aguas
AGUAS DE LAVADO

Separacin de
fases
Crudo

Almacenamiento

Transporte
Vaccum

Tratamiento
trmico

Agua

Precipitacin

Filtracin

Reinyeccin

Floculacin

Aireacin

Estabilizacin
de pH

Clorinacin

Muestreo

Disposicin
final

Lodos

Landfarming

Reuso
Alcantarilla

Aguas de lavado de
tuberas

Aguas residuales a tratar

Aguas
aceitosas

Aguas cidas de
chemplate

Sedimentos aceitosos

Aguas tratadas

Sistema de tratamiento
de aguas

Planta de
tratamien
to

RESULTADOS
Residuos industriales:

TPH = 97373 ppm a 1360 ppm, en 210 das


Cortes y fluidos de perforacin
NO3 = 45000 ppm a 230 ppm en 37 das
Suelos contaminados.
TPH = 63366,30 ppm a 577,55 ppm en 176 das
y en laboratorio en 42 das
Residuos de tanques de combustibles
TPH = 409041,98 ppm a 217354,95 ppm en 32
das

Decremento de TPHs

TPHs en lixiviados
60
50

Datos Obtenidos

m g/L

40
Limit. Permisi sin
impermeabilizacin de
la base

30
20

Limit. Permisi. Con


impermeabilizacin de
la base

10
0
09/11/200 29/12/200 17/02/200 08/04/200 28/05/200 17/07/200
4
4
5
5
5
5
FECHA

Cadmio en lixiviados
0,6
Datos obtenidos

0,5

mg/L

0,4
Limit. Permisi. Sin
impermeabilizacin
de la base

0,3
0,2

Limit. Permisi. Con


impermeabilizacin
de la base

0,1
0,0
09/11/2004

29/12/2004

17/02/2005

08/04/2005

FECHA

28/05/2005

17/07/2005

Cromo en lixiviados
12
Datos obtenidos

10

mg/L

8
Limit. Permi. Sin
impermeabilizacin
de la base

6
4

Limit. Permisi. Con


impermeabilizacin
de la base

2
0
09/11/200 29/12/200 17/02/200 08/04/200 28/05/200 17/07/200
4
4
5
5
5
5
FECHA

Vanadio en lixiviados
3
Datos Obtenidos

mg/L

2
2

Limit. Permisi. Sin


impermeabilizacin
de la base
Limit. Permisi. Con
impermeabilizacin
de la base

1
1

0
09/11/200 29/12/200 17/02/200 08/04/200 28/05/200 17/07/200
4
4
5
5
5
5
FECHA

CONCLUSIONES
Conjunto de tcnicas viables para tratar

residuos.
Sistemas prcticos y simples, de bajo costo.
Los residuos orgnicos se pueden utilizar
como fuente de carbono y nutrientes.
Posibilidades de obtencin de subproductos:
energa, abonos, biomasa.
Empleo de la biotecnologa para mejorar los
rendimientos.
Weatherford es la empresa pionera en la
Gestin Integral de Residuos Industriales.

RESULTADOS
Residuos industriales:

TPH = 97373 ppm a 1360 ppm, en 210 das


Cortes y fluidos de perforacin
NO3 = 45000 ppm a 230 ppm en 37 das
Suelos contaminados.
TPH = 63366,30 ppm a 577,55 ppm en 176
das y en laboratorio en 42 das
Residuos de tanques de combustibles
TPH = 409041,98 ppm a 217354,95 ppm en
32 das
219

Tasas de degradacin de
TPHs
5,000
4,500

lnCo/C TPHs

4,000
3,500

Ue1

3,000

Ue2

2,500

Ue2(2)

2,000

Ue3

1,500

Ue3(2)

1,000
0,500
0,000
0

15
tiem po (dias)

220

22

32

Decremento de TPHs

221

Degradacin de TPHs,
laboratorio

Tiempo

222

16/07/2003

09/07/2003

02/07/2003

25/06/2003

18/06/2003

Serie1

11/06/2003

70000
60000
50000
40000
30000
20000
10000
0

04/06/2003

Conce ntra cin ppm

REDUCCIN TPH Ue2(2)

TPHs en lixiviados
60
50

Datos Obtenidos

m g/L

40
Limit. Permisi sin
impermeabilizacin de
la base

30
20

Limit. Permisi. Con


impermeabilizacin de
la base

10
0
09/11/200 29/12/200 17/02/200 08/04/200 28/05/200 17/07/200
4
4
5
5
5
5
FECHA

223

Cadmio en lixiviados
0,6
Datos obtenidos

0,5

mg/L

0,4
Limit. Permisi. Sin
impermeabilizacin
de la base

0,3
0,2

Limit. Permisi. Con


impermeabilizacin
de la base

0,1
0,0
09/11/2004

29/12/2004

17/02/2005

08/04/2005

FECHA
224

28/05/2005

17/07/2005

Vanadio en lixiviados
3
Datos Obtenidos

mg/L

2
2

Limit. Permisi. Sin


impermeabilizacin
de la base
Limit. Permisi. Con
impermeabilizacin
de la base

1
1

0
09/11/200 29/12/200 17/02/200 08/04/200 28/05/200 17/07/200
4
4
5
5
5
5
FECHA

225

Cromo en lixiviados
12
Datos obtenidos

10

mg/L

8
Limit. Permi. Sin
impermeabilizacin
de la base

6
4

Limit. Permisi. Con


impermeabilizacin
de la base

2
0
09/11/200 29/12/200 17/02/200 08/04/200 28/05/200 17/07/200
4
4
5
5
5
5
FECHA
226

CONCLUSIONES
Conjunto de tcnicas viables para tratar

residuos.
Sistemas prcticos y simples, de bajo
costo.
Los residuos orgnicos se pueden utilizar
como fuente de carbono y nutrientes.
Posibilidades de obtencin de
subproductos: energa, abonos, biomasa.
Empleo de la biotecnologa para mejorar
los rendimientos.

227

ESTUDIO DE CASO
TRATAMIENTO BIOLGICO DE
AGUAS RESIDUALES
SHUSHUFINDI MEDIANTE PSA.

228

TRATAMIENTO DE AGUAS
RESIDUALES
MEDIANTE BIOFILTROS DE LECHO
SUMERGIDO (BLS)
UNA ALTERNATIVA PARA EL
TRATAMIENTO DE AGUAS
RESIDUALES

BIOFILTROS DE LECHO
SUMERGIDO
Qu son?
Son sistemas de lechos sumergidos, que
emulan los pantanos hmedos naturales en
el tratamiento de aguas residuales
industriales, negras y lixiviados

COMO TRABAJAN?
Submerged Bed Systems (SBS)
Estn diseados para imitar los procesos
que ocurren en los pantanos naturales.
Utilizan plantas y suelos propios de
pantanos naturales.
Emplean microorganismos asociados a
las plantas para el tratamiento de aguas

Cmo trabajan?
El tratamiento tiene tres componentes
bsicos:
1. Remocin de slidos.
2. Tratamiento biolgico.
3. Deshidratacin de lodos orgnicos

Remocin de slidos
Se produce en tanques de sedimentacin de
hormign armado, con capacidad variable que
depende del volumen de aguas a tratar y del
tipo de aguas residuales.
Los tanques retienen alrededor del 65% de los
slidos suspendidos que posteriormente se
tratarn en los reed beds. El 35% restante es
retenido en la fase piedra arena, en las lneas
de distribucin

Tratamiento biolgico

El tratamiento biolgico se produce gracias a


la participacin de bacterias asociadas a las
plantas de pantano, quienes les proveen de
oxgeno a travs de sus races.
La degradacin aerbica coexiste con la
anaerbica a corta distancia de las races.

Otros sistemas de
tratamiento biolgico
En el sistema de lodos activados:
Suministran el aire y el oxgeno necesarios,
ya sea por difusores sumergidos que
inyectan aire impulsado por sopladores o por
aireadores superficiales, que mantiene el
20% de saturacin de oxgeno necesario
para soportar el metabolismo de la biomasa
en el lodo activado

Tratamiento biolgico
La degradacin biolgica ocurre en dos
lechos: Uno de lijado y otro de pulido.
Los tiempos de retencin requeridos se
mantienen y controlan en una caja de
salida diseada para proveer rangos de
carga variable desde cero hasta uno.
Las plantas absorben materiales por sus
races y los utilizan para el crecimiento y
almacenamiento en races, tallos, hojas).

Tratamiento biolgico
BLS
Los procesos bioqumicos que se operan
en el microambiente radicular son:
Oxidacin carboncea.
Nitrificacin.
COHNS+ O2 + bact + Nutrientes CO2 +
NH3 + C5H7O2N
C5H7O2N + bacteria 5CO2 + 2H2O + NH3
+ Energa
2NH3 + 4O2 3H2O + NO2 + NO3

Otros sistemas
La biomasa que vive en el biofiltro (trozos de
plstico) depura las aguas en dependencia
de los nutrientes que aporten las aguas
residuales y que se mantengan las
condiciones de humedad adecuadas (sobre
el 60%).
Requieren un tratamiento secundario donde
se elimina el 50- 90% de los parmetros
como: BOD, COD,SS, TOC y NH3. Tiempos de
retencin de 25 a 30 minutos.

Deshidratacin de lodos
orgnicos
Se produce en lechos de junquillos (Reed
Beds).
Los lechos de secado se construyen a
continuacin de los decantadores y
pueden almacenar materia slida.
Los lquidos que se producen caen al fondo
y por gravedad entran al sistema de
tratamiento.

Otros sistemas
La deshidratacin se realiza por 1-7 das,
segn el lodo (calmada) o por induccin
forzada de aire. La digestin de lodos, se
producen en digestores principalmente
anaerbicos ( durante 15- 30 das),que
estimulan la generacin de Biogas y que
requiere de equipos complementarios y la
asistencia de personal especializado. A ms
de metano se forma NH3, H2S, H2 CO2 y otros
mercaptanos .

Cmo se construyen?
Cada sistema de tratamiento debe ser
diseado para un residuo lquido
especfico, por lo general incluye:
1.La impermeabilizacin del fondo y
taludes de los lechos.
2.Una capa superficial de material como
medio de cultivo, sobre el cual crecen
plantas de pantano

Cmo se construyen?
3. Las plantas con sus raices forman una
estructura reticular que oxigena el medio
donde se desarrollan bacterias que digieren
los residuos.
4. Se utilizan tuberas, accesorios y vlvulas,
que aseguran los tiempos de retencin y
control necesarios para el tratamiento

Cunto tiempo duran?


Debido a que la arena, grava, el material
de impermeabilizacin, tuberas, vlvulas y
accesorios de PVC, son virtualmente
indestructibles, la vida de los SBS es
teoricamente infinita.
La permeabilidad (k) del lecho es mnimo,
100 veces ms que LTAR, necesario para el
desarrollo de una capa biolgica.

Son seguros?
Los PSA son a prueba de bala, trabajan
bajo condiciones adversas (en ambientes
extremadamente fros y calurosos)
No generan mosquitos y enfermedades
propagadas por estos vectores.
No hay malos olores, porque los procesos
son generalmente aerobios, sus productos
finales son: CO2 , H2O, NO3, etc.

Qu ventajas presenta?
Bajos costos operativos.
Muy poca o ninguna energa elctrica.
No requiere qumicos.
No necesita bombeo, trabaja por

gravedad.
Poco personal de mantenimiento y
operacin.
Altos rendimientos de tratamiento.
No existe espejo de agua libre

Qu ventajas presenta?
Posibilidad de reutilizar las aguas en

otras actividades (agrcola, piscicultura,


lavado, etc.)
Alta calidad del efluente en corto tiempo.
Las plantas que crecen sobre el pantano
(albahaca) pueden tener valor
econmico.
En su construccin se utilizan materiales
naturales( grava, arena, piedras, plantas)

Qu ventajas presenta?
Se adapta a cualquier relieve del terreno.
Su construccin es modular.
El rea del pantano puede ser utilizada

para recreacin.
Un incremento de volumen de aguas
residuales a tratar, se cubre con la
construccin de un nuevo mdulo.
Costo metro cubico tratado con
reduccin anual.

Cmo se construyen los


lechos?
Pasto
Arena (30cm)
Tubera de distribucin de 20 cm.
Grava de 5/8, (10 cm.)
Grava de , (10cm.)
Piedra bola.(30 cm.)
Tubera de recoleccin de 315mm.
Arcilla roja impermeabilizante (25cm), o

geomembrana.

Sistema de pantanos secos

Sistema de pantanos secos

Entrada de aguas
residuales

Salida de aguas tratadas

Salida de aguas tratadas

Calidad del tratamiento

Aguas tratadas

En invierno

Qu plantas se siembran?
Common reed (Phragmites australis).
Lake sedge, Ripgut (Carex lacustris).
River bulrush (Scirpus flaviatilis).
Broad- leaved cattail (Typha latifolia).
Salt rush, Baltic rush (Juncus balticus).

Dnde se han construido?


En los estados Unidos (Massachussets,

Lloyd. New Hamshire, Vermont, Maine y


Amherst).
China.
Ecuador (Shushufindi y Santo Domingo,
Puerto Aguarico)

Cul es su rendimiento?
Se estima que un pie cuadrado de lecho

trata aproximadamente 25, hasta 75


galones por ao, mediante digestin
aerbica de lodos.
Por va anaerobia, cerca de 14 hasta 41
galones.
Las bacterias pueden reducir slidos
voltiles de los fangos entre un 20 y 70%

Cul es su rendimiento?
La combinacin de digestin y absorcin
catinica, provee un 99% de reduccin el
OD, DBO y concentracin de metales
pesados, con tiempos de retencin de 24
horas (en lixiviados).

Tratamiento qumico
convencional
Costos:
Costo de construccin de la planta.
Costos por metro cbico incremento anual.
Consumo permanente de energa
Consumo diario de qumicos.
Costos del personal especializado para el
tratamiento.
Deterioro de las instalaciones.
Costos de mantenimiento.

Tratamiento qumico
convencional
Operacin :
Generacin de malos olores.
Generacin de ruido.
Incremento de caudales que sobrecargan
las plantas de tratamiento.
Contaminacin secundaria por formacin
de aerosoles, gases, residuos de cloro,
combustibles,lodos descargados a los
ros.

Tratamiento qumico
convencional
Rendimiento:
Remocin de contaminantes hasta un
70%.
Baja efectividad para eliminar metales
pesados.(smosis inversa)
Necesidad de , aireacin para eliminar
excesos de Fe,y Mn.
Necesidad de ablandamiento, para
eliminar Ca y Mg.

Tratamiento Qumico

Costo m3 USD

Costo m 3 tratam iento qum ico


10
5

TQ

0
1

4
Aos

5 10 11

Tratamiento por PSA

Costo USD

Variacin costo USD/ m3


6
5
4
3
2
1
0

SBS

4
Aos

10 11

Nuestra propuesta
Diseo del sistema de tratamiento
Construccin de decantadores.
Construccin de Biofiltros de lecho

sumergido y Reed Beds.


Operacin y mantenimiento (tres aos).
Diseo paisajstico de el rea de
tratamiento.

Nuestra propuesta
Adiestramiento del personal de la empresa

(2).
Manual de operaciones del Biofiltro de
lecho sumergido.
Muestreo de efluentes.
Reporte semanal o quincenal.

Conclusiones
Los Biofiltros de lecho sumergido son una

solucin prctica, ambiental y


econmicamente sustentable.
Consolidan la Gestin ambiental
empresarial, dirigida al empleo de
tecnologas limpias.
Permiten cumplir con la normativa de
vertido de aguas negras e industriales de
la legislacin vigente.

Conclusiones
Los pantanos secos artificiales pueden

ser replicados en cualquier regin del


pas, siempre que tengan los desniveles
adecuados.
Son diseados para el tratamiento de un
residuo especfico.
Su construccin y operacin es sencilla, a
ms de tener un bajo costo.

TRATAMIENTO DE
CORTES Y RIPIOS DE
FORMACIN

ESTUDIO DE CASO
ENCANA

PROYECTO LANDFARMING

FANNY 18B3, CAMPO TARAPOA

ANTECEDENTES

La transnacional petrolera canadiense


ENCANA, desarrollaba sus actividades en
el campo TARAPOA al nor-oriente de la
Provincia de Sucumbios, hasta hace dos
aos, cuando es comprada por la
Compaa China Andes Petroleum.
Qmax Ecuador, brindaba a ENCANA el
servicio de lodos de perforacin, base
solucin acuosa de nitrato de potasio.

ANTECEDENTES
El fluido proporcionado por Qmax, permiti

reducir el tiempo de perforacin de 32-37


das a 11 das; generando un ahorro
sustancial en los costos de perforacin.
Sin embargo los cortes contenan ms de
45000 ppm de nitratos, generando un
elevado riesgo ambiental.

ANTECEDENTES
La DINAPA presiona a ENCANA, para que

inicie un programa de tratamiento de sus


cortes y ripios de perforacin.
En el 2001 se inicia un programa de
investigacin dirigido a reducir la
concentracin de nitratos, a cargo del
Departamento de Investigaciones
Biotecnolgicas de Qmax.

ANTECEDENTES
Para el 2002 se logra desarrollar un sistema

integral de manejo de cortes y ripios de


perforacin, que cumplian las normativas
ambientales vigentes. Cabe sealar que en
la normatividad ecuatoriana no existen
anlogos ni antecedentes tcnicos que
pudieran servir de gua metodologgica,
para un emprendimiento en el campo de la
Biorremediacin.

LOGROS
Las investigaciones desarrolladas durante un
ao y medio generaron los siguientes
resultados:
1. Patente de BIOSOIL.
2. Obtencin de un pool bacteriano con
capacidad para biodegradar nitratos bajo
condiciones aerbicas.
3. Diseo de un sistema de tratamiento de
cortes y ripios de perforacin.

LOGROS
4. Desarrolo de protocolos para
aislamiento, identificacin, reproduccin
y empleo masivo de microorganismos.
5. Manual de Bioseguridad ambiental para
las operaciones de laboratorio y campo.
6. Control de todos los efluentes del
proceso.
7. Ejecucin de un sistema de tratamiento
de cortes y ripios de perforacin
mediante Landfarming en piscinas.

LOGROS
Tiempo de tratamiento 32 das.
Concentracin de nitratos de 45.000 ppm a

200 ppm.

DESCRIPCIN DEL SITIO


La zona elegida fue el Campo Fanny 18B3 de
Tarapoa, cuyas caractersticas podemos
resumirlas en:
Nivel fretico 4.5 m
Pluviosidad 3500 mm/annual.
Temperatura 37-38 C.
Velocidad del viento 12-15 Km/h.
Altura: 210 msnm.

DESCRIPCIN DEL SITIO


Ubicacin equidistante a la mayora de los

pozos del Campo.


Poblacin ms cercana 3.5 Km.
Disponibilidad de red elctrica.
Cercana de un estero y fuente de agua.
Va de acceso, lastrada.

DESCRIPCIN DEL SITIO


Zona de asimilacin petrolera.
Presencia de remanentes de bosque nativo

y bosque secundario. Distribuidos en forma


de mosaico.
Ausencia de vestigios arqueolgicos,
Relieve irregular, con depresiones y
amplios espacios anegados.
Suelo arcilloso pardo- rojizo.

PROYECTO LANDFARMING
COMPONENTES
Introduccin
Objetivos de la fase preoperativa
Etapa I: Aislamiento e identificacin de
cepas bacterianas.
Etapa II: Diseo, construccin y puesta en
marcha de unidades piloto de laboratorio.
Etapa III: Aplicacin de campo.

PROYECTO LANDFARMING
Resultados obtenidos
Observaciones
Conclusiones
Recomendaciones

PROYECTO LANDFARMING

ETAPA PRE-OPERATIVA

INTRODUCCIN
Los lodos de perforacin de la QMAX

poseen altos contenidos de nitratos, que


superan los niveles permitidos por la
legislacin ambiental ecuatoriana, factor
que limita la incorporacin de dichos
lodos a actividades agrcolas y a
proyectos de recuperacin de suelos
erosionados
y
deforestados
de
la
amazona ecuatoriana, constituyndose
en una fuente potencial de contaminacin
de aguas superficiales y subterrneas.

INTRODUCCIN
Con la participacin y asistencia tcnica del

personal profesional de DISCAL, se


desarrollo un producto eficaz denominado
BIOSOIL, que exitosamente se viene
empleando en la estabilizacin de lodos de
perforacin, en la reduccin de los niveles
de metales pesados y en la mejora de sus
propiedades de fluidez y viscosidad.

INTRODUCCIN
Ahora se propone emplear BIOSOIL, en la

desnitrificacin de lodos de perforacin


mediante Landfarming, con la introduccin
de cepas bacteriales desnitrificadoras, de
tal forma que el nivel de nitratos; sea el
adecuado como para soportar y mantener
el desarrollo de especies vegetales de
inters maderero e industrial.

PROYECTO LANDFARMING
Objetivos

Determinar la idoneidad del BIOSOIL

para su aplicacin en landfarming.


Aislar
e
identificar
cepas
bacterianas
con
potencial
degradador de nitratos.
Establecer la mezcla ptima que
garantice la ms alta tasa de
desnitrificacin.

PROYECTO LANDFARMING
Determinar la efectividad de la

propuesta de desnitrificacin
mediante landfarming.
Establecer
la frecuencia de
inyeccin de cepas bacterianas
en el tratamiento.

ETAPA I
AISLAMIENTO E IDENTIFICACIN
SE CEPAS BACTERIANAS

Actividades Realizadas
ADQUISICIONES
Compra

del material de
campo para muestreo inicial
Implementacin de laboratorio
para trabajo microbiolgico

Actividades Realizadas
Etapa I
Recoleccin bibliogrfica
Internet
Bibliografa especializada
Bergeys

Manual of
Determinative Bacteriology
APHA, Metodos
Estandarizados
Principios de Biorrecuperacin ,

Actividades Realizadas
Etapa I
Recoleccin bibliogrfica

Biotratamiento de Residuos

Txicos y Peligrosos
Microbiologa del suelo

TRABAJO DE CAMPO
1. Toma de muestras en el sector

de Lumbaqui. Para obtener


microroganismos capaces de
biodegradar nitratos.
2. Muestreo de cortes, ripios y
lodos de perforacin, para
identificar los componentes y
propiedades fsico-qumicas

MUESTREO
Se enviaron, las muestras de suelos y lodos

a
Gruntec,
para
los
anlisis
correspondientes, de contenido de metales
pesados, nitratos, HPA, y parmetros fsicos
como: pH, conductividad (tabla de la ley
1215
para
las
Operaciones
Hidrocarburferas).

MUESTREO
TPHs = 4.200 ppm.
Nitratos = 45.000 ppm-.
pH = 9.8
Conductividad = 1.250 S/cm.
Cd = 237 ppm.
V = 102 ppm.
Hg = 87 ppm.
Cr = 92 ppm.

MUESTREO
Los cortes obtenidos en Lumbaqui, se

llevaron refrigerados al laboratorio de


Qmax, para obtener a partir de siembras en
medio nutritivo, las cepas bacterianas
idneas para el tratamiento de
desnitrificacin de cortes de perforacin.

TRABAJOS DE LABORATORIO
Preparacin de medios de cultivo y
reactivos.
Enriquecimiento
General

Selectivo

TRABAJOS DE LABORATORIO
Aislamiento y conservacin bacteriano.
Pruebas de biodegradacin de nitratos.
Control y Monitoreo (pH, Nit., Ufc,etc,).
Mezcla ptima cortes, lodos, biosoil,
bacterias.

RESULTADOS

1.

2.

Aislamiento bacteriano.
Se han aislado 60 tipos de cepas
morfolgicamente diferentes de las
muestras de lodos y cortes de Lumbaqui.
Se identificaron 11 cepas con cualidades
desnitrificadoras

ETAPA II
DISEO Y
CONSTRUCCIN DE
CELDAS
EXPERIMENTALES

CONSTRUCCIN DE
UNIDADES EXPERIMENTALES
Cada unidad experimental tena un tamao

de 60x40x35 cm. (gabetas numeradas).


Para el desarrollo efectivo de la
desnitrificacin fue indispensable
aproximar las condiciones de las pruebas a
las ambientales en tal forma que se
garantice resultados lo ms cercanos a los
que se obtendrn en condiciones de
campo.

MATERIALES Y MTODOS
Celdas de madera de 60x40x35cm. (13)
Juegos de jardinera (4)
Balanza analtica (1)
Balanza tcnica 10 kg. (1)
Lmina de polietileno negra 15m.
Vasos de precipitacin de 50, 100, 250 cm 3

(2 de cada una).

MATERIALES Y MTODOS
Tamices (5)
Esptulas (5).
Pisetas (2)
Frascos

para
lixiviados. (20)

toma

de

muestras

de

MATERIALES Y MTODOS
Reactivos.
BIOSOIL (1 saco de 32 Kg).
Lodos de perforacin/ cortes.
Cultivo de microorganismos.
Suelo natural.
Nutrientes y factores de crecimiento.
Agua destilada (10 lit).
Semillas ( 5 variedades)

PROCEDIMIENTOS
Preparacin de las celdas.
Construccin de las celdas, con las
dimensiones acordadas (madera)
Impermeabilizacin de las celdas con la
lmina de polietileno negro.
Ubicacin de celdas en sitios de fcil
acceso y maniobrabilidad, invernadero.

PROCEDIMIENTOS
Preparacin de la mezcla.
Pesado de los componentes en base al
clculo por cada celda.
Mezcla y homogenizacin (manual o con
ayuda de un agitador).
Hidratacin, hasta alcanzar el nivel de
hidratacin ptimo (60%).

PROCEDIMIENTOS
Tendido de la mezcla en la celda.
Vertido
de la mezcla en la celda,
procurando distribuir uniformemente sus
componentes.
Aclimatacin (24 h)
Introduccin
de
cepas
bacteriales
(inyeccin).

CELDAS EXPERIMENTALES
UE 0

BLANCO: LODO SIN TRATAMIENTO

UE 1

LODO + BIOSOL Conc. 1 + CCTEL BACTERIANO

UE 2

LODO + BIOSOL Conc. 2 + CCTEL BACTERIANO

UE 3

LODO + BIOSOL Conc. 3 + CCTEL BACTERIANO

UE 4

LODO + BIOSOL Conc. 4 + CCTEL BACTERIANO

UE 5

LODO + BIOSOIL Conc. 5 + CCTEL BACTERIANO

CELDAS EXPERIMENTALES
Todas la unidades experimentales tenan

una inclinacin de 1 y disponan de un


canal de desalojo para lixiviados, los
mismos que se recolectaron y se trataron
qumicamente y posteriormente evacuados
luego de su anlisis correspondiente.

CONTROL Y MONITOREO DE
UNIDADES.
Control de parmetros ambientales. (diario)
Toma
de
lixiviados
para
anlisis

(1,3,5,10,15,20 das)
Introduccin de nutrientes y factores de
crecimiento en fase lquida.
Control del crecimiento poblacional de
microorganismos.

Resultados obtenidos
Pruebas de biodegradacin

A G R AF IC O C O M P A R A T IV O
N itra to s v s T ie m p o
16000

14000

Nitratos (ppm)

12000

10000

8000

6000

4000

2000

0
0

UE1

UE2

T ie m p o (d a s)

UE3

UE4

UE5

Resultados obtenidos

Pruebas de biodegradacin

GRAFICO COMPARATIVO
Poblacin vs Tiempo
7.E+09

Poblacin bacteriana (ufc/g)

6.E+09
5.E+09
4.E+09
3.E+09
2.E+09
1.E+09
0.E+00
0

Tiempo (das)

UE1

UE2

UE3

UE4

UE5

Resultados obtenidos

Pruebas de biodegradacin
GRAFICO COMPARATIVO
pH vs Tiempo

7.8
7.6

pH

7.4
7.2
7
6.8
6.6
0

2
UE1

3
UE2

4
5
TIEMPO EN DAS
UE3

6
UE4

7
UE5

Resultados obtenidos

Tasa de biodegradacin
TASA DE BIODEGRADACIN COMPARATIVA

2
1.8

1.73

1.6

1.55

1.4

1.4

ln(Co/C)

1.2
1.04

1
0.8
0.6

0.63

0.57

0.4

0.35
0.29

0.24
0.17
0.103

0.2
0
0

0.5

1.5

2.5

TIEMPO (das)
Series1

Series2

Series3

Series4

3.5

Resultados obtenidos
Tasa de crecimiento bacteriano

GRAFICO TASA CRECIMIENTO BACTERIANO


0.515
0.51

0.51

0.51

K/h

0.505
0.5

0.5

0.495
0.49

0.49

0.485
0

0.5

1.5

2.5

UNIDAD EXPERIMENTAL

3.5

4.5

PROYECTO LANDFARMING
Conclusiones

La relacin Biosoil, lodo ptima


recomendada es 2.0- 2.5 sacos de Biosoil
por metro cbico de lodo.
La relacin lodo/ suelo recomendada es de
1/0.5 a 1/1 respectivamente.
El volumen de Bacmax por metro cbico
de lodo ser de 15 20 litros/ m3, cada 48
horas.
La alcalinidad generada por la
desnitrificacin es compensada por los
cidos hmicos, flvicos y ctrico
presentes en el BIOSOIL.

PROYECTO LANDFARMING

Conclusiones

BIOSOIL, es un sustrato idneo para ser


utilizado en tcnicas de landfarming
Fuente de nutrientes para la

microflora bacteriana
Mejorador de la estructura del
suelo
Agente quelante de metales
pesados

La desnitrificacin de lodos y cortes de


perforacin es factible mediante el empleo
de cepas bacterianas desnitrificadoras
autctonas.

ETAPA III

APLICACIN DE CAMPO

ACTIVIDADES
Reuniones de trabajo y planificacin de

campo.
Desbroce y adecuacin de espacios.
Construccin de accesos.
Instalacin de campers.
Construccin de piscinas.
Instalacin del sistema de provisin
bacteriana.

ACTIVIDADES
Construccin de pozos de control, bermas y

canales perimetrales.
Inicio de las operaciones de tratamiento.
Operaciones de tratamiento.
Control de parmetros de proceso.
Evacuacin de cortes tratados.

ACTIVIDADES
Reconformacin del relieve.
Forestacin perimetral del rea de

tratamiento.

REUNIONES DE TRABAJO
Con el personal tcnico de ENCANA.
1. QHSE.
2. Logistica.
Con el personal de apoyo de AZUL y
CETAGUA.
Con la comunidad

DESBROCE Y ADECUACIN
Corte de maleza y arbustos del rea

elegida.
Eleccin de troncos para el cerramiento
perimetral (alambrado).
Construccin de canales para evacuacin
de aguas de anegacin.
Retiro de la capa frtil y almacenamiento
perimetral para tareas de reconformacin
del paisaje.

CONSTRUCCIN DE ACCESOS
Tendido de troncos sobre el suelo arcilloso.
Tendido de capa de piedra bola, ripio y

arena de ro; en espacios asignados para


vas de circulacin.
Desplazamiento de tierras y relleno de
depresiones.

INSTALACIN DE CAMPERS
Campers vivienda
Campers oficina.
Camper bodega.
Camper laboratorio.
Camper Servicios.

CONSTRUCCIN DE PISCINAS
Excavacin con retro excavadora.
Dimenciones: 50 x 8 x 4 m.
Pendiente del fondo 1.5
Pendiente de las paredes 75
Compactacin de paredes y fondo con

arcilla y bentonita.
Construccin de bermas perimetrales 50
cm de alto y 50 cm. ancho.

CONSTRUCCIN DE POZOS
Pozos de control de lixiviacin de 4

pulgadas de dimetro.
Dos pozos por cada piscina, en el sitio de
mayor pendiente.
Profundidad: 4.5 m
Altura sobre la superficie 60 cm.
Proteccin perimetral de hierro.
Tapn.
Canales perimetrales de 40 x 50 cm.

INSTALACIN DEL SISTEMA DE


PROVISIONAMIENTO
BACTERIANO
Instalacin de tanques (3 de 70 Bbls).
Construccin de cubetos de seguridad
Instalacin de tuberas y accesorios en los

tanques de distribucin.(3 pulgadas).


Instalacin de tuberas y accesorios en
torno a las piscinas de tratamiento (dos
pulgadas).

INICIO DE LAS OPERACIONES


DE TRATAMIENTO.
Control in situ (en el taladro) de las

condiciones del corte de perforacin.


Transporte de cortes en camiones
impermeabilizados.
Disposicion diferenciada de cortes de
superficie y de profundidad.
Adicin de pool bacteriano a razn de 3035 l/m3.

OPERACIONES DE
TRATAMIENTO
Mezcla diaria de cortes para:
1. Facilitar la aireacin del sistema.
2. Garantizar la distribucin microbiana en
forma uniforme.
3. Evitar acentamientos y creacin de
condiciones anaerbicas.
Adicin semanal de bacterias (dos
veces).

OPERACIONES DE
TRATAMIENTO
Toma de muestras de cortes para:
1. Control de Ufcs.
2. Determinacin tasa de Biodegradacin.
3. Control,de pH, T, Humedad y
conductividad.
Control de lixiviados (semanal).

OPERACIONES DE
TRATAMIENTO
Bombeo de aguas lluvias.
Tratamiento de aguas lluvias
Adicin de cortes de perforacin, segn el

volumen recibido de los taladros.


Bombeo de pool bacteriano desde reactor
hasta los tanques de distribucin.

CONTROL DE PARMETROS
pH.
T,
Humedad.
Conductividad.
DBO.
DQO.
Metales pesados.
Ufcs.

EVACUACIN DE CORTES
La evacuacin se realiz una vez que los

anlisis de laboratorio sealaron que los


parmetros se hallaban dentro de los
lmites establecidos por la legislacin
ambiental.
Con la retro excavadora se desalojaron los
cortes y se transportaron con camiones
hasta los lmites del campo para su
disposicin final.

RECONFORMACIN DEL
RELIEVE
Con ayuda de planos y fotografas de

archivo, se procedi a reconformar el


relieve existente en la zona antes de la
intervencin.
Los cortes se dispusieron en capas
compactadas de 40 cm.
En la superficie se tendi el suelo frtil
almacenado desde el inicio de las
operaciones.

FORESTACIN

1.
2.
3.

Sobre los cortes tratados y dispuestos en


las reas asignadas se procedi a la
siembra de:
Man forrajero.
Plantas hornamentales .
Maderas.

RESULTADOS
Tiempos de tratamiento de cortes de

perforacin: 50-62 das.


Concentracin final de nitratos 900-1200
ppm.
pH, 6.7
Conductividad, 25-30 S/cm.
Metales pesados: menos de 0.05 ppm

RESULTADOS
Buena tasa de forestacin y crecimiento

vegetal, sin sntomas de toxicidad.


Crecimiento de plantas hortcolas.
Transformacin de la zona en un espacio
verde.
Control de todos los efluentes.
Cortes aptos para ser utilizados en
calidad de suelos para actividaes
agrcolas.

RECOMENDACIONES
Ampliar la investigacin de alternativas de

biorremediacin para cortes de perforacin


impregnados con fluidos base aceite.
Desarrollar protocolos estandarizados para
el tratamiento de cortes y ripios de
perforacin.
Ampliar el uso de tamices molecualres.